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中医干预对艾滋病免疫重建不全患者tcrvβ基因CDR3区克隆片断的影响

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中国中药杂志 2013年第15期38卷 2424-2428页

作者：王阶汤艳莉李勇刘咏梅曾毅中国中医科学院广安门医院北京100053 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

目的:探讨中医干预对艾滋病免疫重建不全患者tcrvβ基因CDR3区克隆片断的影响。方法:以15例HIV抗体阴性健康献血员做对照,采集37例艾滋病免疫重建不全患者治疗前后的外周血PBMC,采用人类tcrvβ基因CDR3多样性定量检测试剂盒检测,基因扫... 详细信息

目的:探讨中医干预对艾滋病免疫重建不全患者tcrvβ基因CDR3区克隆片断的影响。方法:以15例HIV抗体阴性健康献血员做对照,采集37例艾滋病免疫重建不全患者治疗前后的外周血PBMC,采用人类tcrvβ基因CDR3多样性定量检测试剂盒检测,基因扫描作图并计算Vβ家族中每个家族不同大小CDR3区片段的分布。结果:对比正常人,患者一些Vβ内出现了明显的CDR3区的单寡克隆扩增情况,治疗后各家族单寡克隆情况有不同程度的改善和恢复。其中9,11,21,224个家族的D值2组治疗后均比治疗前下降,治疗组下降幅度较对照组在21,22 2个家族更为显著(Ptcrvβ各家族单寡克隆情况有不同程度的改善和恢复,提示中医药可能促进T细胞部分受体基因重排,丰富受体库,帮助机体免疫细胞有效识别病毒,减少T细胞凋亡。

关键词：艾滋病免疫重建不全 tcrvβ 免疫2号方

艾滋病免疫重建不全患者tcrvβ基因多样性改变及药物干预研究

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中国中药杂志 2013年第15期38卷 2438-2442页

作者：汤艳莉王阶李勇刘咏梅泰达医院天津300457 中国中医科学院广安门医院北京100053

目的:探讨艾滋病免疫重建不全患者的tcrvβ基因多样性改变及中药免疫2号方的干预作用。方法:采集37例艾滋病免疫重建不全患者治疗前后的外周血PBMC,另以15例HIV抗体阴性健康献血员做对照,采用人类tcrvβ基因CDR3多样性定量检测试剂盒检... 详细信息

目的:探讨艾滋病免疫重建不全患者的tcrvβ基因多样性改变及中药免疫2号方的干预作用。方法:采集37例艾滋病免疫重建不全患者治疗前后的外周血PBMC,另以15例HIV抗体阴性健康献血员做对照,采用人类tcrvβ基因CDR3多样性定量检测试剂盒检测,基因扫描作图并计算Vβ家族中每个家族不同大小CDR3区片段的分布。结果:HAART治疗后1年免疫重建不全患者的tcrvβ多个家族的扫描图高斯分布被打破,并发生TCR谱系的偏移,经半年中药联合HAART治疗后,偏移的TCR谱系有所恢复。以试剂盒提供的定量分析软件计算的距离D(distance)值来量化评价,2组D值改变无明显差异,但联合中药能减少数据的变异性。CD4+T细胞计数与tcrvβ基因多样性改变两者存在显著的相关关系(r=-0.772,P=0.000)。结论:中药复方对于tcrvβ各家族单寡克隆情况有不同程度的改善和恢复,提示中医药可能促进T细胞部分受体基因重排,丰富受体库,帮助机体免疫细胞有效识别病毒,减少T细胞凋亡。

关键词：艾滋病免疫重建不全 tcrvβ 免疫2号方

T细胞CTLA-4、tcrvβ8基因克隆、重组及表达

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西安交通大学学报（医学版） 2008年第4期29卷 404-408页

作者：王晶朱江朱本章马卫国西安交通大学医学院第一附属医院内分泌科陕西西安710061 陕西省第三人民医院陕西西安710061 西安医学院附属医院陕西西安710077

目的克隆Graves’病患者甲状腺组织T淋巴细胞的CTLA-4胞外段和tcrvβ8目的基因,重组为CTLA-4-tcrvβ8基因并表达出融合蛋白。方法RT-PCR从Graves病患者甲状腺组织中克隆T淋巴细胞的CTLA-4胞外段和tcrvβ8基因,依次与表达质粒进行连接,... 详细信息

