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Simple Modifications to Standard trizol®Protocol Allow High-Yield RNA Extraction from Cells on Resorbable Materials

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Journal of Biomaterials and Nanobiotechnology 2011年第1期2卷 41-48页

作者： Juliana Tsz Yan Lee Wai Hung Tsang King Lau Chow 不详

Resorbable bioceramics are attractive for medical applications such as bone substitution. Biochemical analysis on cells cultured on these biomaterials is vital to predict the impact of the materials in vivo and RNA extraction is an essential step in gene expression study using RT-qPCR. In this study, we describe simple modifications to the trizol? RNA extraction protocol widely used in biology and these allow high-yield extraction of RNA from cells on resorbable calcium phosphates. Without the modifications, RNA is trapped in the co-precipitated calcium compounds, rendering trizol? extraction method infeasible. Among the modifications, the use of extra trizol? to dilute the lysate before the RNA precipitation step is critical for extraction of RNA from porous ?-tricalcium phosphate (?-TCP) discs. We also investigate the rationale behind the undesirable precipitation so as to provide clues about the modifications required for other resorbable materials with high application potential in bone tissue engineering.

关键词： Calcium Phosphate Resorbable Materials RNA Extraction trizol Acid Guanidium Thiocyanate - Phenol - Chloroform Extraction TRI Reagent TRIsure

一种RNA提取试剂盒——trizol的使用方法初探

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食品科学 2005年第11期26卷 39-42页

作者：于寒松彭帅谢远红胡耀辉吉林农业大学食品工程学院吉林长春130118

以酿酒酵母为原料,利用trizol试剂快速提取法,得到的总RNA不完整,只有5srRNA一条条带,经过对该试剂盒的改进后提取的总RNA呈现28srRNA,18srRNA和5srRNA三条清晰的条带,很少有降解,其A260/A280值可达1.946,A260/A230值为2.070,具有很高... 详细信息

以酿酒酵母为原料,利用trizol试剂快速提取法,得到的总RNA不完整,只有5srRNA一条条带,经过对该试剂盒的改进后提取的总RNA呈现28srRNA,18srRNA和5srRNA三条清晰的条带,很少有降解,其A260/A280值可达1.946,A260/A230值为2.070,具有很高的纯度。

关键词： trizol 酵母 RNA提取

改良trizol法提取肿瘤细胞琼脂克隆的总RNA

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中国医学科学院学报 2012年第2期34卷 190-192页

作者：沈景宋利强中国医学科学院北京协和医学院基础学院病理系北京100005

琼脂克隆形成实验是肿瘤研究领域中一种重要的体外实验,可用于筛选转化细胞、评价肿瘤细胞药物敏感性[1]等。有研究表明,琼脂克隆形成实验筛选的肿瘤细胞具有肿瘤干细胞的特性[2],有更强的致瘤性和转移能力[3]。

关键词： trizol 琼脂克隆形成实验 RNA提取多糖

改进trizol一步法提取人晶状体囊膜组织及培养的晶状体上皮细胞中总RNA

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眼科研究 2005年第3期23卷 293-296页

作者：孙岩秀孙慧敏郭若琳张晓红袁佳琴天津医科大学眼科中心 300070 天津医科大学内分泌研究所

目的改进传统一步法,尝试从人晶状体囊膜和培养的晶状体上皮细胞中提取质量满意的总RNA。方法将人晶状体前囊膜和培养的牛晶状体上皮细胞分别随机分为标准组和对照组,分别采用常规一步法和改进法提取总RNA,通过测OD值、做变性胶电泳和RT... 详细信息

目的改进传统一步法,尝试从人晶状体囊膜和培养的晶状体上皮细胞中提取质量满意的总RNA。方法将人晶状体前囊膜和培养的牛晶状体上皮细胞分别随机分为标准组和对照组,分别采用常规一步法和改进法提取总RNA,通过测OD值、做变性胶电泳和RTPCR反应检测改进法是否可提高微量组织或细胞的RNA产量,并验证其纯度和完整性。结果相同标本量条件下,改进组RNA产量均高于标准组数倍;变性胶电泳28S∶18S=2∶1,各组RNA产物经RTPCR反应均可扩增出220bp的目的基因,而阴性对照反应均得到阴性结果,可认为是完整的未降解的无污染的RNA。结论改进一步法可成功地提取毫克级组织和104个细胞的总RNA,产物完整无降解并可用于下一步反应。

