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环磷酰胺通过激活tgf-β通路远期损伤卵巢的机制探讨

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环磷酰胺通过激活TGF-β通路远期损伤卵巢的机制探讨

作者：龚晓琴华中科技大学

学位级别：硕士

目的:通过比较环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)、多柔比星(Doxorubicin,DOX)在不同时间点对小鼠卵巢结构和功能的损伤,探究其导致不同损伤程度的分子机制。方法:7周龄C57BL/6J雌鼠随机分为3组,对照(Control,CON)组,CTX组,DOX组。于用药... 详细信息

目的:通过比较环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)、多柔比星(Doxorubicin,DOX)在不同时间点对小鼠卵巢结构和功能的损伤,探究其导致不同损伤程度的分子机制。方法:7周龄C57BL/6J雌鼠随机分为3组,对照(Control,CON)组,CTX组,DOX组。于用药后的第3天,7天,28天,检测小鼠的卵巢质量、卵巢指数、动情周期、卵泡数量、血清AMH浓度等评估CTX、DOX对卵巢结构和功能的影响;通过TUNEL染色,γH2AX的免疫组化染色,以及Western blot检测Bcl2、Bax、Cleaved caspase3的表达来比较CTX、DOX诱导卵巢细胞凋亡的强弱;通过转录组测序探究CTX、DOX损伤卵巢的差异机制;通过天狼猩红染色,Masson染色,Western blot检测CollagenⅠ、tgf-β、Vimentin、a-SMA的表达验证纤维化是否为CTX、DOX损伤卵巢的差异机制。最后利用腹腔注射tgf-β通路抑制剂SB431542反向验证CTX是否是通过激活tgf-β通路诱导卵巢纤维化进而对卵巢造成损伤。结果:在给药后第3天,7天,28天,CTX组、DOX组始基卵泡和总卵泡的数量显著降低(vs CON组,Ptgf-β通路在CTX给药后28天的小鼠卵巢中显著富集。蛋白检测提示,尽管CTX、DOX给药后7天均可使卵巢发生纤维化,但在给药后第28天时,相较于7天,DOX组卵巢纤维化的水平并未进一步加剧,而CTX组卵巢纤维化程度增加。而当CTX与SB431542联用时,小鼠卵巢纤维化的程度降低,始基卵泡和总卵泡数量显著增加(vs CTX组,Ptgf-β通路诱导纤维化造成卵巢远期损伤,因此纤维化的激活是CTX导致远期卵巢损伤的重要机制。

关键词：环磷酰胺多柔比星凋亡卵巢纤维化 tgf-β通路

miR-335-5P调控的tgf-β通路介导妊娠糖尿病小鼠胰岛素抵抗和胰岛β细胞分泌的实验研究

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中国比较医学杂志 2020年第12期30卷 85-91页

作者：刘洁温学娜冯英李元元刘永莉石家庄市第四医院产科石家庄050011 辛集市第一医院产科河北辛集052360

目的使用miR-335-5P和转化因子-β(tgf-β)处理妊娠期糖尿病(GDM)小鼠,明确miR-335-5P调控tgf-β通路参与促进胰岛β细胞分泌和增强胰岛素抵抗机制,为治疗GDM患者开辟新道路。方法SPF级Balb/c小鼠以雌性和雄性小鼠2∶1合笼饲养,10只正... 详细信息

目的使用miR-335-5P和转化因子-β(tgf-β)处理妊娠期糖尿病(GDM)小鼠,明确miR-335-5P调控tgf-β通路参与促进胰岛β细胞分泌和增强胰岛素抵抗机制,为治疗GDM患者开辟新道路。方法SPF级Balb/c小鼠以雌性和雄性小鼠2∶1合笼饲养,10只正常妊娠小鼠作为空白组,48只成功构建GDM模型的小鼠作为GDM组并随机分成A、B、C、D、E、F组,每组各8只小鼠。A组(模型组)、B组(模型组+溶媒)、C组(模型组+miR-335-5P模拟物)、D组(模型组+miR-335-5P抑制剂)、E组(模型组+si-tgf-β)、F组(模型组+miR-335-5P抑制剂+si-tgf-β)。药物处理后行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)检测空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FIRI),计算稳态模型胰岛素抵抗指数(IRI);进行高血糖钳夹试验测定葡萄糖输注速率(GIR),估计胰岛β细胞功能;采用RT-qPCR、蛋白质印迹分析和ELISA胰岛素释放测定胰岛β细胞中miR-335-5P、tgf-β通路关键因子mRNA水平。结果D、F组FBG、FIRI、IRI低于给药前低于C、E组(Ptgf-β、c-Myc表达低于C、E组低于A、B组(Ptgf-β、c-Myc均有不同程度的表达;tgf-β在胰岛β细胞胞质内表达,且D、F组tgf-β表达高于C、E组高于A、B组(Ptgf-β通路,增强胰岛素抵抗并抑制胰岛β细胞分泌。

