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调控usp8基因抑制神经炎症

中国病理生理杂志 2015年第10期 1866-1867页

作者：朱丽红赵佳仪蓝欣袁羽陆大祥暨南大学医学院

目的:探讨调控泛素特异性修饰酶8(usp8)的表达对小胶质细胞活化的影响。方法:采用脂多糖(LPS)诱导BV2小鼠小胶质细胞为活化的细胞模型,分别应用分子生物学技术构建pG CMV/IRES/EGFP-usp8载体研究上调usp8基因和RNA干扰技术研究干扰usp8... 详细信息

目的:探讨调控泛素特异性修饰酶8(usp8)的表达对小胶质细胞活化的影响。方法:采用脂多糖(LPS)诱导BV2小鼠小胶质细胞为活化的细胞模型,分别应用分子生物学技术构建pG CMV/IRES/EGFP-usp8载体研究上调usp8基因和RNA干扰技术研究干扰usp8基因对LPS诱导BV2小胶质细胞一氧化氮(NO)和前列腺素E2(PGE2)的含量、一氧化氮合酶(iN OS)和

关键词：神经炎症 BV PGE usp8 小胶质细胞小神经胶质调控调节控制

usp8稳定Cx43调控半通道活性在心肌缺血再灌注损伤中的作用及其机制研究

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USP8稳定Cx43调控半通道活性在心肌缺血再灌注损伤中的作用及其机...

作者：刘立华南昌大学

学位级别：硕士

目的:心肌缺血再灌注(Ischemia reperfusion,I/R)损伤是治疗急性心肌梗死的重大挑战。连接蛋白43(Connexin 43,Cx43)构成的缝隙连接可以通过促进动作电位的快速传播,来协调心脏收缩,对心脏的发育和功能至关重要。当心肌发生I/R损伤时,... 详细信息

