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trim59调控肿瘤相关巨噬细胞功能促进结直肠癌进展

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山西医科大学学报 2023年第7期54卷 903-909页

作者：高晓斌王胜杰梁峰王文静孙光源武雪亮河北北方学院附属第一医院普通外科张家口075000

目的探讨trim59促进结直肠癌进展的分子机制。方法收集28例行手术治疗的人结直肠肿瘤组织样本及临床资料,采用免疫荧光双染技术分析癌与癌周正常组织样本肿瘤相关巨噬细胞中trim59的表达,应用流式分选技术分选出CD68^(+)的肿瘤相关巨... 详细信息

目的探讨trim59促进结直肠癌进展的分子机制。方法收集28例行手术治疗的人结直肠肿瘤组织样本及临床资料,采用免疫荧光双染技术分析癌与癌周正常组织样本肿瘤相关巨噬细胞中trim59的表达,应用流式分选技术分选出CD68^(+)的肿瘤相关巨噬细胞,Western blot方法检测trim59的表达。培养人巨噬细胞THP-1细胞系,随机分为sh-trim59组和NC组,分别转染sh-trim59以及阴性对照,并与人结肠癌细胞SW480进行共培养,应用Western blot方法检测两组THP-1细胞中PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白p-PI3K、p-AKT、p-mTOR及trim59、VEGF、COX-2、MMP-9蛋白的表达情况;应用划痕实验检测SW480细胞的迁移能力;应用Transwell检测SW480细胞的侵袭和迁移能力。将HUVEC细胞与上述两种细胞共培养进行血管形成实验,观察两组细胞血管形成能力。结果免疫荧光实验结果显示:结直肠癌组织肿瘤相关巨噬细胞中trim59的表达明显高于癌周正常组织(Ptrim59的表达明显升高(Ptrim59组THP-1细胞中PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白p-PI3K、p-AKT、p-mTOR及trim59、COX-2、VEGF、MMP-9表达明显降低(Ptrim59组SW480细胞划痕距离明显增大,细胞愈合率明显减小(Ptrim59组HUVEC细胞新生血管数量明显增加(Ptrim59通过激活结直肠癌肿瘤相关巨噬细胞中PI3K/AKT/mTOR通路促进COX-2、VEGF、MMP-9的分泌,增强癌细胞的浸润、侵袭和内皮细胞的血管生成能力,从而加速肿瘤的进展。

关键词： trim59 肿瘤相关巨噬细胞结直肠癌 PI3K/AKT/mTOR 迁移

trim59在非小细胞肺癌中的表达及其与预后的关系

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中国肺癌杂志 2020年第1期23卷 21-28页

作者：田海英张东旸徐荣建秦毅兰亚良矫文捷韩玉栋青岛大学附属医院肿瘤放疗科青岛266000 青岛大学附属医院胸外科青岛266000

背景与目的trim家族蛋白是E3泛素连接酶的重要成员,诸多研究证实trim家族成员在多种肿瘤的发生发展中发挥了重要作用。前期我们通过高通量测序发现trim59 mRNA在非小细胞肺癌组织中表达明显升高。本研究旨在探讨trim59在非小细胞肺癌中... 详细信息

背景与目的trim家族蛋白是E3泛素连接酶的重要成员,诸多研究证实trim家族成员在多种肿瘤的发生发展中发挥了重要作用。前期我们通过高通量测序发现trim59 mRNA在非小细胞肺癌组织中表达明显升高。本研究旨在探讨trim59在非小细胞肺癌中的表达变化及其与患者临床病理特征和预后的关系。方法检索高通量芯片表达谱数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)和肿瘤基因组计划(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中的非小细胞肺癌基因表达谱数据和临床数据,分析trim59 mRNA的表达与非小细胞肺癌患者预后的关系;采用免疫组织化学染色的方法检测trim59蛋白在90例肺癌组织及癌旁组织中表达,分析trim59蛋白的表达与患者临床病理参数及预后的关系。结果trim59 mRNA在肺癌组织中表达明显升高并提示预后不良;trim59蛋白在肺癌组织中高表达,在癌旁组织低表达或不表达,trim59蛋白的表达与肿瘤大小(P=0.007)、病理分级(P=0.009)、肿瘤原发灶-淋巴结-转移(tumor-node-metastasis,TNM)分期(P=0.003)和淋巴结转移(P=0.003)密切相关。trim59蛋白高表达的患者预后较差,Cox多因素回归分析发现trim59蛋白的表达和TNM分期是影响患者预后的独立危险因素。结论trim59的表达水平与非小细胞肺癌的预后密切相关,是影响患者预后的独立危险因素。