目的克隆Graves’病患者甲状腺组织T淋巴细胞的CTLA-4胞外段和tcrvβ8目的基因,重组为CTLA-4-tcrvβ8基因并表达出融合蛋白。方法RT-PCR从Graves病患者甲状腺组织中克隆T淋巴细胞的CTLA-4胞外段和tcrvβ8基因,依次与表达质粒进行连接,双酶切及测序鉴定获得正确的重组子;原核表达融合蛋白,SDS-PAGE及Western-Blotting检测蛋白表达情况。结果基因克隆扩增出CTLA-4和tcrvβ8目的基因片段,测序结果证实序列与已发表的一致。重组基因原核表达出与预期分子质量大小相符的目的蛋白。结论成功构建和表达了CT-LA-4-tcrvβ8基因,为探索Graves’病免疫耐受治疗提供了基因产品。

关键词： Graves’病CTLA-4 tcrvβ 基因表达融合蛋白

乙肝疫苗免疫前后人tcrvβ基因亚家族取用表达的研究

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中国免疫学杂志 2002年第4期18卷 262-263,267页

作者：李菁华张学英李长城孙延波孙延波关显智黄树林吉林大学基础医学院病原生物学教研室长春130021 吉林大学中日联谊医院检验科长春130031 广东药学院分子生物学室广州510224

目的：研究Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）Ｖβ基因亚家族在免疫后的表达特征。方法：运用ＲＴ－ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　ｂｌｏｔ技术对乙肝疫苗免疫前后健康成年人ＴＣＲ　Ｖβ１－２０基因亚家族的表达水平迸行了半定量研究。结果：Ｖβ６... 详细信息

目的：研究Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）Ｖβ基因亚家族在免疫后的表达特征。方法：运用ＲＴ－ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　ｂｌｏｔ技术对乙肝疫苗免疫前后健康成年人ＴＣＲ　Ｖβ１－２０基因亚家族的表达水平迸行了半定量研究。结果：Ｖβ６、Ｖβ１４基因亚家族的表达增高；ＶＢ４、ＶＢ９基因亚家族的表达下调。结论：免疫后诱导产生了ＨＢｓＡｇ特异的Ｔ细胞应答，该结果为制定预防和治疗ＨＢＶ感染的免疫策略提供了新的依据。

关键词： tcrvβ HBsAg 免疫乙型肝炎乙肝疫苗

vMIP-Ⅱ对SIV感染的食蟹猴tcrvβ基因表达的影响

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免疫学杂志 2006年第6期22卷 604-607,611页

作者：郭钦丽王峰沙文琼莫雪梅李秀英许华张光孙晗笑暨南大学基因组药物研究所广州510632

目的检测感染SIV初期用病毒巨噬细胞炎症蛋白-Ⅱ(vMIP-Ⅱ)治疗的食蟹猴外周血T细胞tcrvβ优势表达,分析特异性Vβ亚家族表达水平的变化及T细胞克隆性质的改变。方法11只食蟹猴感染前后外周血PBMC样本共22例通过半定量RT-PCR技术分析其... 详细信息

目的检测感染SIV初期用病毒巨噬细胞炎症蛋白-Ⅱ(vMIP-Ⅱ)治疗的食蟹猴外周血T细胞tcrvβ优势表达,分析特异性Vβ亚家族表达水平的变化及T细胞克隆性质的改变。方法11只食蟹猴感染前后外周血PBMC样本共22例通过半定量RT-PCR技术分析其中14个tcrvβ亚家族T细胞的表达情况,运用基因扫描技术分析用药组与感染组差异表达的T细胞tcrvβ7亚家族基因中CDR3的长度了解其克隆性。结果与感染前正常食蟹猴外周血T细胞的14个tcrvβ亚家族中表达(除去表达量极低的10个亚家族)相比较,感染后SIV组中部分样品Vβ7、8、14、16的表达量与感染前比较有上升趋势;vMIP-Ⅱ组中tcrvβ亚家族的表达量上升更加明显。基因扫描结果显示感染前、后标本中Vβ7亚家族的表达由多克隆向寡克隆变化的趋势。结论体内实验研究表明,SIV感染初期的食蟹猴体内部分tcrvβ亚家族有特异性的增生,且克隆性发生改变。vMIP-Ⅱ对此种Vβ亚家族的表达的增生有促进的作用,推测其促使特异性应答的免疫细胞的增生。

关键词：病毒巨噬细胞炎症蛋白-Ⅱ tcrvβ RT-PCR 基因扫描

HLA-Ⅱ类基因和tcrvβ链在特应性皮炎的表达

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HLA-Ⅱ类基因和TCRVβ链在特应性皮炎的表达

作者：冀英天津医科大学

学位级别：硕士

目的：特应性皮炎(Atopic Dermatitise，AD)是一种慢性炎症性皮肤病，其发病机制复杂，本实验通过研究AD的HLA-Ⅱ类基因多态性及变应原诱导的tcrvβ链多态性表达，探讨其发病的分子免疫学机制。方法： 1、采用皮内点刺法对40名AD患者... 详细信息