目的:心肌缺血再灌注(Ischemia reperfusion,I/R)损伤是治疗急性心肌梗死的重大挑战。连接蛋白43(Connexin 43,Cx43)构成的缝隙连接可以通过促进动作电位的快速传播,来协调心脏收缩,对心脏的发育和功能至关重要。当心肌发生I/R损伤时,缝隙连接Cx43被泛素化降解,并导致Cx43半通道活性增强。此外,异常激活的Cx43半通道又与细胞焦亡介导的炎症损伤密切相关。本研究旨在探讨泛素特异性蛋白酶8(Ubiquitin-specific peptidase 8,usp8)、Cx43及其半通道与细胞焦亡在心肌I/R损伤中的作用机制,为防治缺血性心脏病提供新的靶点及途径。方法:1.结扎大鼠左冠状动脉前降支,缺血30 min再灌注2 h,构建心肌I/R损伤模型。采用TTC染色法检测心肌梗死面积。***染色法观察心肌结构变化,ELISA试剂盒测定大鼠血清中CK-MB,c Tn I和IL-1β水平。3.组织免疫荧光法观察心肌闰盘Cx43重构现象,免疫组织化学染色法观察心肌NLRP3炎性小体表达水平。4.H9c2细胞缺氧6 h再复氧12 h,构建缺氧/复氧(Hypoxia reoxygenation,H/R)损伤模型。在显微镜下观察细胞形态学变化,Hoechst 33342/PI双染实验检测PI阳性率,LDH检测试剂盒检测LDH释放率,细胞免疫荧光实验观察NLRP3炎性小体表达水平。*** AM/Di I实验评估Cx43缝隙连接通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)功能,Et Br染料摄取实验评估Cx43半通道活性,ATP检测试剂盒检测ATP释放率。6.采用无缝克隆法构建过表达usp8质粒,并根据琼脂糖凝胶电泳和测序结果进行鉴定。*** blot检测大鼠心肌组织和H9c2细胞中usp8,NLRP3,P2X7,Cx43,GSDMD-N,ASC,cleaved-caspase-1和cleaved-IL-1β的表达水平。结果:1.大鼠I/R处理诱导严重的心肌损伤。与Sham组相比,I/R组大鼠心肌梗死面积明显增加,心肌组织结构紊乱,血清中CK-MB,c Tn I及IL-1β水平均显著升高,焦亡相关蛋白(NLRP3,GSDMD-N,ASC,cleaved-caspase-1和cleavedIL-1β)表达均上调。2.H9c2细胞H/R处理诱导细胞焦亡发生。与Control组相比,H/R组H9c2细胞质膜延伸出焦亡样大气泡,焦亡相关蛋白表达均明显上调,PI阳性率及LDH释放率显著增加。3.抑制P2X7受体缓解H/R诱导的细胞焦亡。使用10μM P2X7受体抑制剂(A-740003)预处理1 h,再H/R处理。与H/R组相比,A-740003+H/R组的NLRP3炎性小体及焦亡相关蛋白的表达显著减少,PI阳性率及LDH释放率也明显下降。***43参与心肌I/R损伤过程。与Sham组相比,I/R组心肌组织Cx43表达下调,闰盘Cx43发生偏侧化重构。与Control组相比,H/R组H9c2细胞Cx43表达下调,GJIC功能减弱,而半通道活性增强,ATP释放率显著增加。5.抑制Cx43半通道活性减轻细胞焦亡,缓解大鼠心肌I/R损伤。术前10min按12.5 mg/kg的量尾静脉注射Cx43半通道抑制剂(Gap19),再进行心肌I/R实验。与I/R组相比,Gap19+I/R组心肌梗死面积显著减少,血清中CK-MB,c Tn I及IL-1β水平明显降低,心肌组织结构得到有效改善,NLRP3炎性小体,P2X7及焦亡相关蛋白表达均下调。6.抑制Cx43半通道活性减轻P2X7/NLRP3介导的细胞焦亡。使用250μM Gap19预处理H9c2细胞30 min,再H/R处理。与H/R组相比,Gap19+H/R组Cx43半通道活性减弱,ATP释放率显著降低,P2X7及焦亡相关蛋白表达均下调,PI阳性率及LDH释放率明显下降。7.过表达Cx43抑制其半通道活性缓解P2X7/NLRP3介导的细胞焦亡。与GV-NC+H/R组相比,GV-Cx43+H/R组Cx43蛋白表达上调,半通道活性降低,ATP释放显著减少,P2X7及焦亡相关蛋白表达均下调,PI阳性率及LDH释放率明显下降。8.过表达usp8通过稳定Cx43调控其半通道活性抑制P2X7/NLRP3介导的细胞焦亡。与pc-NC+H/R组相比,pc-usp8+H/R组的usp8及Cx43蛋白表达得到有效挽救,GJIC功能改善,Cx43半通道活性降低,ATP释放明显减少,P2X7及焦亡相关蛋白表达均下调,PI阳性率及LDH释放率显著下降。结论:去泛素化酶usp8稳定Cx43调控其半通道活性,抑制P2X7/NLRP3介

关键词：心肌缺血再灌注损伤 usp8 Cx43 半通道焦亡

去泛素化酶usp8通过激活JNK信号通路调控细胞迁移的机制研究

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去泛素化酶Usp8通过激活JNK信号通路调控细胞迁移的机制研究

作者：张倩山东农业大学

学位级别：硕士

恶性肿瘤严重威胁着人类生命健康,已成为人类死亡的主要原因。肿瘤转移,而不是原发性肿瘤的过度生长,是肿瘤引起死亡的主要原因。恶性肿瘤的转移是一个由多种基因控制的复杂过程,其潜在调控机制还尚不清楚。因此,探究新的与肿瘤细胞迁... 详细信息

