检索结果-南通市图书馆

渔业科学进展 2023年第3期44卷 85-96页

作者：毛美琴蓝桢宇黄凤萍郭锡燚乐蒙胥鹏吴颖瑞彭银辉蔡小辉北部湾大学海洋学院、广西北部湾海洋生物多样性养护重点实验室广西钦州536011

Toll样受体(Toll-like receptor,tlr)是一种古老的先天性免疫受体,参与病原体相关分子模式识别,对维持免疫稳态和预防感染至关重要。本研究克隆和鉴定了卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)TLR13基因(命名为ToTLR13),其开放阅读框(ORF)为1269 ... 详细信息

Toll样受体(Toll-like receptor,tlr)是一种古老的先天性免疫受体,参与病原体相关分子模式识别,对维持免疫稳态和预防感染至关重要。本研究克隆和鉴定了卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)TLR13基因(命名为ToTLR13),其开放阅读框(ORF)为1269 bp,编码422个氨基酸,等电点为8.13。保守结构域分析显示,ToTLR13含有跨膜结构域(TM)、LRR结构域和TIR结构域,符合tlr家族的典型特征。通过建立TLR13保守域三级结构发现,ToTLR13与小鼠(Mus musculus)和大黄鱼(Larimichthys crocea)TLR13功能结构域的蛋白三级结构具有较高重叠性。多序列比对显示,ToTLR13与其他硬骨鱼TLR13具有较高的相似性,与其他纲物种的序列相似性较低。系统进化树结果显示,To TLR13与硬骨鱼TLR13聚在一起,其中与鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)最为接近,与哺乳动物、两栖类和贝类相分离。实时荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)分析显示,ToTLR13在健康卵形鲳鲹的心、鳃、肾、头肾、肝、脾、脑和肌肉中普遍表达,其中鳃的表达量最高,其次是脾。ToTLR13在其鳃、脾、肝和肾免疫相关组织中的表达情况呈现出不同程度的上调,提示其经无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)和溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)免疫刺激后可能激活了炎症反应,启动了先天性免疫反应。亚细胞定位显示,ToTLR13定位于A549细胞质。本研究表明,ToTLR13在抵御病原菌免疫应答过程中可能发挥重要的作用,研究结果可为阐明脊椎动物tlrs的功能进化史提供基础资料。

关键词：卵形鲳鲹 TLR13 基因克隆表达谱亚细胞定位

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Identification and characterization of a TLR13 gene homologue from Laodelphax striatellus involved in the immune response induced by rice stripe virus

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Journal of Integrative Agriculture 2020年第1期19卷 183-192页

作者： ZHOU Xue HU Jia FU Mei-li JIN Ping ZHANG Yun-ye XIANG Ying LI Yao MA Fei School of Chemistry and Biological Engineering Nanjing Normal University Taizhou CollegeTaizhou 225300P.R.China College of Horticulture and Plant Protection Yangzhou UniversityYangzhou 225009P.R.China Laboratory for Comparative Genomics and Bioinformatics&Jiangsu Key Laboratory for Biodiversity and Biotechnology College of Life ScienceNanjing Normal UniversityNanjing 210046P.R.China

Toll-like receptors(tlrs) are the critical superfamily homologues that initiate sensing of the invasion of pathogens by the Toll pathway. As one of several intracellular nucleic acid-sensing tlrs, TLR13 is activated by an unmethylated motif present in the large ribosomal subunit of bacterial RNA. However, little attention has been paid to the function of TLR13 gene homologue from Laodelphax striatellus(designated as LsToll-13) in the immune response to rice stripe virus(RSV). Herein, LsToll-13 was cloned and characterized using RACE-PCR. Phylogenetic analysis showed that LsToll-13 was clustered with the TLR13 from six insects. Real-time PCR analysis demonstrated that the expression level of LsToll-13 was significantly reduced in L. striatellus with RSV infection compared with that in the naive strain. When the expression of LsToll-13 was significantly up-regulated at 6 h after bacterial infection, the expression of ribonucleoprotein(RNP) indicated that the RSV titer in the host insect was significantly suppressed. Upon knockdown of LsToll-13, using RNA interference(RNAi) in L. striatellus, the expression level of RNP was significantly increased with enhanced RSV accumulation, suggesting that LsToll-13 potentially protects L. striatellus from RSV infection. Taken together, our results indicated that LsToll-13 might be involved in the immune response of L. striatellus to RSV infection, and provided a new insight into further elucidating the molecular mechanisms of complex pathogen-host interactions and integrative pest management.

关键词： Laodelphax striatellus RSV TLR13 RNAi antiviral immunity

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马氏珠母贝TLR13基因的克隆与组织表达分析

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基因组学与应用生物学 2018年第1期37卷 238-246页

作者：吴羽媛梁海鹰阮尧陈华谱杜晓东广东海洋大学水产学院湛江524025 广东省珍珠养殖与加工工程技术研究中心湛江524025

TLR13（Toll like receptor 13）是一种tlr模式识别受体,属于tlr11家族,在机体抵抗细菌、真菌、病毒和寄生虫的感染过程起重要的作用。为研究马氏珠母贝TLR13（PmTLR13）在马氏珠母贝免疫反应中的作用,本研究采用RACE扩增技术获得了PmTL... 详细信息

