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THBS1、SDC2和CYR61在食管鳞癌中的异常表达及其预后意义

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THBS1、SDC2和CYR61在食管鳞癌中的异常表达及其预后意义

作者：黄鑫汕头大学

学位级别：硕士

目的:转化生长因子β(transforming growth factor beta,TGF-β)信号通路在生长和发育过程中发挥着重要作用,与肿瘤的发生发展密切相关。凝血酶敏感素1(Thrombospondin-1, THBS1)、硫酸类肝素蛋白多糖(syndecan-2,SDC2)和富含半胱氨酸61... 详细信息

目的:转化生长因子β(transforming growth factor beta,TGF-β)信号通路在生长和发育过程中发挥着重要作用,与肿瘤的发生发展密切相关。凝血酶敏感素1(Thrombospondin-1, THBS1)、硫酸类肝素蛋白多糖(syndecan-2,SDC2)和富含半胱氨酸61(cysteine-rich 61, CYR61)是TGF-β信号通路相关基因。研究显示,THBS1能明显地活化TGF-β1因子并且激活TGF-β信号途径;SDC2即能通过硫酸肝素蛋白聚糖链与TGF-β1因子相互作用,把TGF-β1因子运输到TGF受体(TGFR)上,又可以直接与TGFR形成三元复合物共同影响TGF-β信号通路,是TGF-β信号通路的重要上游调节基因;而CYR61是TGF-β信号通路直接激活的下游靶基因。但是目前对THBS1、SDC2和CYR61等TGF-β信号通路相关基因在食管鳞癌发生发展中的作用知之甚少。本研究的目的就是探讨THBS1、SDC2和CYR61在食管鳞癌中的表达特点,并评价三者的表达与食管鳞癌各临床病理指标及其预后的关系。方法:收集2004年9月-2007年8月汕头大学第一附属医院胸外科手术切除的食管鳞癌标本77例,包括鳞癌组织及其配对切缘相对正常食管粘膜组织;TRIzol试剂提取总RNA,反转录后,以β-actin为内参照,荧光定量RT-PCR检测上述配对组织中THBS1、SDC2和CYR61基因的mRNA水平;采用配对t检验分析食管鳞癌组织与配对相对正常食管粘膜组织中THBS1、SDC2和CYR61的mRNA表达水平的异常性;采用卡方检验评价THBS1、SDC2和CYR61基因在食管鳞癌组织中的异常表达与临床病理特征之间的相关性,而与食管癌患者生存率与预后的关系则采用Kaplan-Meier检验与Cox回归模型进行统计分析。结果:荧光定量RT-PCR结果显示THBS1(P1)、SDC2(P=0.009)和CYR61(P=0.023)基因在食管鳞癌组织中的mRNA水平均存在异常表达,其中SDC2的异常表达与瘤块的大小(P=0.024)相关;而CYR61的异常表达不仅与瘤块的大小相关(P=0.03),而且与淋巴结转移也相关(P =0.034)。相关性分析结果显示,SDC2和CYR61(r=0.770;P1),THBS1和CYR61(r=0.975;P1)呈正相关;并且SDC2/CYR61的共同异常表达与淋巴结转移(P=0.009)和病理分期(P=0.033)相关;THBS1(P=0.007)、CYR61(P=0.005)异常表达以及SDC2/CYR61(P=0.026),THBS1/CYR61(P=0.006)共同异常表达均与患者的生存率密切相关。Cox回归模型显示,THBS1的异常表达与食管鳞癌的不良预后密切相关(危险度=0.391;P=0.005),同样SDC2(危险度=0.489;P=0.013)和CYR61(危险度=0.539;P=0.031)的异常表达与食管鳞癌的不良预后也有密切相关且具有独立的预警意义。结论:,THBS1、SDC2和CYR61基因在食管鳞癌组织中的mRNA水平均呈异常表达并且THBS1、SDC2与CYR61表达与食管鳞癌的不良预后密切相关,是重要的食管鳞癌独立预后因子。