恶性肿瘤严重威胁着人类生命健康,已成为人类死亡的主要原因。肿瘤转移,而不是原发性肿瘤的过度生长,是肿瘤引起死亡的主要原因。恶性肿瘤的转移是一个由多种基因控制的复杂过程,其潜在调控机制还尚不清楚。因此,探究新的与肿瘤细胞迁移相关的调节因子将为转移性肿瘤治疗提供靶点参考及重要的理论依据。黑腹果蝇由于其生活周期短,易饲养,繁殖力强,染色体少,突变体多等优点,已成为现代生物学研究中最重要的模式生物之一。果蝇的翅原基(wing disc)已成为体内探究肿瘤细胞迁移的理想模型。越来越多的研究以果蝇作为细胞迁移模型,研究表明,JNK(c-Jun N-terminal kinase)信号通路不仅与细胞凋亡有着极大关系,它还能在发育过程中调控细胞移动和粘附,JNK信号通路的激活往往会导致肿瘤细胞的迁移,所以JNK信号通路在肿瘤细胞的迁移过程中发挥着重要作用。目前已经鉴定了多种JNK通路的主要元件,并揭示了其功能;然而,关于蛋白翻译后修饰水平对JNK信号通路元件的调控作用报道相对较少。寻找在翻译后修饰水平调控JNK信号通路元件的调节因子,并揭示其调控机制,对探究JNK信号通路调控的细胞迁移具有重要的意义。去泛素化酶(DUBs)通过水解泛素羧基末端的酯键、肽键或异肽键,将泛素分子特异性的从链接有泛素的蛋白质或者前体蛋白水解下来,调控靶蛋白的定位、稳定性和活性。DUBs参与细胞生长发育、细胞周期、信号转导、免疫反应等多种生物学过程。有研究表明去泛素化酶CYLD通过稳定Traf2来激活JNK信号通路,进而调控果蝇眼睛的发育。然而,去泛素化酶是否调控JNK信号通路介导的细胞迁移还尚不清楚。本研究通过遗传筛选发现,在果蝇中过表达去泛素化酶usp8能够诱导细胞迁移,并且激活JNK信号通路。在此基础上,综合运用遗传学表位分析、表达载体构建、显微注射技术、特异性组织表达系统、免疫荧光染色、细胞瞬时转染、免疫共沉淀和免疫印迹、小鼠抗体制备、siRNA干扰、GST-pull down等技术和方法,探究了usp8对肿瘤细胞发生迁移的作用,并进一步解析了其调控机制。主要研究结果如下:(1)利用GAL4-UAS系统和FLP-out技术过表达usp8,发现过表达usp8能够诱导细胞迁移。随后,在敲降细胞极性相关基因scrib背景下过表达或敲降usp8,发现usp8敲降能够有效抑制scrib RNAi诱导的细胞迁移,而usp8过表达则加剧了scrib RNAi诱导细胞迁移的现象,表明usp8能够促进细胞迁移。(2)免疫荧光染色发现,利用Bsk 阻断JNK信号通路活性能够有效地抑制usp8过表达诱导的肿瘤细胞迁移。同时发现过表达usp8能够引起JNK通路经典靶基因puc-lac Z和Mmp1表达水平显著升高,并且usp8同样激活p JNK蛋白水平。由此表明,usp8通过激活JNK通路活性诱导肿瘤细胞迁移。(3)遗传上位性实验表明,敲降bsk、hep、tak1均能挽救usp8过表达诱导的puc-lac Z上调,而不能通过traf2 RNAi挽救,暗示着usp8作用于Traf2下游和Tak1的上游来调节JNK通路。Co-IP及GST pull-down结果显示,usp8和Tak1存在相互作用,并且usp8的N-末端和C-末端都能结合Tak1,而Tak1的N-末端可以结合usp8,Tak1 C-末端不能结合usp8。(4)通过稳定性和泛素化实验发现Tak1蛋白的半衰期约为3h,usp8以剂量依赖的方式稳定Tak1,并且usp8是通过减少Tak1上K48和K63连接的泛素化来稳定Tak1。(5)鉴于JNK通路从果蝇到哺乳动物高度保守,为了探究usp8调控JNK通路及细胞迁移在高等动物中的保守性。首先,在果蝇翅原基中过表达人源husp8,发现husp8同样能够激活puc-lac Z的表达,升高Mmp1的蛋白水平,促进肿瘤细胞的迁移,并且引起的这种肿瘤细胞的迁移可以被bsk 或tak1 RNAi减弱。由此表明,husp8可以通过激活JNK通路诱导细胞迁移。(6)Co-IP分析显示husp8与hTAK1存在相互作用,敲降husp8降低了hTAK1蛋白水平,而husp8的过表达则稳定了hTAK1蛋白水平。乳腺癌样本分析显示husp8的蛋白水平与hTAK1蛋白水平呈正相关。husp8的过表达升高了(husp8的敲降则降低了)MMP9(人类Mmp1的同源基因)和p JNK的表达水平。q RT-PCR实验表明,husp8的过表达促进了JNK通路靶基因的转录,包括MMP9、Dusp10(人类puc的同源基因),这些结果表明husp8通过稳定hTAK1蛋白激活JNK信号通路活性。同时,Transwell分析显示husp8显著促进了乳腺癌细胞的迁移,而husp8的敲降则抑制了乳腺癌细胞的迁移。综上所述,本

