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Cloning,characterization,and expression analysis of the DEAD-box family genes,Fc-vasa and Fc-PL10a,in Chinese shrimp (Fenneropenaeus chinensis)

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Chinese Journal of Oceanology and Limnology 2010年第1期28卷 37-45页

作者：周倩如邵明瑜秦贞奎康庆浩张志峰 Key Laboratory of Marine Genetics and Breeding of Ministry of Education Ocean University of China Department of Aquaculture Chonnam National University

RNA helicases of the DEAD-box and related families are involved in various cellular processes including DNA replication, DNA repair, and RNA processing. However, the function of DEAD-box proteins in aquaculture species is poorly understood at molecular level. We obtained the full-length cDNA sequences of two genes encoding helicase-related proteins, Fc-vasa and Fc-PL10a, from the testes of Chinese shrimp, Fenneropenaeus chinensis. The two predicted amino acid sequences contain all the conserved motifs characterized by the DEAD-box family and several RGG repeats in the N-terminal regions. Homology and phylogenetic analyses indicate that they belong to the vasa and PLIO subfamilies. The three-dimensional structures of the two proteins were predicted with a homology modeling approach. Both core proteins consist of two tandem RecA-like domains similar to those of the DEAD-box RNA helicase. Using reverse transcription-polymerase chain reaction （RT-PCR） and real-time PCR we found that Fc-vasa was expressed specifically in the adult gonads. Transcription decreased in the ovary but increased in the testis during gonadal development. Fc-PL10a expression was widely distributed in the tissues we examined. Using in situ hybridization, we demonstrated that the Fc-vasa transcript is localized to the cytoplasm of the spermatogonia and oocytes. Thus, our results suggest that Fc-wasa plays an important role in germ-line development, and has utility as a germ cell lineage marker which will help to generate new insight into the origin and differentiation of germ cells as well as the regulation of reproduction in F. chinensis.

关键词： DEAD-box Fenneropenaeus chinensis germ-line vasa PL10

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The Expression of vasa Gene during Zebrafish (Danio rerio) Oogenesis

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Wuhan University Journal of Natural Sciences 2004年第6期9卷 979-982页

作者： XIANGFang ZHENYan ZHENGWen-xuan DENGFeng-jiao WANGXiao-kai ZHANGXi-yuan KeyLaboratoryofMOEforDevelopmentalBiology CollegeofLifeSciencesWuhanUniversityWuhan430072HubeiChina WuhanMunicipalFourthHospital Wuhan430033HubeiChina

vasa gene expression pattern during oogenesis of zebrafish was examined usingin situ hybridization and fluorescent quantitative RT-PCR. During zebrafish oogensis,vasa mRNA is expressed strongly and uniformly distributed in the cytoplasm in stage II oocytes, followed by a distribution among vacuome in stage III. Later in stage IV and V,vasa mRNA is enriched at the cortex and finally localized at the cortex. The fluorescent quantitative RT-PCR shows that the quantity ofvasa mRNA decreases from stage II to stage III, but remains relatively invariable from stage III to stage V. The observed differences invasa mRNA expression in the different stages of zebrafish oogenesis suggest thatvasa gene plays an important role during oogenesis. Key words vasa - zebrafish - fluorescent quantitative RT-PCR - oogenesis CLC number Q 952.6 Foundation item: Supported by the National Natural Science Foundation of China (30370744, 30150005)Biography: XIANG Fang (1979-), male, Master candidate, research direction: molecular development of animals.

