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畜牧兽医学报 2022年第1期53卷 250-262页

作者：王正荣马勋张艳艳孟季蒙薄新文省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院畜牧兽医研究所石河子832000 石河子大学动物科技学院石河子832000

本研究旨在解析巨噬细胞RAW264.7在应对细粒棘球绦虫原头蚴刺激时其th1、th2型免疫反应相关基因的差异表达规律,为进一步揭示巨噬细胞抗细粒棘球绦虫原头蚴免疫调控机制奠定理论基础。将细粒棘球绦虫原头蚴和巨噬细胞RAW264.7共培养6、2... 详细信息

本研究旨在解析巨噬细胞RAW264.7在应对细粒棘球绦虫原头蚴刺激时其th1、th2型免疫反应相关基因的差异表达规律,为进一步揭示巨噬细胞抗细粒棘球绦虫原头蚴免疫调控机制奠定理论基础。将细粒棘球绦虫原头蚴和巨噬细胞RAW264.7共培养6、24、72 h,收集RAW264.7细胞,提取总RNA,构建cDNA文库,利用RNA sequencing技术进行测序分析。结果表明,当细粒棘球绦虫原头蚴(PSC)与巨噬细胞RAW264.7共培养6、24、72 h后,和PBS对照组相比,PSC处理组分别有848、3745和7009个基因的表达出现显著差异变化,其中上调的基因分别为415、1159和2237个,下调的基因分别为433、2586和4772个。对th1、th2型免疫反应相关基因的差异表达分析结果显示,当巨噬细胞RAW264.7与细粒棘球绦虫原头蚴共培养6 h时,共有31个th1、th2型免疫反应相关基因的表达出现显著变化,其中15个基因出现显著上调,16个出现显著下调。当巨噬细胞RAW264.7与细粒棘球绦虫原头蚴共培养24 h时,共有111个th1、th2型免疫反应相关基因的表达出现显著变化,其中34个基因出现显著上调,78个出现显著下调。当巨噬细胞RAW264.7与细粒棘球绦虫原头蚴共培养72 h时,共有212个th1、th2型免疫反应相关基因的表达出现显著变化,其中50个基因出现显著上调,162个出现显著下调。这些差异表达的基因主要包括富亮氨酸重复序列蛋白LRRCs、G蛋白偶联受体GPCRs、C型凝集素受体CLRs、清道夫受体SRs等,同时还有一些模式识别受体PRR下游信号分子以及一些PRR下游效应分子。同时分析结果显示,当细粒棘球绦虫原头蚴与巨噬细胞RAW264.7共培养6、24 h时,其th1型的免疫反应相关的细胞因子编码基因,诸如Tnfrsf1a、Ifnar1的Tnfrsf12a等,它们的表达显著上调;而72 h时,其th2型免疫反应相关细胞因子编码基因,诸如IL4和IL6等,它们的表达显著上调。同时研究随机选取了部分差异表达的基因进行了qRT-PCR验证,结果表明其表达趋势与RNA-seq结果一致。本研究系统解析了巨噬细胞RAW264.7应对细粒棘球绦虫原头蚴刺激不同时间段其相关基因的差异表达谱特性,初步筛选了巨噬细胞RAW264.7应对细粒棘球绦虫原头蚴刺激固有免疫相关的基因,为进一步解析这些差异表达基因在巨噬细胞RAW264.7应对细粒棘球绦虫原头蚴刺激时发挥作用以及调控机制奠定了基础。

关键词：细粒棘球绦虫巨噬细胞RAW264.7 th1免疫反应 th2免疫反应

siRNA沉默STAT6抑制嗜酸粒细胞性慢性鼻窦炎产生的实验性研究

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2023年第11期58卷 1102-1111页

作者：卫红齐朱政文邢洪瑜刘志勇曹忠胜徐龙江刘济生苏州大学附属第二医院耳鼻咽喉科苏州215004 苏州大学附属第二医院病理科苏州215004 苏州大学附属第一医院耳鼻咽喉科苏州215006

