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作者：王鹏翔昆明医科大学

学位级别：硕士

【目的】研究新生鼠缺血缺氧性脑损伤(Hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)后星形胶质细胞中S100B/RAGE信号相关蛋白(S100B、s RAGE、RAGE)、smad 3蛋白以及不同表型反应性星形胶质细胞(A1和A2型)和炎性因子、营养因子的表达变化,研究S... 详细信息

【目的】研究新生鼠缺血缺氧性脑损伤(Hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)后星形胶质细胞中S100B/RAGE信号相关蛋白(S100B、s RAGE、RAGE)、smad 3蛋白以及不同表型反应性星形胶质细胞(A1和A2型)和炎性因子、营养因子的表达变化,研究S100B/RAGE与smad 3之间的调节关系,探讨天麻素通过S100B/RAGE-smad 3信号在缺血缺氧性脑损伤中的保护作用机制,为新生儿缺血缺氧性脑损伤的防治提供新的思路。【方法】本研究采用新生10 d C57BL/6J小鼠和体外培养的TNC-1星形胶质细胞,通过体内复制HIBD模型和体外氧糖剥夺模型(oxygen glucose deprivation,OGD)诱导TNC-1星形胶质细胞进行实验。第一部分:86只小鼠随机分为三组:假手术组(Sham)、HIBD模型组(HIBD)、HIBD+天麻素(100 mg/kg)组(HIBD+GAS)。通过Zea-Longa评分、抓握实验和负向趋地实验检测神经功能缺损;ELISA检测各实验组脑组织匀浆和血浆中S100B和s RAGE的蛋白表达;采用Western blot和免疫荧光双标染色检测各实验组星形胶质细胞RAGE、C3、S100A10、TNF-α、BDNF、smad 3、p-smad 3的表达,研究HIBD后S100B/RAGE-smad 3相关蛋白在星形胶质上的表达及天麻素对其的影响。第二部分:将TNC-1细胞分为对照组(Control)、氧糖剥夺组(OGD)、氧糖剥夺+天麻素(0.34 m M)干预组(OGD+GAS)、天麻素单独干预组(GAS)。采用Western blot和免疫荧光双标染色检测各实验组TNC-1细胞RAGE、C3、S100A10、TNF-α、BDNF、p-smad 3的表达,研究OGD刺激对RAGE信号、不同表型反应性星形胶质细胞和炎症相关蛋白的影响。第三部分:将TNC-1细胞分为六组:对照组(Control)、氧糖剥夺组(OGD)、氧糖剥夺+FPS-ZM1(100 n M)干预组(OGD+FPS-ZM1)、氧糖剥夺+天麻素(0.34 m M)干预组(OGD+GAS)、氧糖剥夺+天麻素+FPS-ZM1干预组(OGD+GAS+FPS-ZM1)。采用Western blot检测各实验组、p-smad 3/smad 3、TNF-α、BDNF、C3、S100A10的表达,研究RAGE信号对smad 3蛋白和不同表型反应性星形胶质细胞的作用及天麻素干预对其的影响。【结果】第一部分,(1)通过TTC染色和行为学实验结果显示:与Sham组相比,HIBD组出现明显梗死病灶,小鼠Zea-Longa评分升高(P3)Western-blot和免疫荧光双标染色显示:小鼠HIBD后星形胶质细胞激活,RAGE、C3、S100A10、TNF-α、BDNF表达较Sham组显著升高(Psmad 3磷酸化程度升高(P3、TNF-α表达显著降低(Psmad 3磷酸化程度下降(Psmad 3、C3、S100A10表达较Control组显著升高(Psmad 3、C3表达显著降低(Psmad 3的激活,抑制TNF-α、C3和S100A10(P3的表达(P0.05)。【结论】(1)新生鼠HIBD后胼胝体区反应性星形胶质细胞S100B/RAGE和smad

关键词： S100B/RAGE smad 3 缺血缺氧性脑损伤星形胶质细胞天麻素

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TGF-β1/smad 3信号转导通路对皮肤成纤维细胞调控作用的研究

TGF-β1/Smad 3信号转导通路对皮肤成纤维细胞调控作用的研究

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美丽人生和谐世界——中华医学会第七次全国医学美学与美容学术年会、中华医学会医学美学与美容学分会20周年庆典暨第三届两岸四地美容医学学术论坛

作者：熊杰余文林肖强曾东李勤广州军区广州总医院整形外科全军激光整形中心

目的探讨TGF-β1/smad 3信号转导通路对皮肤成纤维细胞的具体调控作用及其机制。方法将原代分离培养并经过鉴定的小鼠皮肤成纤维细胞(野生型和smad 3 KO型)分为六组:野生型FB组、野生型FB+TGF-β1组、野生型FB+SB 431542组、野生型FB+SB... 详细信息