关键词： THBS1 SDC2 CYR61 TGF-β信号通路食管鳞癌荧光定量RT-PCR

肝细胞癌MGMT、DAPK、THBS1和RIZ1基因甲基化研究

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中华普通外科杂志 2005年第5期20卷 291-294页

作者：钱波朱立新耿小平熊奇如钱叶本李晓明安徽医科大学第一附属医院普外科合肥230022 香港中文大学医学院病理解剖及细胞学系

目的了解肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma, HCC)中MGMT、DAPK、THBS1和RIZ1基因的甲基化状况。方法应用甲基化特异性PCR(methylation specificPCR,MSP)技术,检测40例HCC和2例正常肝组织中4种基因启动子区域的甲基化状况,并分析每种基因甲基化程度和临床参数之间的关系。结果正常肝组织中无基因甲基化。肝癌组织中,MGMT、DAPK、THBS1和RIZ1基因的甲基化率分别是15%、77 5%、37 5%和30%。且87 5%的HCC中至少有一种基因甲基化。相应癌旁组织中,MGMT,DAPK,THBS1和RIZ1的甲基化率分别为5%、77 5%、27 5%和5%。RIZ1基因癌组织中的甲基化率明显高于癌旁组织(χ2 =8 658,P1种基因甲基化组的年轻(t=2 389,PTHBS1基因甲基化的患者年龄较无此基因甲基化组的年轻(t=3 047,P<0 05)。结论HCC中多基因的启动子甲基化是一种普遍的事件。

关键词：肝细胞癌 MGMT DAPK THBS1 RIZ1基因甲基化 HCC 基因启动子

和胃2号对萎缩性胃炎大鼠THBS1甲基化的影响

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现代医药卫生 2010年第5期26卷 641-643页

作者：韩海明高志星季万胜刘丹丹王婷潍坊医学院山东潍坊261042 潍坊医学院附属医院山东潍坊261042

目的:观察和胃2号对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠的治疗作用及THBS1甲基化的影响。方法:复制CAG大鼠模型,和胃2号治疗4周,HE法观察大鼠胃黏膜病理组织学变化,MSP法检测THBS1甲基化。结果:CAG组炎症程度与正常组及和胃2号干预组比较差异均有... 详细信息

目的:观察和胃2号对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠的治疗作用及THBS1甲基化的影响。方法:复制CAG大鼠模型,和胃2号治疗4周,HE法观察大鼠胃黏膜病理组织学变化,MSP法检测THBS1甲基化。结果:CAG组炎症程度与正常组及和胃2号干预组比较差异均有显著性(P1);THBS1在CAG组甲基化率(15.4%)均高于正常组及和胃2号干预组(PTHBS1启动子甲基化。

关键词：和胃2号萎缩性胃炎甲基化 THBS1

大肠腺癌THBS1 CpG岛甲基化及其蛋白表达的研究

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世界华人消化杂志 2005年第2期13卷 189-193页

作者：张友才陈永平李骥王晓东邓长生朱尤庆龚玲温州医学院附属第一医院感染内科浙江省温州市325005 武汉大学中南医院消化内科湖北省武汉市430071

目的:探讨凝血栓蛋白1(thbsl)基因启动子CpG岛异常甲基化,蛋白表达与大肠腺癌及其临床病理特征的关联,并分析THBS1基因蛋白表达与其甲基化的相关性.方法:应用免疫组化和甲基化特异性PCR技术分别检测大肠腺癌94例及其残端正常黏膜组织中,... 详细信息

