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tdo2通过激活KYN-AHR信号通路促进鼻咽癌的恶性行为

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TDO2通过激活KYN-AHR信号通路促进鼻咽癌的恶性行为

作者：刘翔蚌埠医学院

学位级别：硕士

目的:探讨色氨酸-2,3-双加氧酶2(tryptophan-2,3-dioxygenase2,tdo2)对鼻咽癌细胞系(CNE-2Z和HNE-1)生物学行为的影响及其分子机制。方法:通过在线数据库分析tdo2基因在不同癌症或特定癌症亚型中的表达状态。培养人正常鼻咽黏膜上皮细胞... 详细信息

目的:探讨色氨酸-2,3-双加氧酶2(tryptophan-2,3-dioxygenase2,tdo2)对鼻咽癌细胞系(CNE-2Z和HNE-1)生物学行为的影响及其分子机制。方法:通过在线数据库分析tdo2基因在不同癌症或特定癌症亚型中的表达状态。培养人正常鼻咽黏膜上皮细胞系NP69、鼻咽癌细胞系5-8F、CNE-2Z和HNE-1。实验中对CNE2Z和HNE-1细胞分别转染tdo2干扰序列和阴性对照序列分别命名为si-tdo2组和NC组。采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)方法检测tdo2的m RNA相对表达水平;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率,细胞集落克隆实验检测集落数量;Transwell法和细胞划痕实验检测细胞迁移能力;蛋白质印迹实验(Western blot)检测鼻咽癌细胞中上皮间充质化(EMT)相关蛋白E-cadherin、N-cadherin及Vimentin及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2相对表达量;通过STRING在线数据库,构建了以tdo2基因为中心的PPI网络;TIMER2工具绘制了tdo2在不同癌症类型中KYNU、AHR的对应热图;GEPIA2工具对tdo2表达水平与KYN和AHR表达做相关性分析;蛋白质印迹实验检测通路蛋白KYN、AHR相对表达量。结果:与正常鼻咽黏膜上皮细胞NP69相比,在CNE-2Z和HNE-1细胞中tdo2的m RNA相对表达量明显上调(Ptdo2组细胞存活率降低,克隆细胞集落明显减少(Ptdo2组细胞移数量较少,迁移指数较小(Ptdo2组EMT相关蛋白中N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达水平降低,E-cadherin蛋白相对表达水平升高,凋亡相关蛋白Bax蛋白相对表达量升高,Bcl-2蛋白的相对表达量降低(Ptdo2基因与KYN基因在基因表达、基因共产等方面可能具有相互作用;TIMER2工具绘制的tdo2在不同癌症类型中KYNU、AHR的对应热图表明,tdo2与上述两个基因之间存在正相关关系;GEPIA2工具对tdo2表达水平与KYNU和AHR表达做相关性分析得到tdo2表达水平与KYNU和AHR表达均呈正相关;与NC组相比,si-tdo2组KYN-AHR通路相关蛋白KYN、AHR相对表达量降低(Ptdo2可促进鼻咽癌细胞株CNE-2Z和HNE-1细胞增殖、迁移能力,并抑制细胞凋亡,其机制可能通过KYN-AHR通路进行调控。

关键词： tdo2 鼻咽癌 KYN AHR EMT

tdo2介导巨噬细胞极化在CIA小鼠中的作用和机制

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TDO2介导巨噬细胞极化在CIA小鼠中的作用和机制

作者：李素素安徽医科大学

学位级别：硕士

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种炎性自身免疫病,以持续性滑膜炎、全身感染和自身抗体产生为主要特征,会导致身体多个关节的疼痛和肿胀,严重时会损害其他的器官。随着“免疫代谢”的迅速发展,异常的免疫细胞代谢导致机体... 详细信息

