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tert多表位疫苗的制备及其免疫原性初步研究

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中国免疫学杂志 2010年第10期26卷 885-889,894页

作者：吴丽娜魏林杨建岭石文凯霍明山李彩霞崔玉秀曾瑞红河北医科大学免疫教研室石家庄050017 河北医科大学生物医学工程中心石家庄050017

目的:制备端粒酶逆转录酶(tert)的多表位(metert)肽疫苗和DNA疫苗,免疫小鼠,对其免疫原性进行初步研究。方法:用重叠延伸PCR将tert的多个CD4+和CD8+T细胞表位串联连接,得metert的DNA片段;将该片段分别连接到真核表达载体pcDNA3.1及原核... 详细信息

目的:制备端粒酶逆转录酶(tert)的多表位(metert)肽疫苗和DNA疫苗,免疫小鼠,对其免疫原性进行初步研究。方法:用重叠延伸PCR将tert的多个CD4+和CD8+T细胞表位串联连接,得metert的DNA片段;将该片段分别连接到真核表达载体pcDNA3.1及原核表达载体pGEX-4T中,制备DNA疫苗(PCT),并原核表达多表位肽疫苗(PCG);皮下/肌肉(50μg/100μg)免疫小鼠3次,取脾细胞,用ELISPOT法检测分泌IFN-γ和IL-4的细胞频率;用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性脾细胞杀伤率(抗原刺激的SP2/0细胞为靶细胞)。结果:成功制备metert的PCT和PCG疫苗;动物实验表明:PCT+PCG联合免疫诱导的分泌IFN-γ的淋巴细胞数量显著高于其它各组(Ptert的DNA疫苗PCT和多表位肽疫苗PCG联合免疫能够诱导强烈的Th1和CTL细胞免疫应答。

关键词： tert CD4+T细胞表位 CD8+T细胞表位 metert 细胞免疫

BRAF V600E、tert启动子突变与甲状腺乳头状癌临床特征的关系

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成都医学院学报 2023年第2期18卷 154-157,163页

作者：郭鹏郑新李云龙夏旭良刘凯唐立刘昊中刘伟成都医学院第二附属医院·核工业416医院普外二科成都610057

目的探索BRAF V600E和tert启动子两种基因突变与甲状腺乳头状癌(PTC)临床特征的关系,旨在为PTC患者的个体化精准诊断及治疗提供科学线索。方法选择2019年2月至2021年4月在成都医学院第二附属医院普外二科收治的120例诊断为PTC手术患... 详细信息

目的探索BRAF V600E和tert启动子两种基因突变与甲状腺乳头状癌(PTC)临床特征的关系,旨在为PTC患者的个体化精准诊断及治疗提供科学线索。方法选择2019年2月至2021年4月在成都医学院第二附属医院普外二科收治的120例诊断为PTC手术患者的病理组织,应用二代测序法(NGS)进行BRAF V600E、tert基因检测,分析两种基因的突变特点及其与临床特征之间的关系。结果 PTC患者经检测的BRAFV600E基因突变率为89.2%,tert启动子突变率为4.2%,tert启动子突变的患者均发现有BRAF V600E基因突变。两种基因共突变患者有80.0%(4/5)出现淋巴结转移。单因素分析结果显示,BRAF V600E突变与肿瘤原发灶情况、淋巴结转移、病变数量相关(Ptert启动子双突变与临床分期相关(Ptert启动子突变常同时出现,并且在一定程度上对预测PTC的恶性程度及预后情况具有应用价值。

关键词：甲状腺乳头状癌 BRAF V600E tert 临床特征

BRAF V600E/tert promoter mutations and NIS/TSHR expression in differentiated thyroid carcinomaand their clinical significance

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Oncology and Translational Medicine 2017年第2期3卷 71-76页

作者： Xiaoting Ru Qinjiang Liu Haihong Zhou Rong Yang Lie Bao College of Life Sciences Lanzhou University Lanzhou 730000 China Department of Head and Neck Surgery Gansu Province Tumor Hospital Lanzhou 730050 China Translational Medicine Research Center Gansu Province Tumor Hospitali Lanzhou 730050 China Department of Pathology Gansu Province Tumor Hospital Lanzhou 730050 China

