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Down-regulation of tyrosinase,trp-1,trp-2 and MITF expressions by citrus press-cakes in murine B16 F10 melanoma

Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine 2013年第8期3卷 617-622页

作者： Sang Suk Kim Min-Jin Kim Young Hun Choi Byung Kuk Kim Kwang Sik Kim Kyung Jin Park Suk Man Park Nam Ho Lee Chang-Gu Hyun Cosmetic Science Center Department of ChemistryJeju National UniversityJeju 690-756Korea Citrus Research Station National Institute of Horticultural & Herbal ScienceRDAJeju 699-946Korea Jeju Technopark Ara-1-dongJeju-siJeju 690-121Korea Ohyun High School 1 Hwabook-dongJeju-siJeju 690-061Korea LINC Agency Jeju National UniversityAra-1-dongJeju 690-756Korea

Objective:To investigate the suitability of citrus-press cakes,by-products of the juice industry as a source for the whitening agents for cosmetic ***:Ethylacetate extracts of citrus-press cakes(CCE)were examined for their anti-melanogenic potentials in terms of the inhibition of melanin production and mechanisim of melanogenesis by using Western Blot analysis with tyrosinese,tyrosinase-related protein-1(trp-1),trp2,and microphthalmia-associated transcription factor(MITF)*** apply the topical agents,citrus-press cakes was investigated the safety in human skin cell *** flavonoid analysis of CCE was also determined by HPLC ***:Results indicated that CCE were shown to down-regulate melanin content in a dose-dependent *** CCE inhibited tyrosinase,trp-2,and MITF expressions in a dose-dependent *** test the applicability of CCE to human skin,we used MTT assay to assess the cytotoxic effects of CCE on human keratinocyte HaCaT *** CCE exhibited low cytotoxicity at 50μg/*** of the citrus-press cakes for flavonoid contents using HPLC showed varied quantity of rutin,narirutin,and ***:Considering the anti-melanogenic activity and human safety,CCE is considered as a potential anti-melanogenic agent and may be effective for topical application for treating hyperpigmentation disorders.

关键词： Citrus-press cakes Melanin Melanogenesis Tyrosinase MITF trp-1 trp-2

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补肾化瘀法对白癜风黑素细胞TYR、trp-1和trp-2的影响

补肾化瘀法对白癜风黑素细胞TYR、TRP-1和TRP-2的影响

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作者：罗银凤广州中医药大学

学位级别：硕士

目的观察补肾化瘀法对白癜风黑素细胞酪氨酸酶(TYR)及其相关蛋白1(trp-1)和2(trp-2)的影响。方法1.临床研究：选择58例符合入选标准的白癜风患者,随机分为治疗组、对照组,(1)治疗组治疗方案：补肾化瘀中药复方(由女贞子、旱莲草各20g,... 详细信息

