检索结果-南通市图书馆

国际肿瘤学杂志 2009年第8期36卷 563-565页

作者：孙萍胡(综述) 吴云林(审校) 涂水平(审校) 上海交通大学附属瑞金医院消化科 200025

利用特异性启动子介导的基因治疗是肿瘤靶向性治疗的一种有效途径。survivin启动子既有肿瘤细胞的靶向性，又有增殖性血管内皮细胞的靶向性，且能有效介导目的基因表达，展示了其在肿瘤靶向性治疗研究中的良好前景。

关键词： survivin启动子肿瘤基因疗法

survivin启动子驱动Trail诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

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胃肠病学和肝病学杂志 2010年第8期19卷 708-710页

作者：陈培生陈村龙雷姗毛正果王继德程天明广东省胃肠疾病重点实验室南方医科大学南方医院消化科广东广州510515

目的了解survivin启动子在HepG2肝癌细胞与3T3细胞中诱导Trail蛋白表达能力的差异,并评价其驱动Trail诱导肝癌细胞凋亡的能力。方法以pGL3-surp340质粒为模板,扩增survivin340启动子,构建重组质粒pcDNA3.1/SurP/Trail。将重组质粒分别转... 详细信息

目的了解survivin启动子在HepG2肝癌细胞与3T3细胞中诱导Trail蛋白表达能力的差异,并评价其驱动Trail诱导肝癌细胞凋亡的能力。方法以pGL3-surp340质粒为模板,扩增survivin340启动子,构建重组质粒pcDNA3.1/SurP/Trail。将重组质粒分别转染HepG2肝癌细胞和3T3细胞,通过Western Blot检测两种细胞中Trail蛋白表达的差异。利用流式细胞术检测HepG2肝癌细胞及3T3细胞转染重组质粒pcDNA3.1/SurP/Trail后细胞凋亡的情况。结果成功构建了重组质粒pcDNA3.1/SurP/Trail,转染HepG2和3T3两种细胞后,通过Western Blot检测,HepG2肝癌细胞Trail蛋白表达的相对灰度值为0.49±0.43,较3T3细胞Trail蛋白表达(0.15±0.37)明显增强(Psurvivin基因启动子的重组质粒pcDNA3.1/SurP/Trail在肿瘤细胞中能增强Trail蛋白的表达,并能诱导HepG2肝癌细胞凋亡。

关键词： survivin启动子 pcDNA3.1/SurP/Trail 质粒构建肝癌细胞凋亡

survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒对人膀胱癌细胞BIU87生长的影响

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中国中西医结合外科杂志 2012年第4期18卷 375-379页

作者：严泽军程跃蒋军辉胡嘉盛施小东黄坚成宁波大学医学院附属宁波市第一医院泌尿外科宁波315000

目的:构建survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒Ad-Surp-LRIGl,并检测其对人膀胱癌细胞BIU87生长的影响。方法:将经同源重组产生的重组腺病毒Ad-Surp-LRIGl在293细胞中大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化,测其滴度。用Ad-S... 详细信息

目的:构建survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒Ad-Surp-LRIGl,并检测其对人膀胱癌细胞BIU87生长的影响。方法:将经同源重组产生的重组腺病毒Ad-Surp-LRIGl在293细胞中大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化,测其滴度。用Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl分别感染人膀胱癌细胞BIU87及人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1,MTT法评估Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl对BIU87细胞生长的抑制作用。结果:当感染复数(MOI)=25时,Ad-Surp-LRIGl在BIU87细胞中的转染效率为74.56%,在SV-HUC-1细胞中转染率为0,差异有统计学意义(χ2=58.64,P0.05)。Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl在BIU87细胞中的转染效率相比,差异无统计学意义(χ2=0.016,P>0.05)。与PBS相比,Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl均能明显抑制BIU87细胞的生长,转染后第4天这一差异显著(F=15.96,Psurvivin启动子驱动LRIG1基因的重组复制腺病毒Ad-Surp-LRIGl并鉴定正确,Ad-Surp-LRIGl能选择性转染人膀胱癌细胞BIU87,在体外能明显抑制膀胱癌细胞BIU87的生长。

关键词：膀胱肿瘤 survivin启动子 LRIG1基因基因治疗

survivin启动子驱动的LRIG1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

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现代实用医学 2012年第2期24卷 133-135页

作者：严泽军程跃蒋军辉胡嘉盛施小东黄坚成宁波市第一医院宁波315010

目的构建含survivin启动子和LRIG1基因的重组复制缺陷型腺病毒并进行鉴定,为肿瘤基因治疗的研究奠定基础。方法应用分子克隆技术将survivin启动子连接至pLRIGl-GFP上构建出pEGFP-Surp-LRIGl,将其与含有5型腺病毒右臂的质粒Pbhge3通过Lip... 详细信息