Objective Telomerase reverse transcriptase(tert) promoter mutations have recently been described in thyroid *** purpose of this study was to investigate the clinical significance of(v-raf murine sarcoma viral oncogene homolog B1) BRAF V600 E and tert promoter mutations in differentiated thyroid carcinoma(DTC).The relationship between the two mutations and NIS/TSHR expression was also *** We have detected BRAF V600 E and tert promoter mutations by direct sequencing and NIS/TSHR expression by immunohistochemistry in 229 cases of DTC,52 cases of benign nodular goiter,and 31 cases of normal thyroid *** The BRAF V600 E mutation was detected in 142(62.0%) of 229 cases of DTC [141 cases of papillary thyroid carcinoma(PTC) and 1 case of follicular thyroid carcinoma(FTC)].tert promoter mutations were detected in 18(7.9%) of 229 cases of DTC(14 cases of PTC and 4 cases of FTC),including the mutations C228T(0.9%) and C250T(7.0%),which were mutually ***,11(61.1%) cases also harbored the BRAF V600 E mutation,which was not associated with gender,age,tumor size,lymph node metastasis,and recurrence risk stratification(P >0.05).The rate of tert promoter mutation was higher in males,age ≥45,and in the middle/high-risk group(P tert promoter mutations were higher in the middle/high-risk group(P tert promoter mutation group(45.5 %) was lower than in other groups(that is,the DTC group with BRAF V600 E or tert promoter mutations(55.1%),the DTC group with no BRAF V600 E or tert promoter mutation(57.5%),the nodules and normal group(75.9%);| r | = 0.171,P = 0.002).Conclusion tert promoter mutations were lower in patients with DTC,with the C250 T mutation being the most *** detection of BRAF V600 E mutation combined with tert promoter mutations was instructive for the prognosis assessment and treatment of DTC.

关键词： differentiated thyroid carcinoma (DTC) BRAF V600E tert promoter mutations sodiumiodide symporter thyroid stimulating hormone receptor

萝卜蚜端粒逆转录酶tert基因的鉴定与表达分析

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华中农业大学学报 2020年第6期39卷 8-14页

作者：张鑫泽张慧杰周义成李昭王赫远朱智慧华中农业大学植物科学技术学院/湖北省昆虫资源利用与害虫可持续治理重点实验室武汉430070

为探究端粒酶逆转录酶基因(telomerase reverse transcriptase,tert)在昆虫生长发育过程中的作用机制,以萝卜蚜Lipaphis erysimi(Kaltenbach)为研究对象,克隆其tert基因并分析其时空表达情况。结果发现,萝卜蚜tert基因的CDS区长2658 bp... 详细信息

为探究端粒酶逆转录酶基因(telomerase reverse transcriptase,tert)在昆虫生长发育过程中的作用机制,以萝卜蚜Lipaphis erysimi(Kaltenbach)为研究对象,克隆其tert基因并分析其时空表达情况。结果发现,萝卜蚜tert基因的CDS区长2658 bp,编码885个氨基酸,其二级结构含41个α-螺旋、60个卷曲螺旋。系统进化分析结果显示,萝卜蚜tert基因与麦双尾蚜Diuraphis noxia的tert基因关系最近,与桃蚜Myzus persicae、豌豆蚜Acyrthosiphon pisum的tert基因同源性较高。实时荧光定量PCR显示,tert基因在萝卜蚜生长发育过程中的各个龄期及组织中均有表达,且成虫tert基因的相对表达量依次高于1龄、2龄、3龄、4龄若虫;tert基因在萝卜蚜腹部表达量最高,胸部次之,头部表达量最低。以上研究结果表明,tert基因在萝卜蚜的生长发育过程中起重要作用,可以选择其同源性低的区域作为基因干扰或沉默的靶标区域,用来防治萝卜蚜在农业上造成的重大危害。

