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tan IIA对MCAO模型大鼠脑组织IKK-NFκB/IκB通路的影响及抗凋亡作用

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Tan IIA对MCAO模型大鼠脑组织IKK-NFκB/IκB通路的影响及抗凋亡...

作者：杨凤真中南大学

学位级别：硕士

目的：研究缺血再灌注损伤的发病机理及寻找有效的治疗方法,探讨tan ⅡA抗凋亡作用的可能机制。方法：线栓法建立大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注(MCAO)模型,并结合tan ⅡA不同时间和剂量腹腔注射治疗。TTC染色和HE染色观察缺血再灌注后脑... 详细信息

目的：研究缺血再灌注损伤的发病机理及寻找有效的治疗方法,探讨tan ⅡA抗凋亡作用的可能机制。方法：线栓法建立大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注(MCAO)模型,并结合tan ⅡA不同时间和剂量腹腔注射治疗。TTC染色和HE染色观察缺血再灌注后脑组织形态学变化及tan ⅡA治疗的影响。Western blot与免疫组化检测脑组织IKK及p-IKK、NFκB及p-NFκB和IKB及p-IκB的表达水平,Tunel法检测凋亡细胞,分析缺血再灌注损伤后各分子表达变化和凋亡细胞数量以及tan ⅡA治疗的影响。结果：***染色见正常组脑组织染色均匀,无梗死区。各模型组和治疗组均有不同程度的脑梗死,tan ⅡA治疗能够减小脑梗死范围。***染色见正常对照组和假手术组组织分布正常,结构完整,其余各组有不同程度的组织病理学改变,特别是7d模型组,可见梗死区结构紊乱,间质水肿,炎性细胞浸润,有筛状坏死灶。tan ⅡA治疗组缺血改变较模型组明显减轻,坏死范围缩小,细胞水肿减轻,以高剂量治疗组的改善作用最为明显。3. IKK、 NFκB与IKB在模型组和tan IIA治疗组的表达水平显著高于正常对照组和假手术组(Ptan IIA治疗组之间表达无统计学差异(P>0.05)。p-IKK、p-NFκB与p-IκB的表达在模型组明显降低,与正常对照组和假手术组比较差异有统计学意义(Ptan IIA上调各因子的表达,与相应模型组比较有统计学差异(Ptanⅱa高低剂量治疗组间比较亦有统计学差异(Ptan ⅡA治疗显著降低凋亡细胞的数量(Ptan ⅡA高剂量治疗组凋亡细胞数量显著少于相应低剂量治疗组(Ptan ⅡA治疗能够改善大鼠的缺血再灌注损伤,减少凋亡细胞数量,起到明显的抗凋亡作用,其抗凋亡的可能机制为阻抑IKK-NFκB/IκB通路中活化分子的入核作用,影响下游凋亡相关基因的表达,进而发挥抗凋亡作用。含图12幅,表4个,参考文献35篇。

关键词：缺血再灌注 tanⅱa 凋亡 IKK NFκB IκB

丹参酮ⅡA对高血压病血瘀证患者血清损伤血管内皮细胞形态结构的影响

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丹参酮ⅡA对高血压病血瘀证患者血清损伤血管内皮细胞形态结构的...

丹参酮Ⅱ_A对I/R大鼠脑组织NF-κB和IκB活性的影响

第二届临床中药学学术研讨会

作者：胡小勤陈利国广西中医学院中药学教研室暨南大学医学院

目的:观察丹参酮ⅡA(tanⅱa)对高血压病血瘀证患者血清损伤血管内皮细胞形态结构的影响。方法:将培养的人脐静脉内皮细胞株CRL-1730按tanⅱa组、对照组、血瘀组、非血瘀组、健康组分组,通过投射电镜、扫描电镜观察形态结构的变化。结果... 详细信息

目的:观察丹参酮ⅡA(tanⅱa)对高血压病血瘀证患者血清损伤血管内皮细胞形态结构的影响。方法:将培养的人脐静脉内皮细胞株CRL-1730按tanⅱa组、对照组、血瘀组、非血瘀组、健康组分组,通过投射电镜、扫描电镜观察形态结构的变化。结果:透射电镜的观察结果发现,模型组血清作用后的血管内皮细胞中,饮液泡数量增多。粗面内质网数目减少并有扩张,核糖体部分丢失。线粒体细小,嵴不清或消失。模型组细胞内平滑内质网明显扩张呈空泡状,细胞表面仅有细长的微绒毛;扫描电镜观察发现细胞收缩分离成放射星状体。结论:tanⅱa对高血压病血瘀证患者血清引起的血管内皮细胞形态结构损伤具有保护作用。

