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Overexpression of wild-type HRAS drives non-alcoholic steatohepatitis to hepatocellular carcinoma in mice

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Zoological Research 2024年第3期45卷 551-566页

作者： Chen Ling Su-Su Liu Yu-Ya Wang Gui-Tao Huo Yan-Wei Yang Nan Xu Hong Wang Yong Wu Yu-Fa Miao Rui Fu Yu-Wei Zhao Chang-Fa Fan College of Life Sciences Northwest UniversityProvincial Key Laboratory of Biotechnology of Shaanxi ProvinceXi’anShaanxi 710069China Division of Animal Model Research Institute for Laboratory Animal ResourcesNational Institutes for Food and Drug Control(NIFDC)Beijing 102629China National Center for Safety Evaluation of Drugs National Institutes for Food and Drug Control(NIFDC)Beijing 100176China Division of HIV/AIDS and Sexually Transmitted Virus Vaccines Institute for Biological Products ControlNational Institutes for Food and Drug Control(NIFDC)Beijing 102629China Division of Laboratory Animal Monitoring Institute for Laboratory Animal ResourcesNational Institutes for Food and Drug Control(NIFDC)Beijing 102629China

Hepatocellular carcinoma(HCC),a prevalent solid carcinoma of significant concern,is an aggressive and often fatal disease with increasing global incidence rates and poor therapeutic outcomes.The etiology and pathological progression of non-alcoholic steatohepatitis(NASH)-related HCC is multifactorial and multistage.However,no single animal model can accurately mimic the full NASH-related HCC pathological progression,posing considerable challenges to transition and mechanistic studies.Herein,a novel conditional inducible wild-type human HRAS overexpressed mouse model(HRAS-HCC)was established,demonstrating 100%morbidity and mortality within approximately one month under normal dietary and lifestyle conditions.Advanced symptoms of HCC such as ascites,thrombus,internal hemorrhage,jaundice,and lung metastasis were successfully replicated in mice.In-depth pathological features of NASH-related HCC were demonstrated by pathological staining,biochemical analyses,and typical marker gene detections.Combined murine anti-PD-1 and sorafenib treatment effectively prolonged mouse survival,further confirming the accuracy and reliability of the model.Based on protein-protein interaction(PPI)network and RNA sequencing analyses,we speculated that overexpression of HRAS may initiate the thbs1-COL4A3 axis to induce NASH with severe fibrosis,with subsequent progression to HCC.Collectively,our study successfully duplicated natural sequential progression in a single murine model over a very short period,providing an accurate and reliable preclinical tool for therapeutic evaluations targeting the NASH to HCC continuum.

关键词： HRAS thbs1 HCC driver factor NASH Fibrosis Cirrhosis HCC Treatment evaluation

thbs1 regulates trophoblast fusion through a CD36-dependent inhibition of cAMP,and its upregulation participates in preeclampsia

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Genes & Diseases 2021年第3期8卷 353-363页

作者： Fu-Mei Duan Li-Juan Fu Yong-Heng Wang Enoch Appiah Adu-Gyamfi Ling-Ling Ruan Zeng-Wei Xu Shi-Quan Xiao Xue-Mei Chen Ying-Xiong Wang Tai-Hang Liu Yu-Bin Ding School of Public Health and Management Chongqing Medical UniversityChongqing400016PR China Department of Bioinformatics The School of Basic MedicineChongqing Medical UniversityChongqing400016PR China The Joint International Research Laboratory of Reproduction and Development Ministry of EducationChongqing400016PR China Department of Herbal Medicine School of Traditional Chinese MedicineChongqing Medical UniversityChongqing400016PR China Department of Reproductive Medicine The Third Affiliated HospitalChongqing Medical UniversityChongqing401120PR China