目的:探讨凝血栓蛋白1(thbsl)基因启动子CpG岛异常甲基化,蛋白表达与大肠腺癌及其临床病理特征的关联,并分析THBS1基因蛋白表达与其甲基化的相关性.方法:应用免疫组化和甲基化特异性PCR技术分别检测大肠腺癌94例及其残端正常黏膜组织中,THBS1基因启动子CpG岛甲基化和蛋白表达情况.结果:大肠腺癌和癌旁组织中,THBS1蛋白表达率(61.7%vs77.7%),CpG岛甲基化率(25.5%vs11.7%)的差异均有显著性(前者X2=5.67,P=0.017,后者X2=5.93,P=0.015),老年患者肿瘤组织中THBS1蛋白表达率明显低于非老年患者(48.8%vs72.5%,X2=5.55,P=0.018),甲基化率明显高于非老年患者(37.2%vs15.7%,X2=5.68,P=0.017),直径≥3cm的肿瘤组织中THBS1蛋白表达率显著低于直径THBS1蛋白表达率显著低于A期或B期肿瘤(44.4%vs73.3%,72.1%,X2=7.36,v=2,P=0.025)、甲基化率显著高于A期或B期肿瘤(41.7%vs13.3%,16.3%,X2=8.04,v=2,P=0.018),大肠腺癌THBS1蛋白阴性与阳性表达的组织之间,启动子CpG岛甲基化率的差异有显著性(0%vs66.7%,PTHBS1基因异常甲基化是其蛋白表达缺失的主要原因之一,并在大肠癌的发生发展中起重要作用.

关键词：大肠腺癌 THBS1 CpG岛甲基化蛋白表达

Overexpression of wild-type HRAS drives non-alcoholic steatohepatitis to hepatocellular carcinoma in mice

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Zoological Research 2024年第3期45卷 551-566页

作者： Chen Ling Su-Su Liu Yu-Ya Wang Gui-Tao Huo Yan-Wei Yang Nan Xu Hong Wang Yong Wu Yu-Fa Miao Rui Fu Yu-Wei Zhao Chang-Fa Fan College of Life Sciences Northwest UniversityProvincial Key Laboratory of Biotechnology of Shaanxi ProvinceXi’anShaanxi 710069China Division of Animal Model Research Institute for Laboratory Animal ResourcesNational Institutes for Food and Drug Control(NIFDC)Beijing 102629China National Center for Safety Evaluation of Drugs National Institutes for Food and Drug Control(NIFDC)Beijing 100176China Division of HIV/AIDS and Sexually Transmitted Virus Vaccines Institute for Biological Products ControlNational Institutes for Food and Drug Control(NIFDC)Beijing 102629China Division of Laboratory Animal Monitoring Institute for Laboratory Animal ResourcesNational Institutes for Food and Drug Control(NIFDC)Beijing 102629China

Hepatocellular carcinoma(HCC),a prevalent solid carcinoma of significant concern,is an aggressive and often fatal disease with increasing global incidence rates and poor therapeutic outcomes.The etiology and pathological progression of non-alcoholic steatohepatitis(NASH)-related HCC is multifactorial and multistage.However,no single animal model can accurately mimic the full NASH-related HCC pathological progression,posing considerable challenges to transition and mechanistic studies.Herein,a novel conditional inducible wild-type human HRAS overexpressed mouse model(HRAS-HCC)was established,demonstrating 100%morbidity and mortality within approximately one month under normal dietary and lifestyle conditions.Advanced symptoms of HCC such as ascites,thrombus,internal hemorrhage,jaundice,and lung metastasis were successfully replicated in mice.In-depth pathological features of NASH-related HCC were demonstrated by pathological staining,biochemical analyses,and typical marker gene detections.Combined murine anti-PD-1 and sorafenib treatment effectively prolonged mouse survival,further confirming the accuracy and reliability of the model.Based on protein-protein interaction(PPI)network and RNA sequencing analyses,we speculated that overexpression of HRAS may initiate the THBS1-COL4A3 axis to induce NASH with severe fibrosis,with subsequent progression to HCC.Collectively,our study successfully duplicated natural sequential progression in a single murine model over a very short period,providing an accurate and reliable preclinical tool for therapeutic evaluations targeting the NASH to HCC continuum.

