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消化系统肿瘤中tgfbi研究进展

临床与实验病理学杂志 2019年第7期35卷 816-819页

作者：邓伟王学红芦永福青海大学医学院临床医学系西宁810016 青海大学附属医院消化内科西宁810001

消化系统恶性肿瘤发病率高,严重危害人类健康。转化生长因子β诱导基因(transforming growth factorβinduced gene,tgfbi)参与肿瘤细胞调节、分化、转移及诱发上皮细胞-间质转化,其在不同肿瘤中表现为启动或抑制肿瘤发生、发展的双重... 详细信息

消化系统恶性肿瘤发病率高,严重危害人类健康。转化生长因子β诱导基因(transforming growth factorβinduced gene,tgfbi)参与肿瘤细胞调节、分化、转移及诱发上皮细胞-间质转化,其在不同肿瘤中表现为启动或抑制肿瘤发生、发展的双重生物学特性。tgfbi有望成为消化系统肿瘤早期诊断、靶向治疗及评估预后的标志物,该文现就tgfbi异常表达的致癌机制及其在消化系统肿瘤中的研究进展作一综述。

关键词：消化系统肿瘤 tgfbi 消化致癌机制文献综述

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tgfbi在小鼠乳腺癌骨转移中的功能

TGFBI在小鼠乳腺癌骨转移中的功能

作者：陈晓燕厦门大学

学位级别：硕士

乳腺癌是女性癌症患者中最普遍的一种癌症,也是主要的致死性癌症之一。癌症患者死亡的主要原因是肿瘤转移,肺转移、脑转移和骨转移是乳腺癌最普遍的三种转移方式。已有研究表明细胞外基质蛋白tgfbi在小鼠前列腺癌骨转移组织和小鼠肾癌... 详细信息

乳腺癌是女性癌症患者中最普遍的一种癌症,也是主要的致死性癌症之一。癌症患者死亡的主要原因是肿瘤转移,肺转移、脑转移和骨转移是乳腺癌最普遍的三种转移方式。已有研究表明细胞外基质蛋白tgfbi在小鼠前列腺癌骨转移组织和小鼠肾癌骨转移组织中表达量升高,但对tgfbi在乳腺癌骨转移发生过程中的具体功能和相关的作用机制并不清楚。本课题主要研究细胞外基质蛋白tgfbi在小鼠乳腺癌的骨转移中的功能。本论文通过小鼠左心室注射乳腺肿瘤细胞和胫骨原位注射乳腺肿瘤细胞这两种模型的构建来模仿人乳腺癌骨转移,发现在左心室注射乳腺肿瘤细胞诱导的小鼠乳腺癌骨转移的模型中,骨转移组织tgfbi的表达明显升高;发现在胫骨原位注射过表达tgfbi的4T1小鼠乳腺癌细胞的模型中,过表达tgfbi可促进4T1细胞在始发灶部位的定植生长,并促进4T1细胞由胫骨向股骨等部位转移,加剧股骨损伤;进一步研究表明,过表达tgfbi能有效促进4T1细胞在体外的增殖、黏附、侵袭和迁移,促进破骨细胞的成熟分化。因此,本研究表明tgfbi在小鼠乳腺癌骨转移组织中高表达,高表达tgfbi可促进乳腺癌细胞的黏附、侵袭和增殖,促进乳腺癌细胞骨转移。该研究将有助于进一步阐明tgfbi在小鼠乳腺癌骨转移中的作用机制。

关键词：乳腺癌 tgfbi 骨转移

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人tgfbi基因克隆及真核表达载体的构建

国际眼科杂志 2007年第2期7卷 420-422页

作者：葛红岩于旭辉尚巍赵秀梅张璐高维奇刘平哈尔滨医科大学第一临床医学院眼科医院中国黑龙江省哈尔滨市150001

目的:克隆人tgfbi基因,并构建其真核表达载体。方法:通过RT-PCR从供体角膜移植术后留下的角膜组织中克隆人tgfbi基因全长编码区,将该DNA片断亚克隆到克隆载体pMD18-T中,进一步通过和SalI双酶切将目的片断定向克隆至真核表达质粒载pCI中... 详细信息