Preeclampsia is a pregnancy complication which threatens the survival of mothers and fetuses.It originates from abnormal placentation,especially insufficient fusion of the cytotrophoblast cells to form the syncytiotrophoblast.In this study,we found that thbs1,a matricellular protein that mediates cell-to-cell and cell-to-matrix interactions,is downregulated during the fusion of primary cytotrophoblast and BeWo cells,but upregulated in the placenta of pregnancies complicated by preeclampsia.Also,thbs1 was observed to interact with CD36,a membrane signal receptor and activator of the cAMP signaling pathway,to regulate the fusion of cytotrophoblast cells.Overexpression of thbs1 inhibited the cAMP signaling pathway and reduced the BeWo cells fusion ratio,while the effects of thbs1 were abolished by a CD36-blocking antibody.Our results suggest that thbs1 signals through a CD36-mediated cAMP pathway to regulate syncytialization of the cytotrophoblast cells,and that its upregulation impairs placental formation to cause preeclampsia.Thus,thbs1 can serve as a therapeutic target regarding the mitigation of abnormal syncytialization and preeclampsia.

关键词： cAMP Cell fusion Preeclampsia thbs1 Trophoblast

thbs1对胃癌生物学功能的调控和机制研究

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THBS1对胃癌生物学功能的调控和机制研究

作者：张修远华中科技大学

学位级别：硕士

目的:thbs1起初被认为是一种内源性血管生成抑制剂,但是越来越多的研究发现thbs1可以参与一些肿瘤的恶性进展。目前关于thbs1与胃癌的关系研究较少,本研究旨在于探索thbs1对胃癌细胞生物学功能的影响和发挥作用的分子机制。方法:(1)基于... 详细信息

目的:thbs1起初被认为是一种内源性血管生成抑制剂,但是越来越多的研究发现thbs1可以参与一些肿瘤的恶性进展。目前关于thbs1与胃癌的关系研究较少,本研究旨在于探索thbs1对胃癌细胞生物学功能的影响和发挥作用的分子机制。方法:(1)基于TCGA和GEO数据库,通过Kaplan-Meier生存分析研究thbs1基因表达与胃癌预后的关系。基于免疫组化检测胃癌组织中的thbs1蛋白表达。通过TCGA数据库,探索thbs1与胃癌的临床病理特征和免疫浸润的相关性。(2)thbs1敲减和过表达的稳转胃癌细胞系由慢病毒转染构建;通过CCK8和克隆形成实验检测thbs1对胃癌细胞增殖的影响;通过Transwell和划痕实验检测thbs1对胃癌细胞迁移和侵袭的影响;通过Western blot检测thbs1对胃癌细胞EMT的调控和相关信号通路蛋白的表达;利用GSEA分析,探索thbs1影响胃癌细胞生物学功能的机制。(3)通过免疫共沉淀和Western blot验证thbs1与CD36直接结合;通过细胞免疫荧光检测thbs1与CD36的共定位;通过CCK8、克隆形成、Transwell和Western blot实验进行细胞回复实验。结果:(1)胃癌组织中的thbs1表达水平相对更高,thbs1的表达与胃癌患者的不良预后,分级和分期显著相关。(2)免疫浸润分析显示在胃癌微环境中,thbs1表达与肿瘤相关成纤维细胞和M2巨噬细胞丰度正相关。(3)thbs1可以促进胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT。thbs1可以通过PI3K/AKT/NF-κB通路促进胃癌进展。(4)thbs1通过与CD36相互作用,共同发挥促癌作用。结论:thbs1可作为胃癌患者的预后生物标志物,通过与CD36相互作用调控胃癌的恶性生物学功能。

关键词：胃癌 thbs1 预后侵袭免疫浸润

thbs1及KCNT2在高盐环境下引起的大鼠肠系膜动脉内皮细胞增殖改变中的作用

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THBS1及KCNT2在高盐环境下引起的大鼠肠系膜动脉内皮细胞增殖改变...