关键词：恶性肿瘤细胞转移 usp8 JNK信号通路 Tak1

癌相关成纤维细胞来源外泌体下调USP8/CX43轴促进PC3细胞对多西他...

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作者：叶振扬福建医科大学

学位级别：硕士

【目的】化疗耐药是晚期前列腺癌临床治疗的一个棘手问题,并且相关机制仍未完全阐明。新近研究表明,肿瘤微环境特别是其中的癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAF)对肿瘤进展及化疗耐药形成具有重要作用。本研究以肿瘤... 详细信息

【目的】化疗耐药是晚期前列腺癌临床治疗的一个棘手问题,并且相关机制仍未完全阐明。新近研究表明,肿瘤微环境特别是其中的癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAF)对肿瘤进展及化疗耐药形成具有重要作用。本研究以肿瘤微环境中癌相关成纤维细胞为切入点,结合外泌体作为细胞间通讯介质作用,研究晚期前列腺癌多西他赛化疗耐药问题,并探索其中潜在机制。【方法】本研究首先应用含梯度浓度(0-80n M)多西他赛的培养基培养PC3细胞72h,CCK8法检测细胞活力,绘制药物浓度-肿瘤细胞增殖抑制曲线,计算多西他赛作用于PC3细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50),以确定下一步实验中处理PC3细胞的多西他赛浓度。接着,从手术切除的新鲜前列腺癌标本中分离纯化CAF,从CAF培养上清液中提纯CAF-exo,并行鉴定和示踪实验。实验分4组:CON组(常规培养基处理组)、CAF-medium组(CAF条件培养基处理组)、CAF-exo组(含50ug/ml CAF-exo的常规培养基处理组)、Exo-F-medium组(无外泌体CAF条件培养基处理组)。PC3细胞经上述4种培养基孵育24小时后,用含10n M多西他赛培养基继续培养72小时,然后应用CCK8法检测细胞活力,评估CAF-exo对PC3细胞多西他赛耐药性的影响,并应用Western blotting和q RT-PCR检测各组PC3细胞usp8和CX43表达情况。进一步,应用高表达usp8慢病毒感染PC3细胞(LV-usp8-PC3细胞)上调usp8及CX43表达(usp8/CX43轴),评估其对PC3细胞多西他赛耐药性的影响,并测定多西他赛作用于LV-usp8-PC3细胞的IC50。最后,体外实验验证usp8过表达对PC3细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。【结果】多西他赛作用于PC3细胞的IC50为8.5±0.36n M。从新鲜组织中成功分离纯化了CAF,且相比PC3细胞,CAF对多西他赛具有较高的耐受性。实验证实CAF-exo能够被PC3细胞摄取。分组实验结果显示,CAF-medium组PC3细胞活力高于CON组(P0.05)。多西他赛作用于CAF-exo-PC3细胞IC50为10.9±0.59n M。Western blotting结果表明,CAF-medium组和CAF-exo组PC3细胞usp8蛋白、CX43蛋白表达量低于CON组(Pusp8蛋白、CX43蛋白表达量高于CAF-medium组和CAF-exo组(Pusp8 m RNA表达量低于CON组(Pusp8 m RNA表达量高于CAF-medium组和CAF-exo组(P0.05)。通过慢病毒感染、筛选,成功建立稳定高表达usp8和CX43蛋白的细胞系LV-usp8-PC3。应用q RT-PCR和Western blotting进行效能验证,结果显示:LV-usp8-PC3细胞usp8 m RNA表达量为对照组10.0倍(Pusp8蛋白表达量为对照组的3.4倍(P0.05),CX43蛋白表达水平为对照组1.4倍(Pusp8+CAF-exo组PC3细胞活力低于LV-NC+CAF-exo组(P0.05)。这些结果表明,上调usp8/CX43轴能够回复CAF-exo增强PC3细胞对多西他赛耐药性的作用。多西他赛作用于LV-usp8-PC3细胞IC50为7.0±0.39n M。最后,体外实验证实,相比LV-NC-PC3细胞,LV-usp8-PC3细胞增殖、迁移、侵袭能力减弱。【结论】(1)CAF-exo可增强PC3细胞对多西他赛的耐受性;(2)CAF-exo是通过下调usp8/CX43轴增强PC3细胞对多西他赛耐药性的。