关键词：端粒酶 tert 萝卜蚜基因克隆基因表达生物防治

Clinical significance of BRAF^(V600E) and tert promoter mutation in papillary thyroid microcarcinoma

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Oncology and Translational Medicine 2019年第2期5卷 75-79页

作者： Jincai Xue Qinjiang Liu Youxin Tian Xiaofeng Hou Department of Head and Neck Surgery Gansu Province Tumor Hospital

Objective The objective of this study was to analyze the correlation between BRAF^(V600E) and tert promoter mutations and papillary thyroid microcarcinoma (PTMC) risk factors, and their importance in the risk assessment of papillary thyroid *** This study retrospectively analyzed 107 cases of PTMC, which were diagnosed after the surgery in the department of head and neck surgery in Gansu Province Tumor Hospital from October 2014to June 2016. The mutations of BRAFV^(600E) and tert promoter were detected by PCR direct *** analyzed the data usingχ~2 test and binary Logistic regression *** Among 107 patients with PTMC, the BRAFV^(600E) and tert promoter mutation rates were 68.2%and 11.2%, respectively. Single factor analysis showed that there was a significant difference between the presence of membrane invasion, lymph node metastasis, and BRAFV^(600E) mutations (Ptert promoter mutation (Ptert promotor mutations; although, there was a difference between the association of these factors with the tert promoter mutation and the association of these factors with the coexistence of the BRAF^(V600E)and tert promotor mutations. The multifactorial analysis showed that the factors closely related to the BRAFV^(600E) mutation included capsular invasion (P=0.012) and lymph node metastasis (P=0.000). The following factors were closely associated with the tert promoter mutant:male (P=0.004), aged tert:male (P=0.022), capsular invasion (P=0.023), poor pathological subtype (P=0.041), and lymph node metastasis (P=0.030).Conclusion The risk

关键词： papillary thyroid microcarcinoma (PTMC) BRAFV^600E tert mutation

补肾健脾方对卵巢早衰小鼠ER/c-Myc/tert信号通路调控的影响

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南京中医药大学学报 2021年第6期37卷 886-890页

作者：王海丹郭红玉王琼严士海符蕊殷爱玲南京中医药大学附属医院江苏省中医院江苏南京210029 南京中医药大学附属南京中医院江苏南京210001

目的观察补肾健脾方对卵巢早衰(POF)小鼠ER/c-Myc/tert信号通路调控的影响。方法将50只B6AF1小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组、补肾健脾方高剂量组、补肾健脾方低剂量组。采用小鼠透明带3(ZP_(3))诱导建立POF模型,各组分别给予药... 详细信息

目的观察补肾健脾方对卵巢早衰(POF)小鼠ER/c-Myc/tert信号通路调控的影响。方法将50只B6AF1小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组、补肾健脾方高剂量组、补肾健脾方低剂量组。采用小鼠透明带3(ZP_(3))诱导建立POF模型,各组分别给予药物或生理盐水,期间定时观察小鼠动情周期的变化。干预4周后,取小鼠血清和卵巢组织。放射免疫分析法检测小鼠血清雌二醇(E_(2))、促卵泡生成激素(FSH)的水平;HE染色法观察卵巢组织病理形态;免疫荧光法检测卵巢透明带的变化;Western blot法检测雌激素受体(ER)、c-Myc和端粒酶逆转录酶(tert)的表达。结果与模型组相比,补肾健脾方高、低剂量组均可显著升高小鼠血清E_(2)水平(Ptert的表达(Ptert的表达,从而促进卵巢颗粒细胞的增殖发育以及卵母细胞的成熟,是其发挥治疗POF作用的途径。

关键词：补肾健脾方卵巢早衰透明带 ER c-Myc tert

TERC和tert基因与子宫颈癌发病关系的研究进展

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中华妇产科杂志 2008年第10期43卷 794-796页