关键词： vasa zebrafish fluorescent quantitative RT-PCR oogenesis

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Differential expression of vasa gene in ejaculated spermatozoa from normozoospermic men and patients with oligozoospermia

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Asian Journal of Andrology 2007年第3期9卷 339-344页

作者： Xin Guo Yao-Ting Gui Ai-Fa Tang Li-Hua Lu Xin Gao Zhi-Ming Cai The Laboratory of Male Reproductive Medicine Peking University Shenzhen Hospital Shenzhen 518036 China Department of Urosurgery The Third Affiliated Hospital Sun Yet-Sen University Guangzhou 510630 China

Aim： To detect the expression of vasa in human ejaculated spermatozoa, and to compare the expression of vasa between normozoospermic men and patients with oligozoospermia. Methods： Ejaculated spermatozoa were collected from normozoospermic men and patients with oligozoospermia by masturbation, and subsequently segregated through a discontinuous gradient of Percoll to obtain the spermatozoa. Reverse transcription polymerase chain reaction （RT- PCR）, quantitative RT-PCR （QRT-PCR）, immunoflurescence and Western blotting were used to detect the expression of vasa in mRNA and protein levels. Results： vasa mRNA was expressed in the ejaculated spermatozoa. QRT-PCR analysis showed that vasa mRNA level was approximately 5-fold higher in normozoospermic men than that in oligozoospermic men. Immunofluorescence and Western blotting analysis showed that vasa protein was located on the cytoplasmic membrane of heads and tails of spermatozoa, and its expression was significantly decreased in oligozoospermic men, which is similar to the result of QRT-PCR. Conclusion： The expression of vasa mRNA and protein was significantly decreased in the sperm of oligozoospermic men, which suggested the lower expression of the vasa gene might be associated with pathogenesis in some subtypes of male infertility and vasa could be used as a molecular marker for the diagnosis of male infertility.

关键词： vasa ejaculated spermatozoa oligozoospermia male infertility spermatogenesis

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基于CRISPR/Cas9系统构建绵羊vasa基因敲入载体及验证

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生物工程学报 2023年第10期39卷 4219-4233页

作者：杨花刘孜斐吕文莉王锋张艳丽南京农业大学动物科技学院羊业科学研究所江苏南京210095

本研究旨在探索vasa基因在绵羊睾丸发育中的表达变化,并通过构建vasa基因敲入载体,为下一步进行绵羊生殖细胞体外诱导分化研究提供基础。采集性成熟前后即3月龄(3-month-old,3M)和9月龄(9-month-old,9M)绵羊睾丸组织,利用实时荧光定量PC... 详细信息

本研究旨在探索vasa基因在绵羊睾丸发育中的表达变化,并通过构建vasa基因敲入载体,为下一步进行绵羊生殖细胞体外诱导分化研究提供基础。采集性成熟前后即3月龄(3-month-old,3M)和9月龄(9-month-old,9M)绵羊睾丸组织,利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和Western blotting技术分析vasa基因的差异表达,并利用免疫组织化学技术对vasa基因的表达定位进行分析。设计靶向vasa基因的向导RNA(guide RNA,gRNA),并构建同源重组载体,进行质粒转染绵羊耳成纤维细胞。结合CRISPR/dCas9技术对vasa基因进行激活,进一步验证载体效率。结果表明,vasa基因随着绵羊睾丸发育,表达水平极显著增加(Pvasa基因敲入载体,联合pEGFP-PGKpuro-vasa载体转染耳成纤维细胞,CRISPR/dCas9系统激活后,耳成纤维细胞成功表达vasa基因。结果提示,vasa基因在绵羊睾丸发育和精子发生中发挥潜在功能,且通过CRISPR/Cas9系统可在体外构建vasa基因敲入载体,为下一步探究vasa基因对绵羊雄性生殖细胞的发育和分化提供有效的研究手段。

关键词： vasa CRISPR/Cas9 CRISPR/dCas9 敲入绵羊

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vasa-LIKE GENE AS A MARKER OF THE GERMLINE CELL DEVELOPMENT IN SCALLOP CHLAMYS FARRERI

VASA-LIKE GENE AS A MARKER OF THE GERMLINE CELL DEVELOPMENT ...