关键词： HRAS THBS1 HCC driver factor NASH Fibrosis Cirrhosis HCC Treatment evaluation

胃癌THBS1和MINT1基因启动子甲基化及其蛋白表达的研究

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胃癌THBS1和MINT1基因启动子甲基化及其蛋白表达的研究

血小板凝血酶蛋白1对犬乳腺肿瘤细胞体外生物学特性的影响分析

第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议

作者：关志宇戴冬秋天津医科大学总医院胸心外科中国医科大学附属第一医院肿瘤外科

目的:探讨THBS1和MINT1基因启动子CpG岛异常甲基化,蛋白表达与胃癌及其临床病理特征的联系,并分析上述基因蛋白表达与其甲基化的相关性。方法:应用甲基化特异性PCR技术和免疫组化分别检测78例患者的胃正常粘膜组织、胃癌组织及转移淋巴... 详细信息

目的:探讨THBS1和MINT1基因启动子CpG岛异常甲基化,蛋白表达与胃癌及其临床病理特征的联系,并分析上述基因蛋白表达与其甲基化的相关性。方法:应用甲基化特异性PCR技术和免疫组化分别检测78例患者的胃正常粘膜组织、胃癌组织及转移淋巴结中,THBS1和MINT1基因启动子CpG岛甲基化和蛋白表达情况。结果:胃正常粘膜组织,早期、进展期胃癌组织和转移淋巴结中上述基因启动子均有甲基化修饰。胃癌组及转移淋巴结组THBS1和MINT1 基因启动子甲基化率均明显高于胃正常粘膜组。胃正常粘膜组织中均存在着肿瘤抑制基因THBS1和MINT1表达,胃癌组织中表达量显著性降低,不同分化程度和有无淋巴结转移或浸润深度,分别存在明显差异。在胃癌组织蛋白表达阴性的标本中,THBS1和MINT1基因启动子甲基化率明显升高, 蛋白表达与启动子甲基化呈明显负相关（P＜0．01）。结论:胃癌及淋巴结转移组织中存在肿瘤抑制基因THBS1和MINT1 甲基化并与不同发展阶段呈相关性。

关键词：胃癌 THBS1 MINT1 甲基化免疫组织化学

来源： cnki会议评论

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畜牧兽医学报 2022年第12期53卷 4470-4481页

作者：吴居业卢宝春祝宇凡贾坤华南农业大学兽医学院广州510642 广东省兽医临床重大疾病综合防控重点实验室广州510642 广东省宠物工程技术研究中心广州510642

本研究旨在深入探讨血小板凝血酶蛋白1(THBS1)对犬乳腺肿瘤细胞CHMp的影响,并阐明其影响犬乳腺肿瘤发生发展的作用机制。通过构建THBS1慢病毒稳定过表达和THBS1沉默表达的犬乳腺肿瘤细胞CHMp细胞系,采用CCK-8试验、划痕试验、Transwell... 详细信息

本研究旨在深入探讨血小板凝血酶蛋白1(THBS1)对犬乳腺肿瘤细胞CHMp的影响,并阐明其影响犬乳腺肿瘤发生发展的作用机制。通过构建THBS1慢病毒稳定过表达和THBS1沉默表达的犬乳腺肿瘤细胞CHMp细胞系,采用CCK-8试验、划痕试验、Transwell试验、原位荧光检测和流式细胞术检测THBS1对CHMp细胞增殖、迁移、侵袭、细胞凋亡和细胞周期情况的影响;通过qRT-PCR和Western blot检测THBS1对CHMp细胞凋亡相关因子(p53、Bcl-2、Bax)表达情况的影响,验证THBS1对CHMp细胞凋亡通路的影响。结果显示,过表达THBS1能有效增强犬乳腺肿瘤细胞CHMp的增殖、迁移和侵袭能力,并且减少CHMp细胞的凋亡数量,而沉默THBS1后结果与之相反;流式细胞术得出THBS1能够影响CHMp细胞的细胞周期分布;经qRT-PCR和Western blot检测发现,在THBS1过表达后,p53和Bcl-2的表达量均明显增高,Bax的表达量明显减少,在沉默THBS1后结果与之相反。结果表明,THBS1的异常表达能够影响犬乳腺肿瘤细胞CHMp的增殖、迁移、侵袭以及细胞周期;此外,THBS1能够通过影响细胞凋亡因子p53、Bcl-2和Bax的表达来影响CHMp细胞凋亡相关通路,进而影响犬乳腺肿瘤的发生发展。