作者：詹涛安徽医科大学

学位级别：硕士

背景高盐饮食已经成为三大饮食风险因素之一。有大量的研究表明高盐摄入会导致血压升高、血管内皮功能受损和靶器官损害,从而导致心血管和其他慢性疾病的风险性增大。血管内皮细胞是维持血管稳态的主要细胞之一,内皮细胞功能障碍会导致... 详细信息

背景高盐饮食已经成为三大饮食风险因素之一。有大量的研究表明高盐摄入会导致血压升高、血管内皮功能受损和靶器官损害,从而导致心血管和其他慢性疾病的风险性增大。血管内皮细胞是维持血管稳态的主要细胞之一,内皮细胞功能障碍会导致严重的心血管功能失调。thbs1(Thrombospondin-1)是一种有效的内源性生理和病理血管生成抑制剂,有研究表明它作用于血管内皮细胞,对心血管疾病有着重要意义。我们前期的研究发现高盐环境下,thbs1在大鼠肠系膜动脉内皮细胞增殖中起关键作用,然后通过转录组测序技术发现高盐作用于内皮细胞增殖的靶基因KCNT2(Potassium sodium-activated channel subfamily t member 2),最后通过RT-q PCR和CCK-8增殖实验探究高盐环境下thbs1和KCNT2在大鼠肠系膜动脉内皮细胞增殖中所起的调节作用,从而为心血管疾病的治疗和预后判断提供一些新的思路。目的(1)探究thbs1在高盐环境下对肠系膜动脉内皮细胞增殖的影响及机制。(2)探究KCNT2对于肠系膜动脉内皮细胞增殖的影响。(3)探究高盐环境下thbs1是否与KCNT2共同调节肠系膜动脉内皮细胞的增殖。方法1.免疫荧光实验鉴定原代培养的大鼠肠系膜细胞为内皮细胞;2.CCK-8实验检测高盐环境下thbs1对肠系膜动脉内皮细胞增殖的影响;3.转录组测序技术发现thbs1引起肠系膜动脉内皮细胞增殖改变相关的靶基因;4.RT-q PCR实验验证测序发现的靶基因:KCNT2;5.CCK-8实验检测KCNT2对肠系膜动脉内皮细胞增殖的影响;6.CCK-8实验检测thbs1和KCNT2是否在高盐环境下共同作用于大鼠肠系膜动脉内皮细胞增殖;结果本研究首先发现高盐环境下thbs1的敲低会抑制大鼠肠系膜动脉内皮细胞的增殖,转录组测序结果表明KCNT2可能是作用于大鼠肠系膜动脉内皮细胞增殖的靶基因,并且通过RT-q PCR实验确定KCNT2在高盐培养的内皮细胞中的表达与测序结果一致,最后通过CCK-8实验进一步发现:KCNT2能够影响内皮细胞的增殖,高盐环境下thbs1和KCNT2共同调节内皮细胞增殖。结论高盐环境下大鼠肠系膜动脉内皮细胞中thbs1的敲低能够明显抑制内皮细胞增殖,KCNT2是高盐环境下thbs1调节内皮细胞增殖的重要靶点,KCNT2在高盐下能调节大鼠肠系膜动脉内皮细胞增殖。该研究为thbs1和KCNT2在高盐引起的心血管疾病,提供一些新的治疗思路。

关键词：高盐 thbs1 KCNT2 内皮细胞

ADAMDEC1通过降解thbs1促进胎盘滋养细胞合体化的机制研究

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ADAMDEC1通过降解THBS1促进胎盘滋养细胞合体化的机制研究

作者：李卓航重庆医科大学

学位级别：硕士

研究目的:胎盘是连接母体及半异源性胎儿的重要纽带,其在整个妊娠期间保持高度动态变化以平衡母-胎免疫耐受和满足胎儿不同发育阶段营养物质的转运需求。滋养细胞作为胎盘的主要构成细胞,其中由细胞滋养细胞（Cytotrophoblast,CTB）不... 详细信息