关键词： trim59 肺肿瘤预后

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trim59对神经胶质瘤形成的促进作用

上海交通大学学报（医学版） 2017年第6期37卷 719-725页

作者：宋丽娜冯海忠上海交通大学医学院附属仁济医院干细胞研究中心上海200127

目的·揭示trim59在神经胶质瘤发生中的作用及分子机制。方法·通过免疫组织化学法分析trim59蛋白在临床胶质瘤手术切除样本中的表达;利用Western blotting和定量PCR法分析trim59在多个胶质瘤细胞系中的表达;利用shRNA敲低胶质瘤细胞系... 详细信息

目的·揭示trim59在神经胶质瘤发生中的作用及分子机制。方法·通过免疫组织化学法分析trim59蛋白在临床胶质瘤手术切除样本中的表达;利用Western blotting和定量PCR法分析trim59在多个胶质瘤细胞系中的表达;利用shRNA敲低胶质瘤细胞系中trim59基因,分析其对胶质瘤细胞增殖、迁移、琼脂糖克隆形成及颅内原位肿瘤形成的影响;通过转录组测序及KEGG PATHWAY软件分析trim59调节的信号通路。结果·trim59在神经胶质瘤组织中表达水平与肿瘤的临床分级呈正相关。相对于正常星形胶质细胞,胶质瘤细胞系LN229和U87细胞中trim59表达较高。用慢病毒介导的shRNA抑制U87和LN229细胞中trim59的表达,能显著降低体外细胞增殖、迁移及克隆形成能力。用敲低trim59基因的U87细胞注射入裸鼠的右脑室,相较于对照细胞,胶质瘤细胞体积明显缩小。转录组测序及KEGG PATHWAY分析表明,敲低LN229细胞trim59基因后共有306个基因下调,其中与PI3K/AKT信号通路相关的基因最多。Western blotting分析发现,LN229和U87细胞敲低trim59后,AKT磷酸化水平显著降低,而过表达组成型活化的Myr-AKT可逆转trim59敲低对细胞增殖的抑制作用。结论·trim59是新发现的胶质瘤促癌基因,其可能通过PI3K/AKT信号通路发挥作用。

关键词： trim59 胶质瘤 PI3K/AKT信号通路促癌基因

trim59靶向调控PPMIB对鼻咽癌侵袭和迁移的作用

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南方医科大学学报 2021年第7期41卷 1030-1036页

作者：王文忠周兰柱孙哲吴俊崔忆旋蚌埠医学院第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科安徽蚌埠233000

目的探讨trim59能否通过靶向PPM1B影响鼻咽癌侵袭和迁移。方法TCGA数据库分析trim59在鼻咽癌中的表达;Western blot实验检测trim59和PPM1B在鼻咽癌和癌旁组织中的表达情况;RT-PCR和Western blot实验分别检测鼻咽癌细胞系中trim59和PPM1B... 详细信息

