大黄鱼β2-微球蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的重组表达

作     者：余素红 王玉桥 陈新华 YU Su-hong;WANG Yu-qiao;CHEN Xin-hua

作者机构：厦门大学生命科学学院福建厦门361005 国家海洋局第三海洋研究所福建厦门361005 福建省农业科学院福建福州350002 

出 版 物：《台湾海峡》 (Journal of Oceanography In Taiwan Strait)

年 卷 期：2009年第28卷第1期

页      面：13-18页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(4047605230571439) 

主　　题：大黄鱼 β2-微球蛋白 克隆 重组表达 Western-blotting 

摘      要：主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)是一类高度多态的基因群,它广泛分布于各种脊椎动物体内,在启动特异性免疫应答中起关键作用.MHC根据结构分为I型和II型两种.β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2m)是MHCI型分子的轻链.本文根据大黄鱼β2m的表达序列标签(expressed sequence tags,EST)序列设计合成了特异性引物,利用RT-PCR技术从大黄鱼脾脏组织中克隆了β2m基因(Pscr-β2m);构建了含β2m基因的原核表达载体(pGEX4T-2-β2m),在0.1mmol/dm3IPTG诱导下重组β2m得到了表达;采用Sepharose 4B亲合层析纯化目的蛋白并制备了抗体;Western-blotting分析证实了该抗体具有与天然大黄鱼脾脏组织中β2m蛋白反应的特性.这些结果为进一步研究鱼类β2m结构与功能的关系,以及制备MHCI类分子四聚体奠定基础.