研究目的:胎盘是连接母体及半异源性胎儿的重要纽带,其在整个妊娠期间保持高度动态变化以平衡母-胎免疫耐受和满足胎儿不同发育阶段营养物质的转运需求。滋养细胞作为胎盘的主要构成细胞,其中由细胞滋养细胞（Cytotrophoblast,CTB）不断增殖和分化为合体滋养层细胞（Syncytiotrophoblast,STB）以及绒毛外滋养细胞（Extravillous trophoblast,EVT）是实现胎盘动态变化的关键,但调控机制仍不甚明了。已有研究发现,细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）在滋养细胞分化及胎盘形成过程中广泛进行重塑,并参与母-胎信号转导、胎盘屏障构建及器官形态发生等,其异常将介导子痫前期（Preeclampsia,PE）、胎儿生长受限（Fetal growth restriction,FGR）和自然流产（Spontaneous abortion,SA）等胎盘源性妊娠疾病的发生与发展。因此,本研究从细胞外基质重塑调控细胞分化角度着手,拟阐明基质金属蛋白酶ADAMDEC1通过降解细胞外基质调控滋养细胞合体化的分子机制,及其异常与子痫前期发生的相关性,为揭示滋养细胞分化的调控机制提供理论依据,为子痫前期防治策略及药物研发提供潜在靶点。研究方法:本研究综合生物信息学分析、多种体外合体化模型、慢病毒转染系统、3D培养系统、蛋白质组学技术、临床关联性分析等研究手段,多方面探究ADAMDEC1对滋养细胞融合、细胞间边界重塑、信号转导的影响及其表达异常与子痫前期发生的相关性。首先,利用生物信息学方法从5个已发表的公共数据集中筛选出唯一共同上调基因ADAMDEC1,通过分离原代滋养细胞及收集正常早孕绒毛组织,采用实时荧光定量 PCR（Quantitative Reverse Transcription PCR,qRT-PCR）、免疫荧光（Immunofluorescence,IF）、蛋白免疫印迹（Western Blot,WB）验证ADAMDEC1在CTB及STB中的表达模式;其次,通过慢病毒转染系统建立稳定敲低的BeWo细胞系、稳定过表达的BeWo细胞系和3DJEG-3细胞,联合福斯克林（Forskolin,FSK）诱导细胞融合构建合体化模型,采用 qRT-PCR、IF、WB、免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation,Co-IP）等实验技术探究ADAMDEC1降解thbs1介导滋养细胞融合的分子机制;再者,利用蛋白质组学技术挖掘ADAMDEC1在滋养细胞融合过程中其他潜在的底物,为进一步解析其参与ECM重塑提供研究靶标;最后,收集临床胎盘组织样本,采用IF、WB分析ADAMDEC1异常表达与PE发生的相关性。研究结果:一、滋养细胞融合差异表达基因筛选及分析通过对GEO数据库以及BioProject数据库中的5组滋养细胞合体化转录组数据集进行重分析,共获得6282个差异表达基因（Differentially expressed genes,DEGs）,进一步维恩（Venn）分析发现ADAMDEC1是所有数据集中唯一共同上调表达的基因;通过“clusterProfiler”软件分析包对DEGs进行基因本体（Gene ontology,GO）和KEGG信号通路富集分析,结果显示DEGs主要富集于细胞周期,参与类固醇合成、TNF介导的炎症信号通路、PI3K-Akt信号通路和Jak-STAT信号通路。二、原代滋养细胞验证DEGs及ADAMDEC1在胎盘组织的表达模式至少存在于2个数据集中的DEGs被认为是高度可信的基因,以此为标准共筛选出190个上调表达基因和406个下调表达基因。基于原代滋养细胞体外自发合体化模型对其中20个DEGs进行表达差异验证,实验统计结果与生物信息学分析结果一致,并且ADAMDEC1表达差异倍数高达23倍;进一步蛋白水平检测证实了原代滋养细胞体外培养48h后ADAMDEC1表达显著升高,且在早孕绒毛组织中显示相对高表达于外层STB。三、干扰ADAMDEC1表达抑制BeWo细胞合体化进程为了探究ADAMDEC1对滋养细胞合体化的影响,在BeWo细胞合体化模型上进行干扰ADAMDEC1表达实验,结果显示干扰抑制FSK诱导合体化标志物Syncytin1、β-hCG的上调表达以及降低BeWo细胞的融合效率。四、过表达ADAMDEC1促进BeWo细胞及3D JEG-3细胞融合基于经典的BeWo细胞合体化模型以及成功构建的3D合体化模型,发现单纯过表达ADAMDEC1在一定程度上促进了 BeWo细胞和3D JEG-3细胞核聚集,联合FSK处理显著上调合体化标志Syncytin1、β-hCG的表达并且更大程度地促进滋养细胞融合;同时发现在此过程中伴随着重要的细胞外基质蛋白表达降低,如钙粘附蛋白（Epithelial cadherin,E-cadherin）和血小板反应蛋白（Thr