目的：特应性皮炎(Atopic Dermatitise，AD)是一种慢性炎症性皮肤病，其发病机制复杂，本实验通过研究AD的HLA-Ⅱ类基因多态性及变应原诱导的tcrvβ链多态性表达，探讨其发病的分子免疫学机制。方法： 1、采用皮内点刺法对40名AD患者进行了皮肤过敏原测定，找出常见的过敏原。 2、用序列特异性引物聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)，对AD患者进行HLA-DRB等位基因分型，并计算了HLA-DRB基因分型的相对危险度，找出AD的易感基因和抗性基因。 3、用放射变应原吸附实验(Radioallergosorbent Test，RAST)检测所有患者血清抗h1 sIgE、抗d sIgE、抗d sIgE、抗mx sIgE、抗fx5E sIgE值，进行基因型和特异性抗原的相关性研究。 4、运用流式细胞仪检测特异性变应原诱导的tcrvβ链的多态性表达。结果： 1、过敏原检测：过敏原阳性率前四名依次为尘螨(45％)、尘土(37.5％)，混合吸入过敏原(30％)，春季花粉Ⅱ(22.5％)。 2、HLA-DRB等位基因分型检测：AD组的HLA-DR的基因频率高于对照组(p＜0.01)有统计学意义;HLA-DR的基因频率低于对照组(p＜0.05)有统计学意义。AD组HLA-DR的RR值是6.33＞4，说明HLA-DR与AD有较肯定的相关性。AD的HLA-DR的RR值为0.13＜1，说明HLA-DR是AD患者的抗性基因，具有HLA-DR的个体较不易患AD。 3、40例患者中有HLA-DR阳性表达的有16例，其中1例抗hsIgE阳性、3例抗dsIgE阳性、12例抗dsIgE阳性、1例抗mxsIgE阳性、4例抗fxEsIgE阳性，HLA-DR阳性患者中抗dsIgE阳性率比HLA-DR阴性患者中抗dsIgE阳性率高(p＜0.05)。 4、不论是AD组还是健康对照组外周血淋巴细胞经尘螨抗原刺激前后tcrvβ的表达量均无明显差异(p＞0.05)无统计学意义。但是AD组tcrvβ18T细胞的表达量在尘螨刺激后(2.19±2.04)较刺激前有明显的增高(1.26±1.49)，增长了1.5倍以上。其中一名患者tcrvβ18的基础表达值为0.56％，尘螨抗原刺激后表达量上升到3.99％。而tcrvβ18T细胞单纯受分裂素(PHA)刺激后表达量无明显改变(1.53±2.05)。结论： 1、尘螨是AD患者最常见的过敏原，是导致AD加重的常见过敏因素。 2、AD组的HLA-DR的基因频率高于对照组;而HLA-DR的基因频率低于对照组。HLA-DR是AD的易感基因，HLA-DR是AD的抗性基因。 3、AD组的易感基因HLA-DR与抗dsIgE有相关性(p＜0.05)，提示了尘螨抗原很可能是被抗原呈递细胞呈递后，与HLA-DR形成特异性复合物，进一步刺激T细胞的分化，导致机体免疫失调。 4、经尘螨抗原刺激后AD组tcrvβ18T细胞表达量较刺激前增高，tcrvβ18T细胞可能在尘螨诱发AD中起一定作用。

关键词：特应性皮炎尘螨 HLA-DR IgE tcrvβ

vMIP-Ⅱ对SIV感染的食蟹猴tcrvβ基因表达和T细胞增殖影响的探讨

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vMIP-Ⅱ对SIV感染的食蟹猴TCRVβ基因表达和T细胞增殖影响的探讨

作者：郭钦丽暨南大学

学位级别：硕士

目的:本室通过基因重组的方法克隆的vMIP-Ⅱ属于β趋化因子家族,具有广谱的趋化因子受体结合活性,可与CC类和CXC类趋化因子受体结合以阻止HIV病毒感染CD4+细胞。检测感染SIV初期用药的食蟹猴外周血T细胞tcrv β优势表达和克隆性分布情况... 详细信息