关键词： miR-335-5P tgf-β通路妊娠糖尿病胰岛素抵抗胰岛β细胞分泌

影响安徽省皖南地区结直肠癌患者预后的tgf-β通路候选基因关联研究

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医学研究生学报 2015年第9期28卷 957-961页

作者：沈丽娟钟芳芳吴平平曹晓智卢林明芜湖市中医医院病理科基因诊断室芜湖241000 芜湖市第二人民医院病理科芜湖241000 皖南医学院附属第二医院病理科芜湖241000 皖南医学院附属弋矶山医院病理科芜湖241000

目的既往研究发现tgf-β通路可能是影响结直肠癌预后的分子通路,由于人种遗传差异性,中国人群中是否与疾病相关尚不确定。文中探讨安徽皖南地区人群结直肠癌预后相关的遗传因素。方法纵向随访安徽省芜湖市中医医院及皖南医学院附属医... 详细信息

目的既往研究发现tgf-β通路可能是影响结直肠癌预后的分子通路,由于人种遗传差异性,中国人群中是否与疾病相关尚不确定。文中探讨安徽皖南地区人群结直肠癌预后相关的遗传因素。方法纵向随访安徽省芜湖市中医医院及皖南医学院附属医院2013年1月至2014年4月收治的结直肠癌患者52例,提取DNA保存并对选取的5个候选基因进行分型,评价患者基因多态性位点（single nucleotide polymorphism,SNP）在不同遗传模型下与结直肠癌预后的关联。结果转化生长因子β（tgf-β）通路上POU2AF1基因SNP rs10749971的A等位基因在加性、隐性遗传模型下,均显著增加具有Ⅲ结直肠癌患者的复发风险（HR=1.968,P=0.004;HR=2.174,P=0.010）;BMP2基因SNP rs961253的C等位基因在隐形遗传模型下,可同时增加Ⅲ期结直肠癌患者复发（HR=1.992,P=0.005）及死亡风险（HR=3.161,P=0.007）,SMAD7基因SNP rs4464148的A等位基因在显性遗传模型下可显著降低Ⅱ期及Ⅲ期结直肠癌患者的死亡风险（HR=0.382,P=0.017;HR=0.230,P=0.006）。对于Ⅲ期结直肠癌患者预后的多基因累积效应显示,基因高风险组可明显增加患者的死亡风险（HR=15.512,95%CI：1.611-149.360）。结论在不同遗传模型下,TCF-β通路上的POU2AF1、BMP2及SMAD7基因的SNP位点突变与结直肠癌患者预后存在关联,且随着携带不利基因数增加,患者的死亡风险增加。

关键词：结直肠癌预后基因多态性 tgf-β通路

乙醛激活肝星状细胞中Wnt与tgf-β信号通路的Crosstalk研究

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乙醛激活肝星状细胞中Wnt与TGF-β信号通路的Crosstalk研究

作者：陶忠桦泸州医学院

学位级别：硕士

目的：Wnt信号转导通路是近年来分子生物学、细胞生物学和肿瘤研究中的一大热点,参与了胚胎发育及成体组织细胞增殖、分化及凋亡等调控过程。Wnt信号通路的异常活化与肾、肺、肝、心脏以及皮肤等组织器官纤维化的发生与进展关系密切。... 详细信息