关键词：胎盘滋养细胞合体化 ADAMDEC1 thbs1 子痫前期

乳腺癌中thbs1的表达及其沉默后对肿瘤细胞增殖、迁移及EMT的影响研究

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乳腺癌中THBS1的表达及其沉默后对肿瘤细胞增殖、迁移及EMT的影响...

作者：马若男内蒙古医科大学

学位级别：硕士

研究背景:乳腺癌是一种常见恶性肿瘤,好发于女性,其特点为侵袭性强、复发率高、预后较差。探讨乳腺癌发生和进展的分子机理,对于早期防治乳腺癌、延长患者生存期、改善预后有重要意义。血小板反应蛋白1(thrombospondin 1,thbs1)是一种... 详细信息

研究背景:乳腺癌是一种常见恶性肿瘤,好发于女性,其特点为侵袭性强、复发率高、预后较差。探讨乳腺癌发生和进展的分子机理,对于早期防治乳腺癌、延长患者生存期、改善预后有重要意义。血小板反应蛋白1(thrombospondin 1,thbs1)是一种广泛存在于人体各种组织细胞中的基质糖蛋白,在调节肿瘤血管生成、侵袭转移及凋亡等恶性生物学行为中起重要作用,其具体机制尚不清楚。目的:1.对比thbs1在乳腺癌和正常组织中的表达差异,分析其表达水平对乳腺癌患者生存预后的影响;2.探讨利用siRNA沉默thbs1基因后人乳腺癌细胞的生物学功能变化。方法:1.通过TCGA数据库分析乳腺肿瘤组织和癌旁正常组织中的thbs1基因表达差异,利用Ualcan数据库和KM-plotter数据库评估生存预后价值;2.探讨siRNA介导的thbs1基因沉默对MCF-7和MDA-MB-23 1细胞的功能影响。(1)通过脂质体细胞转染法将靶向沉默thbs1基因的siRNA转染至2种乳腺癌细胞中,得到thbs1沉默细胞系;(2)应用实时荧光定量PCR技术检测沉默效果及EMT标志物E-cadherin、Vimentin和N-cadherin的mRNA表达量变化;(3)利用划痕损伤实验,检测细胞迁移愈合能力的变化;(4)平板细胞克隆形成实验检测集落形成和增殖能力;(5)Western blot检测用siRNA转染的乳腺癌细胞E-cadherin、Vimentin和N-cadherin蛋白质表达变化。所有实验重复3次,使用SPSS 25.0统计分析实验结果,以P1.生物信息学分析结果显示,与癌旁组织相比,乳腺癌组织中的thbs1表达量更高,且高表达thbs1患者的生存期低于低表达组(P1)qRT-PCR实验:siRNA-THB S1对 MCF-7 细胞的沉默效率为(94.98±0.37)%,MDA-MB-231 细胞为(62.9±2.90)%;相比于空白对照组及 siRNA-NC 对照组,siRNA-THB S1 组 N-cadherin、Vimentin mRNA相对表达量降低(Pthbs1组MCF-7和MDA-MB-231细胞48h的迁移率分别为(22.94±1.00)%和(37.21±1.79)%,相比于各组空白对照组迁移率(27.69±3.16)%和(49.50±6.44)%、siRNA-NC 迁移率(28.61±1.37)%和(50.75±3.20)%,差异有统计学意义(P1细胞克隆形成数分别为(62.00±2.31)和(102.00±3.22),siRNA-NC 组分别为(59.00±2.52)和(96.33±4.50),siRNA-thbs1 组分别为(43.33±2.40)和(40.33±11.73),差异有统计学意义(Pthbs1基因后,MCF-7和MDA-MB-231细胞的上皮标志物E-cadherin表达升高,间质标志物Vimentin、N-cadherin表达降低,差异有统计学意义(P1.thbs1在乳腺癌组织中的表达量高于癌旁组织,生信分析显示thbs1的表达与生存期减少相关。2.乳腺癌中thbs1的高表达与肿瘤增殖迁移有一定相关性,可能通过诱导EMT过程促进肿瘤的侵袭转移。