关键词： trizol 糖原晶状体上皮细胞 RNA

trizol——一把同时提取核酸和蛋白质的利器

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生物学通报 2012年第9期47卷 9-10页

作者：舒端阳揭阳华侨高级中学广东揭阳522000

在trizol问世之前,提取RNA是一件异常困难的工作,因为能够降解RNA的核糖核酸酶无处不在;然而在Chomczynski和Sacchi发明trizol后,这件工作就变得十分简单快捷,利用这种试剂盒人们可以在1 h内从离体细胞中提取出高质量的RNA。其实,TRIzo... 详细信息

在trizol问世之前,提取RNA是一件异常困难的工作,因为能够降解RNA的核糖核酸酶无处不在;然而在Chomczynski和Sacchi发明trizol后,这件工作就变得十分简单快捷,利用这种试剂盒人们可以在1 h内从离体细胞中提取出高质量的RNA。其实,trizol不仅可以提取RNA,还可以同时从组织或离体细胞中分离出DNA和蛋白质。

关键词： trizol 核糖核酸酶离体细胞

trizol试剂法快速高效提取3种作物不同组织总RNA

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Trizol试剂法快速高效提取3种作物不同组织总RNA

改进trizol法提取白色念珠菌总RNA初探

中国作物学会2013年学术年会

作者：吴凯朝黄诚梅李杨瑞杨丽涛吴建明广西大学/广西亚热带生物资源保护和利用重点实验室中国农业科学院甘蔗研究中心/广西农业科学院甘蔗研究所/农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室/广西甘蔗遗传改良重点实验室广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室

【目的】探讨和建立适用于禾本科作物不同组织总RNA的快速、高效提取方法。【方法】采用trizol试剂法,通过改变抽提上清液吸取量、沉淀方法及沉淀漂洗次数,分别提取甘蔗、玉米和水稻的叶片、茎尖和根尖的总RNA。【结果】与吸取0.4 mL上... 详细信息

【目的】探讨和建立适用于禾本科作物不同组织总RNA的快速、高效提取方法。【方法】采用trizol试剂法,通过改变抽提上清液吸取量、沉淀方法及沉淀漂洗次数,分别提取甘蔗、玉米和水稻的叶片、茎尖和根尖的总RNA。【结果】与吸取0.4 mL上清液相比,吸取0.2 mL上清液的总RNA OD/OD、OD/OD值在1.95～2.00、2.11～2.44之间,所获得的总RNA纯度较高。沉淀漂洗两次的OD/OD值(2.11～2.47)明显高于沉淀漂洗1次的总RNA OD/OD值(1.01～1.61),总RNA纯度较高。经异丙醇沉淀所得各个材料的总RNA 28S、18S和5S谱带清晰,无拖尾现象,总RNA完整性较好:LiCl沉淀法的RNA条带较模糊粘连,5S条带明显弥散,总RNA产率相对较低。以trizol—异丙醇法提取的甘蔗总RNA为模板进行GAPDH基因片段扩增,所获甘蔗的叶片、茎尖和根尖的GAPDH基因表达丰度很强,无特异扩增,目的片段长度为153 bp。【结论】改良trizol—异丙醇法提取甘蔗、玉米和水稻不同组织的总RNA带型清晰、完整性好,纯度和产率高,适用于快速、高效提取禾本科植物不同组织总RNA。

关键词： RNA trizol 甘蔗水稻玉米

来源： cnki会议评论

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临床口腔医学杂志 2007年第9期23卷 531-533页

作者：潘琤魏昕刘卫红南京医科大学口腔医学研究所南京医科大学口腔医学院牙体牙髓科江苏南京210029

目的:比较trizol法、改进trizol法和超声粉碎法提取白色念珠菌总RNA产量、纯度和完整性的差异。方法:对生长至静止期的白色念珠菌标准株ATCC10231分别采用trizol法、改进trizol法和超声粉碎法提取总RNA,用紫外分光光度计测量其A260,A28... 详细信息