关键词： tanⅱa 血瘀证形态结构

来源： cnki会议评论

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中药材 2013年第7期36卷 1136-1139页

作者：周丽刘艳平王芳杨凤真中南大学生物科学与技术学院湖南长沙410013 中南大学湘雅医学院微生物与免疫学教研室湖南长沙410013

目的:观察tanⅱa干预缺血-再灌注(I/R)大鼠脑组织病理学特征的变化,以及NF-κB、ⅠκB的表达,研究tanⅱa对血管性痴呆的影响及其作用机理。方法:将80只大鼠随机分为正常对照组、假手术组、缺血-再灌注7d和15 d模型组及tanⅱa低、高剂量... 详细信息

目的:观察tanⅱa干预缺血-再灌注(I/R)大鼠脑组织病理学特征的变化,以及NF-κB、ⅠκB的表达,研究tanⅱa对血管性痴呆的影响及其作用机理。方法:将80只大鼠随机分为正常对照组、假手术组、缺血-再灌注7d和15 d模型组及tanⅱa低、高剂量7 d和15 d组,每组10只。tanⅱa低剂量组(4 mg/kg)和高剂量组(8 mg/kg)分别于术后连续腹腔注射给药7 d和15 d,1次/d,假手术组和模型组给予等体积生理盐水腹腔注射。后用HE染色观察大脑组织的病理学变化,免疫组织化学染色法检测tanⅱa处理后各组NF-κB和IκB表达水平的改变。结果:tanⅱa组脑组织病变程度较MCAO模型组有不同程度减轻,其中以15 d高剂量组改变最为明显,免疫组化结果也显示模型组的NF-κB和IκB表达水平在显著高于tanⅱa组和正常对照组(Ptanⅱa能有效降低缺血-再灌大鼠模型脑组织NF-κB和IκB蛋白的表达水平,其机制可能是通过抑制NF-κB和IκB的活性和生成有效的降低大脑中炎性反应的发生,从而发挥保护大脑神经元,改善缺血-再灌脑组织损伤的作用。

关键词： tanⅱa 脑缺血-再灌注 NF-κB IκB

丹参酮ⅡA对高血压病血瘀证患者血清损伤血管内皮细胞形态结构的影响

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辽宁中医杂志 2010年第11期37卷 2130-2132页

作者：胡小勤陈利国曾学文许小伍广西中医学院中药教研室广西南宁530001 暨南大学医学院广东广州510632 广州中医药大学广东广州510006

目的:观察丹参酮ⅡA(tanⅱa)对高血压病血瘀证患者血清损伤血管内皮细胞形态结构的影响。方法:将培养的人脐静脉内皮细胞株CRL-1730按血瘀组、非血瘀组、健康组、对照组、药物(tanⅱa10μg/mL)组分组,通过扫描电镜、透射电镜观察各组内... 详细信息

目的:观察丹参酮ⅡA(tanⅱa)对高血压病血瘀证患者血清损伤血管内皮细胞形态结构的影响。方法:将培养的人脐静脉内皮细胞株CRL-1730按血瘀组、非血瘀组、健康组、对照组、药物(tanⅱa10μg/mL)组分组,通过扫描电镜、透射电镜观察各组内皮细胞的形态结构。结果:(1)血瘀组:与非血瘀组、健康组、对照组比较,扫描电镜观察发现,细胞收缩分离成放射星状体;透射电镜观察发现,饮液泡数量增多。粗面内质网数目减少并有扩张,核糖体部分丢失。线粒体细小,嵴不清或消失。细胞内平滑内质网明显扩张呈空泡状,细胞表面仅有细长的微绒毛,核未见特殊改变。(2)药物组:与血瘀组比较,扫描电镜观察发现,部分细胞之间有间隙,但仍有突起互相连接,透射电镜观察发现,多数细胞表面有细长的微绒毛,粗面内质网数目较少但不扩张,其上附着的核糖体不丢失,部分细胞的平滑内质网扩张成大小不等的小池,线粒体双层膜及内嵴结构清晰,在细胞群体内较易找到核分裂相,核未见特殊改变。结论:高血压病血瘀证患者血清严重损伤体外培养的血管内皮细胞,tanⅱa对高血压病血瘀证患者血清引起的血管内皮细胞形态结构损伤具有一定的保护作用。

