真鲷(Pagrus major)vasa基因5′端启动子克隆及表达载体构建

作     者：林帆 刘清华 李军 隋娟 肖志忠 徐世宏 马道远 肖永双 

作者机构：中国科学院海洋研究所青岛266071 中国科学院研究生院北京100049 

出 版 物：《海洋与湖沼》 (Oceanologia Et Limnologia Sinica)

年 卷 期：2011年第42卷第2期

页      面：186-192页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071008[理学-发育生物学] 

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划)课题 2006AA10A404号 国家自然科学基金项目 31072212号 41076100号 

主　　题：真鲷 vasa 启动子 PGCs 

摘      要：采用染色体步移(Genome walking)的方法克隆了真鲷vasa基因5′侧翼序列,采用生物信息学方法分析潜在的顺式作用元件,并与斑马鱼核心启动子进行比对,在此基础上构建了绿色荧光蛋白表达载体。序列分析结果显示:克隆得到的真鲷vasa基因5′侧翼序列序列长度为2762bp,其中包括TATA-box、CAAT-box、SP-1、GAGA-1、OCT-1、v-Myb、Sox-5、SRY、HNF等可能对vasa基因转录调控起重要作用的顺式作用元件。潜在的核心启动子区与斑马鱼核心启动子具有同源性(61.1%),推测可能对转录调控具有重要的作用。采用PCR方法扩增起始密码5′侧翼全长片段,连接入去除CMV启动子的绿色色荧光蛋白载体,最终成功构建真鲷vasa基因5′侧翼表达载体,为进一步研究分析启动子效率和绿色荧光蛋白在PGCs中的特异表达提供了基础。