目的：Wnt信号转导通路是近年来分子生物学、细胞生物学和肿瘤研究中的一大热点,参与了胚胎发育及成体组织细胞增殖、分化及凋亡等调控过程。Wnt信号通路的异常活化与肾、肺、肝、心脏以及皮肤等组织器官纤维化的发生与进展关系密切。本研究采用肝星状细胞株体外培养,MTT, VG染色,ELISA, Western Blotting等检测方法,探讨Wnt与tgf-β信号通路在乙醛刺激肝星状细胞活化中交叉对话(crosstalk)的可能机理,然后从肝星状细胞活化程度的角度观察两条通路crosstalk的功能效应。首先,乙醛刺激HSC细胞株,通过VG染色法从形态学角度观察HSC活化程度;MTT法检测活化的HSC的增殖程度;ELISA法测定HSC内胶原蛋白Ⅰ以及纤维粘连素FN含量,证明乙醛能有效刺激肝星状细胞株活化。接着采用SB-431542特异性阻断tgf-β信号通路,Western blotting检测Wnt信号通路下游产物β-catenin的磷酸化水平;TDZD-8特异性阻断GSK-3β,进一步激活Wnt途径,Western bloting检测tgf-β通路中Smad3的磷酸化状态;同时使用SB-431542和TDZD-8检测β-catenin以及Smad3的磷酸化,以分析两通路可能存在的crosstalk。方法：(1)HSC-T6细胞株分为未处理组(阴性对照组),乙醛激活组(阳性对照组),TDZD-8处理组(Wnt激活对照组),乙醛激活+TDZD-8处理组(Wnt激活组),乙醛激活+SB-431542处理组(tgf-β通路抑制组,而Wnt途径激活),乙醛激活+SB-431542+TDZD-8处理(Wnt途径进一步激活而tgf-β通路抑制)。各组细胞培养至融合度70%-80%时,0.4%胎牛血清DMEM培养基同步化处理细胞12h后,更换为10%胎牛血清DMEM完全培养基。对照组用对应的抑制剂处理培养,刺激组在对应的抑制剂预处理1h后给予乙醛刺激(终浓度200gmol/L)刺激,每12h补加一次,刺激24h。之后提取细胞总蛋白,G250法测定蛋白含量,SDS-PAGE电泳分离,Western Blotting检测各目的蛋白含量,检测指标包括：Wnt途径下游产物总β-catenin,磷酸化β-catenin, tgf-β途径总smad3,磷酸化的p-smad3-S425,磷酸化的p-smad3-S204。根据Western印迹膜上蛋白条带灰度,采用Quantity One分析软件进行处理,对不同受体拮抗剂或激活剂作用后各蛋白磷酸化水平的改变进行分析。(2)分组同(1),所有细胞均在6孔板中爬片,细胞处理方案同(1),待处理完毕,将细胞爬片做VG染色,显微镜下观察及照相。细胞培养上清液做ELISA检测纤维粘连素FN和胶原蛋白Ⅰ含量变化。(3)将96孔板接种HSC-T6细胞株,分组同(1),每组设3复孔,细胞处理方法同(1),光镜下观察细胞生长状况,MTT法检测细胞活性。结果：(1)乙醛激活HSC细胞株后,MTT法检测细胞增值活性明显上升,ELLSA检测出纤维粘连素FN和胶原蛋白Ⅰ以及平滑肌动蛋白α-SMA含量均有不同程度的增多,VG染色示胶原含量增多,说明酒精的代谢产物乙醛对肝星状细胞的活化有明显的刺激作用。(2)使用Wnt途径激活剂TDZD-8 (GSK-3β特异性阻断剂)激活Wnt途径后,Wnt途径下游产物β-catenin表达无明显变化,但p-β-catenin水平下降;在另一组使用SB431542阻断tgf-β通路,下游产物β-catenin无明显变化,p-β-catenin水平也下降;使用TDZD-8和SB431542同时阻断tgf-β通路,激活Wnt途径,β-catenin表达量无明显变化,p-β-catenin水平明显下降。(3)使用Wnt途径激活剂TDZD-8(GSK-3β特异性阻断剂)激活Wnt途径后,tgf-β途径的关键因子Smad3的S425和S204磷酸化水平并无明显变化;使用SB431542阻断tgf-β途径后S425和S204表达都明显降低;同时使用TDZD-8和SB431542,S425和S204水平降低但降幅不如单阻断tgf-β途径。结论：(1)乙醛激活HSC细胞后,可以使HSC细胞进一步活化,其分泌产物Ⅰ型胶原蛋白及纤维粘连素明显增多,细胞增殖并转分化。(2)在乙醛激活的肝星状细胞中,tgf-β信号通路的抑制可导致Wnt信号通路的激活,因此tgf-β信号通路对Wnt信号通路具有抑制效应。(3)乙醛可导致肝星状细胞tgf-β信号通路激活,且Wnt与tgf-β两条信号通路之间存在"crosstalk",Wnt信号通路对Smad3的S425和S204的磷酸化修饰具有拮抗效应。

关键词： Wnt途径 tgf-β通路乙醛激活肝星状细胞

miR-128-3p靶向PP1c活化tgf-β通路促进急性淋巴细胞白血病的进展与耐药的机制研究

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miR-128-3p靶向PP1c活化TGF-β通路促进急性淋巴细胞白血病的进展...