关键词： tanⅱa 血瘀证内皮细胞形态结构

丹参酮ⅡA对人食管癌细胞系Eca-109增殖抑制作用及机制研究

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丹参酮ⅡA对人食管癌细胞系Eca-109增殖抑制作用及机制研究

作者：周新强河南中医学院

学位级别：硕士

研究背景据报道,在我国每年死于食管癌的人数约为21万人,男性人数多于女性,40岁以上的发病率高,它严重威胁着我国人民的健康和生命[1]。其治疗方法主要有手术切除、肿瘤的放疗和化疗等,单一的任何一种方法都不是理想的,因此多采用综合治... 详细信息

研究背景据报道,在我国每年死于食管癌的人数约为21万人,男性人数多于女性,40岁以上的发病率高,它严重威胁着我国人民的健康和生命[1]。其治疗方法主要有手术切除、肿瘤的放疗和化疗等,单一的任何一种方法都不是理想的,因此多采用综合治疗,在手术切除后配合药物化疗。现在的化疗新药层出不穷,但因化疗产生的副反应仍然较大,并且耐药性不断增加,病人的的5年存活率依然很低。因此,利用我国的优势,研究中药及其提取的有效成分在肿瘤治疗方面的作用是以后发展的方向之一。本研究探讨了食管癌可能的发生机制及中药丹参中的挥发油-丹参酮ⅡA(tanⅱa)对人食管癌细胞株Eca-109的作用。tanⅱa是中药丹参的主要成分。丹参酮在临床上已被广泛应用于非肿瘤领域,主要用来治疗心血管疾病,在抗菌消炎等[1]方面也有显著疗效。近年来,学者对丹参酮IIA的抗肿瘤活性产生了极大兴趣,并进行了多种肿瘤细胞的体内外试验,但对食管癌的抗癌作用却鲜见报道。目的通过对人食管癌Eca-109细胞的培养,用不同浓度的tanⅱa干预其生长,运用现代分子生物学技术,探讨tanⅱa促进Eca-109细胞凋亡的机制,为tanⅱa更深入的研究做准备。方法***法:通过培养人食管癌Eca-109细胞,用不同剂量的tanⅱa作用于Eca-109细胞,通过四甲基偶氮唑盐法(MTT法)测定各组的吸光值(OD值),并计算出各组细胞的增殖抑制率,绘制增殖抑制率曲线。2.显微形态观察:药物组细胞和正常组细胞培养24小时后,在显微镜下观察正常细胞和药物干预细胞的生长状态和形态变化。3.细胞荧光观察:药物组细胞和正常组细胞培养24小时后,应用AO/EB染色,在荧光显微镜下观察两组细胞的形态变化。4.流式细胞术:采用140μg/ml、160μg/ml的tanⅱa干预细胞生长24和48小时,设置阴性对照,用流式检测细胞周期和细胞凋亡。5.免疫蛋白印迹法:采用140μg/ml、160μg/ml的tanⅱa干预细胞生长24小时,提取细胞的总蛋白,用BCA法进行蛋白定量,采用蛋白免疫印迹技术(western blot)检测Caspase-3、Caspase-9、Cyclin A和CDK2的表达,以β-actin作为内参,用BIO-RAD软件分析条带的灰度值。结果***检测结果显示:正常组细胞活力明显高于药物组,并且在一定的范围内,随药物的浓度增加,细胞的活力下降,最高的抑制率可达66.164%,与阴性对照组相比较,差异有统计学意义(P﹤0.05)。2.显微镜观察显示:经过tanⅱa处理后的细胞与正常组细胞相比较,药物组细胞有明显的凋亡形态的改变,出现细胞漂浮,细胞核固缩,细胞膜结构破坏出现“小泡”现象。3.细胞荧光观察结果显示:与正常组细胞相比较,药物组细胞出现核染色质着绿色或红色并呈固缩状、圆珠状。4.流式结果表明:1)140μg/ml tanⅱa干预Eca-109细胞24小时后,结果显示S期的细胞数升高,达到54.47%;同时G0/G1期的细胞数下降,由51.317%降至41.787%,与阴性对照相比,差异具有统计学意义(P﹤0.05)。2)采用140μg/ml和160μg/ml的tanⅱa培养细胞24小时,结果显示药物组凋亡指数随着药物浓度的增加,凋亡指数增大,由阴性的8.319增加到tanⅱa140、160μg/ml组的31.982和52.937。用药组和阴性对照组相比较,差异具有统计学意义(P﹤0.01)。*** blot结果显示:药物培养24小时后,细胞内Cyclin A、CDK2表达量降低;Caspase-3、Caspase-9的表达量上升,和正常组相比较,差异具有统计学意义(P﹤0.05)。结论***ⅡA可以抑制人食管癌细胞的增殖活力,并且这种抑制作用随药物浓度的增加会更明显。2.在tanⅱa作用于食管癌细胞系Eca-109的过程中,随着药物浓度的升高,细胞在S期的比例逐渐升高,S期检查点的调控因子Cyclin A和CDK2的相对表达量降低。***ⅡA抑制人食管癌Eca-109细胞的增殖并促进其凋亡的机制可能与通过下调Cyclin A和CDK2,将细胞阻滞于S期和上调Caspase-9和Caspase-3促进细胞凋亡增加有关。