目的探讨trim59能否通过靶向PPM1B影响鼻咽癌侵袭和迁移。方法TCGA数据库分析trim59在鼻咽癌中的表达;Western blot实验检测trim59和PPM1B在鼻咽癌和癌旁组织中的表达情况;RT-PCR和Western blot实验分别检测鼻咽癌细胞系中trim59和PPM1B mRNA和蛋白的相对表达量;建立HNE1细胞trim59过表达及抑制表达的稳定细胞系,实验设未转染组(Control)、模拟物阴性对照组(mimic NC)、trim59模拟物组(mimic-trim59)、抑制剂阴性对照组(inhibitor NC)及trim59抑制剂组(si-trim59)。Western blot和荧光素酶报告基因实验检测trim59和PPM1B靶向关系;Transwell小室检测HNE1细胞侵袭和迁移能力的变化。结果TCGA数据库结果表明,trim59在鼻咽癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P=0.006);trim59在鼻咽癌组织中表达增加(P=0.01)且PPM1B表达下降(P=0.03);与HNEpC细胞相比,trim59在HNE1细胞中相对表达量显著增加(P=0.04),PPM1B在HNE1细胞中相对表达量显著下降(P=0.02);PPM1B为trim59下游靶基因且与trim59表达呈负相关(P=0.01);Transwell结果显示,上调trim59表达,HNE1细胞侵袭和迁移能力增强(P=0.01,P=0.02),下调trim59表达,HNE1细胞侵袭和迁移能力受到显著抑制(P=0.01);同时下调trim59且上调PPM1B表达后,HNE1细胞侵袭和迁移能力均较单独下调trim59表达显著被抑制(P=0.02,P=0.01)。结论trim59通过靶向调控PPM1B影响鼻咽癌细胞侵袭和转移。

关键词：鼻咽癌 trim59 PPM1B 侵袭迁移

trim59激活β-catenin/TCF4信号通路促进骨肉瘤细胞的侵袭和迁移

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肿瘤 2021年第9期41卷 581-590页

作者：祝开忠陈涛陈焕雄王挺锐钟贞浩海南医学院第一附属医院脊柱骨病外科海南海口570102

目的:研究三结构域家族蛋白59(tripartite motif family protein 59,trim59)在骨肉瘤组织细胞中的表达情况,并探讨其对骨肉瘤侵袭及迁移的影响及可能的分子作用机制。方法:采用蛋白质印迹法及实时荧光定量PCR法检测骨肉瘤组织及细胞中TR... 详细信息

目的:研究三结构域家族蛋白59(tripartite motif family protein 59,trim59)在骨肉瘤组织细胞中的表达情况,并探讨其对骨肉瘤侵袭及迁移的影响及可能的分子作用机制。方法:采用蛋白质印迹法及实时荧光定量PCR法检测骨肉瘤组织及细胞中trim59的表达水平,并通过免疫组织化学法检测骨肉瘤及相应癌旁组织中trim59蛋白的表达水平。通过病毒感染的方法将携带有特异性针对trim59基因的shRNA(shtrim59)和阴性对照shNC转入骨肉瘤U2-OS细胞,采用Transwell小室及划痕愈合实验检测沉默trim59基因表达对U2-OS细胞侵袭及迁移能力的影响,蛋白质印迹法检测对上皮-间质转化相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关蛋白β-catenin和转录因子4(transcription factor 4,TCF4)表达的影响,最后通过体内实验观察trim59基因沉默对骨肉瘤细胞肺转移的影响。通过病毒感染的方法将trim59基因过表达载体转入骨肉瘤143B细胞中,同时采用β-catenin信号通路抑制剂XAV939处理trim59过表达的细胞,再用蛋白质印迹法检测β-catenin和TCF4蛋白的表达水平,Transwell小室及划痕愈合实验检测骨肉瘤细胞侵袭及迁移能力的变化情况。结果:骨肉瘤组织及细胞中trim59 mRNA及蛋白的表达水平均明显升高(P均trim59的表达水平后,Transwell小室及划痕愈合实验均表明其侵袭及转移能力减弱(P均trim59表达后骨肉瘤细胞肺部转移的发生率降低。上调trim59表达后,β-catenin和TCF4蛋白的表达水平均明显上调(P均trim59在骨肉瘤组织及细胞中高表达,trim59可能通过激活β-catenin/TCF4信号通路调控体内外骨肉瘤细胞转移的发生。trim59可能是骨肉瘤治疗上一个潜在新的靶点。