目的:克隆人tgfbi基因,并构建其真核表达载体。方法:通过RT-PCR从供体角膜移植术后留下的角膜组织中克隆人tgfbi基因全长编码区,将该DNA片断亚克隆到克隆载体pMD18-T中,进一步通过和SalI双酶切将目的片断定向克隆至真核表达质粒载pCI中。经PCR,酶切和序列测定方法鉴定重组质粒。结果:获得了人tgfbi的编码基因,并成功建了其真核表达载体。结论:人tgfbi基真核表达质粒的成功构建并鉴定。

关键词： tgfbi 角膜营养不良真核表达

microRNA-21和tgfbi基因在猪骨骼肌生长发育中的表达分析

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中国畜牧兽医 2014年第11期41卷 191-197页

作者：朱师云谢炳坤梁如意李奎唐中林中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 广西畜牧研究所广西南宁530001

试验旨在研究microRNA-21(miR-21)和转化生长因子β诱导(tgfbi)基因在长白猪骨骼肌中的表达相关性。采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法分析了miR-21和tgfbi基因在长白成年猪中的组织表达谱,同时比较分析了其在长白猪不同发育阶段(出生前和... 详细信息

试验旨在研究microRNA-21(miR-21)和转化生长因子β诱导(tgfbi)基因在长白猪骨骼肌中的表达相关性。采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法分析了miR-21和tgfbi基因在长白成年猪中的组织表达谱,同时比较分析了其在长白猪不同发育阶段(出生前和出生后共28个发育点)背最长肌中的表达相关性。结果表明,miR-21在长白成年猪的各个组织中均表达,且分布相对平衡,在不同发育阶段的背最长肌中呈现波浪式的表达趋势;tgfbi基因在长白猪胚胎期的背最长肌中高表达,在整个背最长肌发育过程中呈现出不同的表达丰度。相关性分析表明,在胚胎期骨骼肌发育过程中,miR-21和tgfbi表达之间为显著的负相关,tgfbi可能是miR-21的调控靶标基因。

关键词： miR-21 tgfbi 骨骼肌发育猪

A546D突变型tgfbi基因真核表达载体的构建及体外表达

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眼科新进展 2015年第6期35卷 525-528页

作者：曹文萍苑海刚刘平朱静李雪胡琦哈尔滨医科大学附属第一医院眼科黑龙江省哈尔滨市150001 黑龙江省中医药大学附属第一医院普外科黑龙江省哈尔滨市150040 哈尔滨医科大学遗传学教研室黑龙江省哈尔滨市150001

目的构建A546D突变型tgfbi基因真核表达载体和体外转染体系,为研究野生型及A546D突变型tgfbi基因的功能提供实验基础。方法应用重叠延伸PCR法定点诱变,构建A546D突变型tgfbi基因真核表达载体,以阳离子脂质体介导体外转染技术瞬时转染人... 详细信息

目的构建A546D突变型tgfbi基因真核表达载体和体外转染体系,为研究野生型及A546D突变型tgfbi基因的功能提供实验基础。方法应用重叠延伸PCR法定点诱变,构建A546D突变型tgfbi基因真核表达载体,以阳离子脂质体介导体外转染技术瞬时转染人角膜上皮(human corneal epithelium,HCE)细胞,Western Blot法检测转染后培养基中HCE细胞分泌的tgfbi蛋白的表达。结果重组质粒总长约7.5 kb,由HindⅢ、XbaⅠ双酶切鉴定产生5.4 kb和2.1 kb两条片段者为克隆正确质粒。测序鉴定证实了tgfbi基因编码区完整插入到载体pcDNA3.1的多克隆位点中,突变载体的第1685位碱基由C替换为A,使其编码的第546个氨基酸由Ala突变为Asp即A546D突变。野生型及A546D突变型载体转染入HCE细胞后,tgfbi蛋白有效表达。结论成功构建了A546D突变型tgfbi基因真核表达载体,为tgfbi基因相关性角膜营养不良致病机制的研究奠定了基础。