关键词：前列腺癌化疗耐药癌相关成纤维细胞外泌体 usp8 CX43

去泛素化酶usp8的小分子抑制剂对胶质母细胞瘤细胞作用及机制的研究

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去泛素化酶USP8的小分子抑制剂对胶质母细胞瘤细胞作用及机制的研...

作者：龙宇大连医科大学

学位级别：硕士

背景与目的:肿瘤是严重影响人类生命健康的疾病,并不断引发人们对这一领域的研究,推动全球医疗水平的发展。神经胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性脑瘤,约占所有原发性脑瘤的1/3,占所有中枢恶性脑肿瘤的大部分,其中胶质母细胞瘤在恶... 详细信息

背景与目的:肿瘤是严重影响人类生命健康的疾病,并不断引发人们对这一领域的研究,推动全球医疗水平的发展。神经胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性脑瘤,约占所有原发性脑瘤的1/3,占所有中枢恶性脑肿瘤的大部分,其中胶质母细胞瘤在恶性脑肿瘤中比例最高,并且这些病人治疗效果不佳,预后非常差,患者的中位生存时间仅为1年,即便通过手术和放化疗,也有复发的风险。目前针对于脑瘤的表观遗传学研究已经取得了长足进展,但其中对于蛋白质水平调控以及其活性变化是如何影响脑瘤的进展并不十分明确,还需要进一步探讨研究。蛋白质翻译后修饰是维持细胞生理功能稳定中不可缺少的环节,泛素-蛋白酶体系统(UPS)在真核细胞中负责底物降解,并且这个系统是可逆的,由去泛素化酶(DUBs)去除底物上的泛素部分。泛素特异性蛋白酶(usps)是DUBs中数量最多的一大类,根据现有研究表明usps能够通过调节癌细胞的增殖和死亡来调节癌症的发生发展。在多种癌细胞中,泛素特异性蛋白酶8(usp8)的异常升高与预后不良相关,表明usp8可能是致癌的,可能是肿瘤治疗的潜在靶蛋白,这些研究显示usps成为潜在的抗癌靶点,开发usps的特异性小分子抑制剂作为抗癌治疗药物越来越重要。本研究的目的是探讨usp8的小分子抑制剂对胶质母细胞瘤细胞作用与机制的研究,从而为临床患者的治疗方案选择提供帮助。方法与结果:通过细胞增殖、细胞克隆形成、Ki-67染色、Transwell、细胞划痕、细胞成球、电离辐射(IR)等实验评价usp8的小分子抑制剂对胶质母细胞瘤细胞LN229、T98G以及U87MG这三个细胞系的生长、迁移、侵袭和干性的影响。U87MG细胞对usp8的小分子抑制剂敏感性低,选择LN229、T98G细胞做后续研究。结果表明以500 n M和800 n M药物浓度的usp8的小分子抑制剂处理胶质母细胞瘤细胞能抑制LN229和T98G细胞的生长。用500 n M药物浓度的usp8的小分子抑制剂处理的胶质母细胞瘤细胞LN229和T98G细胞的转录组结果分析显示,药理作用上抑制usp8能够显著改变胶质母细胞瘤细胞AURKA m RNA的表达。此外我们通过蛋白免疫印迹实验分析也证实了这一结果,usp8的小分子抑制剂以剂量依赖性的方式下调细胞周期调节因子Aurora kinase A(AURKA)在LN229和T98G细胞中的蛋白水平。我们的实验结果表明抑制usp8能明显抑制LN229和T98G细胞的增殖、迁移、侵袭和成球。usp8的抑制可能通过调节多种m RNA表达的事件来呈现,其中包括关键的细胞周期调节剂和致癌蛋白AURKA,以此来引发多种肿瘤的抑制作用。因此,我们的结果证实了usp8能够作为支持胶质母细胞瘤细胞的作用,我们建议将usp8药理抑制作为靶向胶质母细胞瘤细胞的潜在治疗方法。结论:***8抑制剂能抑制胶质母细胞瘤细胞LN229、T98G和U87MG细胞的增殖,U87MG细胞对usp8的小分子抑制剂敏感性低。***8抑制剂可减弱胶质母细胞瘤细胞LN229和T98G细胞的迁移。***8抑制剂能影响胶质母细胞瘤细胞LN229和T98G细胞的成球并使胶质母细胞瘤细胞LN229和T98G细胞对电离辐射敏感。***8抑制剂可降低胶质母细胞瘤细胞LN229和T98G细胞AURKA的表达。