目的探讨TGF-β1/smad 3信号转导通路对皮肤成纤维细胞的具体调控作用及其机制。方法将原代分离培养并经过鉴定的小鼠皮肤成纤维细胞(野生型和smad 3 KO型)分为六组:野生型FB组、野生型FB+TGF-β1组、野生型FB+SB 431542组、野生型FB+SB 431542+TGF-β1组、smad 3 KO FB组和smad3 KO FB+TGF-β1组。各组细胞经同步化处理后,直接以TGF-β1刺激或经SB 431542预处理后再以TGF-β1刺激。收集细胞抽提总RNA,以实时荧光定量RT-PCR检测TGF-β1、smad 3、PCNA、MMP 2、MMP 9和TIMP-1的变化情况,细胞培养液上清经离心超滤浓缩后进行明胶酶谱分析,检测MMP-2和MMP-9的活性。结果 TGF-β1促进成纤维细胞中TGF-β1、smad3、PCNA、MMP 2、MMP 9的表达,抑制TIMP-1表达;抑制smad 3可显著增加MMP 2和MMP 9的表达并降低TIMP-1表达。结论 smad 3抑制TGF-β1的自身正反馈,参与促进成纤维细胞增殖的信号途径,同时还对MMP 2/9的表达起负向调控作用而对TIMP-1起正向调控作用。

关键词：转化生长因子β1 smad 3 成纤维细胞创面愈合基因敲除 SB 431542

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定坤丹通过microRNA-30d-5p靶向调控卵巢组织smad 2治疗多囊卵巢综合征模型大鼠的机制研究

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中国实用妇科与产科杂志 2024年第8期40卷 849-854页

作者：陈兰杨波罗立波颜晓静王地均蔡佳丽尹春燕常州市中医医院江苏常州213003 广誉远中药股份有限公司山西太原030000

目的通过观察定坤丹对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)模型大鼠卵巢组织形态学、血清性激素水平、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、smad 2、smad 3和microRNA-30d-5p表达的影响,进而探讨其通过microRNA-30d-5p靶向调控卵巢组织中smad2治疗PCOS模型大鼠的作用机制。方法应用高、中、低剂量定坤丹[4.5、2.25、1.125 g/(kg·d)]干预脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)诱导的PCOS大鼠模型,采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、苏木精-伊红(hematoxylineosin,HE)染色、免疫组化、实时聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)及Western blot等方法检测各组大鼠卵巢组织形态学、血清性激素水平、microRNA-30d-5p的表达及TGF-β1、smad 2、smad 3 m RNA及蛋白的表达。结果与模型大鼠组相比较,定坤丹高、中、低剂量组卵巢分布有各级卵泡,可见较多黄体;雌二醇(estradiol,E_(2))、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)及睾酮(testosterone,T)均下降,卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)则升高,且差异均具有统计学意义;microRNA-30d-5p的表达升高,且差异均具有统计学意义;TGF-β1、smad 2及smad 3的mRNA及蛋白表达均下降,且差异均具有统计学意义。结论DHEA诱导的PCOS大鼠模型是研究PCOS排卵障碍较为理想的动物模型。定坤丹对PCOS大鼠有一定治疗作用,其机制可能是通过microRNA-30d-5p靶向调控卵巢组织中smad 2的表达水平来实现。

关键词：多囊卵巢综合征定坤丹转化生长因子β1 smad 2 smad 3 microRNA-30d-5p

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Erbin在TGF-β信号通路介导的胰腺星状细胞（PSC）EMT改变中的表达

Erbin在TGF-β信号通路介导的胰腺星状细胞（PSC）EMT改变中的表达

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作者：赵朕华第二军医大学

学位级别：硕士

第一部分组织块法分离培养小鼠PSC目的:利用组织块法分离培养CP模型组和对照组PSC,并分析两组分选细胞的差异。方法:雨蛙素诱导制备小鼠CP模型,HE染色观察胰腺纤维化改变;取CP组和对照组小鼠胰腺组织,胎牛血清清洗,剪切至小米粒大小贴... 详细信息