关键词：乳腺癌 thbs1 增殖迁移 EMT

早发性脊柱侧凸合并胸廓发育不良综合征幼猪模型的肺发育相关分子分析

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昆明医科大学学报 2024年第5期45卷 49-59页

作者：代兴飞李啟堂严荣爽张清东潘呈费德锐马裕俭徐世鑫张颖昆明医科大学第二附属医院骨科云南昆明650101 昆明理工大学附属玉溪医院/玉溪市第二人民医院骨科云南玉溪653100

目的基于已建立的早发性脊柱侧凸合并胸廓发育不良综合征(EOS+TIS)幼猪模型及治疗模型获取组织标本,进行转录组测序,生物信息学分析。筛选出影响肺发育相关的部分HUB基因。方法建立EOS+TIS及治疗动物模型,进行HE及Masson染色观察肺组织... 详细信息

目的基于已建立的早发性脊柱侧凸合并胸廓发育不良综合征(EOS+TIS)幼猪模型及治疗模型获取组织标本,进行转录组测序,生物信息学分析。筛选出影响肺发育相关的部分HUB基因。方法建立EOS+TIS及治疗动物模型,进行HE及Masson染色观察肺组织形态及纤维化程度,并对3组(对照组、模型组、治疗组)肺组织测序。利用R软件的DESeq2进行差异分析,运用DAVID数据库进行差异基因的GO/KEGG富集分析,筛选核心基因,预测相关通路,并通过PCR和免疫印迹实验进行验证。结果(1)HE染色结果:模型组肺组织体现了显著的支气管肺发育不良,治疗组获得明显改善;Masson染色结果:模型组肺纤维化程度较重,治疗组减轻;(2)DESeq2分析表明,正常组与模型组有170个上调和262个下调基因,而模型组与治疗组有323个上调和467个下调基因;(3)GO功能注释显示差异基因主要富集在细胞外基质、质膜组成、免疫应答、炎症反应、钙离子结合、细胞因子活性等功能。KEGG显示差异基因主要富集在神经活性配体-受体相互作用、细胞因子-细胞因子受体相互作用等通路;(4)筛选出共同基因thbs1;(5)PCR和Western Blot实验验证,thbs1在模型组中下调,治疗后上调(Pthbs1与TGF-β参与了早发性脊柱侧凸合并胸廓发育不良综合征幼猪模型的肺发育变化过程。

关键词：早发性脊柱侧凸胸廓发育不良综合征生物信息分析 thbs1 TGF-β

thbs1基因甲基化与AML发病关系的研究及去甲基化药物在Allo-HSCT中的作用

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THBS1基因甲基化与AML发病关系的研究及去甲基化药物在Allo-HSCT...