目的构建含survivin启动子和LRIG1基因的重组复制缺陷型腺病毒并进行鉴定,为肿瘤基因治疗的研究奠定基础。方法应用分子克隆技术将survivin启动子连接至pLRIGl-GFP上构建出pEGFP-Surp-LRIGl,将其与含有5型腺病毒右臂的质粒Pbhge3通过Lipofectamine2000共转染至人胚肾293细胞,经同源重组产生重组腺病毒Ad-Surp-LRIGl。Ad-Surp-LRIGl在人胚肾293细胞中大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化,测其滴度。结果 pEGFP-Surp-LRIGl经酶切鉴定正确,扩增得到的Ad-Surp-LRIGl经PCR扩增证实为survivin启动子驱动的LRIG1重组腺病毒,滴度为2.3×1010pfu/ml。结论成功构建出含有Sur-vivin启动子和LRIG1基因的重组复制缺陷型腺病毒并鉴定正确,可用于下一步膀胱癌基因治疗的研究中。

关键词：腺病毒载体 survivin启动子 LRIG1基因基因治疗

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survivin启动子的真核表达载体构建

湖北民族学院学报（医学版） 2009年第2期26卷 1-3,F0003页

作者：袁成福湖北民族学院医学院湖北恩施445000

目的构建以survivin启动子驱动增强绿色荧光蛋白(EGFP)表达的真核表达载体pEGFP-C1/Surv。方法用PCR扩增survivin启动子,构建其真核表达载体并检测survivin启动子的活性。结果PCR成功扩增出survivin启动子,其真核表达载体构建成功。结论... 详细信息

目的构建以survivin启动子驱动增强绿色荧光蛋白(EGFP)表达的真核表达载体pEGFP-C1/Surv。方法用PCR扩增survivin启动子,构建其真核表达载体并检测survivin启动子的活性。结果PCR成功扩增出survivin启动子,其真核表达载体构建成功。结论survivin启动子能驱动EGFP的表达,证明其具有活性。

关键词： survivin启动子真核表达载体

survivin启动子控制自杀基因HSV-TK真核表达载体对肝癌细胞杀伤活性的研究

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中华临床医师杂志（电子版） 2016年第2期10卷 229-233页

作者：李勇芳张英敏赵娜孟凡秀张琪高然朋张悦红于保锋郭睿王海龙解军徐钧山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室太原030001 山西医科大学附属山西省肿瘤医院普外科太原030013

目的研究自杀基因单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)对人肝癌细胞的特异性杀伤作用,推进该自杀基因治疗原发性肝癌的可行性,从而为肝癌靶向基因治疗奠定一定的基础。方法将pc DNA3.1-p survivin-TK质粒转染人肝癌细胞Hep G2中,RT-PCR法检测... 详细信息

目的研究自杀基因单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)对人肝癌细胞的特异性杀伤作用,推进该自杀基因治疗原发性肝癌的可行性,从而为肝癌靶向基因治疗奠定一定的基础。方法将pc DNA3.1-p survivin-TK质粒转染人肝癌细胞Hep G2中,RT-PCR法检测自杀基因m RNA水平,Western blot法检测自杀基因蛋白量的表达;再次转染上述质粒到肝癌细胞Hep G2中,随着更昔洛韦(GCV)剂量的增加,来监测pc DNA3.1-p survivin-TK重组载体对细胞的杀伤效果,CCK-8法检测GCV对肝癌细胞的毒性作用,流式细胞术检测细胞凋亡的情况。结果通过RT-PCR法、Western blot法表明了转染该重组质粒的Hep G2细胞可以成功表达TK基因;此外,在外源药物GCV作用下也实现了对肝癌细胞的特异杀伤,CCK-8法表明,随着药物浓度的增高质粒转染组细胞存活率逐渐下降;流式细胞术检测得知,细胞经GCV处理48 h后,转染pc DNA3.1-p survivin-TK重组质粒的肝癌细胞组凋亡率约为(37.37±4.02)%,而未转染质粒组细胞凋亡率约为(1.00±0.62)%,两组间比较有统计学差异(P<0.01)。结论 HSV-TK/GCV自杀基因的毒性作用随着GCV浓度的增高而上升,并且HSV-TK/GCV系统对人肝癌细胞具有特异性靶向杀伤作用。

关键词：胸苷激酶阳离子脂质体肝癌细胞 survivin启动子基因治疗

survivin启动子驱动腺病毒介导LRIG1基因治疗前列腺癌的体外实验

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现代泌尿外科杂志 2012年第5期17卷 443-445页

