检索结果-南通市图书馆

作者：汪怀周第二军医大学

学位级别：硕士

淋巴细胞的活化不仅需要来自于抗原受体[包括T细胞受体(T cell receptor,TCR)与B细胞受体(B cell receptor,BCR)]的信号,还需要来自于共刺激或共抑制性分子的第二信号,这些第二信号共同调控着淋巴细胞活化的程度、质量及持续性。对T细... 详细信息

淋巴细胞的活化不仅需要来自于抗原受体[包括T细胞受体(T cell receptor,TCR)与B细胞受体(B cell receptor,BCR)]的信号,还需要来自于共刺激或共抑制性分子的第二信号,这些第二信号共同调控着淋巴细胞活化的程度、质量及持续性。对T细胞而言,其表面的共刺激和共抑制分子不仅包括了CD28、CTLA-4(cytotoxicT-lymphocyte antigen-4)等免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)超家族成员,还包括了CD27、CD30、4-1BB和Fas等肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor,TNFR)-TNF家族成员。过去一直认为免疫球蛋白超家族成员主要接受来自抗原递呈细胞(antigen-presenting cell,APC)和外周组织上表达的B7家族蛋白的信号,而TNFR-TNF超家族成员除极个别的受体,如神经生长因子受体结合神经妥乐平、HVEM(herpesvius entry mediator)可与Ⅰ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus typeⅠ,HSVI)糖蛋白D(glycoprotein D)结合外,几乎均只与本家族成员发生联系。这些表面分子调节T细胞活化的一般规律是Ig超家族成员在T细胞活化早期决定其活化或抑制;而TNFR-TNF超家族成员则在T细胞活化晚期维持活化状态或诱导调亡,该超家族成员的这一功能特点主要是因为其大部分成员都是在T细胞活化后诱导表达。 BTLA(B and T lymphocyte attenuator)是新近发现的一Ig超家族抑制性受体,其虽与CTLA-4具有相似的结构,但其配体却不是经典的B7家族成员,而是TNFR-TNF超家族的HVEM。这是迄今为止发现的唯一一对Ig超家族成员与TNFR-TNF超家族成员相互作用的受配体。除BTLA外,HVEM还有另一个重要的膜结合分子——LIGHT,传递的信号维持T细胞的活化。通过和BTLA和LIGHT的结合,HVEM扮演一个双相调节T细胞激活的角色。对BTLA-HVEM复合物的晶体结构进行分析,提示HVEM有可能能同时结合LIGHT和BTLA,体外以纯化蛋白进行实验,也的确发现三者可形成复合物。ul144是人巨细胞病毒上一段和HVEM具有同源性的长独特型序列,ul144结合BTLA,但不结合LIGHT,并且抑制T细胞的增殖,选择性的模拟了HVEM的共抑制功能。 ul144基因产物与BTLA结合,在体外能抑制T细胞增殖,并且效果强于HVEM。由于BTLA表达于分化阶段的CDT细胞,并在Th1型细胞获得永久表达。在本研究中,我们考虑拟通过转基因的方式诱导DC表达ul144,观察其是否可能成为一种耐受型DC,或表现出某些耐受型特征,这种DC能否介导免疫抑制作用。在本课题中,我们拟选用实验性自身免疫性心肌炎为模型,研究通过调控ul144-BTLA通路重建自身免疫耐受,实现对Th1型反应为主的自身免疫性疾病进行治疗。在各种用于细胞转染的载体中,重组腺病毒对DC具有良好的感染效率,且易于构建、纯化并获得较高滴度,因而成为本研究首选的载体。本研究设计以hCMVDNA为模板,通过PCR扩增出ul144全长片段;用常规分子生物学方法构建了ul144全长片段的腺病毒表达载体(pAdEasy-1系统);腺病毒载体经HEK293细胞包装产生含ul144片段的重组腺病毒Ad-CMV-ul144,用氯化铯密度梯度离心法获得纯化的高滴度腺病毒;采用TCID方法对重组腺病毒滴度进行检测;运用AD-CMV-ul144感染DC,研究其表型变化以及细胞因子分泌情况;通过感染DC,与T细胞进行混合淋巴反应研究其抑制活性;用纯化的猪心肌肌凝蛋白免疫Balb/c小鼠,诱导实验性自身免疫性心肌炎动物模型的产生,并分别于再次免疫后0～2天与14～16天经尾静脉注射重组腺病毒感染的DC,观察Ad-CMV-ul144对实验性自身免疫性心肌炎的治疗效果,研究其在体内的抑制作用。第一部分携带ul144基因片段的重组腺病毒载体的构建与纯化本部分采用常规分子生物学方法,先从CMV-DNA阳性的病人外周血提取cDNA,根据Primer3软件设计的引物,PCR扩增获得ul144目的片段;经pMD18-T载体获得多克隆位点,装载进入重组穿梭质粒pAdTrack-CMV。以PmeⅠ酶切带目的片段的穿梭质粒pAdTrack-CMV后,与重组腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化感受态大肠杆菌DH-5α,发生同源重组获得携带ul144基因的重组腺病毒骨架,经鉴定后纯化该骨架质粒,以内切酶PacⅠ线性化骨架,转染HEK293细胞获得完整的重组腺病毒颗粒ul144。重组的腺病毒转入HeLa细胞中,经RT-PCR鉴定ul144基因成功表达。重组腺病毒经过大量扩增,收取细胞,PBS重悬,反复冻融3次后,