关键词： tgfbi 重叠延伸PCR 人角膜上皮细胞转染

卵巢上皮性癌组织中tgfbi基因启动子甲基化及VEGF检测

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郑州大学学报（医学版） 2012年第4期47卷 488-490页

作者：郭小芬李红雨忽平张宏岩高玉霞贾冬丽郑州大学第三附属医院妇产科郑州450052

目的:检测卵巢上皮性癌组织中tgfbi基因启动子的甲基化状态及VEGF的表达,探讨二者的关系。方法:应用甲基化特异性PCR法(MSP)和免疫组化SP法分别检测20例正常卵巢组织、20例卵巢良性上皮性肿瘤组织及30例卵巢上皮性癌组织中tgfbi基因启... 详细信息

目的:检测卵巢上皮性癌组织中tgfbi基因启动子的甲基化状态及VEGF的表达,探讨二者的关系。方法:应用甲基化特异性PCR法(MSP)和免疫组化SP法分别检测20例正常卵巢组织、20例卵巢良性上皮性肿瘤组织及30例卵巢上皮性癌组织中tgfbi基因启动子的甲基化状态及VEGF蛋白的表达。结果:3种组织中tgfbi基因启动子的甲基化率及VEGF蛋白的阳性表达率差异均有统计学意义(χ2=34.886和26.298,Ptgfbi基因的甲基化率及VEGF蛋白的阳性表达率均高于正常卵巢组织和卵巢良性上皮性肿瘤组织。卵巢上皮性癌组织中tgfbi基因启动子甲基化与VEGF的表达有关联(χ2=13.976,rP=0.516,Ptgfbi基因启动子在卵巢上皮性癌组织中发生超甲基化,可能诱导血管生成,促进卵巢上皮性癌的发生发展。

关键词：卵巢上皮性癌 tgfbi 甲基化血管内皮生长因子血管生成

利用CRISPRCas9技术构建tgfbi敲除的Met-5A稳定细胞株

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现代预防医学 2019年第15期46卷 2837-2841页

作者：杨杰郑晋南兰亚佳张勤四川大学华西公共卫生学院/四川大学华西第四医院

目的利用CRISPRas9基因编辑技术构建tgfbi敲除的Met-5A稳定细胞株,为进一步深入研究tgfbi低表达在人膜间皮细胞恶性转化过程中的功能角色提供技术支持。方法根据CRISPRas9靶点设计原则针对tgfbi基因第4号外显子设计2对sgRNA(小向导RNA)... 详细信息

目的利用CRISPRas9基因编辑技术构建tgfbi敲除的Met-5A稳定细胞株,为进一步深入研究tgfbi低表达在人膜间皮细胞恶性转化过程中的功能角色提供技术支持。方法根据CRISPRas9靶点设计原则针对tgfbi基因第4号外显子设计2对sgRNA(小向导RNA),退火形成双链,连接至Bsmbl酶切后的载体质粒lentiCRISPRv2(命名为lentiCRISPRv2-T1和lentiCRISPRv2-T2),经感受态细胞扩增后提取质粒并测序验证。提取和纯化正确插入目的片段的重组质粒,经慢病毒包装并转染Met-5A细胞,嘌呤霉素筛选阳性克隆。提取细胞及上清液总mRNA和蛋白,使用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和免疫印迹实验(Western blot)检测慢病毒系统转染后tgfbi mRNA和蛋白表达水平的变化。结果经基因测序后证实lentiCRISPRv2-T1、lentiCRISPRv2-T2重组载体质粒均正确插入了sgRNA序列;慢病毒系统转染Met-5A细胞后,v2-T1、v2-T2组tgfbi mRNA相对表达水平相比对照组明显降低(Ptgfbi mRNA相对表达水平低于v2-T1组(Ptgfbi蛋白表达量下降为对照组的0.03倍,在v2-T2细胞中几乎检测不到tgfbi蛋白。结论构建了针对tgfbi第4号外显子的两组sgRNA-lentiCRISPRv2敲除载体;成功获得了tgfbi敲除的Met-5A稳定细胞株,为进一步研究tgfbi低表达在恶性胸膜间皮瘤发生发展过程中的分子机制奠定了基础。