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种炎性自身免疫病,以持续性滑膜炎、全身感染和自身抗体产生为主要特征,会导致身体多个关节的疼痛和肿胀,严重时会损害其他的器官。随着“免疫代谢”的迅速发展,异常的免疫细胞代谢导致机体免疫稳态失衡,逐渐成为RA研究的热点。在RA中,代谢与免疫相互调控,免疫细胞代谢紊乱会导致其重要的免疫功能失调,可能会进一步介导RA的病理过程。色氨酸(tryptophan,Trp)属于芳香族的一种必需氨基酸,参与蛋白质和核酸等大分子的合成,在维持生理活动中起关键作用。95%以上的Trp通过犬尿氨酸途径(kynurenine pathway,KP)代谢。RA患者的Trp水平降低,犬尿氨酸(kynurenine,Kyn)和相关代谢产物水平升高,提示KP代谢异常。因此,靶向调控KP通路使其异常代谢恢复正常,使机体免疫稳态再次恢复平衡,可为临床上治疗RA提供新策略。色氨酸-2,3双加氧酶(tryptophan-2,3-dioxygenase2,tdo2)是KP反应第一步的关键限速酶,通过酶促反应将Trp代谢为Kyn,并随之产生一系列下游活性代谢产物。近年来,针对tdo2的研究逐渐增多,并发现tdo2在肿瘤、神经系统疾病和炎症免疫相关性疾病中具有免疫调节作用。但tdo2在RA中的作用尚未见报道。巨噬细胞在RA病程中至关重要。巨噬细胞的活化可作为检测RA的早期指标,巨噬细胞数量的增加是炎性病变的显著特征。而且巨噬细胞能够通过分泌细胞因子(Interleukin-6)等和其他免疫细胞(如T细胞和B细胞)和非免疫细胞(如破骨细胞)相互作用增强炎症反应,促进软骨和骨的破坏进而影响RA疾病进程。巨噬细胞主要分为促炎型巨噬细胞(M1)和抗炎型巨噬细胞(M2)。在生理条件下,这两种巨噬细胞处于平衡状态。但在RA患者中,M1/M2型巨噬细胞的比例失衡。tdo2介导的KP代谢通路异常对CIA小鼠巨噬细胞功能的影响未曾报道。因此,本课题以巨噬细胞为靶细胞,通过敲除和过表达tdo2基因,研究tdo2对其功能的调控作用。体内实验中,我们构建了CIA模型,研究tdo2介导的KP通路在RA中的作用以探寻新的药物靶点。目的:结合基因敲除和基因过表达方法,观察tdo2对RAW264.7细胞功能的影响。通过建立CIA小鼠模型,进一步探讨tdo2在CIA小鼠中的表达和活性,明确tdo2抑制剂LM10对CIA小鼠的治疗作用,为揭示tdo2参与RA巨噬细胞极化以及tdo2作为RA治疗的潜在靶点提供实验依据。方法:采用CRISPR/Cas9技术构建RAW264.7-tdo2稳定细胞株。质粒转染构建tdo2基因过表达的RAW264.7细胞。将鸡Ⅱ型胶原制备CIA小鼠关节炎模型,LM10和MTX分别灌胃给药,进行关节炎指数和关节肿胀数评分。HE染色法观察小鼠踝关节的病理变化。免疫组化法检测CIA小鼠脾脏、肝脏和踝关节中tdo2的表达。流式细胞术检测巨噬细胞表型CD86和CD206的表达及巨噬细胞吞噬作用。Western blot法检测RAW264.7细胞和PMs中tdo2、iNOS和Arg1的表达。流式细胞术检测CIA小鼠脾脏T细胞亚型的比例。ELISA法检测小鼠血清和PMs上清中IL-10、TGF-β、IL-1β和TNF-ɑ的水平。结果:***2基因敲除对RAW264.7细胞功能的影响CRISPR/Cas9法成功构建了RAW264.7-tdo2稳定细胞株。Western blot结果显示,tdo2敲除后RAW264.7细胞中iNOS的表达低于对照组,Arg1的表达高于对照组。流式结果显示,tdo2基因敲除后的RAW264.7细胞的M1/M2比例和吞噬能力明显低于对照组。ELISA结果显示,与对照组相比,tdo2基因敲除的RAW264.7细胞上清中IL-10和TGF-β的水平升高,IL-1β和TNF-ɑ的水平降低。***2过表达对RAW264.7细胞功能的影响运用质粒转染构建过表达tdo2的RAW264.7细胞。Western blot结果显示,与对照组相比,tdo2过表达后,RAW264.7细胞中iNOS的表达升高,Arg1的表达降低。流式细胞术结果表明,与对照组相比,tdo2基因过表达后,RAW264.7细胞的M1/M2比例升高,其吞噬能力增强。ELISA结果显示,与对照组相比,tdo2过表达的RAW264.7细胞上清中IL-10和TGF-β的水平降低,TNF-ɑ的水平升高。3.680C91对RAW264.7细胞功能的影响体外给予680C91(5n M、10n M、20n M)作用于RAW264.7细胞24 h。Western blot结果显示,680C91组可降低RAW264.7细胞中iNOS的表达,升高Arg1的表达。流式细