关键词： ul144基因单纯疱疹病毒进入介导子 B和T淋巴细胞衰减子重组腺病毒免疫炎症免疫耐受实验性自身免疫性心肌炎

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

先天性巨结肠患者人类巨细胞病毒ul144基因多态性的研究

引用

中华微生物学和免疫学杂志 2006年第4期26卷 348-353页

作者：毛志芹黄英孙梅何蓉黄郁静吉耀华齐莹马艳平孙峥嵘高红阮强中国医科大学附属盛京医院儿内科沈阳110004 中国医科大学附属盛京医院儿外科沈阳110004 卫生部小儿畸形重点实验室

目的研究人类巨细胞病毒(human cytomegalovims,HCMV)ul144基因在先天性巨结肠(Hirschsorung's disease,HD)临床株中的多态性,探讨HCMV ul144基因多态性与致病性之间的关系。方法随机选取53个先天性巨结肠患儿痉挛段结肠手术标本及经荧... 详细信息

目的研究人类巨细胞病毒(human cytomegalovims,HCMV)ul144基因在先天性巨结肠(Hirschsorung's disease,HD)临床株中的多态性,探讨HCMV ul144基因多态性与致病性之间的关系。方法随机选取53个先天性巨结肠患儿痉挛段结肠手术标本及经荧光定量PCR方法检测HC- MV DNA为阳性的4个HD患儿的尿标本,对照组为无症状或仅有皮肤轻度黄疸的6个尿标本。应用巢式聚合酶链反应的方法,扩增HCMVul144基因开放阅读框架(ORF),扩增阳性的临床株进行双向 DNA测序,最后通过DNAclub、Bioedit、DNAstar、GeneDoc等软件进行分析。结果23份HD痉挛段肠组织(46％)及4份尿标本HCMVul144基因扩增阳性,并且完成测序。种系进化树分析结果显示25个 HD患儿的DNA序列分为3个基因型,G1A型64．O％,G2型24％,G3型12％。与对照组比较,经X^2检验,X^2=10．93,p为0．012;其中HD临床株G1A和G3型基因经Fisher检验,P为0．015,差异具有统计学意义。全结肠型、长段型及普通型HD分散分布于ul144各个基因型中。结论HD与HCMV感染有关,HCMV可能是HD的病因之一;在HD患儿中,HCMV感染以ul144．基因G1A型为主;HD的临床分型与HCMVul144基因分型无关。

关键词：人巨细胞病毒先天性巨结肠 ul144基因多态性

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

人类巨细胞病毒ul144基因在临床低传代分离株中的多态性研究

引用

中华微生物学和免疫学杂志 2003年第1期23卷 42-48页

作者：何蓉阮强吉耀华刘庆陈淑荣刘兰青吕绳敏中国医科大学附属第二临床医院病毒室沈阳110004

目的　探讨人类巨细胞病毒 (humancytomegalovirus ,HCMV)ul144序列在临床患儿低传代分离株中的多态性及其与临床疾病的关系。方法　对 6 5株HCMV临床低传代分离株及 7例同年龄组HCMV DNA定量PCR方法检测阳性健康儿尿液进行HCMV ul144PC... 详细信息

目的　探讨人类巨细胞病毒 (humancytomegalovirus ,HCMV)ul144序列在临床患儿低传代分离株中的多态性及其与临床疾病的关系。方法　对 6 5株HCMV临床低传代分离株及 7例同年龄组HCMV DNA定量PCR方法检测阳性健康儿尿液进行HCMV ul144PCR扩增分析 ,对HCMV ul144扩增阳性标本进行HMA SSCP分析 ,并对其中 32个阳性标本进行HCMV ul144基因全序列测定及分析。结果　 6 5株分离株中有 5 5株ul144全序列引物PCR扩增为阳性 ,7份QPCR检测HCMV DNA阳性健康儿尿液中 5份ul144全序列引物PCR扩增为阳性。 6 0份ul144扩增阳性标本HMA SSCP (heteroduplexmobilityassayandsingle strandedconformationpolymorphism)分析呈现 3种典型带形 ,32个测序标本序列呈现较高的多态性 ,差异多位于序列的前半部 ,种系发生图谱分析可大致分为 3组 ,二级结构预测表现为 6种类型 ,在重要的蛋白质功能区氨基酸序列高度保守。各病种间结果比较显示 ,巨结肠患儿分离株序列没有Ⅱ型 ,小头畸形患儿的序列分布以Ⅰ型为主 ,黄疸患儿以Ⅲ型为主。32个HCMV ul144序列已被GenBank收录。结论　HCMV ul144广泛存在于临床低传代分离株中 ,序列呈现高度多态性 ,不同疾病类型的HCMV ul144序列不同 ,提示ul144基因可能在HCMV致病上起一定的作用。