作者：许轩苏州大学

学位级别：硕士

第一部分miR-128-3p在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达情况研究背景与目的:急性淋巴细胞白血病(Acute lymphocytic leukemia,ALL)以儿童期(0～9岁)为发病的高峰阶段,在我国儿童白血病的比例是70%以上。急性淋巴细胞白血病本质上是克隆... 详细信息

第一部分miR-128-3p在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达情况研究背景与目的:急性淋巴细胞白血病(Acute lymphocytic leukemia,ALL)以儿童期(0～9岁)为发病的高峰阶段,在我国儿童白血病的比例是70%以上。急性淋巴细胞白血病本质上是克隆性的恶性疾病,我国发病率为每年每十万名儿童中就有2-3例患者,对我国公民身心健康造成很大危害。该病具有十分复杂的发病机制,它通常与多基因的异常表达和复杂的细胞信号转导途径等有相当密切的关系。因此,进一步研究急性淋巴细胞白血病生长、增殖和转移的分子机制有助于寻找潜在的生物治疗靶点。MiRNA是具有控制功能的小RNA分子,近年来,关于急性淋巴细胞白血病的研究很多,大量的研究提示,MiRNA在急性淋巴细胞白血病的发生以及发展中起着非常重要的作用。研究表明,在多种肿瘤中miR-128-3p高水平表达是一个独立的预后不良标志物,在细胞增殖、代谢和转移(肺、乳腺癌、胶质母细胞瘤、胃癌和结肠癌)中发挥非常重要的作用。然而,miR-128-3p对儿童急性淋巴细胞白血病的进展与耐药性是否发挥作用仍不清楚。因此,本文的研究目的是深入讨论miR-128-3p在儿童急性淋巴细胞白血病进展以及耐药中的功能和机制。方法:以2011年7月到2013年12月在苏州大学附属儿童医院血液科就诊的ALL患儿细胞为标本,按照均按照随机的原则,此次研究的标准将随机抽取到的样本分为实验组和对照组两组,同时加入3ml抗凝素以防血液凝固,随后用淋巴细胞分离液利用密度梯度来完成离心完成单个核细胞的分离实验,使得总RNA被提取,进行浓度和质量检验,结果:采用q-PCR对miRNA表达情况进行了对比,结果miR-128-3p在ALL中的表达水平最丰富。与对照组相比,miR-128-3p表达于很多细胞系中。急性淋巴白血病细胞系相对更多表达miR-128-3p,这证明miR-128-3p表达水平提高的情况出现在所有区域。miR-128-3p大量表达于Jurcat细胞中,这意味着后者可以被用作靶细胞。结论:通过研究了 miR-128-3p及其靶基因PP1c在急性淋巴细胞白血病中的相关作用,miR-128-3p作为一种促癌因子,通过负调控PP1c-tgf-β信号通路来加速急性淋巴母细胞白血病细胞增殖和迁移。第二部分miR-128-3p对急性淋巴细胞白血病细胞生物学特性的影响目的:miR-128-3p在急性淋巴白血病样本和细胞系中的表达增加。但是,miR-128-3p在急性淋巴白血病中的作用还不清楚。本文的研究在于miR-128-3p在急性淋巴白血病中的作用。MimRNA模拟物是通过化学方式合成的,它可以改善内源性MiRNA的功能,以模拟生物体内的内源性MiRNA。MiRNA抑制剂可以抑制MiRNA。在本研究中,使用miR-128-3p的模拟物,观察急性淋巴白血病细胞迁移、增殖、凋亡和耐药受miR-128-3p过表达的影响。方法:按照2×105/mL细胞密度选取对数生长期Jurkat细胞,在24孔板中铺满细胞,细胞分为阴性对照组、miR-195模拟组。将用miR-128-3p mimics转染Jurkat细胞,通过RT-PCR技术检测Jurcat细胞系中检测干细胞特性相关基因(CD133、ABCG2、SOX2、c-MYC)表达量。在体外检测了 NC 细胞 jurkat-miR-128-3p 和 jurkat NC的增殖能力,通过CCK8-3p增殖的经验。进行了药敏检测硫唑嘌呤(AZA)实验。先对细胞开展转染的操作,之后等待48小时,在分别加入浓度为1/5/10/20/40ng/μL的药物,再次等待48小时,通过特定装置对细胞进行检测,以得出其存活、增殖等相关情况。通过流式细胞术在临时输注miR-128-3p模拟物48小时后发现Jurkat细胞下垂,观察表达情况。结果:用miR-128-3p mimics转染Jurkat细胞,通过RT-PCR技术检测Jurcat细胞系中检测干细胞特性相关基因(CD133、ABCG2、SOX2、c-MYC)表达量。结果与对照组相比,miR-128-3p mimics 过表达组 CD133、ABCG2、SOX2、c-MYC 的表达在Jurkat细胞显著增高,提示miR-128-3p高表达促进干性基因高表达。Jurkat FOI细胞的miR-128-3p过表达模拟组的增殖率显著高于对照组(NC)(P值<0.05),表明Jurkat-miR-128-3p促进了体外细胞的增殖。过表达miR-128-3p mimics组的Jurkat细胞耐药性显著高于对照组;提示miR-128-3p促进急性淋巴细胞白血病细胞的耐药能力。mir-128-3p的过度表达可以抑制急性淋巴白血病细胞的凋亡。结论:miR-128-3p mimics组细胞凋亡数目(%)明显低于对照组,活体细胞数(百分比)明显高于对照组,提示miR