关键词：胶质母细胞瘤 AURKA usp8 LN229细胞 T98G细胞

去泛素化酶usp8介导的自噬-溶酶体通路在帕金森病致病机制中的作用

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去泛素化酶USP8介导的自噬-溶酶体通路在帕金森病致病机制中的作用

作者：徐婉苏州大学

学位级别：硕士

目的:帕金森病（PD）是第二大常见的中枢神经退行性疾病,其确切的发病机制还不清楚。本研究通过对PD病人转录组数据的分析来鉴定参与PD发病的关键调控因子,并考察其对自噬的调控作用。方法:我们从GEO数据库中收集来自PD病人黑质脑区的... 详细信息

目的:帕金森病（PD）是第二大常见的中枢神经退行性疾病,其确切的发病机制还不清楚。本研究通过对PD病人转录组数据的分析来鉴定参与PD发病的关键调控因子,并考察其对自噬的调控作用。方法:我们从GEO数据库中收集来自PD病人黑质脑区的转录组数据,并进行差异表达分析。在基因表达数据的基础上进行全基因组通路富集分析（GSEA）,从而鉴定参与PD发病的潜在调控因子,并对它进行生物学功能的研究。采用MPP+处理多巴胺能神经元细胞系MES23.5细胞的方法建立PD细胞模型。在该模型中,我们通过Western blot检测对照组和MPP+处理组中usp8的蛋白水平;在MES23.5细胞中过表达Flag-usp8,检测对照组和MPP+处理组中剪切形式的caspase-3的蛋白水平。为了探究usp8对自噬的影响,我们在MES23.5细胞和HEK293细胞中转染siRNA来沉默usp8的表达,分别检测LC3、p62的蛋白水平。在敲减usp8的HEK293细胞中加入自噬抑制剂Bafilomycin A1（Baf A1）处理,检测LC3的蛋白水平。在稳定转染mCherry-EGFP-LC3的HEK293细胞中敲减usp8,通过细胞免疫荧光的方法观察LC3点状聚集体。为了进一步探究usp8对溶酶体的影响,我们通过Western blot和Real-time qPCR检测usp8敲减细胞中TFEB、LAMP 1的蛋白水平和mRNA水平。通过溶酶体酸度指示剂Lysotracker的染色实验,观察溶酶体的荧光强度。最后,我们通过GeneMANIA分析与usp8具有相互作用的蛋白,并对这些蛋白进行GO功能注释分析。在敲减usp8的MES23.5细胞中,通过Western blot检测ESCRT-Ⅲ复合物成分CHMP1B的蛋白水平。结果:我们从GEO数据库中收集了来自PD病人的五组转录组数据,并进行基因的差异表达分析。与正常对照组相比,PD病人中共有252个基因显著下调,有22个基因显著上调。GSEA结果显示PD病人中蛋白酶体通路和溶酶体通路的显著下调,这表明PD中异常聚集蛋白质的降解途径受到抑制。在这些相关通路中,我们发现与正常对照组相比,PD病人中usp8的表达水平明显下调。在MPP+处理的MES23.5细胞中,usp8的蛋白水平也明显下调。当过表达Flag-usp8时,抑制了 MPP+诱导的剪切形式caspase-3的表达,这表明usp8在PD细胞模型中具有神经保护作用。在MES23.5和HEK293细胞中敲减usp8,都导致LC3-Ⅱ、p62的蛋白水平增加。在稳定转染mCherry-EGFP-LC3的HEK293细胞中敲减usp8后,观察到LC-3点状聚集体的黄色荧光增加,而红色荧光减少;当加Baf A1处理后,对照组和usp8敲减的细胞相比,黄色荧光没有明显差异。这些结果共同表明usp8的缺陷导致自噬流阻滞。在MES23.5细胞中敲减usp8后,转录因子TFEB的蛋白水平没有明显变化,但溶酶体膜蛋白LAMP1的蛋白水平明显减少。在敲减usp8的HEK293细胞中进行Lysotracker染色,发现溶酶体的荧光强度也明显减弱,表明敲减usp8下调溶酶体的生物合成。GO功能注释分析表明usp8的互作蛋白都富集在内体转运途径以及多囊泡小体的运输。在MES23.5细胞中敲减usp8导致ESCRT-Ⅲ复合物成分CHMP1B的蛋白水平明显减少,表明usp8可能通过介导内吞途径而导致溶酶体功能障碍。结论:我们的研究发现usp8在PD病人中的表达显著下调,并且在PD体外模型中具有神经保护作用。usp8的功能研究表明,敲减usp8下调溶酶体的生物合成进而导致自噬流阻滞。总之,我们的研究说明了 usp8缺陷导致的自噬-溶酶体通路障碍可能参与PD的发病。