关键词：人类巨细胞病毒 ul144基因临床低传代分离株多态性儿童

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

人巨细胞病毒ul144基因克隆表达及其对树突状细胞功能的影响

引用

第二军医大学学报 2009年第8期30卷 874-878页

作者：汪怀周蔡刚沈茜第二军医大学长海医院实验诊断科上海200433

目的:构建携带人巨细胞病毒(hCMV)ul144基因的重组腺病毒,研究ul144基因修饰的树突状细胞(dendritic cell,DC)的功能变化。方法:从hCMV-DNA阳性患者外周血提取cDNA,采用PCR技术扩增出ul144基因。采用AdEasy系统构建携带hCMVul144基因的... 详细信息

目的:构建携带人巨细胞病毒(hCMV)ul144基因的重组腺病毒,研究ul144基因修饰的树突状细胞(dendritic cell,DC)的功能变化。方法:从hCMV-DNA阳性患者外周血提取cDNA,采用PCR技术扩增出ul144基因。采用AdEasy系统构建携带hCMVul144基因的重组腺病毒载体pAd-ul144,转染HEK293细胞后包装产生重组腺病毒Ad-ul144。通过RT-PCR检测目的基因的表达。将此重组腺病毒转染小鼠骨髓来源的DC,采用流式细胞术检测DC表面分子,采用ELISA技术分析DC培养上清中的细胞因子,采用3H-TdR掺入法检测ul144基因修饰的DC激活T细胞增殖的能力。结果:成功将ul144基因片段克隆至载体上,并经HEK293细胞包装出病毒颗粒,经测定病毒滴度为3×1010pfu/ml。流式细胞术检测显示,ul144基因修饰的DC表面分子CD80、CD86和I-Ad表达水平低于对照组(Pul144基因修饰的DC分泌TNF-α、IL-6和IL-1β的能力减弱(Pul144基因修饰的DC介导的T细胞增殖功能明显低于DC对照组(Pul144基因修饰的DC具有维持相对未成熟状态的能力,并减弱了对抗原特异性T效应细胞的刺激功能。

关键词：人巨细胞病毒 ul144基因疱疹病毒侵入介体树突状细胞免疫耐受

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

人巨细胞病毒ul144基因序列分析及T细胞CTL表位预测

引用

实用预防医学 2011年第4期18卷 594-597页

作者：魏中南王维鹏胡洪波彭巧英胡兴文湖北省妇幼保健院湖北武汉430070

目的了解引起新生儿晚期黄疸的人巨细胞病毒（HCMV）ul144基因多态性,预测ul144基因各型编码蛋白的T细胞CTL表位。方法应用荧光定量PCR法检测晚期黄疸新生儿标本HCMV-DNA含量,采用巢式聚合酶链反应扩增阳性标本HCMV ul144基因开放读码框... 详细信息

目的了解引起新生儿晚期黄疸的人巨细胞病毒（HCMV）ul144基因多态性,预测ul144基因各型编码蛋白的T细胞CTL表位。方法应用荧光定量PCR法检测晚期黄疸新生儿标本HCMV-DNA含量,采用巢式聚合酶链反应扩增阳性标本HCMV ul144基因开放读码框（ORF）,结果进行双向DNA测序,绘制种系进化树对HCMV感染患儿ul144基因进行分型。应用SYFPEITHI和NetCTL方案预测HCMV ul144基因编码蛋白各临床株T细胞CTL表位。结果①30例晚期黄疸新生儿荧光定量PCR检测阳性,其中28例ul144基因扩增阳性。②28株ul144基因与Toledo株进行同源性比较,核苷酸水平为80.4%~99.2%,氨基酸水平为78.9%~98.8%。种系进化树分析显示感染患儿标本ul144基因可分为3个基因型,G1型7株（25%）,其中G1a3株,G1b3株,G1c1株,G2型7株（25%）,G3型14株（50%）。③初步筛选出ul144基因各型T细胞CTL表位：G1a：YTYFSTPGV或HTYFSTPGV;G1b：HTYFSTPGV;G1c：YTSFSISGV;G2：TLCPNGTYL或TLCPNGTYL和HTLFSTPGV;G3：TLCPNGTYV。结论①HCMV ul144基因的DNA序列具有高度多态性,晚期黄疸新生儿中HCMV感染以G3型为主。②各型编码蛋白的T细胞CTL表位存在差异。