作者：李静然魏丽惠北京大学人民医院妇科 100044

研究发现，端粒酶的激活与恶性肿瘤的发生、发展关系密切。端粒酶是一种含有RNA链的逆转录酶，以自身的RNA为模板合成端粒DNA，并连接到端粒的染色体末端，延长端粒的长度。如该模板区发生基因突变将导致端粒酶的激活，使端粒长度不随... 详细信息

研究发现，端粒酶的激活与恶性肿瘤的发生、发展关系密切。端粒酶是一种含有RNA链的逆转录酶，以自身的RNA为模板合成端粒DNA，并连接到端粒的染色体末端，延长端粒的长度。如该模板区发生基因突变将导致端粒酶的激活，使端粒长度不随细胞分裂而缩短，细胞具有了无限增殖的能力。而在大多数正常体细胞中端粒酶无活性，随着细胞分裂次数的增加，端粒缩短，细胞死亡。

关键词：基因突变发病关系子宫颈癌 tert 细胞分裂次数端粒长度端粒酶端粒DNA

tert、ATRX基因在中高级别胶质瘤中的突变及意义

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TERT、ATRX基因在中高级别胶质瘤中的突变及意义

作者：刘佳雨天津医科大学

学位级别：硕士

背景:胶质瘤是中枢神经系统较为常见的原发性肿瘤,在我国的发病率约为7/10万。其具有手术切除难、疾病进展快、生存时间短的特点。随着分子病理学研究的进展,目前已有多个分子标志物被证实与胶质瘤相关,且这些分子标志物在胶质瘤的临床... 详细信息

背景:胶质瘤是中枢神经系统较为常见的原发性肿瘤,在我国的发病率约为7/10万。其具有手术切除难、疾病进展快、生存时间短的特点。随着分子病理学研究的进展,目前已有多个分子标志物被证实与胶质瘤相关,且这些分子标志物在胶质瘤的临床治疗中起到了重要的指导作用。其中1p/19q和IDH分子标记物发现相对较早,并已列入世界卫生组织(WHO)在2016年修订的第4版中枢神经系统肿瘤分类。两种端粒维持相关基因,端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase,tert)和α-地中海贫血/X连锁智力低下综合征(ATRX)基因的突变也是许多对胶质瘤分类和预后的研究的主题。端粒是由几百个核苷酸重复序列组成的所有真核染色体末端的核蛋白复合物,伴随每个有丝分裂其长度逐渐缩短。端粒酶是一种逆转录酶,它用自身的RNA分子作模板,以向端粒复制添加核苷酸。肿瘤通过重新激活端粒酶或通过非依赖性端粒酶(共同称为替代延长端粒)的机制(ALT)来保持其端粒长度。在胶质瘤和许多其他肿瘤中发现tert启动子中的核心区域突变是导致端粒酶活性增加的主要原因。许多具有替代延长端粒的肿瘤均存在ATRX基因突变,这个基因可将H3.3组蛋白与端粒中所需的染色质重塑复合物的中心成分相结合。ATRX突变在II-III级胶质瘤和继发性胶质母细胞瘤的发生率将近75%。因此二者的突变对于胶质瘤的形成与发展产生重大意义。目前越来越越多的研究针对于胶质瘤端粒维持机制。这些研究对于临床的的预后和预测作用是非常有意义的,其可能指导胶质瘤患者的临床治疗。然而目前为止,还没有研究明确分析WHO 2016分类中诊断实体之间ATRX改变和tert启动子突变的重要性。本研究的目的是评估胶质瘤标志物的ATRX改变和tert启动子突变的表达在II-III级胶质瘤中的意义。目的:应用Sanger测序技术及免疫组织化学法检测179例脑胶质瘤组织中tert启动子区及ATRX突变情况,分析其在WHO II-IV级别胶质瘤中的意义。探寻其表达水平与肿瘤起源、进展及侵袭机制之间的关系。方法:收集天津市环湖医院神经外科2016-2017年间初次手术并且术后病理表明为WHO II-IV级胶质瘤共179例病人的瘤组织石蜡标本,将其制作组织芯片(TMA)以便研究分析。通过Sanger测序技术检测179例肿瘤组织中tert启动子区及IDH突变情况,使用免疫组织化学法检测ATRX突变情况以及Ki67蛋白表达情况,并结合他们的临床资料应用SPSS20.0统计软件对数据进行分析处理,探寻它们在WHO II-IV级胶质瘤中的表达及临床意义。结果:1、我们发现tert启动子突变与年龄表现出正相关(Ptert启动子区突变以及ATRX突变情况的影响。最终,得到的Logistic模型具有统计学意义。2、在本实验收集脑组织切片中:WHO II级胶质瘤,ATRX突变的阳性率为44.74%(17/38),在WHO III级胶质瘤中,ATRX突变的阳性率为44.18(19/43);在WHO IV级胶质瘤中,ATRX突变的阳性率为27.55(27/98)。我们进一步分析了应用二分类Logistic回归分别评估年龄、性别、WHO分级、IDH突变、MGMT甲基化和Ki-67蛋白表达指数与tert启动子区突变情况的影响。最终,得到的Logistic模型具有统计学意义。3、我们把ATRX突变加入tert启动子突变的分型中,以观察其与Ki-67蛋白表达指数的关系。我们发现,tert启动子突变分别在ATRX突变组和野生组表现出明显的有差异性的意义(ptert野生型组中,伴有ATRX缺失的患者Ki-67蛋白阳性表达指数最低,而不伴ATRX缺失的患者Ki-67蛋白表达指数在四组中最高。4、我们进一步研究了IDH突变与tert突变之间的关系,我们发现:IDH的突变率随着肿瘤级别的升高而下降,在高级别胶质瘤的的阳性率(Ⅳ级)显著低于WHO II、III级胶质瘤,tert启动子突变的阳性率(Ⅲ-Ⅳ级)的阳性表达比率显著高于低级别的胶质瘤(Ⅱ级),统计学差异显著。结论:本研究表明tert启动子区及ATRX突变情况对于胶质瘤的明确病理诊断、评估肿瘤恶性程度具有重大预测意义。