关键词：类风湿关节炎色氨酸巨噬细胞 tdo2

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小鼠tdo2基因条件性敲除打靶载体的构建

安徽医科大学学报 2023年第7期58卷 1082-1086页

作者：许媛魏伟常艳安徽医科大学临床药理研究所抗炎免疫药物教育部重点实验室安徽医科大学类风湿关节炎研究中心抗炎免疫药物安徽省协同创新中心合肥230032

目的构建小鼠tdo2基因条件性敲除打靶载体,为建立tdo2基因条件性敲除小鼠奠定基础。方法根据CRISPR/Cas9技术原理,设计并构建单链向导RNA(sgRNA)和Donor载体,以tdo2-201(ENSMUST00000029645.13)转录本的外显子3作为敲除区,在打靶基因两... 详细信息

目的构建小鼠tdo2基因条件性敲除打靶载体,为建立tdo2基因条件性敲除小鼠奠定基础。方法根据CRISPR/Cas9技术原理,设计并构建单链向导RNA(sgRNA)和Donor载体,以tdo2-201(ENSMUST00000029645.13)转录本的外显子3作为敲除区,在打靶基因两侧各放置一个Loxp元件,建立条件性敲除tdo2第3号外显子的条件性基因打靶载体。将CRISPR/Cas9复合体和Donor载体显微注射到C57BL/6小鼠的受精卵中,获得阳性F0小鼠,再将阳性F0代小鼠与C57BL/6小鼠交配获得F1代小鼠,并经PCR和基因测序鉴定F1代小鼠基因型。结果结果证实所构建的tdo2基因条件性敲除打靶载体符合设计要求,成功繁育并鉴定出B6/JGpt-tdo2^(em1C)flox/Gpt小鼠。结论成功构建了小鼠tdo2基因条件性敲除打靶载体,为后续进一步构建tdo2基因条件敲除小鼠奠定了基础。

关键词： tdo2 基因敲除 CRISPR/Cas9 打靶载体

tdo2介导的犬尿氨酸代谢异常在大鼠佐剂性关节炎中的作用及初步机制研究

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TDO2介导的犬尿氨酸代谢异常在大鼠佐剂性关节炎中的作用及初步机...

作者：韩萍安徽医科大学

学位级别：硕士

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节损伤和滑膜炎症为特征的慢性自身免疫病,尚不清楚其发病机制。导致其发病的原因可能是由于非免疫细胞成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocyte,FLS)和免疫细胞如腹腔巨噬细胞... 详细信息