关键词：人巨细胞病毒 ul144基因 CTL表位

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

人巨细胞病毒ul144基因序列分析及B细胞表位预测

引用

实用预防医学 2010年第11期17卷 2158-2160页

作者：胡洪波王维鹏魏中南彭巧英胡兴文湖北省妇幼保健院检验科湖北武汉430070 湖北省妇幼保健院新生儿科

目的了解引起新生儿晚期黄疸的人巨细胞病毒（HCMV）ul144基因多态性,预测ul144基因各型编码蛋白的B细胞优势表位。方法应用荧光定量PCR法检测晚期黄疸新生儿标本HCMV-DNA含量,采用巢式聚合酶链反应扩增阳性标本HCMV ul144基因开放读码... 详细信息

目的了解引起新生儿晚期黄疸的人巨细胞病毒（HCMV）ul144基因多态性,预测ul144基因各型编码蛋白的B细胞优势表位。方法应用荧光定量PCR法检测晚期黄疸新生儿标本HCMV-DNA含量,采用巢式聚合酶链反应扩增阳性标本HCMV ul144基因开放读码框（ORF）,结果进行双向DNA测序,绘制种系进化树对HCMV感染患儿ul144基因进行分型。结合亲水性参数、可及性参数、抗原性参数、柔韧性参数及二级结构方案对HCMV ul144基因编码各型蛋白的B细胞表位进行预测,参照已建立的预测方法综合评价B细胞优势表位。结果①30例晚期黄疸新生儿荧光定量PCR检测阳性,其中28例ul144基因扩增阳性。②28株ul144基因与Toledo株进行同源性比较,核苷酸水平为80.4%-99.2%,氨基酸水平为78.9%-98.8%。种系进化树分析显示感染患儿标本ul144基因可分为3个基因型,G1型7株（25%）,G2型7株（25%）,G3型14株（50%）。③HCMV ul144基因G1型和G2型B细胞表位均位于编码蛋白N段109-119位,G3型于氨基酸116位缺失一个谷氨酰胺,B细胞表位位于编码蛋白N段109-118位。结论①HCMV ul144基因的DNA序列呈高度多态性,但B细胞表位预测高度保守;②ul144 G3型氨基酸N段116位（Q）位点缺失可能改变该抗原表位的抗原性。

关键词：人巨细胞病毒 ul144基因 B细胞表位

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

引起新生儿晚期黄疸的巨细胞病毒ul144基因多态性研究

引用

中国儿童保健杂志 2011年第2期19卷 137-140页

作者：胡洪波王维鹏彭巧英管婉华胡兴文湖北省妇幼保健院检验科湖北武汉430070 湖北省妇幼保健院新生儿科湖北武汉430070

【目的】研究引起新生儿晚期黄疸的人巨细胞病毒（cytomega lovirus,HCMV）ul144基因的多态性,探讨HCMV ul144基因多态性与致病性之间的关系。【方法】应用荧光定量PCR法检测本院新生儿科2008年1—12月98例晚期黄疸新生儿样本HCMV-DNA含... 详细信息

【目的】研究引起新生儿晚期黄疸的人巨细胞病毒（cytomega lovirus,HCMV）ul144基因的多态性,探讨HCMV ul144基因多态性与致病性之间的关系。【方法】应用荧光定量PCR法检测本院新生儿科2008年1—12月98例晚期黄疸新生儿样本HCMV-DNA含量,采用巢式聚合酶链反应扩增阳性标本HCMV ul144基因开放读码框（ORF）,结果进行双向DNA测序,通过BioEdit、DNAstar、GeneDoc等软件进行序列分析。【结果】1）30例晚期黄疸新生儿HCMV荧光定量PCR检测阳性,阳性率30.6%,其中2例ul144基因扩增阴性。2）28株ul144基因与Toledo株进行同源性比较,核苷酸水平为80.4%~99.2%,氨基酸水平为78.9%~98.8%。种系进化树分析将DNA序列分为3个基因型,其中G1型7株（25%）,G2型7株（25%）,G3型14株（50%）。3）ExPASy数据库预测分析ul144基因编码产物重要功能区包括2个半胱氨酸富集结构域（CRD1、CRD2）、1个跨膜区和1个胞浆区。G1-G3型蛋白质二级结构高变区主要分布在CRD1区,跨膜区和胞浆区结构高度保守。【结论】1）HCMV感染是导致新生儿晚期黄疸的原因之一;2）HCMV ul144基因编码跨膜区和胞浆区结构高度保守,CRD1呈高度多态性;3）晚期黄疸新生儿中HCMV感染以G3型为主。

关键词：人巨细胞病毒 ul144基因黄疸多态性

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：