Trizol试剂法快速高效提取3种作物不同组织总RNA
作者单位：广西大学/广西亚热带生物资源保护和利用重点实验室 中国农业科学院甘蔗研究中心/广西农业科学院甘蔗研究所/农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室/广西甘蔗遗传改良重点实验室 广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室
会议名称：《中国作物学会2013年学术年会》
会议日期：2013年
摘 要：【目的】探讨和建立适用于禾本科作物不同组织总RNA的快速、高效提取方法。【方法】采用Trizol试剂法,通过改变抽提上清液吸取量、沉淀方法及沉淀漂洗次数,分别提取甘蔗、玉米和水稻的叶片、茎尖和根尖的总RNA。【结果】与吸取0.4 mL上清液相比,吸取0.2 mL上清液的总RNA OD/OD、OD/OD值在1.95～2.00、2.11～2.44之间,所获得的总RNA纯度较高。沉淀漂洗两次的OD/OD值(2.11～2.47)明显高于沉淀漂洗1次的总RNA OD/OD值(1.01～1.61),总RNA纯度较高。经异丙醇沉淀所得各个材料的总RNA 28S、18S和5S谱带清晰,无拖尾现象,总RNA完整性较好:LiCl沉淀法的RNA条带较模糊粘连,5S条带明显弥散,总RNA产率相对较低。以Trizol—异丙醇法提取的甘蔗总RNA为模板进行GAPDH基因片段扩增,所获甘蔗的叶片、茎尖和根尖的GAPDH基因表达丰度很强,无特异扩增,目的片段长度为153 bp。【结论】改良Trizol—异丙醇法提取甘蔗、玉米和水稻不同组织的总RNA带型清晰、完整性好,纯度和产率高,适用于快速、高效提取禾本科植物不同组织总RNA。