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DIFFERENT RESULTS BY DIFFERENT COMMERCIAL taq DNA POLYMERASE IN RAPD

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四川动物 2002年第2期21卷 101-102,F003页

作者： HE Li YUAN Shuiquan MO Banghui YAO Guanggui LIN Honghui CHEN Fang GUO Xiaocai Chengdu Institute of Biology Chinese Academy of SciencesChengdu 610041 Life College Sichuan UniversityChengdu 610064 Chengdu Institute of Agriculture.Chengdu 610072

RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) technique has been widely used in animal, plant, human and microorganism research since it was first established by Williams in 1990[1-3]. But, because of low annealed temperature and short 10-nt primers, the resolution and repetition is low in RAPD. The stability of RAPD is influenced by many factors such as the concentration of template, primers, dNTP, Mg++,and taq DNA polymerase[4-6]. The influence on amplified products of different commercial taq DNA polymerase in RAPD was studied in this paper.

关键词： taq DNA聚合酶 RAPD 片断扩增稳定性

新型taq Man-MGB探针实时荧光定量PCR检测人类mdr1基因

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南方医科大学学报 2006年第4期26卷 466-468页

作者：邹亚伟封志纯胡斌乔英飒吴梓梁陈福雄叶铁真广州医学院第一附属医院儿科广东广州510120 南方医科大学珠江医院儿科广东广州510282 中山大学达安基因诊断中心广东广州510089

目的建立一种比现有方法敏感、准确性高、重复性好的人类mdr1基因的新型实时荧光定量PCR检测新方法。方法用Primer Express 2．0引物设计软件设计引物和MGB探针,以taq Man-MGB探针技术为基础,运用taq Man-MGB探针,以含有目的基因mdr1cDN... 详细信息

目的建立一种比现有方法敏感、准确性高、重复性好的人类mdr1基因的新型实时荧光定量PCR检测新方法。方法用Primer Express 2．0引物设计软件设计引物和MGB探针,以taq Man-MGB探针技术为基础,运用taq Man-MGB探针,以含有目的基因mdr1cDNA的质粒pHaMDR1／A为阳性模板,建立实时荧光定量PCR检测方法。结果所建立方法的最低检测限度为15个基因拷贝／反应,在待扩增DNA浓度为3．061×103 cps／ml-3．061×109cps／ml范围时,模板浓度与循环阈值(Ct)之间的相关性良好,决定系数r2为0．988243。结论应用taq Man-MGB探针的实时荧光定量PCR方法检测人类mdr1基因,具有灵敏度高、特异性高和精确性高等优点。

关键词： taq Man-MGB探针实时荧光定量PCR mdr1

taq plusⅠ DNA聚合酶的反转录活性

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中国兽医学报 2006年第1期26卷 57-58页

作者：牛冬赵艳阮晖何国庆傅衍浙江大学生物系统工程与食品科学学院浙江杭州310029 浙江工商大学生物工程系浙江杭州310035 浙江大学动物科学学院浙江杭州310029

选择具有高保真性的taq plusⅠ DNA聚合酶,以小鼠表皮生长因子mRNA为模板研究其反转录性能。对cD-NA的检验结果表明,taq plusⅠ DNA聚合酶在72℃下有良好的反转录活性,且由于其高保真性,故在进行反转录时既可避免碱基错配,又可避免在低... 详细信息

选择具有高保真性的taq plusⅠ DNA聚合酶,以小鼠表皮生长因子mRNA为模板研究其反转录性能。对cD-NA的检验结果表明,taq plusⅠ DNA聚合酶在72℃下有良好的反转录活性,且由于其高保真性,故在进行反转录时既可避免碱基错配,又可避免在低温下用AMV反转录酶或Mulv反转录酶进行反转录时可能造成的cDNA序列缺失。

关键词： taq plusⅠDNA聚合酶反转录PCR mRNA二级结构

Quantum dots induce hot-start effects for taq-based polymerase chain reaction

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Journal of Biomedical Science and Engineering 2012年第6期5卷 295-301页

作者： Fuming Sang Yang Yang Hongyuan Wang Xiaolei Ju Zhizhou Zhang Harbin Institute of Technology School of Marine Science and Technology Weihai China

Decent hot-start effects were here reported in taq DNA polymerase-based polymerase chain reaction (PCR) when water-soluble CdTe quantum dots (QDs) were employed. The hot-start effects were revealed by the higher amplicon yields and distinguished suppression of nonspecific amplification after pre-incubation of PCR mix with quantum dots between 30°C and 56°C. DNA targets were well amplified even after PCR mixture was pre-incubated 3 hr at 30°C or 1 hr at 50°C. Importantly, the effects of QDs nanoparticles could be reversed by increasing the polymerase concentration, suggesting that there was an interaction between QDs and taq DNA polymerase. Moreover, control experiment indicated that hot-start effect is not primarily due to the reduced polymerase concentration resulted from the above interaction. This study provided another good start to investigate potential implications of quantum dots in key molecular biology techniques.