目的观察补肾化瘀法对白癜风黑素细胞酪氨酸酶(TYR)及其相关蛋白1(trp-1)和2(trp-2)的影响。方法1.临床研究：选择58例符合入选标准的白癜风患者,随机分为治疗组、对照组,(1)治疗组治疗方案：补肾化瘀中药复方(由女贞子、旱莲草各20g,丹参、何首乌、菟丝子、桑椹子、当归、赤芍、黄芪、茯苓各15g,甘草10g等组成),由广州中医药大学第一附属医院制剂科提供,水煎,温服,每日1剂。(2)对照组治疗方案：口服白灵片,一次4片,一日3次。白灵片(佛山冯了性药业有限公司国药准字Z44022380)由当归、三七、红花、牡丹皮、桃仁、防风、苍术、白芷、马齿苋、赤芍、黄芪等中药组成。两组均外用消斑酊(为本院制剂,药准字号：(粤)Z20071234,主要成分为白芷、红花等),3次/d,涂药后每天适当光照30min,两组患者皆以90天为1个疗程,且在治疗期间停用其他药物。2.实验研究：以90天为观察期限,于治疗前,负压吸引患者隐蔽部位正常皮肤及隐蔽部位皮损部分表皮,于治疗的第90天,负压吸引患者隐蔽部位正常皮肤及隐蔽部位复色区表皮。取材采用负压吸疱(负压吸引装置：BY-Ⅱ白癜风治疗仪由山东神思医疗设备有限公司提供医疗器械注册证：鲁食药监械(准)字2008第201017),用眼科剪剪下发疱表皮,将所取得的皮片立即置于10%中性甲醛固定,待免疫组化染色(阳性对照为正常的皮肤相应抗体做免疫组化,阴性对照是PBS代替一抗后做免疫组化)。细胞质中出现棕黄色颗粒为染色阳性,细胞显色的有无作为区分阳性和阴性的依据,Mias99彩色图像分析仪(四川大学图像图形研究所)分析阳性细胞,得出其平均灰度。结果1.临床研究：中药补肾化瘀组29例中,基本治愈6例、显效15例、好转4例、无效4例,有效率为72.4%;白灵片组29例中,基本治愈3例,显效10例,好转10例,无效6例,总有效率44.8%,补肾化瘀组与白灵片组有效率相比较,差异存在统计学意义(P2.实验研究：补肾化瘀组黑素细胞TYR、trp-1、trp-2的表达量高于白灵片组黑素细胞同种分子表达。结论1.补肾化瘀中药复方治疗白癜风具有较好的临床疗效,其作用机制可能与中药复方能增强黑素细胞分化标记分子的的表达量有关。2.补肾化瘀复方组相对于白灵片组,其黑素细胞酪氨酸酶及其相关蛋白1和2的表达量更高,更能增加黑素细胞的密度,这与临床疗效研究结果一致,这可能是补肾化瘀中药复方治疗白癜风的主要作用机制。

关键词：补肾化瘀法白癜风 TYP trp-1 trp-2

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逍遥散有效部位对A375与HacaT细胞共培养模型TYR及其相关蛋白mRNA表达的影响

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中药材 2014年第6期37卷 1025-1029页

作者：张宁刘慧张明磊刘斌任燕冬王雪李建民黑龙江中医药大学黑龙江佳木斯154007

目的:探讨逍遥散有效部位对A375与HacaT细胞共培养模型黑素合成的影响及机理。方法:制备逍遥散AB-8大孔树脂柱层析富集物,将其作用于以1∶2的比例构建的A375细胞与HacaT细胞共培养模型,采用Hunt法检测黑素含量,RT-PCR法测定TYR、trp-1、... 详细信息

目的:探讨逍遥散有效部位对A375与HacaT细胞共培养模型黑素合成的影响及机理。方法:制备逍遥散AB-8大孔树脂柱层析富集物,将其作用于以1∶2的比例构建的A375细胞与HacaT细胞共培养模型,采用Hunt法检测黑素含量,RT-PCR法测定TYR、trp-1、trp-2 mRNA的表达。结果:逍遥散大孔树脂柱层析40%乙醇洗脱部位对细胞共培养模型作用显著,与阴性对照组比较,逍遥散4、2 g/L组黑素量分别下调82.23%、93.01%;TYR、trp-1、trp-2 mRNA表达量分别下调29.11%、23.78%、20.05%和25.13%、15.02%、11.64%(Ptrp-1和trp-2 mRNA的表达而降低人黑素瘤细胞的酪氨酸酶活性和黑素合成量。

关键词：逍遥散黄褐斑 TYR trp-1 trp-2

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异源黑色素瘤DNA疫苗结合IL-12和Ii-PADRE抗鼠黑色素瘤的研究

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中国细胞生物学学报 2014年第9期36卷 1262-1268页

作者：刘祥磊张利红孙蕴淳 Steve Kay 吴炯浙江理工大学生命科学学院新元医药与生物技术研究所杭州310018 理查罗伯茨生物科技研究院宜兴214200 盐城肿瘤生物和靶向治疗工程技术研究中心盐城224005

研究酪氨酸激酶相关蛋白2(tyrosinase related protein 2,trp-2)和gp100质粒DNA在B16黑色素瘤小鼠模型中的抗肿瘤作用。trp-2及gp100在人类和鼠类黑色素瘤中均高度表达。鼠源gp100(mgp100)和鼠源trp-2(mtrp-2)在小鼠中的免疫原性较差,... 详细信息