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节损伤和滑膜炎症为特征的慢性自身免疫病,尚不清楚其发病机制。导致其发病的原因可能是由于非免疫细胞成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocyte,FLS)和免疫细胞如腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophage,p M)、树突状细胞(dendritic cells,DC)、T细胞、B细胞等细胞的过度活化。色氨酸(L-tryptophan,Trp)代谢通路在免疫系统中有很重要的作用,Trp是人体必需的氨基酸,是许多信号分子形成的前体,可以调节适应性免疫反应。绝大部分的Trp是通过犬尿氨酸(L-kynurenine,Kyn)途径代谢,此途径生成Kyn及下游产物,参与炎症和免疫反应。在正常机体中,Trp和Kyn维持着一个动态平衡,但当体内的Trp和Kyn含量发生变化时,RA等自身免疫病、肾脏疾病、病毒感染或恶性肿瘤等疾病就会被诱发。由于Kyn代谢与炎症反应之间存在着密切的关系,Kyn已成为RA等多种疾病的公认参与者。吲哚胺2,3双加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)、吲哚胺2,3双加氧酶2(indoleamine2,3-dioxygenase 2,IDO2)和色氨酸2,3双加氧酶(tryptophan 2,3 dioxygenase,tdo2)是催化此代谢通路导致Trp和Kyn含量变化的第一限速酶,研究表明RA患者血清中Trp浓度降低,Kyn浓度升高,胶原性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠肝脏和血清中Trp浓度降低,Kyn浓度升高。IDO1在免疫系统中的作用已经比较明确,在正常机体中在p M和DC等细胞中表达较低,具有较低的底物选择性,在发病机体中如RA中可被γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白介素1(interleukin-1,IL-1)等炎性因子显著上调高表达,研究表明IDO1主要影响免疫应答初始阶段。tdo2在生理条件下主要表达在哺乳动物肝脏中,底物选择性较高。新近研究发现,tdo2在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用,能够促进Th1和Th17的分化,提示tdo2可能介导机体免疫反应,但tdo2在自身免疫病中的作用未见报道。本课题通过建立大鼠佐剂性关节炎(adjuvant-induced arthritis,AA)模型,通过体内外实验研究tdo2在AA大鼠不同组织和细胞中的表达,初步探讨其作用机制。目的:检测tdo2在AA大鼠不同组织和细胞中的表达;研究tdo2抑制剂对不同细胞功能的影响,阐明tdo2介导的犬尿氨酸通路参与大鼠AA病程发生发展的作用;以tdo2为研究靶点,为发现新的病理机制和新的药物靶点治疗RA提供理论依据和实验依据。方法:通过建立大鼠AA模型,在不同炎症阶段(炎症初期、炎症高峰期和炎症缓解期)取AA大鼠血清和肝脏组织,采用HPLC法检测血清和肝脏中Trp和Kyn的浓度变化;采用免疫组化法检测正常和AA大鼠不同炎症阶段关节滑膜组织和肝脏组织中IDO1和tdo2的表达,观察IDO1和tdo2在AA大鼠不同炎症阶段的表达变化;分离和培养正常和AA大鼠的FLS、p M、T、B细胞,采用western blot法和激光共聚焦法检测tdo2在免疫细胞和非免疫细胞中的表达变化;采用CCK-8法检测Kyn和tdo2抑制剂对FLS及转染tdo2 si RNA的FLS增殖能力的影响,采用Transwell法检测Kyn和tdo2抑制剂680C91对FLS及转染tdo2 si RNA的FLS迁移和侵袭能力的影响;通过western blot法检测680C91对p M细胞中i NOS和Arg1的影响,观察690C91对p M中M1和M2极化的影响;采用CCK-8法检测Kyn和680C91对T、B淋巴细胞增殖的影响。结果:***大鼠不同炎症阶段血清和肝脏中Trp、Kyn含量及Kyn/Trp比值的变化和正常组相比,AA大鼠血清和肝脏中不同炎症阶段Trp浓度均降低,Kyn浓度均升高,Kyn/Trp比值升高。血清中AA大鼠初期Kyn/Trp比值升高较明显,肝脏组织中Kyn/Trp比值在AA大鼠高峰期显著升高。***1和tdo2在AA大鼠不同炎症阶段关节滑膜组织和肝脏组织中的表达与正常组大鼠相比,IDO1的表达在AA大鼠不同炎症阶段滑膜组织中均升高,在初期阶段表达最高;AA大鼠不同炎症阶段关节滑膜组织和肝脏组织中tdo2表达均升高,在AA大鼠高峰期表达升高最为明显。***2在FLS、p M、T、B淋巴细胞中的表达变化Western blot法显示,与正常组相比,FLS、p M、T、B淋巴细胞中tdo2表达明显升高。激光共聚焦法结果显

关键词： tdo2 类风湿关节炎佐剂性关节炎色氨酸犬尿氨酸

生物信息学分析tdo2在肾透明细胞癌中预后作用和免疫作用

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生物信息学分析TDO2在肾透明细胞癌中预后作用和免疫作用

作者：夏天成大连医科大学

学位级别：硕士

背景:肾透明细胞癌(cc RCC,Clear cell renal cell carcinoma)是肾细胞癌中最常见的组织学亚型。其预后较其他常见类型的肾细胞癌差,如肾乳头状细胞癌、肾嫌色细胞癌等。肾透明细胞癌患者中Fuhrman分级I-II级患者在部分肾切除术后预后较... 详细信息