关键词：犬乳腺肿瘤 CHMp细胞 THBS1 生物学特性细胞凋亡

多拉菌素对胶质瘤细胞迁移侵袭的影响及机制研究

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多拉菌素对胶质瘤细胞迁移侵袭的影响及机制研究

作者：王丽薇东北农业大学

学位级别：硕士

胶质瘤是大脑和脊髓中最常见的恶性肿瘤,呈浸润式生长,且易于复发,患者如果不接受治疗平均生存期仅几个月。高侵袭性是导致胶质瘤患者预后复发的重要原因,常规手术治疗并不能完全切除,结合放化疗稍有成效,目前国内外几种胶质瘤化疗药物... 详细信息

胶质瘤是大脑和脊髓中最常见的恶性肿瘤,呈浸润式生长,且易于复发,患者如果不接受治疗平均生存期仅几个月。高侵袭性是导致胶质瘤患者预后复发的重要原因,常规手术治疗并不能完全切除,结合放化疗稍有成效,目前国内外几种胶质瘤化疗药物已通过临床试验并投入使用,并常以替莫唑胺辅助治疗为主,复发情况还是不可避免的,因此,开发新型有效的抗胶质瘤药物成为了胶质瘤治疗的研究热点。本实验室前期研究发现,多拉菌素(Doramectin,DRM)能明显抑制胶质瘤和食管癌的增殖和迁移,诱导细胞发生自噬和凋亡,并验证了相关死亡机制。本实验将着重探讨DRM对胶质瘤迁移侵袭的影响及作用机制,为DRM的抗胶质瘤作用开发提供理论和数据支撑。为检测DRM对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,首先,通过MTT法检测DRM作用下的细胞活力,明确随DRM浓度的升高,胶质瘤U251和C6细胞的细胞存活率明显降低,IC50值分别为18.22μM和15.78μM,进而确定本实验用药浓度范围为DRM≤20μM;然后通过黏附实验发现,随着DRM浓度的升高,U251和C6细胞的黏附能力受到显著抑制;采用划痕愈合实验及transwell小室实验检测DRM对U251和C6细胞迁移侵袭能力的影响,结果发现,随着DRM浓度的升高,相比于对照组,细胞的划痕愈合距离缩短,穿过小室底膜的细胞数量也逐渐减少,迁移侵袭能力被抑制;通过western blot实验发现用DRM处理的U251和C6细胞中MMP2和MMP9蛋白表达量均低于对照组,而且,随着浓度的升高,抑制程度会更明显。以上结果表明,DRM能明显抑制U251和C6细胞的增殖、迁移和侵袭能力。为了进一步探究DRM抑制胶质瘤细胞迁移侵袭的作用机制,我们对C6细胞的前期高通量测序数据进行整理归纳,对受DRM影响明显的差异基因进行层次聚类、GO、KEGG和蛋白质相互作用(PPI)关联分析,筛选出DRM抗胶质瘤迁移侵袭的关键靶点和通路,并解释其相关作用机制,猜测DRM可能是通过调控THBS1的表达影响Focal adhesion信号通路,进而影响胶质瘤细胞的迁移侵袭;并通过RT-q PCR和western blot验证用DRM处理后U251和C6细胞中THBS1 m RNA和蛋白的表达量变化情况,结果显示,相比对照组,DRM能明显下调THBS1 m RNA和蛋白的表达,这与测序结果保持一致。THBS1在胶质瘤细胞中表达异常,并随胶质瘤分级增加而增加,为探究THBS1促进胶质瘤细胞迁移侵袭的作用机理,使用si RNA技术对U251和C6细胞中THBS1进行沉默,探究THBS1表达的下调对U251和C6细胞的迁移侵袭能力的影响,结果显示,与阴性对照组相比,THBS1表达的下调导致细胞划痕愈合能力减弱,穿过小室底膜的数量显著减少,表明细胞迁移侵袭受到抑制,同时MMP2、MMP9的表达和通路蛋白FAK、Akt的磷酸化情况也受到了抑制。以上结果证明,THBS1表达的下调会通过FAK/Akt信号通路抑制胶质瘤细胞的迁移侵袭。同时,为明确DRM通过靶向THBS1影响胶质瘤迁移侵袭的分子机制,选用临床治疗更有意义的人源胶质瘤U251细胞进行THBS1基因过表达重组载体的转染,实验结果表明过表达THBS1能促进胶质瘤细胞的迁移侵袭,并能逆转DRM对胶质瘤细胞迁移侵袭的抑制作用,也就是说,DRM是通过靶向THBS1调控FAK/Akt信号通路影响胶质瘤细胞的迁移侵袭。综上所述,DRM对胶质瘤细胞增殖、黏附和迁移侵袭均具有明显的抑制作用,具有浓度依赖性,并通过调控THBS1的表达影响FAK/Akt信号通路,对胶质瘤细胞的迁移侵袭产生抑制。因此,DRM有望成为抗胶质瘤的有效靶向化疗药物,提高患者预后生存能力,本实验为进一步推动其临床应用提供了一定的实验基础及理论支撑。