关键词： Quantum Dots Hot-Start Polymerase Chain Reaction (PCR) DNA taq DNA Polymerase

Diagnosis of Clinical Cases of Infectious Bursal Disease Using a Modified Rapid taq Man-MGB Real-Time RT-PCR Assay

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Journal of Agricultural Science and Technology(A) 2018年第4期8卷 230-238页

作者： Maryame Cheggag Khalil Zro Ghizlane Sebbar Naoufal Rahmatallah Mohamed Mouahid Mohammed EL Houadfi Faouzi Kichou Unit of Histology and Pathological Anatomy Department of Veterinary Pathology and Public HealthInstitute of Agronomy and Veterinary Medicine Hassan IIB.P.6202RabatMorocco Society of Veterinary Pharmaceutical and Biological Productions(Biopharma) B.P.4569RabatMorocco Veterinary Clinic Temara Morocco

Infectious bursal disease(IBD)is an important contagious viral infection of immune system of *** infection possesses a permanent threat to the profitability of poultry industry *** aim of this work was to modify the taq Man-MGB real-time reverse transcription-polymerase chain reaction(rRT-PCR)in one step involving two fluorogenic taq Man labeled probe and using this protocol for detection of infectious bursal disease virus(IBDV)collected from suspected cases distributed in different regions of the country during the period *** intralaboratory validation of modified method was realized for specificity,linearity,repeatability,sensitivity and *** allowed reducing the test running time by six *** method was applied on 102 pools of bursa of fabricius(BF)samples collected from affected broiler farms suspected to be infected by *** showing macroscopic lesions including muscle petechial hemorrhages,hypertrophy and hemorrhage of BF,were subjected to molecular analysis using modified protocol“taq Man-MGB rRT-PCR”.The validation satisfied all criteria and the assay developed could be a useful tool for a very rapid diagnosis of IBDV and permit to detect and to discriminate in one-step very virulent(vv)from non-vv(classic and variant)IBDV *** of 84 IBDV positive samples,a prevalence of 39%for vv strains and 61%for classical strains was *** results indicate that despite the vaccination against IBDV,the vv form of this pathologie continues to cause serious problems for Moroccan broiler *** obtained results indicate the successfully detection of IBDV and differentiated all vvIBDV strains from non-vvIBDV strains;Avian infectious agent RNA viruses tested are negative,demonstrating great specificity of the *** results obtained indicate that this method is suitable as a routine laboratory test for the rapid detection and differentiation of IBDV strains in samples of avian origin.

关键词： IBDV one-step rRT-PCR taq Man-MGB macroscopic lesions

taq Man实时荧光定量PCR检测猪伪狂犬病病毒方法的建立与初步应用

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中国预防兽医学报 2009年第2期31卷 137-140,164页

作者：赵丽崔保安陈红英魏战勇赵玉丛郑州牧业工程高等专科学校河南郑州450011 河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002

根据猪伪狂犬病病毒gE基因保守序列,设计合成引物和探针,优化反应条件,建立实时定量荧光PCR方法。实验结果表明,当50pmol/L的引物0.3μL和5pmol/L的探针0.5μL时,反应体系获得的CT值较小,而荧光强度增加值最大;制作的标准曲线显示各浓... 详细信息

根据猪伪狂犬病病毒gE基因保守序列,设计合成引物和探针,优化反应条件,建立实时定量荧光PCR方法。实验结果表明,当50pmol/L的引物0.3μL和5pmol/L的探针0.5μL时,反应体系获得的CT值较小,而荧光强度增加值最大;制作的标准曲线显示各浓度范围内具有良好的线性关系;可检测到相当于20拷贝/μL的病毒DNA;与猪细小病毒、圆环病毒和猪瘟病毒等不发生交叉反应;敏感性比常规PCR电泳检测高约100倍。该方法具有快速、特异、敏感、可定量,并可同时检测大量样品等优点。