目的探讨用小干扰RNA(siRNA)沉默信号传导和转录激活因子6(signal transducer and activator of transcription 6,STAT6),能否抑制小鼠嗜酸粒细胞性慢性鼻窦炎(eosinophilic chronic rhinosinusitis,ECRS)的产生。方法2022年3—9月期间,48只BALB/c雌性小鼠随机分为Control(对照)组、Vehicle(转染试剂)组、Scramble siRNA(对照siRNA)组和STAT6 siRNA组,每组12只。用卵清蛋白(OVA)联合金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)诱导小鼠ECRS,并用siRNA鼻腔滴注进行干预。随后收集外周血以及鼻黏膜组织标本。血细胞分析仪检测外周血嗜酸粒细胞(Eos)的数目及百分比;酶联免疫吸附实验检测外周血总免疫球蛋白E(IgE)和OVA-特异性IgE(OVA-sIgE)水平,以及鼻黏膜组织中干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-5、IL-17A和嗜酸粒细胞趋化因子1(Eotaxin-1)的表达量;用苏木精-伊红(HE)染色鼻黏膜组织切片,在高倍视野(HPF)下对Eos进行计数;蛋白免疫印迹检测鼻黏膜中STAT6和磷酸化STAT6(p-STAT6)蛋白水平;免疫荧光染色对鼻黏膜中p-STAT6表达进行定位。采用SPSS 18.0软件进行统计学分析。结果STAT6 siRNA组小鼠外周血Eos计数、Eos百分比、总IgE以及OVA-sIgE水平[(0.318±0.045)×10^(3)/μl、(3.667±0.479)%、(102.070±13.205)ng/ml和(38.870±7.352)ng/ml]明显低于Vehicle组[(0.532±0.049)×10^(3)/μl、(6.710±1.061)%、(203.102±29.653)ng/ml和(74.575±6.432)ng/ml,Z值分别为-2.56、-2.24、-2.40、-2.56,P值均2)%、(189.964±30.042)ng/ml和(80.935±8.358)ng/ml,Z值分别为-2.17、-2.08、-2.24、-2.72,P值均2.279±34.281)pg/ml和(25.297±4.323)pg/ml,也显著低于Vehicle组[(689.667±31.905)pg/ml、(68.278±6.485)pg/ml,Z值分别为-2.73、-2.88,P值均2.094)pg/ml、(63.015±7.416)pg/ml,Z值分别为-2.72、-2.81,P值均29.132±4.163)/HPF,明显低于Vehicle组[(78.050±7.912)/HPF,Z=-2.88,P2.72,P21,与Control、Vehicle及Scramble siRNA组(0.232±0.037、0.243±0.039、0.228±0.032)相比显著降低(Z值分别为-2.25、-2.49、-2.56,P值均292±0.038)明显下降(Z值分别为-2.81、-2.88,P值均免疫荧光染色结果显示,p-STAT6主要位于鼻黏膜上皮细胞及炎性细胞的细胞核中,STAT6 siRNA组小鼠鼻黏膜中表达p-STAT6的绿色荧光弱于Vehicle及Scramble siRNA组。结论经鼻滴入STAT6 siRNA可下调鼻黏膜STAT6表达,降低p-STAT6水平,抑制ECRS产生。

关键词：鼻窦炎嗜酸粒细胞 th2免疫反应信号传导和转录激活因子6 小干扰RNA

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积极稳妥推广变应原特异性免疫治疗

中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2011年第12期46卷 969-971页

作者：张罗韩德民首都医科大学附属北京同仁医院耳鼻咽喉头颈外科教育部耳鼻咽喉头颈外科重点实验室（首都医科大学）北京市耳鼻咽喉科研究所 100730

变应性鼻炎（AR）是体外环境变应原（过敏原）作用于具有独特遗传特征的特应性机体后出现的以鼻腔黏膜th2免疫反应占优势的过敏性炎性反应。

关键词：特异性免疫治疗变应原 th2免疫反应变应性鼻炎炎性反应鼻腔黏膜遗传特征体外环境

重组可诱导共刺激分子融合蛋白治疗过敏性支气管哮喘小鼠的实验研究

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中华结核和呼吸杂志 2005年第6期28卷 398-402页