研究酪氨酸激酶相关蛋白2(tyrosinase related protein 2,trp-2)和gp100质粒DNA在B16黑色素瘤小鼠模型中的抗肿瘤作用。trp-2及gp100在人类和鼠类黑色素瘤中均高度表达。鼠源gp100(mgp100)和鼠源trp-2(mtrp-2)在小鼠中的免疫原性较差,而异源黑色素瘤相关抗原可打破这些免疫耐受。使用电脉冲法免疫人源gp100(hgp100)和人源trp-2(htrp-2)质粒在B16F10肿瘤模型中表现出显著的保护作用。trp-2和gp100质粒免疫结合Ii-PADRE(invariant Pan DR reactive epitope)和鼠源白介素-12(murine interleukin-12,mIL-12)质粒有效消退了建立的皮下B16F10肿瘤。上述结果表明,肌肉内注射异源DNA疫苗结合Ii-PADRE与IL-12质粒使用可能是一种有效治疗黑色素瘤的策略。

关键词： gp100 trp-2 B16F10黑色素瘤肿瘤消退

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嵌合NY-ESO-1 DNA疫苗诱导黑色素瘤小鼠模型抗肿瘤免疫的研究

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中国细胞生物学学报 2015年第11期37卷 1503-1511页

作者：谷银芳顾汉民周曙明吴炯蒋泽华上海师范大学生命与环境科学学院上海200234 理查罗伯茨生物科技研究院宜兴214200 宜兴市肿瘤医院宜兴214200

NY-ESO-1作为一种肿瘤抗原,具有较强的免疫抗原性,并且已成为肿瘤候选疫苗之一。但由于目前大多应用NY-ESO-1多肽以及蛋白质疫苗,其临床试验效果欠佳,亟需更为有效的NY-ESO-1抗原设计的肿瘤免疫治疗出现。该研究的目的是探索将NY-ESO-1... 详细信息

NY-ESO-1作为一种肿瘤抗原,具有较强的免疫抗原性,并且已成为肿瘤候选疫苗之一。但由于目前大多应用NY-ESO-1多肽以及蛋白质疫苗,其临床试验效果欠佳,亟需更为有效的NY-ESO-1抗原设计的肿瘤免疫治疗出现。该研究的目的是探索将NY-ESO-1与具有增强免疫效应的五种因子分别重组成嵌合蛋白抗原,使其更有效地被加工、转运和呈递,以期找到最佳的基因佐剂,增强NY-ESO-1作为肿瘤治疗性DNA疫苗的免疫效果。采用电脉冲体内细胞高效转入的方法对C57BL/6小鼠进行DNA免疫,发现用编码NY-ESO-1或连接有HSP70的嵌合体质粒免疫可诱导强烈的NY-ESO-1特异性Ig G1反应。NY-ESO-1连接泛素的质粒免疫小鼠主要诱导NY-ESO-1特异性Ig G2a反应,表明此基因佐剂诱导强的Th1免疫反应。与其他嵌合NY-ESO-1质粒免疫相比,NYESO-1连接泛素的质粒免疫小鼠,有效地保护小鼠对有NY-ESO-1表达的B16F10黑色素瘤细胞系的挑战作用,证明强的Th1免疫反应对预防和治疗肿瘤具有重要作用。去除调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)可进一步增强泛素-NY-ESO-1嵌合DNA疫苗治疗黑色素瘤的作用。此外,Ub-NY-ESO-1质粒结合编码异源黑素瘤抗原GP100和trp-2的质粒免疫可诱导对抗含有NY-ESO-1表达的B16F10黑色素瘤的协同抗肿瘤免疫疗效。该研究结果表明,编码泛素-NY-ESO-1嵌合抗原的质粒DNA疫苗或与编码其他相关黑色素瘤抗原的质粒的联合可能是有效的治疗黑色素瘤的疫苗。

关键词： NY-ESO-1 B16F10黑色素瘤基因佐剂治疗性基因疫苗 gp100 trp-2

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异源黑色素瘤DNA疫苗结合佐剂治疗鼠黑色素瘤的研究

异源黑色素瘤DNA疫苗结合佐剂治疗鼠黑色素瘤的研究

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作者：刘祥磊浙江理工大学

学位级别：硕士

恶性黑色素瘤是一种具有高度转移性的恶性肿瘤，全球范围内的黑色素瘤致死率一直居高不下。近年来，随着酪氨酸激酶相关蛋白-2(tyrosinase related protein2, trp-2)和gp100等黑色素瘤相关抗原研究的日益深入，黑色素瘤DNA疫苗得到了极... 详细信息