关键词：骨肉瘤 trim59 RNA,小分子干扰细胞运动 β-catenin信号通路

促癌因子trim59不依赖泛素化酶活性促进乳腺癌转移的机制

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中国科学：生命科学 2019年第2期49卷 191-192页

作者：蒋德伟陈策实中国科学院动物模型与人类疾病机理重点实验室中国科学院昆明动物研究所昆明650223

据2018全球癌症年报统计,乳腺癌是女性中发病率和死亡率最高的癌症[1].在癌症进程中,肿瘤细胞会采取多种策略应对并适应微环境压力最终发生转移,而肿瘤细胞转移是癌症病人死亡的主要原因[2].临床上发生癌细胞淋巴结和骨转移的乳腺癌患... 详细信息

据2018全球癌症年报统计,乳腺癌是女性中发病率和死亡率最高的癌症[1].在癌症进程中,肿瘤细胞会采取多种策略应对并适应微环境压力最终发生转移,而肿瘤细胞转移是癌症病人死亡的主要原因[2].临床上发生癌细胞淋巴结和骨转移的乳腺癌患者预后生存情况均较差.

关键词：乳腺癌促癌因子 trim59 泛素化泛素化修饰酶活性

trim59调控波形蛋白促进人肝细胞肝癌细胞的增殖与迁移

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现代肿瘤医学 2021年第19期29卷 3341-3346页

作者：刘德权孙纲李校冲刘晗锦州医科大学中国人民解放军联勤保障部队第九六七医院研究生培养基地辽宁大连116021 中国人民解放军联勤保障部队第九六七医院辽宁大连116021 大连医科大学中国人民解放军联勤保障部队第九六七医院研究生培养基地辽宁大连116021

目的:探讨三结构域蛋白59(tripartite-motif protein 59,trim59)对于人肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)细胞增殖与迁移的影响以及波形蛋白(vimentin, VIM)作为其中潜在调控靶点的相关性研究。方法:通过细胞培养和细胞转染得... 详细信息

目的:探讨三结构域蛋白59(tripartite-motif protein 59,trim59)对于人肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)细胞增殖与迁移的影响以及波形蛋白(vimentin, VIM)作为其中潜在调控靶点的相关性研究。方法:通过细胞培养和细胞转染得到所需要的人HCC细胞,采用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测其中trim59 mRNA的表达水平并通过蛋白印迹法(Western blot)检测trim59蛋白质的表达水平;采用慢病毒介导的基因沉默效应与trim59过表达质粒进行转染介导的基因过表达效应调控trim59基因的表达,通过集落形成试验检测trim59处于不同表达水平时的肝癌细胞系的增殖能力差别;通过细胞划痕试验检测trim59基因处于不同表达水平时HCC细胞的迁移能力差异;并通过考马斯亮蓝法(Bradford法)检测trim59基因处于不同表达水平时,VIM的表达情况,通过统计学方法研究trim59及VIM表达的相关性。结果:通过定量qRT-PCR与Western blot检测,在所选取的HCC细胞系中,trim59 mRNA及trim59蛋白质的表达量均高于普通肝细胞(P均trim59的表达与HCC的细胞集落形成数量呈正相关(P均trim59的表达与HCC的细胞迁移能力呈正相关(P均trim59蛋白质的表达与VIM的表达呈正相关(P均trim59促进人HCC细胞的增殖与迁移,可能是通过调控VIM表达而完成,可为HCC的靶向治疗提供新的靶点。

关键词： trim59 肝细胞肝癌 VIM 增殖迁移

trim59基因沉默对结直肠癌细胞增殖和细胞周期的影响

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安徽医科大学学报 2022年第5期57卷 796-801页