作者：王健张军龙宪连蔡刚沈茜上海长海医院中心实验室 200433

目的研究可诱导共刺激分子融合蛋白(ICOSIg)对过敏性支气管哮喘(简称哮喘)小鼠的治疗作用。方法32只健康雌性BALB/c小鼠用分段随机分组法将小鼠随机分成4组。哮喘组(A组)、ICOSIg治疗组(B组)、同型抗体对照组(C组)、生理盐水气雾激发对... 详细信息

目的研究可诱导共刺激分子融合蛋白(ICOSIg)对过敏性支气管哮喘(简称哮喘)小鼠的治疗作用。方法32只健康雌性BALB/c小鼠用分段随机分组法将小鼠随机分成4组。哮喘组(A组)、ICOSIg治疗组(B组)、同型抗体对照组(C组)、生理盐水气雾激发对照组(D组),每组8只,采用重组真核表达技术制备ICOSIg,建立鸡卵白蛋白(OVA)免疫小鼠哮喘模型,给予ICOSIg治疗后观察其气道阻力变化、支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数、各炎性细胞百分比及白细胞介素4(IL4)、γ干扰素(IFNγ)和总免疫球蛋白E(IgE)含量的变化;采用流式细胞仪(FACS)检测T辅助细胞(th)亚群变化;取肺组织行病理组织学分析观察肺内炎症情况。结果(1)制备的ICOSIg可与哮喘小鼠脾脏B细胞上相应配体结合。(2)B组小鼠气道压力变化为[(33±12)%],与A组[(58±10)%]比较差异有统计学意义(Pth2细胞比例为(4.5±1.0)%,与A组[(11.1±2.5)%]比较差异有统计学意义(Pth2免疫反应偏移并抑制IgE的生成,对过敏性哮喘有治疗作用。

关键词：可诱导共刺激分子融合蛋白实验研究哮喘小鼠 ICOS-Ig 过敏性支气管哮喘 BALB/c小鼠支气管肺泡灌洗液 th2免疫反应重组真核表达总免疫球蛋白气道压力变化治疗作用细胞总数统计学白细胞介素 IFN-γ T辅助细胞

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紫菜多糖和龙须菜寡糖抗食物过敏性质的研究

紫菜多糖和龙须菜寡糖抗食物过敏性质的研究

作者：时超岚集美大学

学位级别：硕士

在过去的几十年中，食物过敏的发生率在全世界范围内逐年上升。食物过敏常常会引起皮肤、消化道和呼吸道等部位的病理反应，严重的还会威胁到患者的生命。目前，通过开发新型抗过敏天然活性物质来预防或治疗食物过敏正逐渐成为一个新的... 详细信息