恶性黑色素瘤是一种具有高度转移性的恶性肿瘤，全球范围内的黑色素瘤致死率一直居高不下。近年来，随着酪氨酸激酶相关蛋白-2(tyrosinase related protein2, trp-2)和gp100等黑色素瘤相关抗原研究的日益深入，黑色素瘤DNA疫苗得到了极大的发展。然而，尽管已经在治疗恶性黑色素瘤方面取得了可喜成绩，黑色素瘤DNA疫苗仍然存在着容易引发免疫耐受、诱导的免疫应答微弱等问题亟待解决。 trp-2和gp100在人类黑色素瘤中高度表达，并且在同源的鼠类黑色素瘤中有类似现象。鼠源gp100(mgp100)和鼠源trp-2(mtrp-2)在小鼠体内容易引发免疫耐受，导致小鼠难以产生有效的保护性免疫应答反应。在本实验中，我们尝试着使用异源黑色素瘤相关抗原来打破这些免疫耐受反应，提高黑色素瘤DNA疫苗的抗肿瘤效果。然而，DNA疫苗本身难以诱导强烈的免疫应答反应，还需要使用适当的佐剂加强其效果。因此，我们选择了基因佐剂Ii-PADRE(invariant Pan DR reactive epitope)和鼠源白介素12(murine interleukin-12, mIL-12)配合我们的黑色素瘤疫苗。此外，癌症患者体内的调节性T (Treg)细胞可能会抑制针对自身肿瘤抗原如gp100和trp-2的抗肿瘤免疫应答。我们使用地尼白介素(denileukin diftitox, ONTAK)去除Tregs，以便于疫苗更好的发挥功效。我们的实验结果显示，电脉冲法免疫人源gp100(hgp100)和人源trp-2(htrp-2)黑色素瘤DNA疫苗(phgp100和phtrp-2)在B16F10肿瘤模型中表现出了显著的保护作用。因此，异源gp100和trp-2对于打破这些同源抗原引起的免疫耐受是十分必要的;ELISPOT结果显示，phgp100、phtrp-2和pIi-PADRE共同免疫使得抗trp-2的IFN-γ分泌细胞的数量增加了近2倍，体外抗B16F10细胞的毒性细胞的数量增加了近4倍。而phtrp-2、phgp100和pIi-PADRE(肌肉免疫)结合3次注射pmIL-12(瘤内免疫)免疫的方案治疗效果最佳，该方案免疫小鼠的无瘤生存率达到了75%，且皮下建立的B16F10肿瘤得以有效消退;此外，我们发现疫苗免疫前一天腹腔注射ONTAK去除Treg细胞，结果ONTAK去除Treg细胞后phtrp-2和phgp100的抗肿瘤效果得到了进一步的提升。综上所述，2种异源黑色素瘤DNA疫苗(phgp100和phtrp-2)共同免疫可显著提高机体对B16F10黑色素瘤的保护作用;以ONTAK去除Treg细胞可以进一步增加癌症疫苗效果;而最有效的治疗策略是phgp100和phtrp-2疫苗结合基因佐剂pIi-PADRE和pmIL-12共同免疫。该方案可以在不去除Treg细胞的情况下完全消退建立的B16F10肿瘤，有效的延续小鼠的存活时间并且防止病情复发。

关键词： gp100 trp-2 B16F10黑色素瘤肿瘤消退

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人酪氨酸酶相关蛋白-2的cDNA克隆及表达

人酪氨酸酶相关蛋白-2的cDNA克隆及表达

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作者：王秋枫第四军医大学

学位级别：硕士

酪氨酸酶相关蛋白—2(trp—2)是酪氨酸酶蛋白家族的重要成员，它在黑素合成过程中催化特异的反应，具有多巴色素异构酶活性，可以将红色化合物多巴色素异构为无色的优黑素中间介质—5、6二羟基吲哚-2-羧酸(DHICA);它与白癜风的病理机制... 详细信息