关键词： CRISPR/Cas9 tgfbi Met-5A细胞恶性胸膜间皮瘤

口腔疣状癌中tgfbi、KLK7及BNIP3基因的表达

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口腔疣状癌中TGFBI、KLK7及BNIP3基因的表达

作者：卢若煌中南大学

学位级别：硕士

目的：（1）研究tgfbi、KLK7及BNIP3基因在口腔疣状癌、癌旁组织与正常组织中mRNA表达特点,验证前期基因芯片结果;（2）运用免疫组织化学的方法检测tgfbi蛋白在口腔疣状癌、口腔鳞癌及正常组织中表达水平,探讨其在口腔疣状癌、口腔鳞癌... 详细信息

目的：（1）研究tgfbi、KLK7及BNIP3基因在口腔疣状癌、癌旁组织与正常组织中mRNA表达特点,验证前期基因芯片结果;（2）运用免疫组织化学的方法检测tgfbi蛋白在口腔疣状癌、口腔鳞癌及正常组织中表达水平,探讨其在口腔疣状癌、口腔鳞癌中可能的作用机制,为临床治疗提供依据。方法：（1）将4例口腔疣状癌、癌旁组织及正常组织标本提取mRNA后,利用RealTime PCR方法研究tgfbi、KLK7及BNIP3基因在三组组织中mRNA表达水平,验证前期基因芯片结果;（2）采用免疫组织化学方法对18例口腔疣状癌、26例口腔鳞癌和14例口腔正常粘膜组织的tgfbi蛋白的表达进行检测并进行统计分析。结果：（1）RT-PCR检测结果显示：tgfbi、KLK7在口腔疣状癌组织中的mRNA表达水平明显高于癌旁组织及正常组织（p＜0.05）;BNIP3 mRNA的表达水平在口腔疣状癌中仅高于癌旁组织（p＜0.05）,与正常组织无明显差异（p＞0.05）。（2）免疫组织化学结果显示：tgfbi蛋白在口腔疣状癌、口腔鳞癌中的蛋白表达水平高于正常组（p＜0.05）;口腔疣状癌与口腔鳞癌中的表达无显著性差异（p＞0.05）;口腔疣状癌中三型：外生型、囊肿型、浸润型之间无显著性差异（p＞0.05）。结论:（1） tgfbi、KLK7 mRNA表达水平在口腔疣状癌中显著高于正常组织,BNIP3 mRNA表达水平在口腔疣状癌与正常组织中无显著差异,与前期芯片结果一致,提示tgfbi和KLK7在其发生发展过程中可能起到重要作用,为进一步研究提供依据。（2） tgfbi蛋白在口腔疣状癌组织、口腔鳞癌组织中表达显著高于正常粘膜组织,验证了在口腔疣状癌中转录水平和翻译水平的一致性。

关键词：口腔疣状癌口腔鳞癌差异基因 RealTime-PCR 免疫组织化学 tgfbi KLK7 BNIP3

HBV rtA181T突变致tgfbi启动子甲基化

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HBV rtA181T突变致TGFBI启动子甲基化

作者：杨棉甜南昌大学

学位级别：硕士

目的:构建重组质粒,转染LO2细胞,明确HBV rtA181T截短表面蛋白在细胞内的作用位点tgfbi,探讨rtA181T截短表面蛋白致癌与tgfbi启动子甲基化之间可能存在的关系。方法:1.根据HBsAg基因序列(Gene Bank:M74498.1),设计引物,RT-PCR方法获得HB... 详细信息