TLR13（Toll like receptor 13）是一种tlr模式识别受体,属于tlr11家族,在机体抵抗细菌、真菌、病毒和寄生虫的感染过程起重要的作用。为研究马氏珠母贝TLR13（PmTLR13）在马氏珠母贝免疫反应中的作用,本研究采用RACE扩增技术获得了PmTLR13基因cDNA全长序列,并且运用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术检测PmTLR13基因在马氏珠母贝7个组织中的表达模式。结果显示,Pm TLR13基因序列全长2 750 bp,其中5＇UTR长为25 bp,3＇UTR长为34 bp,开放阅读框（ORF）为2 106 bp,编码701个氨基酸,预测其分子量约为81.22 kD,等电点为8.77。SMART分析结果显示PmTLR13具有富含亮氨酸的重复序列（LRRs）、TIR域、跨膜域和信号肽,符合典型的tlr家族特征;多序列比对结果表明物种间TLR13具有较高的保守性;RT-PCR数据分析表明,PmTLR13基因在马氏珠母贝肝胰腺、性腺、闭壳肌、鳃、血细胞、中央膜区、边缘膜区中均有表达,其中鳃中表达量最高,其次是外套膜边缘区和肝胰腺。研究结果表明,PmTLR13可能在马氏珠母贝免疫防御反应中担任着重要的角色。

关键词：马氏珠母贝 TLR13 模式识别受体实时荧光定量PCR

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几种病原菌感染短蛸的病理学研究及TLR13基因的克隆与表达

几种病原菌感染短蛸的病理学研究及TLR13基因的克隆与表达

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作者：王金龙上海海洋大学

学位级别：硕士

短蛸（Octopus ocellatus）是我国北方沿海地区经济物种。近年来由于环境的不断恶化和短蛸的过度捕捞,导致短蛸的供应不足,开展短蛸的人工养殖迫在眉睫。短蛸养殖过程中由病原菌感染导致的细菌性疾病,给短蛸养殖业带来了不小的难题与挑... 详细信息

短蛸（Octopus ocellatus）是我国北方沿海地区经济物种。近年来由于环境的不断恶化和短蛸的过度捕捞,导致短蛸的供应不足,开展短蛸的人工养殖迫在眉睫。短蛸养殖过程中由病原菌感染导致的细菌性疾病,给短蛸养殖业带来了不小的难题与挑战。本研究主要进行了短蛸感染鳗弧菌和副溶血弧菌后组织的病理学观察;通过16S扩增子技术检测了病原菌感染后短蛸肝脏的菌群结构分布及多样性变化;最后分析了TLR13基因在短蛸不同组织及鳗弧菌感染后不同时间点的表达规律,以期为短蛸的疾病防控和免疫识别分子应答机制研究提供理论基础。具体研究内容如下:（1）从组织病理学角度出发,对人工感染鳗弧菌和副溶血弧菌的短蛸进行了病理学观察和研究,组织切片结果发现短蛸的肝脏、鳃心、鳃以及白体皆有明显的病理学改变,肝细胞呈现许多空泡化,细胞膜分裂,肝锁支架的结构也变得不完整;鳃细胞除了明显的形态变化外,鳃小叶和上皮细胞微绒毛都有所破坏,这些都会影响鳃的呼吸、排泄等功能;白体内含有大量的造血干细胞、祖细胞及血细胞前体细胞和血细胞,白体也是身体很好的血液供应组织,经鳗弧菌和副溶血弧菌感染后的白体细胞除了出现明显的细胞空泡化外,还有一些细胞碎片和细胞皱缩的现象导致其造血功能降低;鳃心细胞出现核膜破裂、核仁解体的现象,导致了鳃心的清除细菌和解毒功能降低。（2）通过16S扩增子技术对鳗弧菌和爱德华氏菌感染后的短蛸肝脏菌群结构及多样性变化进行了研究。结果如下,由鳗弧菌感染短蛸肝脏的Shannon index＜爱德华氏菌感染组＜对照组,而鳗弧菌感染短蛸肝脏的Simpson指数＞爱德华氏菌感染组＞对照组,说明鳗弧菌和爱德华氏菌感染短蛸会导致群落多样性降低,爱德华氏菌感染组的群落多样性高于鳗弧菌感染组的群落多样性。通过稀疏性曲线和物种丰度聚类树可知,鳗弧菌感染组和对照组差异明显,爱德华氏菌感染组的菌群结构及多样性和对照组更为接近。以上研究结果表明鳗弧菌对短蛸肝脏的影响更大。（3）TLR13基因的c DNA序列全长为2608bp,其中包括201bp的5’非编码区（UTR）,343bp的3’UTR,2064bp的开放阅读框（ORF）,共编码668个氨基酸,预测其分子量为79.5KDa,理论等电点为8.83。经SMART预测氨基酸结构发现,该序列共包括一个信号肽和三个结构域。通过实时荧光定量PCR法检测了TLR13基因的m RNA在健康短蛸肝脏、鳃、白体、系统心脏、肌肉及血细胞等组织中都有表达,其中在血液的表达量最高,在肝脏中的表达量最低。鳗弧菌感染短蛸可引起TLR13的m RNA在肝脏中表达量上调,感染24 h后达到最高峰,是刺激前的6.97倍。TLR13的升高表明该基因可能参与抵抗外源病原菌入侵的免疫应答。综上所述,本文进行了短蛸经鳗弧菌和副溶血弧菌感染后的病理学观察,发现短蛸体内各组织均有明显的病理学变化;利用16S扩增子技术研究短蛸肝脏由鳗弧菌和爱德华氏菌感染后短蛸肝脏菌群结构变化,研究发现鳗弧菌对短蛸肝脏的影响较爱德华氏菌更为强烈;克隆了短蛸TLR13基因,检测了其在各组织的表达情况和鳗弧菌菌感染后不同时间点的表达规律,发现了鳗弧菌可诱导短蛸TLR13基因上调,表明短蛸TLR13作为一种模式识别受体,可以识别鳗弧菌。以上的研究结果有利于对今后短蛸养殖中的疾病防控和准确诊断以及免疫应答机制的研究具有重要意义。

关键词：短蛸鳗弧菌病理学菌群结构 TLR13

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