作者：王晓果第三军医大学

学位级别：硕士

目的:急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)对人类的健康产生严重的威胁,其发病因素各不相同。目前,基因启动子区域甲基化与急性髓系白血病发生、发展及预后的关系日益受到关注,去甲基化药物在血液系统恶性肿瘤中的应用越来越受... 详细信息

目的:急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)对人类的健康产生严重的威胁,其发病因素各不相同。目前,基因启动子区域甲基化与急性髓系白血病发生、发展及预后的关系日益受到关注,去甲基化药物在血液系统恶性肿瘤中的应用越来越受到重视。我们前期蛋白芯片研究发现凝血酶敏感蛋白-1在急性髓系白血病患者血清中表达较对照组下调[1]。凝血酶敏感蛋白-1(Thrombospondin-1,TSP-1,thbs1)是一种多功能的细胞外基质糖蛋白[2],其编码基因thbs1,位于人类染色体15q15,是潜在的抑癌基因[3]。部分研究表明thbs1基因启动子区域高甲基化抑制基因转录,与胃癌、结肠癌等肿瘤的发生密切相关[4,5],thbs1基因甲基化是否与急性髓系白血病的发病也有一定的关系仍不确定。异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,alloHSCT)为目前唯一可能治愈急性髓系白血病的方法[6],但是移植后复发及移植物抗宿主病一直是影响AML患者预后的主要原因。去甲基化药物在异基因造血干细胞移植前后的使用对急性髓系白血病及骨髓增生异常综合症的预后影响国内外学者做了大量的研究,但结论仍存在一些争议。因此,我们针对去甲基化药物桥接异基因造血干细胞移植对急性髓系白血病及骨髓增生异常综合症预后的影响进行meta分析,并针对小剂量地西他滨对移植后早期复发的AML和MDS患者的疗效进行观察,以期找到提高移植后AML和MDS患者预后、改善其生存质量的有效方法。方法:1.检测初诊急性髓系白血病患者及健康成年人外周血血清thbs1蛋白水平,并检测初诊的急性髓系白血病患者外周血、健康成年人外周血以及白血病细胞株中thbs1基因甲基化发生频率,并比较两者之间差异;2.收集国内外期刊及会议已发表临床病例数据资料进行Meta分析,来评价去甲基化药物桥接异基因造血干细胞移植对AML和MDS患者预后的影响;3.观察我院6例异基因造血干细胞移植后早期复发并接受小剂量地西他滨治疗的AML和MDS患者,总结这6例患者的临床特点、治疗前后骨髓中原始细胞比例、植入指标、移植物抗宿主病的转归及对预后的影响。主要结果:1.与健康成年人相比,急性髓系白血病患者外周血血清中thbs1蛋白水平明显下降,且thbs1基因启动子区域甲基化发生率高(36.7%和0%,p=0.002),在四种白血病细胞株中均检测到thbs1基因甲基化。2.Meta分析结果显示,与诱导化疗和最佳支持治疗相比,异基因造血干细胞前接受去甲基化药物桥接治疗可显著提高AML和MDS患者总生存率(P=0.03),并降低cGVHD发生率(P=0.03),改善患者生存质量;同时并不增加NRM、CIR、II-III a GVHD和III-IV aGVHD,且对EFS和DFS没有影响。3.6例接受小剂量地西他滨治疗后患者的c GVHD症状均有好转。其中病例1患者复查骨髓细胞学提示原始单核细胞5.5%,流式细胞学检测MRD阳性;小剂量地西他滨治疗1疗程后复查骨髓细胞学提示完全缓解,MRD阴性。病例3患者复查骨髓植入指标XX7%,XY93%,小剂量地西他滨治疗1疗程后植入指标XX2%,XY98%;患者移植后早期复发倾向得到控制。截至目前,病例3患者因严重肺部感染放弃治疗,其余5例患者病情平稳。主要结论:1.thbs1基因甲基化与急性髓系白血病的发病有一定的相关性。2.去甲基化药物桥接异基因造血干细胞移植治疗AML和MDS,可有效提高患者OS,减轻c GVHD,提高患者生存质量。3.小剂量地西他滨治疗异基因造血干细胞移植后早期复发患者安全有效,可一定程度改善移植后c GVHD症状。