在过去的几十年中，食物过敏的发生率在全世界范围内逐年上升。食物过敏常常会引起皮肤、消化道和呼吸道等部位的病理反应，严重的还会威胁到患者的生命。目前，通过开发新型抗过敏天然活性物质来预防或治疗食物过敏正逐渐成为一个新的研究热点。紫菜多糖（porphyran）是一类存在于紫菜中的硫酸多糖，具有免疫调节的活性，并且能够预防和治疗自身免疫性疾病。龙须菜寡糖（Gracilaria lemaneiformis oligosaccharide）是通过菌株与龙须菜共培养直接制备的寡糖。目前关于紫菜多糖和龙须菜寡糖抗过敏方面的研究较少，所以探究紫菜多糖和龙须菜寡糖的抗食物过敏功效，并深入研究其抗食物过敏机理，对于开发新型原料药或功能性食品具有重要的意义。本研究通过水提、低压浓缩、醇沉、DEAE-cellulose52离子柱层析等方法获得高纯度紫菜多糖，其总糖含量为98.85%，3,6-内醚半乳糖含量为6.25%，硫酸根含量为14.26%，糖醛酸含量为14.02%，蛋白含量为1.2%。通过离子色谱鉴定其含有的单糖主要为半乳糖，含量为60.09%。通过发酵、超滤、Superdex Peptide HR10/300柱层析等方法获得高纯度龙须菜寡糖，其总糖含量为78.85%，还原糖含量为17.80%，蛋白含量为0.2%。通过离子色谱测定纯化的龙须菜寡糖中四糖含量为48.47%，六糖含量为25.69%。从拟穴青蟹中纯化得到原肌球蛋白（tropomyosin，TM），利用TM作为过敏原建立小鼠食物过敏模型，以评价紫菜多糖和龙须菜寡糖的抗过敏效果。动物实验结果显示，第二次腹腔注射TM后，TM组小鼠血清IgE的含量是PBS组的4-9倍，说明小鼠已致敏，而注射紫菜多糖和龙须菜寡糖后小鼠血清IgE和IgG1的水平均能显著降低， IgG2a的水平均能显著升高;第十次灌胃后，TM组小鼠粪便中组胺含量上升为187.48μg/mL，而紫菜多糖组小鼠粪便中组胺含量下降为32.49μg/mL，龙须菜寡糖组小鼠粪便中组胺含量下降为133.52μg/mL。细胞实验结果显示，紫菜多糖和龙须菜寡糖均能够显著抑制th2细胞因子（IL-4、IL-5、IL-13）水平，促进th1细胞因子（IFN-γ，紫菜多糖还能促进IL-10的产生）的产生，紫菜多糖和龙须菜寡都能有效缓解空肠组织的过敏病理现象。紫菜多糖诱导IFN-γ的产生是通过JNK和JAK2两条信号通路途径。综上所述，紫菜多糖和龙须菜寡糖均能够显著降低小鼠血清特异性IgE和IgG1的水平，促进IgG2a的水平，能够促进th1细胞因子的水平，抑制th2细胞因子的水平，能有效缓解空肠组织的过敏病理现象。这些结果说明紫菜多糖和龙须菜寡糖能够有效调节辅助性T细胞的免疫功能向th1细胞转换，使th1、th2细胞重新处于相对平衡状态，从而抑制th2细胞主导的食物过敏反应。

关键词：原肌球蛋白食物过敏小鼠模型坛紫菜紫菜多糖龙须菜寡糖抗过敏 th2免疫反应

变应性鼻炎与非变应性鼻炎生物标志物的鉴定与基因表达分析

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变应性鼻炎与非变应性鼻炎生物标志物的鉴定与基因表达分析

作者：罗洋山东大学

学位级别：硕士

背景:变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)是目前最常见的鼻黏膜慢性炎性疾病,其主要病理特点为IgE介导的th2免疫反应。非变应性鼻炎(non-allergic rhinitis,NAR)是一种临床排除的诊断,有鼻部高反应性症状,但特应性试验呈阴性。NAR表现出... 详细信息