目的:本室通过基因重组的方法克隆的vMIP-Ⅱ属于β趋化因子家族,具有广谱的趋化因子受体结合活性,可与CC类和CXC类趋化因子受体结合以阻止HIV病毒感染CD4+细胞。检测感染SIV初期用药的食蟹猴外周血T细胞tcrv β优势表达和克隆性分布情况,了解不同分组内tcrv β基因优势表达差异和克隆性分布的趋势,通过分析特异性tcrv β亚家族表达水平的变化及T细胞克隆性的改变,了解药物对食蟹猴的体内免疫状况的影响,对于评价药物疾病的疗效是一个客观的指标。方法:11只食蟹猴感染前后外周血PBMC样本通过半定量RT—PCR技术分析其中14个tcrv β亚家族T细胞的表达情况,并运用高敏感性的基因扫描技术分析用药组与感染组相比差异表达的T细胞tcrv β 7亚家族基因中CDR3长度变化,通过GENOTYPER2.0软件分析从而了解其克隆性。结果:与感染前正常食蟹猴外周血T细胞的14个tcrv β亚家族中表达(除去表达量极低的10个亚家族)相比较,感染后17天三组食蟹猴外周血14个tcrvβ亚家族都有表达,未出现表达缺失。感染后SIV组中部分样品V β 7,8,14,16的表达量与感染前比较有上升趋势;vMIP-Ⅱ组中tcrv β亚家族的表达量的变化趋势与SIV组相似,表达量上升更加明显。治疗组中tcrv β亚家族的表达量的变化与正常对照组比较,V β 7、8的表达量上升。基因扫描结果显示感染前6个标本中V β 7亚家族的表达为多克隆的,感染后V β 7家族的表达则有寡克隆的趋势,部分为寡克隆性的。结论:体内实验研究表明SIV感染初期的食蟹猴体内部分tcrv β亚家族的表达量有所变化,一些V β亚家族有特异性的增生,且增生的tcrv β亚家族克隆性发生改变,提示其可能为针对病毒的特异性增生。vMIP-Ⅱ对此种V β亚家族的表达的增生有促进的作用,推测其对免疫系统的应答有增强的作用,促使特异性应答的免疫细胞的增生。

关键词：病毒巨噬细胞炎症蛋白-Ⅱ PBMCs tcrvβ RT-PCR CDR3 基因扫描

超抗原TSST-1之靶tcrvβHV4序列的特征分析

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上海免疫学杂志 1998年第3期18卷 150-151页

作者：胡伟钢朱锡华吴玉章贾正才第三军医大学免疫学教研室重庆400038

首先对人和小鼠的tcrvβ的氨基酸序列进行多序列对准,就Vβ之HV4片段进行比较,分析与超抗原TSST-1结合的四种Vβ（小鼠Vβ3、Vβ15、Vβ17和人Vβ2）之HV4序列内是否存在特定的氨基酸残基排列主型。结果发现:小鼠Vβ3和Vβ17的HV4具有... 详细信息

首先对人和小鼠的tcrvβ的氨基酸序列进行多序列对准,就Vβ之HV4片段进行比较,分析与超抗原TSST-1结合的四种Vβ（小鼠Vβ3、Vβ15、Vβ17和人Vβ2）之HV4序列内是否存在特定的氨基酸残基排列主型。结果发现:小鼠Vβ3和Vβ17的HV4具有特异的RFSAXCXSNS主型,而小鼠Vβ15和人β2的HV4则含独特的KFXIXH主型。提示:与TSST-1结合的四种Vβ所对应的T细胞识别表位可能不止一个。

关键词：超抗原 TSST-1 tcrvβ HV4 序列分析

获得性再生障碍性贫血患者外周血T细胞表型及TCR Vβ亚家族分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第2期27卷 133-134页

作者：傅晋翔张勇黄海雯孙谕张晓惠陈萍苏州大学附属第二医院 215004

采用抗胸腺细胞球蛋白（ATG）和环胞菌A（CyA）为主的治疗方案，约50％～75％的再生障碍性贫血（AA）患者可获缓解，鉴此，患者体内异常活化的淋巴细胞在本病的发生发展起关键作用。本研究采用定量PCR技术（Q-PCR）测定了从患者T细胞抗... 详细信息

采用抗胸腺细胞球蛋白（ATG）和环胞菌A（CyA）为主的治疗方案，约50％～75％的再生障碍性贫血（AA）患者可获缓解，鉴此，患者体内异常活化的淋巴细胞在本病的发生发展起关键作用。本研究采用定量PCR技术（Q-PCR）测定了从患者T细胞抗原受体（TCR）的25对Vβ等位基因，对比分析其它自身免疫性疾病的tcrvβ变化，探讨免疫功能在从发病中的作用。

关键词：再生障碍性贫血患者 Vβ亚家族 tcrvβ T细胞表型外周血获得性抗胸腺细胞球蛋白 T细胞抗原受体