作者：潘东亮张录芳晋连超杨冰张祥华那彦群北京大学首钢医院吴阶平泌尿外科医学中心北京100144 潍坊市人民医院泌尿外科山东潍坊261041

目的由于去势抵抗性前列腺癌(CRPC)缺乏有效治疗方法,因此催生了探索新治疗模式的需求,其中靶向基因治疗可能是治疗CRPC的较理想模式;但是CRPC的靶向性基因治疗尚没有受到应有的关注。本课题拟研究survivin启动子驱动的重组腺病毒Ad-Sur... 详细信息

目的由于去势抵抗性前列腺癌(CRPC)缺乏有效治疗方法,因此催生了探索新治疗模式的需求,其中靶向基因治疗可能是治疗CRPC的较理想模式;但是CRPC的靶向性基因治疗尚没有受到应有的关注。本课题拟研究survivin启动子驱动的重组腺病毒Ad-Surp-LRIGl对前列腺癌细胞株的体外治疗效果。方法用Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl分别感染人前列腺癌细胞PC-3M及人前列腺上皮细胞CRL-11609RWPE-1,根据报告基因EGFR表达的不同计算病毒的细胞转染率。MTT法评估Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl对PC-3M细胞生长的抑制作用。结果当MOI=25时,Ad-Surp-LRIGl在PC-3M细胞中的转染效率为81.24%,在CRL-11609RWPE-1细胞中转染率为0,在两种细胞内的转染率比较差异有显著性意义(χ2=65.18,P=0.000);Ad-LRIGl在PC-3M细胞中的转染效率为77.22%,在CRL-11609RWPE-1细胞中转染率为71.68%,转染率比较差异无显著性意义(χ2=0.051,P=0.802)。Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl在PC-3M细胞中的转染率相比,差异无显著性意义(χ2=0.013,P=0.796)。在常规培养1d后PBS组的细胞生长速度即开始超过Ad-Surp-LRIGl组和Ad-LRIGl组细胞,4d后细胞生长速度差异显著(χ2=15.37,P=0.001),而Ad-Surp-LRIGl组和Ad-LRIGl组细胞生长速度无明显差异。结论 Ad-Surp-LRIGl能选择性转染人前列腺癌细胞PC-3M,能明显抑制体外前列腺癌细胞的生长。

关键词：前列腺癌腺病毒 survivin启动子 LRIG1基因治疗

survivin启动子调控siRNA真核表达载体的构建及对HeLa细胞中stathmin基因的干涉作用

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现代肿瘤医学 2007年第12期15卷 1720-1723页

作者：王燕吴冰苏海川高萍林芳刘丽任继鸿赵辉张惠中第四军医大学唐都医院陕西西安710038

目的:探讨survivin基因启动子调控的siRNA真核表达载体对HeLa细胞中stathmin基因表达的肿瘤特异性封闭作用。方法:合成针对人stathmin基因的siRNA cDNA寡核苷酸链退火形成双链,连接入经BamHI和HindIII双酶切后的pSilencer4.1-CMV neo真... 详细信息

目的:探讨survivin基因启动子调控的siRNA真核表达载体对HeLa细胞中stathmin基因表达的肿瘤特异性封闭作用。方法:合成针对人stathmin基因的siRNA cDNA寡核苷酸链退火形成双链,连接入经BamHI和HindIII双酶切后的pSilencer4.1-CMV neo真核表达载体。PCR扩增suvivin基因启动子并测序,用EcoRI和BamHI分别双酶切,连接至经相同内切酶消化的载体,获得survivin启动子调控的siRNA真核表达载体,酶切及测序鉴定。脂质体法转染重组质粒入HeLa细胞,G418筛选。RT-PCR扩增stathmin基因,检测其对stathmin基因表达的干涉效果;流式细胞仪分析转染后HeLa细胞增殖周期的改变。结果:经酶切及测序鉴定,成功构建重组质粒;RT-PCR结果显示所构建的干涉载体可有效封闭stathmin基因表达;流式细胞仪分析结果显示,Hale细胞在stathmin siRNA作用下G2/M期细胞的比例明显增加。结论:survivin基因启动子调控的siRNA真核表达载体可有效地封闭HeLa细胞中stathmin基因表达并使HeLa细胞阻断于G2/M期,为以stathmin基因为靶点的恶性肿瘤生物治疗奠定了理论基础。

关键词： survivin启动子 stathmin RNA干涉真核表达载体 HeLa细胞

survivin启动子调控的hTERT基因shRNA表达载体的构建及对肿瘤特异性靶向作用研究

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Survivin启动子调控的hTERT基因shRNA表达载体的构建及对肿瘤特异...