关键词：胶质瘤免疫组织化学染色基因测序 tert ATRX

tert在预电刺激小脑顶核后大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤中的作用

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TERT在预电刺激小脑顶核后大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤中的作用

作者：张兆霞广西医科大学

学位级别：硕士

目的：研究预电刺激小脑顶核对大鼠脑缺血再灌注后tert表达、定位及其抗凋亡的可能机制。方法：Wistar雄性大鼠120只,随机分2组：(1)单纯造模组;(2)预电刺激组,即电刺激小脑顶核1h,24h后制作右侧局灶脑缺血模型,缺血2h后再灌注,按再灌... 详细信息

目的：研究预电刺激小脑顶核对大鼠脑缺血再灌注后tert表达、定位及其抗凋亡的可能机制。方法：Wistar雄性大鼠120只,随机分2组：(1)单纯造模组;(2)预电刺激组,即电刺激小脑顶核1h,24h后制作右侧局灶脑缺血模型,缺血2h后再灌注,按再灌注时间不同分24h、48h、72h亚组。用TTC染色测定脑梗死体积;通过TUNEL组织化学染色法检测各组不同时间点的凋亡细胞数;通过蛋白免疫印迹的方法检测tert与Bax蛋白的表达;通过免疫电镜、透射电镜分别进一步检测tert与Bax蛋白的表达、定位及观察线粒体超微结构的变化。结果：预电刺激组的脑梗死体积明显小于单纯造模组(Ptert蛋白的相对表达(0.871±0.505,0.908±0.396,0.798±0.238)较造模组(0.727±0.366,0.796±0.510,0.642±0.325)增加(Ptert主要分布在线粒体外的胞浆(P0.05),但两组相比其定位有显著差异(Ptert的表达,增加的tert可能通过抑制Bax线粒体转位,减少缺血区神经元的凋亡而起到脑保护作用。

关键词：脑缺血电刺激 tert Bax 细胞凋亡