作者：高晓斌武雪亮王胜杰孙光源王文静梁峰赵轶峰刘振显河北北方学院附属第一医院普通外科张家口075000

目的探讨三结构域蛋白59(trim59)对人结直肠癌HCT116细胞生物学功能的影响及其作用机制。方法构建重组trim59干扰质粒RNA(si-trim59),采用脂质体转染法将trim59敲减质粒转染至结直肠癌细胞HCT116中,RT-qPCR和Western blot验证转染效率;C... 详细信息

目的探讨三结构域蛋白59(trim59)对人结直肠癌HCT116细胞生物学功能的影响及其作用机制。方法构建重组trim59干扰质粒RNA(si-trim59),采用脂质体转染法将trim59敲减质粒转染至结直肠癌细胞HCT116中,RT-qPCR和Western blot验证转染效率;CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术检测trim59基因沉默对结直肠癌细胞增殖、克隆形成及细胞周期的影响,Western blot检测CDK4和cyclinD1细胞周期蛋白表达水平。结果trim59 mRNA及蛋白在结直肠癌细胞中的表达水平高于正常结直肠黏膜细胞(Ptrim59表达后,HCT116细胞的增殖活性和克隆形成能力受到抑制(Ptrim59在结直肠癌细胞中高表达,下调trim59表达可抑制结直肠癌细胞的增殖、克隆形成能力,提示trim59有望成为结直肠癌基因治疗的新靶点。

关键词： trim59 结直肠癌细胞增殖细胞周期

trim59在非小细胞肺癌中的表达、临床意义及与c-myc、CDC25A蛋白的相关性研究

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安徽医科大学学报 2020年第2期55卷 287-291页

作者：李琛杨晓光钱海红陈丽萍苏菁冯萍侯海军张志华河北北方学院附属第一医院呼吸内科张家口075000

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中三结构域蛋白59(trim59)的表达、临床意义及与细胞周期相关蛋白c-myc、CDC25A的相关性。方法选取NSCLC组织40例(NSCLC组)、正常肺组织40例(正常组),应用RT-PCR法检测2组trim59 mRNA的表达,应用免疫组... 详细信息

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中三结构域蛋白59(trim59)的表达、临床意义及与细胞周期相关蛋白c-myc、CDC25A的相关性。方法选取NSCLC组织40例(NSCLC组)、正常肺组织40例(正常组),应用RT-PCR法检测2组trim59 mRNA的表达,应用免疫组织化学染色法检测两组trim59、c-myc、CDC25A的表达,同时收集患者的临床资料,分析trim59、c-myc和CDC25A蛋白的表达与临床病理特征间的关系;应用Spearman检验分析三种因子间的相关性,并绘制生存曲线,分析trim59与NSCLC患者预后之间的相关性,建立Cox回归模型分析NSCLC患者预后的因素。结果RT-PCR法结果显示:NSCLC组中trim59 mRNA的表达水平明显高于正常组,差异有统计学意义(t=2.901,P=0.002);免疫组织化学染色法结果显示:NSCLC组trim59、c-myc、CDC25A的表达水平明显高于正常组,差异有统计学意义(P=0.000);NSCLC组中trim59、c-myc、CDC25A蛋白的表达水平均与病变分化程度、TNM分期、脉管浸润、淋巴结转移及肝转移相关(P0.05);Spearman相关分析显示:NSCLC组中trim59与c-myc、CDC25A均呈明显相关性(r=0.451,P=0.000;r=0.421,P=0.002);生存分析显示:trim59表达阳性的NSCLC患者生存期明显低于阴性患者(Ptrim59表达是NSCLC患者预后的独立影响因素。结论trim59的高表达在NSCLC的发生、发展中发挥重要作用,考虑与诱导细胞周期相关蛋白c-myc、CDC25A上调有关,trim59可作为NSCLC早期诊断和预后监测的潜在生物学指标。

关键词： trim59 c-myc CDC25A 非小细胞肺癌临床意义预后