关键词：多拉菌素胶质瘤迁移和侵袭 THBS1

Bak1调控实验性蛛网膜下腔出血小胶质细胞坏死性凋亡及神经炎症的机制研究

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Bak1调控实验性蛛网膜下腔出血小胶质细胞坏死性凋亡及神经炎症的...

作者：邱显程西南医科大学

学位级别：硕士

蛛网膜下腔出血主要由颅内动脉破裂引起,占所有出血性卒中的5%。其高死亡率和致残率使治疗变得困难。小胶质细胞为神经系统的先天免疫细胞,在神经系统稳态、免疫监测、炎症反应和损伤修复中起着重要作用。蛛网膜下腔出血后,多种病理生... 详细信息

蛛网膜下腔出血主要由颅内动脉破裂引起,占所有出血性卒中的5%。其高死亡率和致残率使治疗变得困难。小胶质细胞为神经系统的先天免疫细胞,在神经系统稳态、免疫监测、炎症反应和损伤修复中起着重要作用。蛛网膜下腔出血后,多种病理生理机制在小胶质细胞中诱导氧化应激,过度炎症和程序性细胞死亡,并加重神经炎症。坏死性凋亡是神经系统疾病中神经炎症的重要调节机制,取决于受体相互作用蛋白3(RIPK3)的激酶活性和随后的假激酶混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)的激活,通常也依赖于受体相互作用蛋白1(RIPK1)激酶活性。Bak1(bcl-2同源拮抗剂杀手蛋白)是bcl-2蛋白家族中的线粒体凋亡效应分子,有报道发现Bak1的活化抑制IAP蛋白促进Caspase-8介导的IL-1β活化,促进并加重炎症反应。内源性凋亡及坏死性凋亡在多种效应分子中存在交叉作用,但其相关分子机制还不清楚。我们设计并实施了这次实验,探究内源性凋亡效应分子Bak1在蛛网膜下腔出血后诱导的坏死性凋亡中的作用和潜在分子机制,为蛛网膜下腔出血坏死性凋亡的调控机制提供新的参考,对蛛网膜下腔出血后的治疗提供新思路。本次研究分为三个部分讨论:1.小鼠蛛网膜下腔出血模型构建及小胶质细胞坏死性凋亡检测目的:通过改良单夹穿刺法建立C57BL/6J(雄性)小鼠蛛网膜下腔出血模型。检测蛛网膜下腔出血后损伤脑组织及小胶质细胞坏死性凋亡的发生情况及相关坏死性凋亡标志蛋白的时间表达模式。评估坏死性凋亡发生后神经功能损伤的情况。方法:蛋白质免疫印迹法(Westen blot,WB)检测RIPK1、RIPK3在小鼠在蛛网膜下腔出血模型中24h,48h,72h的表达情况。