关键词：帕金森病转录组 usp8 自噬溶酶体

垂体促肾上腺皮质激素腺瘤基因型与临床表型的相关性研究

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中华内分泌代谢杂志 2022年第2期38卷 125-131页

作者：苗卉王珞龚凤英段炼王林杰姚勇冯铭邓侃王任直管彦芳朱惠娟卢琳中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院内分泌科卫健委内分泌重点实验室疑难重症及罕见病国家重点实验室协和转化医学中心100730 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院神经外科100730 北京吉因加医学检验实验室有限公司 102206

目的库欣病(Cushing′s disease,CD)是由于垂体促肾上腺皮质激素(adrenocorticotroph hormone,ACTH)腺瘤分泌过多促肾上腺皮质激素,引起血浆皮质醇水平升高,导致血糖血脂代谢异常等一系列病理生理变化。若得不到有效治疗,病死率较高,因... 详细信息

目的库欣病(Cushing′s disease,CD)是由于垂体促肾上腺皮质激素(adrenocorticotroph hormone,ACTH)腺瘤分泌过多促肾上腺皮质激素,引起血浆皮质醇水平升高,导致血糖血脂代谢异常等一系列病理生理变化。若得不到有效治疗,病死率较高,因此阐明库欣病的发病机制十分重要。本研究旨在利用全基因组测序技术探索垂体ACTH腺瘤的发病机制。方法选取9例确诊为垂体ACTH腺瘤并经过手术治疗患者的垂体瘤组织和与之配对的外周血样本进行了全基因组测序,并进行单核苷酸突变、小的插入或缺失、拷贝数变异、染色体结构变异的分析与验证。结果5例患者发现usp8基因体细胞热点突变(***718del、***718Pro、***720Arg、***720Gln),突变率为55.6%;1例患者检测出usp8拷贝数增加;1例usp8野生型患者检测出TP53(***135Tyr)、NF1(***1049Glufs*11)及KMT2C(c.3323+1G>A)突变。拷贝数变异分析结果显示1例usp8野生型患者存在多条染色体的杂合性缺失。结构变异分析发现2例意义未明的结构变异。本研究未发现胚系基因突变。结论usp8基因的体细胞突变和拷贝数增加、TP53等肿瘤相关基因的突变、广泛的体细胞拷贝数变异共同参与垂体ACTH腺瘤的致病。染色体结构变异可能有助于识别高危垂体ACTH腺瘤,患者需要更密切的随访和更积极的治疗。

关键词：垂体腺瘤 ACTH 全基因组测序 usp8

Nrdp1 increases ischemia induced primary rat cerebral cortical neurons and pheochromocytoma cells apoptosis via downregulation of HIF-1α protein

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Nrdp1 increases ischemia induced primary rat cerebral cortic...