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Ⅸ International Congress on Medical and Applied Malacology

作者： Mingyu Shao Zhenmin Bao Zhifeng Zhang* Laboratory of Marine Genetics and Breeding Ocean University of China Qingdao P.R.China

＜正＞The vasa gene,encoding a RNA helicase protein member of the DEAD-box family,is a key determinant for germline formation in *** gene exclusively expresses in germ cell lineage throughout development in most animal species and provides the most reliable molecular marker for germline *** the present study,a vasa-like gene of scallop

关键词： vasa germline cell development scallop Chlamys farreri

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vasa基因研究进展

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动物学杂志 2010年第4期45卷 173-180页

作者：陈玉冬邹志华王艺磊张子平集美大学水产学院福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室厦门361021 德克萨斯州立大学化学和生物化学系美国圣马克斯TX78666

DEAD-box家族基因编码一类ATP依赖的RNA解旋酶。经系统进化分析可将该家族蛋白分为vasa、PL10和p68三个亚家族。其中,vasa基因最先在果蝇(Drosophila melanogaster)中被发现,在许多动物中都已经克隆得到其同源基因,研究显示,vasa基因在... 详细信息

DEAD-box家族基因编码一类ATP依赖的RNA解旋酶。经系统进化分析可将该家族蛋白分为vasa、PL10和p68三个亚家族。其中,vasa基因最先在果蝇(Drosophila melanogaster)中被发现,在许多动物中都已经克隆得到其同源基因,研究显示,vasa基因在生殖细胞系中特异性表达,在许多生物中为生殖细胞形成和配子发生所需。有趣的是在果蝇中vasa蛋白是生殖质的组成部分,而在斑马鱼(Danio rerio)中vasa mRNA才是生殖质的组成部分。本文主要综述了vasa基因及其蛋白的结构、功能、表达和作为原生殖细胞分子标记物的应用等方面的内容,并展望了其研究前景。

关键词： vasa vasa蛋白 DEAD-box 生殖细胞配子发生

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vasa基因编码蛋白的结构特征和应用展望

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海洋湖沼通报 2007年第4期 129-134页

作者：周倩如邵明瑜张志峰中国海洋大学海洋生物遗传育种实验室山东青岛266003

vasa基因编码的蛋白是DEAD-box家族的一种RNA解旋酶,该基因最先在果蝇中发现,其同源基因在许多动物中都已经克隆得到,vasa基因在生殖细胞系中特异性表达,研究显示其在配子发生和胚胎发育过程中发挥重要作用。本文重点介绍其编码蛋白的... 详细信息

vasa基因编码的蛋白是DEAD-box家族的一种RNA解旋酶,该基因最先在果蝇中发现,其同源基因在许多动物中都已经克隆得到,vasa基因在生殖细胞系中特异性表达,研究显示其在配子发生和胚胎发育过程中发挥重要作用。本文重点介绍其编码蛋白的结构特征和应用展望。

关键词： vasa vasa蛋白 DEAD-box 原生殖细胞生殖系

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黑脊倒刺鲃vasa同源基因的克隆及表达分析

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水产学报 2012年第6期36卷 868-878页

作者：唐良华苏敏吕博彦詹冰津池丽影祝玲周琼福建师范大学福建省发育与神经生物学重点实验室福建师范大学生命科学学院

为了从分子水平上研究鱼类生殖细胞发育的机制,首次从重要的经济养殖鱼类——黑脊倒刺鲃中克隆了斑马鱼vasa的同源基因ScVHG。该cDNA长1962bp,编码654个氨基酸,氨基酸序列中含有DEAD蛋白家族特有的9个保守结构域。经比对发现,其编码的... 详细信息