小鼠腹腔内注射碘化吡啶(propidium iodide,PI)然后通过组织冰冻切片免疫荧光法(Histoimmunofluorescencem,IF),观察小鼠蛛网膜下腔出血后小胶质细胞与PI共定位情况,并检测坏死性凋亡marker蛋白MLKL在小胶质细胞中的表达情况。采用改良加西亚(Garcia)评分及平衡木(Beam balance)评分,评估小鼠发生蛛网膜下腔出血后神经功能评分改变情况,探索坏死性凋亡的发生与神经功能改变的关系。结果:1.成功建立小鼠SAH模型,SAH Grade评分稳定在12-15分之间,WB结果提示RIPK1蛋白水平在造模后24h升高(P1+小胶质细胞中发现共定位。3.冰冻切片IF染色中,发现在出血损伤区周围脑组织内细胞PI染色阳性,而Sham组却没有发生这种情况,同时能发现IBA1+小胶质细胞能与碘化吡啶(PI)存在共定位,改良加西亚(Garcia)评分和平衡木(Beam balance)评分在造模后明显下降(P1调控小胶质细胞坏死性凋亡及神经炎症的机制探究。1.目的:坏死性凋亡为细胞坏死的一种亚型可促进细胞死亡并表现为促炎过程,但其下游调控机制不清。Bak1定位于线粒体外膜并产生通透性,在MPTP依赖的细胞坏死性凋亡中起重要作用。Bak1是否调控蛛网膜下腔出血小胶质细胞坏死性凋亡和其促炎反应目前还不清楚。我们应用相关实验及转录组测序探索Bak1调控氧合血红蛋白刺激后小胶质细胞坏死性凋亡和神经炎症的潜在机制,为进一步明确坏死性凋亡相关调控网络和炎症调控机制提供新的视角。2.方法:应用氧合血红蛋白10μM(Oxy-Hb)刺激BV2小胶质细胞系,通过蛋白质免疫印迹法(Westen blot,WB)检测相关坏死性凋亡marker蛋白RIPK1、RIPK3、P-MLKL表达情况。碘化吡啶(propidium iodide,PI)染色明确小胶质细胞发生坏死。DCFH-DA活性氧探针染色观察BV2细胞氧化应激情况。CCK-8检测小胶质细胞活性。细胞内ATP测定评估线粒体状态。RT-q PCR检测小胶质细胞刺激后促炎因子(IL-6,IL-1β,TNFα),促炎表型基因(Irg-1,Gpr84),抗炎基因(Arg-1,Mrc-1),趋化因子(Ccl2,Ccl5,Cxcl2),趋化因子受体(Ccr5),一氧化氮合酶(Nos2)的转录情况,同时检测在z VAD-FMK(Caspase Inhibitor z VADFMK)诱导坏死性凋亡后,小胶质细胞促炎因子(IL-6,IL-1β,TNFα)的改变。免疫共沉淀实验(Co-Immunoprecipitation,C

关键词：蛛网膜下腔出血坏死性凋亡小胶质细胞 RIPK1 MLKL Bak1 神经炎症 THBS1 全转录组测序早期脑损伤