背景:肾透明细胞癌(cc RCC,Clear cell renal cell carcinoma)是肾细胞癌中最常见的组织学亚型。其预后较其他常见类型的肾细胞癌差,如肾乳头状细胞癌、肾嫌色细胞癌等。肾透明细胞癌患者中Fuhrman分级I-II级患者在部分肾切除术后预后较好,发病率较低。然而,有30-35%接受手术的患者最终会发生远处转移。高Fuhrman分级的晚期患者的5年生存率仅仅只有32%左右。同时,透明细胞肾细胞癌对放疗和化疗有很大的抵抗力。研究显示tdo2(色氨酸-2,3-双氧合酶,Tryptophan 2,3-dioxygenase)的过表达与失巢凋亡抗性、免疫逃逸、增殖和侵袭有关,与许多癌症的不良预后相关。所以,我们通过生物信息学方法目的探索tdo2基因在肾透明细胞癌患者中的总生存期(OS,Overall Survival)和与免疫细胞相关作用。方法和材料:肾透明细胞癌的RNA测序数据和相应的临床信息从癌症基因组图谱(TCGA,The Cancer Genome Atlas)数据库和基因表达数据库(GEO,Gene Expression Omnibus)数据库下载。我们使用R软件进行生存(KM,Kaplan-Meier Plotter)分析、接收者操作特征(ROC,receiver operating characteristic curve)曲线分析、单因素和多因素Cox回归分析以评估独立的预后因素。我们并采用基因集富集分析(GSEA,gene-set enrichment analysis)来探索tdo2相关的信号通路。然后在String数据库对tdo2基因构建了PPI网络(蛋白互作网络,protein protein interaction network)。此外,我们通过TIMER(Tumor Immune Estimation Resource)数据库研究了tdo2与免疫细胞浸润的相关性,通过GEPIA2(Gene Expression Profiling Interactive Analysis)数据库探索了tdo2基因与其他免疫检查点基因是否存在的相关性。结果:我们结果表明在TCGA数据库中tdo2表达在肾透明细胞癌中显著上升,其表达升高与OS较短有关(ptdo2确定为独立的预后因素(均ptdo2高表达与氧化磷酸化、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸降解、细胞外基质(ECM)受体相互作用、细胞周期、趋化因子信号通路、转化生长因子-β(TGF-β)通路、细胞因子和细胞因子受体相互作用、P53信号通路等有关。而且tdo2与微卫星不稳定性显着相关(MSI,Microsatellite Instability,ptdo2干性评分与正常组有显著差异(ptdo2的高表达和免疫细胞的浸润相关,包括巨噬细胞、中性粒细胞和树突细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞。tdo2还与PD-L1、PDCD1、PD-L2、CTLA4、BTLA、LAG3、TIGIT、PVR、CEACAM1、VTCN1免疫检查点具有显著相关。结论:本研究发现tdo2基因在肾透明细胞癌中表达水平明显升高,同时是肾透明细胞癌不良预后的独立因素。它与肾透明细胞癌中的tdo2的微卫星不稳定性、肿瘤侵袭、免疫逃逸和作为潜在的分子作用靶点起到了显著作用。

关键词： tdo2 肾透明细胞癌生物信息学分析预后免疫

tdo2基因对鼻咽癌细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响及其机制

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山西医科大学学报 2023年第1期54卷 53-59页

作者：刘翔罗燕贞周兰柱孙哲吴俊王文忠蚌埠医学院第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科蚌埠233000

目的探讨色氨酸-2,3-双加氧酶2(tryptophan-2,3-dioxygenase2,tdo2)对鼻咽癌细胞系CNE-2Z和HNE-1细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法通过TIMER2数据库分析tdo2基因在不同癌症或特定癌症亚型中的表达状态。培养人正常鼻咽黏膜上皮... 详细信息

目的探讨色氨酸-2,3-双加氧酶2(tryptophan-2,3-dioxygenase2,tdo2)对鼻咽癌细胞系CNE-2Z和HNE-1细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法通过TIMER2数据库分析tdo2基因在不同癌症或特定癌症亚型中的表达状态。培养人正常鼻咽黏膜上皮细胞系NP69、鼻咽癌细胞系5-8F、CNE-2Z和HNE-1。实验中对CNE2Z和HNE-1细胞分别转染tdo2干扰序列和阴性对照序列,分别命名为si-tdo2组和NC组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测tdo2的mRNA相对表达水平;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率,细胞集落克隆实验检测集落数量;Transwell法和细胞划痕实验检测细胞迁移能力;蛋白质印迹实验(Western blot)检测鼻咽癌细胞中上皮间充质化(EMT)相关蛋白E-cadherin、N-cadherin及Vimentin及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2相对表达量。结果与正常鼻咽黏膜上皮细胞NP69相比,在CNE-2Z和HNE-1细胞中tdo2的mRNA相对表达量明显上调(Ptdo2组细胞存活率降低,克隆细胞集落明显减少(Ptdo2组细胞迁移数量较少,迁移指数较小(Ptdo2组EMT相关蛋白中N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达水平降低,E-cadherin蛋白相对表达水平升高,凋亡相关蛋白Bax蛋白相对表达量升高,Bcl-2蛋白的相对表达量降低(Ptdo2可促进鼻咽癌细胞株CNE-2Z和HNE-1细胞增殖、迁移能力,并抑制细胞凋亡,其机制可能通过促进EMT进行调控。