目的:比较trizol法、改进trizol法和超声粉碎法提取白色念珠菌总RNA产量、纯度和完整性的差异。方法:对生长至静止期的白色念珠菌标准株ATCC10231分别采用trizol法、改进trizol法和超声粉碎法提取总RNA,用紫外分光光度计测量其A260,A280的值,并进行琼脂糖凝胶电泳,对总RNA的产量、纯度和完整性进行比较。结果:三种方法提取白色念珠菌总RNA产量分别为1.904μg、7.208μg和5.000μg,A260/A280比值分别为1.896、1.415和1.612。电泳结果显示改进trizol法提取的总RNA呈现28 s rRNA,18 s rRNA和5 s rRNA三条清晰的条带,而trizol法和超声粉碎法提取的总RNA均有降解。结论:改进trizol法提取的白色念珠菌总RNA产量及纯度均高于trizol法和超声粉碎法,且完整性更好。该法优于trizol法和超声粉碎法。

关键词：白色念珠菌 trizol RNA

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改进trizol法提取基因组DNA

医学分子生物学杂志 2006年第2期3卷 105-107页

作者：杨宇虹梁东春郭刚张镜宇天津医科大学代谢病医院内分泌研究所

目的建立一种在提取总RNA的同时又能制备基因组DNA的方法。方法利用TR IZOL法收集水相沉淀总RNA后余下的中间层和有机相,合并去除蛋白质,再提取基因组DNA。通过紫外分光光度法和电泳法予以鉴定,并以之为模板进行PCR扩增鉴定。结果提取... 详细信息

目的建立一种在提取总RNA的同时又能制备基因组DNA的方法。方法利用TR IZOL法收集水相沉淀总RNA后余下的中间层和有机相,合并去除蛋白质,再提取基因组DNA。通过紫外分光光度法和电泳法予以鉴定,并以之为模板进行PCR扩增鉴定。结果提取的基因组DNA纯度和浓度俱佳,用于PCR扩增效果良好。结论改进的TR IZOL法可以更加充分地利用实验材料,且可靠易行。

关键词：基因组DNA法 trizol 方法改进聚合酶链反应

改良的trizol法提取小鼠皮肤RNA技术

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中山大学学报（医学科学版） 2020年第2期41卷 224-232页

作者：林震嘉张辉揭英桃熊媖唐源谈智刘先国周利君中山大学中山医学院生理教研室//疼痛研究中心广东广州510080 广东省第二人民医院麻醉科广东广州510317

[目的]由于皮肤组织韧性强且存在大量RNA酶,采用经典trizol法提取的RNA存在易降解质量低等不足.因此,本研究旨在通过改良的trizol法实现高质量的皮肤RNA提取.[方法]采用不同处理方式(Tri:trizol包埋;Pro:RNA样本保护液包埋;Cry:先冷冻... 详细信息

[目的]由于皮肤组织韧性强且存在大量RNA酶,采用经典trizol法提取的RNA存在易降解质量低等不足.因此,本研究旨在通过改良的trizol法实现高质量的皮肤RNA提取.[方法]采用不同处理方式(Tri:trizol包埋;Pro:RNA样本保护液包埋;Cry:先冷冻液氮再冷冻-80℃冰箱;LNG:液氮研磨;Cut:采用剪刀剪碎组织)提取的小鼠正常皮肤RNA为实验组;脊髓组织作为参照组,并以咪喹莫特(IMQ)诱导的小鼠银屑病模型皮肤组织作为保真性验证组.我们采用紫外分光光度法、琼脂凝胶电泳法、定量逆转录PCR法(qRT-PCR)等方法来检测经典trizol法(1-Tri,Nor)和改良trizol法(2-Tri,LNG-Tri,Tri-Cut,Pro)提取的RNA浓度、纯度和完整性以及IL-1βmRNA表达的差异性情况.[结果]①与脊髓组织相比,经典trizol法(1-Tri)获得的正常皮肤组织总RNA量要低,DNA污染和5S RNA条带明显,IL-1βmRNA相对表达偏高,说明经典trizol法在皮肤组织中提取RNA存在局限性,需要进行改良.②在不同小鼠皮肤样本处理组中,改良的2-Tri法和LNG-Tri法获得的RNA浓度更高,同时RNA降解、DNA污染更低,IL-1βmRNA表达更接近正常水平.更重要的是,在小鼠银屑病模型中,2-Tri法提取的RNA样本能真实反映出正常皮肤与银屑病变皮肤之间IL-1βmRNA的变化趋势.[结论]改良的2-Tri或LNG-Tri法分离的总RNA质量好,能可靠地反映生理或病理条件下的mRNA表达模式.

关键词： RNA提取小鼠皮肤 trizol 银屑病