背景:变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)是目前最常见的鼻黏膜慢性炎性疾病,其主要病理特点为IgE介导的th2免疫反应。非变应性鼻炎(non-allergic rhinitis,NAR)是一种临床排除的诊断,有鼻部高反应性症状,但特应性试验呈阴性。NAR表现出与AR相似的鼻部症状,但其基因表达情况及与AR的关系尚不清楚。目的:基于多项芯片数据,观察和比较AR和NAR患者上皮基因的表达特征,为进一步了解鼻炎的精细分子机制和诊疗策略提供理论依据。方法:从GEO数据库下载4组包含有AR与健康对照组的基因表达数据集,采用RRA分析筛选出差异表达基因。同时,利用加权共表达网络分析确定与AR有高相关性的关键模块。使用基因本体论和京都基因与基因组百科全书通路富集分析探索差异表达基因和目标模块的生物学功能。随后,联合差异表达基因和关键模块基因筛选出差异共表达基因,通过STRING数据库构建蛋白质互作网络并筛选出核心基因。使用iRegulon插件探索核心基因的上游调控子。最后,通过RT-PCR技术验证AR和NAR鼻刷上皮细胞中核心基因的表达,进一步比较AR和NAR基因表达的异同。此外,对患者进行随访,并分析验证基因的临床意义。结果:通过RRA分析筛选出了 34个DEGs,WGCNA识别出两个AR相关模块,随后联合RRA和WGCNA筛选出17个差异共表达基因。GO和KEGG结果显示,DEGs主要与免疫反应调节、肽酶活性和上皮细胞屏障相关,brown模块主要与细胞膜系统和物质转运代谢相关,magenta模块与蛋白酶活性、细胞迁移、氯离子转运和唾液分泌有关。PPI网络和Cytoscape插件来筛选出10个hub基因,分别为POSTN、CDH26、CCL26、CLC、CPA4、CPA3、CST1、SERPINB2、HDC、FETUB。除 CCL26、CLC、CPA4 以外,其他7个基因共同受到CUX2的调控。PCR结果显示10个基因均在AR中显著增加。除FETUB外,其他9个基因在NAR组的表达也显著升高。CLC在AR组表达显著高于NAR组。SERPINB2在混合变应性鼻炎组的表达明显高于季节性变应性鼻炎组。CCL26与变应性鼻炎病程呈显著正相关,相关性很弱。CLC在中度-重度AR患者的鼻上皮中CLC表达显著高于轻度患者。ROC曲线显示CST1、CLC和CPA3对AR有良好的诊断效能,POSTN、CLC和CPA3对NAR有良好的预测能力。结论:AR与NAR上皮基因表达有很大相似性,大多数基因与th2炎症相关,NAR也存在th2免疫反应。FETUB和CLC基因的表达具有鉴别AR与NAR的潜力。SERPINB2可能是识别AR过敏原类型的潜在生物标志物。对比了解不同类型鼻炎的发病机制有助于鼻炎的诊断和治疗。

关键词：变应性鼻炎非变应性鼻炎 th2免疫反应上皮基因表达生物信息学

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龙须菜寡糖分离纯化和抗食物过敏功效的研究

集美大学学报（自然科学版） 2015年第1期20卷 14-22页

作者：时超岚曾润颖曹敏杰刘庆梅张凌晶苏文金刘光明集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室福建厦门361021 国家海洋局第三海洋研究所福建厦门361005 国家海洋局海洋生物遗传资源重点实验室福建厦门361005

为探究深海细菌Flammeovirga pacifica降解龙须菜所产生的寡糖抗食物过敏功效,以龙须菜为原料,通过发酵、超滤、Superdex Peptide HR 10/300柱层析等方法获得高纯度寡糖.离子色谱结果显示:分离纯化获得的寡糖主要为四糖和六糖,其质量分... 详细信息

为探究深海细菌Flammeovirga pacifica降解龙须菜所产生的寡糖抗食物过敏功效,以龙须菜为原料,通过发酵、超滤、Superdex Peptide HR 10/300柱层析等方法获得高纯度寡糖.离子色谱结果显示:分离纯化获得的寡糖主要为四糖和六糖,其质量分数分别为48.47%和25.69%.小鼠过敏模型实验结果表明,腹腔注射该寡糖(100μg/只)能显著降低过敏小鼠血清特异性Ig E和Ig G1水平,提高特异性Ig G2a水平.通过灌胃(10 mg/只)能显著降低小鼠粪便中组胺的水平,且能有效缓解空肠组织过敏病理现象.小鼠脾淋巴细胞实验结果显示,该寡糖能在转录和转译水平上显著降低th2细胞因子(IL-4、IL-5、IL-13)含量,促进th1细胞因子IFN-γ分泌.说明该寡糖能有效调节辅助性T细胞的免疫功能向th1细胞转换,从而抑制th2细胞主导的食物过敏反应.