关键词：急性淋巴细胞白血病 miR-128-3p PP1c tgf-β 急性淋巴细胞白血病细胞 MiRNA tgf-β通路

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tgf-β信号通路在肿瘤进展中的作用

肿瘤基础与临床 2014年第5期27卷 444-446页

作者：齐元富李慧杰刘寨东山东中医药大学附属医院肿瘤科山东济南250014

转化生长因子-β（ transforming growth factor-β， tgf-β）信号通路是一条重要的细胞内信号转导途径，参与胚胎发育、肿瘤发生、创伤愈合及炎症反应等生理或病理生理过程。tgf-β信号通路与肿瘤发生密切相关，并可通过增强侵袭性质... 详细信息

转化生长因子-β（ transforming growth factor-β， tgf-β）信号通路是一条重要的细胞内信号转导途径，参与胚胎发育、肿瘤发生、创伤愈合及炎症反应等生理或病理生理过程。tgf-β信号通路与肿瘤发生密切相关，并可通过增强侵袭性质、影响肿瘤微环境及抑制免疫功能等促进肿瘤转移，在其进展中发挥重要作用，且在不同肿瘤、同种肿瘤不同亚型及肿瘤的不同阶段均可产生不同反应，并呈现不同调控机制［1］。

关键词： tgf-β通路肿瘤靶点

ZEB家族因子在大鼠肝纤维化体内外tgf-β通路中的研究

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ZEB家族因子在大鼠肝纤维化体内外TGF-β通路中的研究

APC、SMAD4双基因沉默研究WNT通路、tgf-β通路对大肠癌细胞粘附作用的交叉调控机制

中华医学会第三次全国肝纤维化、肝硬化学术会议

作者：沈宇娟陈永平刘真真戴春蕾陈黎黎林镯温州医学院附属第一医院感染内科

目的检测ZEB1和ZEB2在大鼠肝纤维化组织以及HSC中的表达变化方法清洁级SD大鼠分为健康对照组6只;模型组24只,腹腔注射二甲基亚硝胺(DMN)诱导形成大鼠肝纤维化模型,按造模后不同时间点分为2周,4周,6周,8周四个亚组,每组6只。肝组织经HE,M... 详细信息

目的检测ZEB1和ZEB2在大鼠肝纤维化组织以及HSC中的表达变化方法清洁级SD大鼠分为健康对照组6只;模型组24只,腹腔注射二甲基亚硝胺(DMN)诱导形成大鼠肝纤维化模型,按造模后不同时间点分为2周,4周,6周,8周四个亚组,每组6只。肝组织经HE,Masson染色,光学显微镜下观察;采用RT-PCR和Westem-blotting法检测不同时间点肝脏ZEB1和ZEB2mRNA与蛋白的表达

关键词：肝纤维化发病机制 tgf-β通路 ZEB家族因子蛋白表达

来源： cnki会议评论

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APC、SMAD4双基因沉默研究WNT通路、TGF-β通路对大肠癌细胞粘附...