目的:构建重组质粒,转染LO2细胞,明确HBV rtA181T截短表面蛋白在细胞内的作用位点tgfbi,探讨rtA181T截短表面蛋白致癌与tgfbi启动子甲基化之间可能存在的关系。方法:1.根据HBsAg基因序列(Gene Bank:M74498.1),设计引物,RT-PCR方法获得HBsAg cDNA,克隆至真核表达载体p IRES2-EGFP,构建pIRES2真核表达重组质粒p IRES2-HBsAg;2.以重组质粒p IRES2-HBsAg为模板,采用定点突变方法获得突变质粒p IRES2-HBsAg(rtA181T);3.p-HBsAg作为对照,rt A181T重组质粒转染LO2细胞,应用染色质免疫共沉淀法(CHIP-seq),探测分析HBV rtA181T截短表面蛋白在细胞DNA的作用位点。4.根据CHIP-seq结果,构建pGL3-tgfbi(UCSC:NM00358)启动子重组质粒,分别与p-HBs Ag、rtA181T共转染LO2细胞,24 h后用0.5 nM TGF-β处理,继续培养24 h后进行荧光素酶报告基因实验;5.p-HBsAg、rtA181T分别转染LO2细胞,转染24 h后用0.5 nM TGF-β处理细胞24 h。收集细胞总RNA,RT-qPCR检测tgfbi mRNA的表达水平;收集细胞总蛋白,Western blot检测tgfbi蛋白的表达变化;6.p-HBsAg、rtA181T分别转染LO2细胞,转染48 h后MSP法检测tgfbi启动子甲基化状态;相同分组转染24 h后用5-Aza处理24 h,RT-qPCR检测各组tgfbi表达水平;Western blot检测Cyclin D1、pCREB的表达量,观察rtA181T型突变下调tgfbi对Cyclin D1、pCREB表达的影响。结果:1.pIRES2-HBsAg、p IRES2-HBsAg(rtA181T)重组质粒双酶切后用琼脂糖凝胶电泳检测,条带位置大小与目的片段一致;测序结果符合实验要求。2.p-HBsAg、rtA181T转染LO2细胞后,CHIP-seq实验分析结果显示rtA181T截短表面蛋白可与tgfbi启动子结合。3.成功构建pGL3-tgfbi启动子重组质粒,测序结果符合实验要求;pGL3-tgfbi+Control、pGL3-tgfbi+p-HBsAg和pGL3-tgfbi+rtA181T三组质粒转染LO2细胞后,荧光素酶活性检测显示,rtA181T组的荧光素酶活性较p-HBsAg组明显偏低。4.p-HBsAg、rtA181T转染LO2细胞后,RT-qPCR结果显示,在LO2细胞中,经由TGF-β诱导24 h后,与对照组比较,p-HBsAg组tgfbi的mRNA表达显著增加,但rtA181T组无明显差异;且无论有无TGF-β诱导,rtA181T组tgfbi的mRNA表达量与Control组和p-HBs Ag组相比都明显较低;Western blot检测结果显示也是一样,与RT-qPCR结果存在一致性,说明rtA181T截短表面蛋白能够下调tgfbi表达。5.Control组、p-HBsAg组和rtA181T组三种质粒转染LO2细胞48 h后,tgfbi启动子甲基化状态检测结果也可以看出只有rtA181T组没有出现未被甲基化的状态;相同转染分组使用5-Aza处理后,p-HBsAg组与Control组相比,tgfbi表达量无明显变化,但rtA181T组表达被逆转;western blot检测Cyclin D1、pCREB蛋白表达量,结果显示rtA181T组Cyclin D1、pCREB蛋白表达量明显上调。结论:HBV rtA181T截短表面蛋白下调tgfbi表达,可能与其使tgfbi启动子甲基化有关。

关键词： rtA181T 截短型乙肝病毒表面蛋白 tgfbi 甲基化 Cyclin D1