关键词：龙须菜寡糖纯化抗食物过敏原肌球蛋白小鼠模型 th2免疫反应

抑制性ODN对溃疡性结肠炎小鼠th1/th2免疫失衡的调节作用

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中国实验诊断学 2013年第12期17卷 2133-2135页

作者：孙鹏周晓晶刘伯岩杨文颖吉林省人民医院消化内科吉林长春130021 长春中医药大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室

目的研究抑制性ODN对溃疡性结肠炎小鼠th1/th2免疫失衡的调节作用。方法首先利用我们已发表的研究[1]中的方法建立小鼠溃疡性结肠炎模型。建模成功后将结肠炎小鼠随机分为两组,分别给予腹腔内注射PBS、A151,记作PBS+UC组、A151+UC组,同... 详细信息

目的研究抑制性ODN对溃疡性结肠炎小鼠th1/th2免疫失衡的调节作用。方法首先利用我们已发表的研究[1]中的方法建立小鼠溃疡性结肠炎模型。建模成功后将结肠炎小鼠随机分为两组,分别给予腹腔内注射PBS、A151,记作PBS+UC组、A151+UC组,同时设一组健康小鼠对照并给予腹腔注射PBS,记作PBS+健康对照组。每组分别连续注射7天,末次注射后7天取小鼠血清并分离小鼠结肠组织制备匀浆。利用ELISA方法检测血清及结肠匀浆中IL-6、TNF-α、IL-10、IL-4水平。结果经检测发现抑制性ODN能明显下调IL-6和TNF-α的水平,而上调IL-10和IL-4水平。结论抑制性ODN对小鼠溃疡性结肠炎的抑制作用或许是通过调节th1/th2平衡来实现的。

关键词：溃疡性结肠炎 th2免疫反应 th1免疫反应

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幼年小鼠应用抗生素致免疫反应亢进的研究

临床肺科杂志 2003年第1期8卷 36-37页

作者：刘伟时衍同杨晖山东省日照市人民医院呼吸内科 276800

目的　探讨卡那霉素如何影响 th1 / th2 平衡 ,使 th2 免疫反应占优势。方法　 BAL B/ c雄性小鼠 1周龄、5 0周龄 ,且每组 15只 ,其前未用过抗生素 ,然后分别让 1周龄组 ,5 0周龄组 ,口服硫酸卡那霉素 6 0 0 mg/ d,连用7天 ,在服用硫酸... 详细信息

目的　探讨卡那霉素如何影响 th1 / th2 平衡 ,使 th2 免疫反应占优势。方法　 BAL B/ c雄性小鼠 1周龄、5 0周龄 ,且每组 15只 ,其前未用过抗生素 ,然后分别让 1周龄组 ,5 0周龄组 ,口服硫酸卡那霉素 6 0 0 mg/ d,连用7天 ,在服用硫酸卡那霉素停止后的第 10周将小鼠杀掉 ,取眼球血测 Ig E、Ig G1 、Ig G2 a,并做脾的单个核细胞分离 ,在体外用伴刀豆蛋白 A2 .5 ug/ ml(Sigma公司 )刺激约 96小时后测上清液中的 IL - 4及 IFN- r。结果　 5 0周龄比 1周龄组脾脏单个核细胞分泌的 IL - 4量明显升高 ,IFN- r量明显降低 (P均 2 a明显降低 (pth1 / th2 平衡 ,使 th2

关键词：抗生素卡那霉素 th2免疫反应 th1/th2平衡不良反应