关键词：急性髓系白血病 thbs1 去甲基化药物复发移植物抗宿主病

thbs1基因沉默对乳腺癌细胞生物学功能的影响

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THBS1基因沉默对乳腺癌细胞生物学功能的影响

作者：包楠丁内蒙古医科大学

学位级别：硕士

研究背景:乳腺癌是危害女性健康最常见的恶性肿瘤之一,其发病率在全球范围呈逐年上升趋势。临床治疗乳腺癌主要采取手术切除及术后化疗,但由于侵袭性强、复发率高的特点,乳腺癌的病死率位居女性恶性肿瘤之首。血小板凝血酶蛋白-1(thromb... 详细信息

研究背景:乳腺癌是危害女性健康最常见的恶性肿瘤之一,其发病率在全球范围呈逐年上升趋势。临床治疗乳腺癌主要采取手术切除及术后化疗,但由于侵袭性强、复发率高的特点,乳腺癌的病死率位居女性恶性肿瘤之首。血小板凝血酶蛋白-1(thrombospondin-1,thbs1)是由多种细胞合成分泌的一种多功能糖蛋白,在肿瘤中的异常表达有致癌或抑癌功能,在肿瘤的发展过程中起到较为复杂的调控作用,其对乳腺癌进展过程起到的调控作用尚不明确。目的:1.分析thbs1m RNA在乳腺癌中的表达水平及其与年龄、性别、TNM分期、病理分期、预后等临床病理特征的相关性。2.探讨小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)介导的thbs1基因沉默对人乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。方法:1.生物信息学分析:利用TCGA数据库及GEPIA数据库分析thbs1m RNA在乳腺癌中的表达情况,分析thbs1的表达与年龄、性别、TNM分期等临床病理特征是否存在相关性。2.研究利用si RNA介导的thbs1基因沉默对乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞生物学行为的影响:(1)通过脂质体转染法,将三条不同序列的特异性针对thbs1基因的si RNA(简称si RNA-thbs1)转染至MCF-7及MDA-MB-231细胞中。(2)通过实时荧光定量PCR技术(q RT-PCR)检测三个不同序列的si RNA-thbs1对thbs1的沉默效果,并筛选出沉默效果最佳的序列,后续实验均采用转染该序列si RNA进行thbs1基因沉默。(3)Cell Counting Kit-8(CCK-8)增殖实验检测thbs1基因沉默对乳腺癌细胞增殖能力的影响。(4)Transwell小室基质侵袭实验检测thbs1基因沉默对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。(5)流式细胞学技术Annexin V-FITC/PI双染法检测thbs1基因沉默对乳腺癌细胞凋亡的影响。所有实验均重复三次,实验结果使用SPSS23.0统计软件进行统计学分析,P1.生物信息学分析:thbs1在乳腺癌组织中的表达高于正常组织(Pthbs1的表达与年龄、性别、病理分期、T(肿瘤大小)、M(远处转移)均无关,(P>0.05);与N(淋巴结转移)有关,(P1)q RT-PCR:三种序列的si RNA-thbs1均可沉默thbs1,其中序列-1(si RNA-thbs1-1)的沉默效率最高,该序列si RNA对MDA-MB-231细胞的沉默效率达到(62.9±2.9)%,对MCF-7细胞的沉默效率达到(94.98±0.37)%。(2)CCK-8细胞增殖实验:沉默thbs1基因后,MCF-7细胞的增殖能力较空白对照组、si RNA-NC组均明显降低(P1细胞的增殖能力较其他对照组无明差异(P>0.05)。(3)Transwell小室基质侵袭实验:经苏木素染色计数后发现,两种细胞的si RNA-thbs1组侵袭细胞数均少于si RNA-NC组(Pthbs1组凋亡率均高于si RNA-NC组,P1.thbs1在乳腺癌中表达高于正常组织,且thbs1的表达与淋巴结转移相关;2.thbs1基因促进乳腺癌细胞MCF-7细胞的增殖,促进MDA-MB-231及MCF-7细胞的侵袭,并抑制两种细胞凋亡。

关键词： thbs1 乳腺癌增殖凋亡侵袭