关键词：食管癌 tanⅱa 细胞周期细胞凋亡

丹参酮ⅡA诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡的作用及机制

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丹参酮ⅡA诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡的作用及机制

作者：祝敏湖北中医学院

学位级别：硕士

目的: 研究丹参酮ⅡA(tanⅱa)诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡的作用,探讨其作用机制,为tanⅱa应用于临床治疗卵巢癌提供理论依据。方法: MTT法检测人卵巢癌A2780细胞经tanⅱa药物处理后细胞的增殖情况,计算细胞抑制率=(1-实验组吸光度值/... 详细信息

目的: 研究丹参酮ⅡA(tanⅱa)诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡的作用,探讨其作用机制,为tanⅱa应用于临床治疗卵巢癌提供理论依据。方法: MTT法检测人卵巢癌A2780细胞经tanⅱa药物处理后细胞的增殖情况,计算细胞抑制率=(1-实验组吸光度值/对照组吸光度值)×100%。实验重复三遍,取三次结果的平均值。然后以药物浓度为横坐标,以细胞抑制率为纵坐标,用Excel软件绘制出细胞生长抑制曲线,并用IC计算软件计算出药物作用细胞的半数抑制率(IC)。流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,实验分为空白对照组(对照组)和实验组。其中实验组依据4.0 mg/L tanⅱa作用于卵巢癌A2780细胞时间的长短不同,又分为24h组、48h组、72h组三个组。每个组均设3个平行样本。细胞以1×10的浓度接种到25cm的培养瓶中。收集对照组和实验组的细胞,进行固定、染色,通过FCM检测细胞凋亡,定量测定细胞凋亡率。 Western blotting法(按试剂盒说明书操作)分别检测对照组及实验组的细胞中Bcl-2及Bax两种蛋白表达变化情况。结果: ***ⅡA对人卵巢癌A2780细胞的增殖具有抑制作用,其作用强度随着药物作用时间及浓度的增加而增强,呈时间-剂量依赖性。tanⅱa作用A2780细胞48h的半数抑制率为7.78mg/L。 2.流式细胞仪显示,经4.0 mg/L tanⅱa处理后,凋亡的卵巢癌A2780细胞明显增多。FCM定量显示0,24,48,72h的凋亡率分别为4.52%,19.7%,25.3%,40.40%。随着时间的延长,凋亡细胞增多,72h的凋亡率达到最高值,与对照组比较,24、48、72h药物作用组凋亡率增高有统计学意义(P＜0.05)。 *** blot检测各组细胞Bax及Bcl-2两种蛋白表达情况,结果表明与空白组相比,实验组中Bax的表达均有所增加,而Bcl-2的表达则有所减少(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值明显下降。结论: ***ⅡA对人卵巢癌A2780细胞具有明显的增殖抑制和诱导凋亡的作用。 ***ⅡA诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡的机制可能与下调Bcl-2的表达,以及上调Bax的表达有关。

关键词： tanⅱa 卵巢癌 A2780细胞细胞凋亡