关键词：鼻咽癌 tdo2 增殖迁移凋亡

tdo2在大鼠围着床期子宫中的表达规律研究

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黑龙江动物繁殖 2016年第2期24卷 14-15页

作者：岳巍王胜轩方园马兴红东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

深入研究哺乳动物胚胎着床的分子机理对提高动物繁殖率具有重要意义。本文以大鼠为动物模型,利用原位杂交技术研究了tdo2基因在大鼠围着床期的表达规律,探讨了tdo2基因在大鼠胚胎着床过程中可能发挥的作用。

关键词：胚胎着床 tdo2 大鼠

tdo2基因敲除小鼠模型的建立和初步表型研究

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中国药理学通报 2021年第5期37卷 730-734页

作者：李素素常艳魏伟安徽医科大学临床药理研究所抗炎免疫药物教育部重点实验室抗炎免疫药物安徽省协同创新中心安徽合肥230032

目的构建tdo2基因敲除的C57BL/6小鼠,初步研究其表型。方法根据CRISPR/Cas9技术原理,设计并体外转录sgRNA,用显微注射法将Cas9、sgRNA同时注射到小鼠的受精卵。经胚胎移植,获得可能出现多种基因型并存的F0代小鼠。利用PCR法进行基因型判... 详细信息

目的构建tdo2基因敲除的C57BL/6小鼠,初步研究其表型。方法根据CRISPR/Cas9技术原理,设计并体外转录sgRNA,用显微注射法将Cas9、sgRNA同时注射到小鼠的受精卵。经胚胎移植,获得可能出现多种基因型并存的F0代小鼠。利用PCR法进行基因型判定,获得阳性F0代小鼠。由阳性F0代小鼠与野生型小鼠回交得到F1代杂合子小鼠。阳性F1代杂合子小鼠之间配繁,得到F2代纯合子小鼠。观察和分析纯合子小鼠的生长特性,繁殖能力和子代存活率。Western blot验证tdo2基因敲除纯合子小鼠肝脏组织中tdo2的蛋白表达。结果成功繁育和鉴定出tdo2基因敲除小鼠,PCR法成功鉴别了子代鼠的基因型;Western blot结果表明,tdo2基因敲除小鼠的肝脏组织中tdo2蛋白不表达。tdo2基因敲除小鼠饮食、体质量等未发现异常改变。结论成功建立tdo2基因敲除小鼠,为研究tdo2基因的生物学功能和在疾病中的调控作用提供实验手段。

关键词： tdo2 基因敲除表型小鼠繁育 CRISPR/Cas9

敲减tdo2通过调控PI3K/AKT信号通路抑制宫颈鳞状细胞癌增殖和转移的作用机制

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河北医药 2023年第19期45卷 2895-2900页

作者：肖慧英刘改文张改梅刘君赵文华乔娟内蒙古自治区呼和浩特市第一医院妇产科 010000 内蒙古自治区人民医院妇产科内蒙古自治区肿瘤医院妇产科

目的研究色氨酸2,3-双加氧酶(tryptophan 2,3-dioxygenase,tdo2)在宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)中表达的临床意义及促进CSCC细胞增殖和转移能力的作用及机制。方法采用免疫组化检测tdo2在CSCC组织和配对的癌... 详细信息

目的研究色氨酸2,3-双加氧酶(tryptophan 2,3-dioxygenase,tdo2)在宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)中表达的临床意义及促进CSCC细胞增殖和转移能力的作用及机制。方法采用免疫组化检测tdo2在CSCC组织和配对的癌旁组织中的表达水平,并分析tdo2的表达与CSCC患者临床病理参数及预后的关系。培养CSCC细胞SiHa,随机分为对照组si-NC和实验组si-tdo2,分别转染NC siRNA和tdo2 siRNA,western blotting检测各组细胞中tdo2的表达;CCK8实验和平板克隆实验检测各组细胞的增殖能力;Transwell实验检测各组细胞的转移能力;Western blotting检测各组细胞中PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K、pPI3K、AKT和pAKT的表达。结果免疫组化结果显示与癌旁组织比较,tdo2在CSCC组织中的表达增加(Ptdo2高表达与CSCC患者、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、FIGO分期、KI67指数和预后均相关(Ptdo2组SiHa细胞中tdo2蛋白表达减少(Ptdo2组SiHa细胞的增殖和转移能力降低(P0.05)。结论tdo2在CSCC组织中表达增加,可能通过激活PI3K/AKT信号通路促进CSCC的增殖和转移能力。tdo2是治疗CSCC的潜在分子靶点。

关键词： CSCC tdo2 增殖转移 PI3K/AKT