APC、SMAD4双基因沉默研究WNT通路、tgf-β通路对大肠癌细胞粘附作用的交叉调控机制

两岸三地药理学与临床药理学术会议

作者：张依宁张惠晶魏敏杰孙明军中国医科大学第一附属医院中国医科大学药理教研室

目的Wnt通路与tgf-β通路分别在大肠癌细胞粘附中发挥重要作用,但两通路间是否存在交叉调控尚不明确,本实验的目的即是阐明大肠癌中Wnt通路和tgf-β通路交叉调控作用与机制。方法人类大肠腺癌细胞株HCT116/ HT29(中国科学院典型培养物... 详细信息

目的Wnt通路与tgf-β通路分别在大肠癌细胞粘附中发挥重要作用,但两通路间是否存在交叉调控尚不明确,本实验的目的即是阐明大肠癌中Wnt通路和tgf-β通路交叉调控作用与机制。方法人类大肠腺癌细胞株HCT116/ HT29(中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库,上海)分别经携带APC-shRNA及Smad4-RNA序列的质粒(Psilencer 4.1 neo,Ambion)转染后,应用RNA干扰技术建立APC基因沉默、Smad4基因沉默和双基因沉默细胞系。然后应用反转录-PCR和western-blot比较每个细胞系粘附因子E-cadherin、catenins和转录因子c-myc/Cyclin D1/P21/Met等在细咆中分布与表达差异上的变化。结果在APC-shRNA克隆大肠癌细胞株(APC基因沉默),tgf-β可明显抑制其过快生长速度,但丧失了诱导α、β、γ-catenin和E-cadherin表达增加作用。在对照组与沉默组间,E-cadherin/catenins/c-myc/Cvclin D1/P21/Met的分布与表达存在显著性差异(P通路在正常细胞中是关闭的,但在结直肠癌细胞中被激活。tgf-β是一种多向细胞调控因子,它在肿瘤发生的早期发挥抑癌作用,但在进展期则促进肿瘤细胞的转移。tgf-β促进cadherins表达依赖于APC活性,说明Wnt通路和tgf-β通路均以APC作为共同的调控因子在大肠癌细胞粘附与生长中发挥相互调控作用。

关键词：大肠癌细胞粘附 Wnt通路 tgf-β通路交叉调控

来源： cnki会议评论

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沈阳药科大学学报 2008年第S1期25卷 65-65页

作者：张依宁张惠晶魏敏杰孙明军中国医科大学第一附属医院辽宁沈阳110001 中国医科大学药理教研室辽宁沈阳110001

目的Wnt通路与tgf-β通路分别在大肠癌细胞粘附中发挥重要作用,但两通路间是否存在交叉调控尚不明确,本实验的目的即是阐明大肠癌中Wnt通路和tgf-β通路交叉调控作用与机制。方法人类大肠腺癌细胞株HCT116/HT29(中国科学院典型培养物保... 详细信息

目的Wnt通路与tgf-β通路分别在大肠癌细胞粘附中发挥重要作用,但两通路间是否存在交叉调控尚不明确,本实验的目的即是阐明大肠癌中Wnt通路和tgf-β通路交叉调控作用与机制。方法人类大肠腺癌细胞株HCT116/HT29(中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库,上海)分别经携带APC-shRNA及Smad4-RNA序列的质粒(Psilencer4.1neo,Ambion)转染后,应用RNA干扰技术建立APC基因沉默、Smad4基因沉默和双基因沉默细胞系。然后应用反转录-PCR和western-blot比较每个细胞系粘附因子E-cadherin、catenins和转录因子c-myc/CyclinD1/P21/Met等在细胞中分布与表达差异上的变化。结果在APC-shRNA克隆大肠癌细胞株(APC基因沉默),tgf-β可明显抑制其过快生长速度,但丧失了诱导α、β、γ-catenin和E-cadherin表达增加作用。在对照组与沉默组间,E-cadherin/catenins/c-myc/CyclinD1/P21/Met的分布与表达存在显著性差异(P通路在正常细胞中是关闭的,但在结直肠癌细胞中被激活。tgf-β是一种多向细胞调控因子,它在肿瘤发生的早期发挥抑癌作用,但在进展期则促进肿瘤细胞的转移。tgf-β促进cadherins表达依赖于APC活性,说明Wnt通路和tgf-β通路均以APC作为共同的调控因子在大肠癌细胞粘附与生长中发挥相互调控作用。

关键词：大肠癌细胞粘附 Wnt通路 tgf-β通路交叉调控