为了从分子水平上研究鱼类生殖细胞发育的机制,首次从重要的经济养殖鱼类——黑脊倒刺鲃中克隆了斑马鱼vasa的同源基因ScVHG。该cDNA长1962bp,编码654个氨基酸,氨基酸序列中含有DEAD蛋白家族特有的9个保守结构域。经比对发现,其编码的蛋白序列与斑马鱼vasa蛋白等具有高度的同源性,与斑马鱼、罗非鱼、虹鳟、银鲫、黄鳝、金鱼、金枪鱼、草鱼的vasa蛋白相似度分别为77%,77%,79%,90%,74%,89%,79%和86%。RT-PCR结果显示:在成鱼不同的组织中,ScVHG仅在精巢和卵巢中表达。RNA原位杂交结果进一步表明:在精子发生中,ScVHG只在精原细胞中表达,而在后期的精母细胞、精子细胞中均未发现明显的表达;在卵子发生中,ScVHG在卵原细胞和卵母细胞的各个时相中均有表达,在卵原细胞中表达最为强烈,而在随后各时相的卵母细胞中,阳性信号逐渐减弱。研究认为,该基因中含有的保守序列、序列的相似性以及该基因在生殖细胞中的特异性表达等结果均表明,克隆得到的ScVHG是斑马鱼vasa的同源基因,此基因可作为一种有效的分子标记,用于黑脊倒刺鲃以及其他鱼类生殖细胞发育机制的研究。

关键词：黑脊倒刺鲃 vasa 原位杂交生殖细胞

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真鲷(Pagrus major)vasa基因5′端启动子克隆及表达载体构建

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海洋与湖沼 2011年第2期42卷 186-192页

作者：林帆刘清华李军隋娟肖志忠徐世宏马道远肖永双中国科学院海洋研究所青岛266071 中国科学院研究生院北京100049

采用染色体步移(Genome walking)的方法克隆了真鲷vasa基因5′侧翼序列,采用生物信息学方法分析潜在的顺式作用元件,并与斑马鱼核心启动子进行比对,在此基础上构建了绿色荧光蛋白表达载体。序列分析结果显示:克隆得到的真鲷vasa基因5′... 详细信息

采用染色体步移(Genome walking)的方法克隆了真鲷vasa基因5′侧翼序列,采用生物信息学方法分析潜在的顺式作用元件,并与斑马鱼核心启动子进行比对,在此基础上构建了绿色荧光蛋白表达载体。序列分析结果显示:克隆得到的真鲷vasa基因5′侧翼序列序列长度为2762bp,其中包括TATA-box、CAAT-box、SP-1、GAGA-1、OCT-1、v-Myb、Sox-5、SRY、HNF等可能对vasa基因转录调控起重要作用的顺式作用元件。潜在的核心启动子区与斑马鱼核心启动子具有同源性(61.1%),推测可能对转录调控具有重要的作用。采用PCR方法扩增起始密码5′侧翼全长片段,连接入去除CMV启动子的绿色色荧光蛋白载体,最终成功构建真鲷vasa基因5′侧翼表达载体,为进一步研究分析启动子效率和绿色荧光蛋白在PGCs中的特异表达提供了基础。

关键词：真鲷 vasa 启动子 PGCs

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Contrast-enhanced ultrasound imaging of the vasa vasorum of carotid artery plaque

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World Journal of Radiology 2015年第6期7卷 131-133页

作者： Ze-Zhou Song Yan-Ming Zhang Department of Ultrasound Zhejiang Provincial People’s Hospital

The vasa vasorum of carotid artery plaque is a novel marker of accurately evaluating the vulnerability of carotid artery plaque, which was associated with symptomatic cerebrovascular and cardiovascular disease. The presence of ultrasound contrast agents in carotid artery plaque represents the presence of the vasa vasorum in carotid artery plaque because the ultrasoundcontrast agents are strict intravascular tracers. Therefore, contrast-enhanced ultrasound(CEUS) is a novel and safe imaging modality for evaluating the vasa vasorum in carotid artery plaque. However, there are some issues that needs to be assessed to embody fully the clinical utility of the vasa vasorum in carotid artery plaque with CEUS.

关键词： vasa vasorum Carotid artery Plaque Vulnerability Contrast-enhanced ultrasound

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