关键词：实时荧光定量 taq Man PCR 检测猪伪狂犬病病毒

taq酶体外合成DNA时模板错位机制的探讨

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安徽大学学报（自然科学版） 2018年第1期42卷 67-74页

作者：李慧慧王涛中国科学院合肥物质科学研究院强磁场科学中心安徽合肥230031 中国科学技术大学生命科学学院安徽合肥230026

利用taq DNA聚合酶体外合成DNA过程中,当反应体系中缺少与模板链互补配对的dNTP底物时,产物合成并不会在底物缺失位点处终止,聚合反应继续进行.为研究此复制缺陷现象,设计一系列模板用于DNA体外酶促合成.除了已知的碱基错配机制,笔者发... 详细信息

利用taq DNA聚合酶体外合成DNA过程中,当反应体系中缺少与模板链互补配对的dNTP底物时,产物合成并不会在底物缺失位点处终止,聚合反应继续进行.为研究此复制缺陷现象,设计一系列模板用于DNA体外酶促合成.除了已知的碱基错配机制,笔者发现存在另一种"模板错位"机制,即模板中与底物非Watson-Crick互补配对的碱基位点首先进行收缩滑动,形成模板bulge结构后再继续进行酶促合成反应.这项研究有助于提高DNA样品合成保真度以及继续深入探索体外DNA合成的详细机制.

关键词： taq DNA聚合酶复制缺陷模板错位模板bulge结构互补dNTP底物缺失

犬细小病毒taq Man荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

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中国兽医学报 2010年第5期30卷 593-596页

作者：刘海防胡传伟谢之景姜世金张兴晓倪长鹏贾赟杨笃宝山东农业大学动物科学院山东泰安271018 辽宁出入境检验检疫局技术中心辽宁大连116001

根据GenBank中CPV VP2蛋白基因序列,选择CPV VP2基因保守序列,分别设计1对特异性引物和taqMan探针,建立了CPV taq Man荧光定量PCR检测方法。对CPV taq Man荧光定量PCR的反应体系和反应条件进行优化,并对其特异性和敏感性进行了测定,建... 详细信息

根据GenBank中CPV VP2蛋白基因序列,选择CPV VP2基因保守序列,分别设计1对特异性引物和taqMan探针,建立了CPV taq Man荧光定量PCR检测方法。对CPV taq Man荧光定量PCR的反应体系和反应条件进行优化,并对其特异性和敏感性进行了测定,建立标准曲线。结果,CPV taq Man荧光定量PCR对CPV检测阳性,并能对10拷贝/μL的CPV模板检测阳性,标准曲线的相关系数为0.9992,但对非CPV模板检测阴性。结果表明,所建立的CPV taq Man荧光定量PCR具有很好的特异性和敏感性,标准曲线具有很强的实用性。同时对CPV taq Man荧光定量PCR与CPV PCR进行了比较试验,结果前者比后者的敏感性高100倍。采用CPVHA、CPV PCR与CPV taq Man荧光定量PCR对55份临床样品进行检测,CPV HA对30份样品检测阳性,CPVPCR对40份样品检测阳性,CPV taq Man荧光定量PCR对47份样品检测阳性。这表明,CPV taq Man荧光定量PCR对样品的检出率最高,具有特异、敏感、快速的特点,适用临床样品的检测。

关键词：犬细小病毒实时定量PCR taq Man荧光探针

鸡贫血病毒taq Man探针荧光定量PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2009年第1期31卷 56-59页

作者：宋修庆高宏雷王晓艳林欢宇文延青王永强王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 中国科学院生物物理研究所北京100101

根据鸡贫血病毒(CAV)的基因序列,选取一段高度保守的基因序列作为目的片段设计引物与探针,将该目的片段克隆到pMD18-T载体中,作为阳性标准品。通过优化荧光定量PCR反应条件,建立了CAV的荧光定量PCR检测方法。结果表明,该检测方法的敏感... 详细信息

根据鸡贫血病毒(CAV)的基因序列,选取一段高度保守的基因序列作为目的片段设计引物与探针,将该目的片段克隆到pMD18-T载体中,作为阳性标准品。通过优化荧光定量PCR反应条件,建立了CAV的荧光定量PCR检测方法。结果表明,该检测方法的敏感性达到10个病毒拷贝/μL,与其他禽病病毒无交叉反应,批间与批内重复试验相关系数都小于5%。实验数据证明该检测方法敏感性高,特异性好,重复性佳。

关键词：鸡贫血病毒 taq Man探针荧光定量PCR