含survivin启动子条件复制型腺病毒的构建及其对前列腺癌抑瘤效应的体外研究

中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会

作者：曾永秋赵矫刘岚余红陈绍坤税青林泸州医学院医学细胞生物学与遗传学教研室

人端粒酶逆转录酶(hTERT)是端粒酶的核心组分,与包括乳腺癌、肝癌等在内的多种肿瘤的发生、发展密切相关,研究表明抑制其表达可有效地抑制肿瘤细胞增殖并促进肿瘤细胞凋亡。但除了90%的肿瘤细胞,人类的少数正常细胞如正常胚胎细胞、生... 详细信息

人端粒酶逆转录酶(hTERT)是端粒酶的核心组分,与包括乳腺癌、肝癌等在内的多种肿瘤的发生、发展密切相关,研究表明抑制其表达可有效地抑制肿瘤细胞增殖并促进肿瘤细胞凋亡。但除了90%的肿瘤细胞,人类的少数正常细胞如正常胚胎细胞、生殖细胞、干细胞、活化的白细胞等亦具有端粒酶活性,端粒酶的表达对这些细胞的分裂和增殖同样具有重要意义。RNAi虽然能够高效地抑制基因的表达,但缺乏特异性。为了让RNAi在有效抑制肿瘤细胞中端粒酶活性的同时,对正常细胞无影响,本研究构建了带有肿瘤特异性survivin启动子、针对hTERT基因的shRNA表达载体pYr-survivin-miR30-hTERT,探讨该载体的肿瘤靶向性及对肿瘤细胞生长增殖的影响。文章分别用针对hTERT基因的RNA干扰寡核苷酸序列及survivin启动子取代质粒pYr-Micro30中原有的miR30序列及CMV启动子,构建pYr-survivin-miR30-hTERT载体并进行酶切及测序鉴定,同法构建CMV对照组质粒pYr-CMV-miR30-hTERT及阴性对照组质粒pYr-miR30-NC。将以上载体分别转染人乳腺癌MCF-7细胞、肝癌HEPG-2细胞及293T细胞,并设立survivin实验组、CMV对照组、阴性对照组和空白组,荧光显微镜下观察各种细胞的荧光表达情况,RT-PCR及western blot法检测肿瘤细胞中各组hTERT mRNA和蛋白的表达情况,CCK-8检测各组肿瘤细胞的生长增殖情况。重组质粒经酶切及测序鉴定证实符合设计要求,构建成功;荧光结果表明,与对照组相比,survivin实验组质粒仅在两种肿瘤细胞中表达绿色荧光,转染效率为70%左右,而在293T细胞中则未见荧光细胞,RT-PCR和western blot的结果均显示两种肿瘤细胞的survivin实验组和CMV对照组中hTERT mRNA和蛋白的表达均受到明显抑制(Psurvivin实验组和CMV对照组增殖抑制明显(Psurvivin启动子调控的hTERT基因的shRNA表达载体能有效抑制survivin阳性肿瘤细胞中hTERT的表达,抑制细胞生长,而对正常细胞不产生影响。

关键词： survivin启动子 hTERT基因 RNAi 肿瘤特异性

来源： cnki会议评论

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临床泌尿外科杂志 2011年第7期26卷 488-492页

作者：文博李晓铭黄丽兴黄小佳李春冯海航余贵亮深圳市宝安人民医院泌尿外科广东深圳518101

目的:构建携带有survivin启动子和报告基因的条件复制型腺病毒并观察该病毒对前列腺癌细胞的特异性溶瘤作用。方法:以前列腺癌细胞系LNCaP细胞全基因组DAN为模板.PCR扩增survivin启动了,构建pGL3Bsurvivin质粒表达载体,荧光素酶检测系... 详细信息

目的:构建携带有survivin启动子和报告基因的条件复制型腺病毒并观察该病毒对前列腺癌细胞的特异性溶瘤作用。方法:以前列腺癌细胞系LNCaP细胞全基因组DAN为模板.PCR扩增survivin启动了,构建pGL3Bsurvivin质粒表达载体,荧光素酶检测系统观察查列腺癌细胞中survivin启动子活性。将pGL3Bsurvivin亚克隆至穿梭质粒pShuule中,构建含有survivin启动子的重组腺病毒reADGL3Bsurvivin。转染HEK293细胞进行重组病毒的扩增、纯化和滴度检测。利用CCK- 8法检测重组腺病毒对前列腺癌细胞的生长抑制作用,以正常前列腺细胞为对照。结果:经多种限制性内切酶酶切、PCR及测序鉴定,证实成功构建了含survivin启动子报告基因质粒表达载体。荧光素酶报告基因检测结果表明前列腺癌细胞内survivin启动子活性明显高于正常细胞组。同时也证实成功构建了含survivin启动子和报告基因的腺病毒载体;CCK-8结果显示reADGL3Bsurvivin可有效抑制前列腺癌细胞增殖而对正常细胞无增殖抑制作用。结论:成功构建含survivin启动子的条件复制型腺病毒具有选择性杀伤前列腺癌细胞的能力,实验结果为前列腺癌靶向治疗提供了良好的条件复制型病毒载体及新的治疗策略。

关键词：前列腺肿瘤 survivin启动子条件复制型腺病毒