酪氨酸酶相关蛋白—2(trp—2)是酪氨酸酶蛋白家族的重要成员，它在黑素合成过程中催化特异的反应，具有多巴色素异构酶活性，可以将红色化合物多巴色素异构为无色的优黑素中间介质—5、6二羟基吲哚-2-羧酸(DHICA);它与白癜风的病理机制密切相关，并且与酪氨酸酶存在着交叉抗原，是近年来备受关注的黑素细胞抗原。确定其抗原表位对于深入研究该抗原及临床应用具有极其重要的意义，为了给trp—2抗原表位确定的研究打下基础，本研究克隆了人trp—2编码基因并表达了trp—2蛋白。我们通过RT—PCR的方法扩增trp—2编码基因，克隆至pUC19载体并测序，再亚克隆至GST融合表达载体pGEX—4T—1，转化大肠杆菌，IPTG诱导表达了GST/trp—2融合蛋白，并分析鉴定表达蛋白的可溶性，最后第四军医大学硕士学位论文一用谷氨酚胺树脂柱纯化表达的蛋白。试验结果表明：我们从培养的人黑素细胞中扩增出编码trp—2的 CDNA序列，序列测定证实与文献报道的序列一致;成功构建了GST融合表达载体 pGEX—4T—l／trp—2;表达T GST／trp—2融合蛋白;得到了纯化的GST／trp—2融合蛋白。我们的工作为进一步探索人trp—2的抗原表位及白癫风的发病机制和治疗打下了基础。

关键词： trp-2 克隆融合表达白癜风

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酪氨酸酶相关蛋白家族

酪氨酸酶相关蛋白家族

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2002中国中西医结合皮肤性病学术会议

作者：王秋枫第四军医大学西京医院皮肤科

酪氨酸酶是黑素合成关键酶,它启动了由酪氨酸转化为黑素生物聚合体的级链反应。另外两种相关蛋白:trp-1(DHICA氧化酶)和trp-2(多巴色素异构酶)也参与了该反应途径。这些蛋白表现为40%的同源性,构成了酪氨酸酶相关蛋白家族。有研究表明... 详细信息

酪氨酸酶是黑素合成关键酶,它启动了由酪氨酸转化为黑素生物聚合体的级链反应。另外两种相关蛋白:trp-1(DHICA氧化酶)和trp-2(多巴色素异构酶)也参与了该反应途径。这些蛋白表现为40%的同源性,构成了酪氨酸酶相关蛋白家族。有研究表明这些蛋白可能起源于共同的祖先基因。本文回顾了这三种蛋白的基因结构以及在黑素合成和白癜风形成中三者的生物学功能。

关键词：酪氨酸酶 trp-1 trp-2 白癜风色素形成

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人酪氨酸酶相关蛋白-2的cDNA克隆及表达

人酪氨酸酶相关蛋白-2的cDNA克隆及表达

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2002中国中西医结合皮肤性病学术会议

作者：王秋枫高天文李春英李强沈柱第四军医大学西京医院全军皮肤性病中心第四军医大学唐都医院皮肤科

目的:克隆酷氨酸酶关蛋白4( trp-2)编码基因,表达trp-2蛋白。方法:从培养的人黑素细胞中提取总RNA,反转录成CDNA,通过PCR方法扩增trp-2编码基因,克隆至pUC19载体并测序,再亚克隆至GST融合表达载体pGEX-4T-l,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达TR... 详细信息

目的:克隆酷氨酸酶关蛋白4( trp-2)编码基因,表达trp-2蛋白。方法:从培养的人黑素细胞中提取总RNA,反转录成CDNA,通过PCR方法扩增trp-2编码基因,克隆至pUC19载体并测序,再亚克隆至GST融合表达载体pGEX-4T-l,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达trp-2/GST融合蛋白。结果: l、从培养的人黑素细胞中扩增出编码TPR-2的CRNA,序列测定证实与文献报道的序列一致;2、成功构建了GST融合表达载体pGEX-4T-l/trpy-2;3、表达了trp-2/GST融合蛋白。结论:本研究成功克隆了人trp-2基因,构建了GST融合表达载体并表达了trp-2/GST融合蛋白,为以后研究trp-2的抗原表位及白癜风发病机制和治疗打下了基础。

关键词： trp-2 克隆融合表达白癜风

来源： cnki会议评论

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