第一部分组织块法分离培养小鼠PSC目的:利用组织块法分离培养CP模型组和对照组PSC,并分析两组分选细胞的差异。方法:雨蛙素诱导制备小鼠CP模型,HE染色观察胰腺纤维化改变;取CP组和对照组小鼠胰腺组织,胎牛血清清洗,剪切至小米粒大小贴壁培养,观察两组细胞及传代前后细胞形态学差异,采用油红O染色鉴定静息态PSC,免疫细胞化学/荧光法标记α-SMA和Desmin,荧光定量PCR对比静息和活化PSCα-SMA和Desmin的m RNA表达量;利用免疫细胞化学/荧光法标记胰腺导管细胞标志物CK19和SOX9,及腺泡细胞标志物Chymotrypsin和Amylase。结果:(1)HE染色:造模组胰腺发生纤维化改变,腺泡细胞导管化;(2)形态学观察:贴壁4天细胞多呈类圆形或星形,核周环绕脂滴,传代细胞体积增大,立体感消失,呈“星芒状”,脂滴消失,CP组细胞形态体积小于对照组;(3)油红O染色:CP组和对照组早期细胞均染色,传代细胞未着色;(4)免疫细胞化学/荧光:两组细胞传代后,α-SMA和Desmin标记均阳性,CK19、SOX9、Chymotrypsin、Amylase标记均阴性;(5)荧光定量PCR:对照组传代细胞和CP组细胞α-SMA m RNA含量明显高于对照组早期细胞。结论:组织块法可成功分选CP模型组和对照组PSC,且两组贴壁早期细胞均为静息状态。第二部分Erbin及TGF-β1在CP模型组和对照组PSC中的表达差异目的:探讨Erbin及TGF-β1在CP模型组和对照组PSC中的表达差异方法:采用雨蛙素腹腔注射法制备CP模型鼠,组织块法分离提取PSC,运用荧光定量PCR和Western blot技术比较CP组和对照组PSC中Erbin及TGF-β1m RNA和蛋白表达量的差异。结果:(1)CP组Erbin表达较对照组显著升高,其转录水平为对照组的6.36倍,蛋白水平为对照组的6.79倍,P3.99倍和1.43倍,P33:1)和蛋白(0.07:1)表达均下调(P3.40:1)表达均上调(P3)荧光定量PCR结果示,TGF-β1处理细胞Erbin(13.03倍)、TGF-β1(2.94倍)及其下游的smad 3(2.08倍)和ERK(2.99倍)m RNA均表达增加(Psmad 3及ERK蛋白表达均升高,分别为未处理细胞的2.28倍、1.30倍、3.15倍及1.73倍(Psmad通路及ERK通路靶点分子表达,参与胰腺纤维化的形成。

关键词：组织块法胰腺星状细胞(PSC) 分离鉴定慢性胰腺炎(CP) Erbin TGF-β1 EMT smad 3 ERK

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宫腔粘连大鼠模型的构建以及二甲双胍对模型大鼠生育能力的改善作用

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广西医学 2021年第1期43卷 62-66页

作者：江梅姜经航邵帅王洋丁涛湖北省荆门市第二人民医院生殖医学中心荆门市448000

目的构建大鼠宫腔粘连模型,并探讨二甲双胍对宫腔粘连大鼠生育能力的改善作用。方法(1)取30只SD雌性大鼠随机分为对照组和造模组各15只,其中造模组采用刮宫联合感染法构建宫腔粘连大鼠模型。于造模后第7天、第14天以及第21天,取各组大... 详细信息

目的构建大鼠宫腔粘连模型,并探讨二甲双胍对宫腔粘连大鼠生育能力的改善作用。方法(1)取30只SD雌性大鼠随机分为对照组和造模组各15只,其中造模组采用刮宫联合感染法构建宫腔粘连大鼠模型。于造模后第7天、第14天以及第21天,取各组大鼠子宫组织,检测子宫内膜腺体数量、子宫内膜厚度、子宫内膜纤维化比例,以及转化生长因子β1(TGF-β1)、smad 3、纤维粘连蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白及其mRNA的表达水平。(2)另取15只SD雌性大鼠随机分为对照组、造模组、造模+二甲双胍组各5只,后两组采用同法构建宫腔粘连大鼠模型。造模14 d后,造模+二甲双胍组开始给予二甲双胍灌胃,其他两组给予生理盐水灌胃。服药4周后,将雌性大鼠与雄性大鼠合笼,评估大鼠孕囊数。结果(1)随着造模时间的延长,造模组大鼠的子宫内膜腺体数量减少、子宫内膜厚度变薄、宫内膜内膜纤维化比例增加,且以上表现均较对照组更严重(均Psmad 3蛋白及mRNA的表达水平,以及FN和α-SMA的mRNA表达水平均增高,且高于对照组(均P<0.05)。(2)对照组、造模+二甲双胍组、造模组大鼠的子宫内孕囊数依次降低(均P<0.05)。结论刮宫联合感染法能够构建稳定的宫腔粘连大鼠模型,且模型的子宫组织纤维化相关指标出现高表达。二甲双胍能够改善宫腔粘连大鼠的生育能力。

关键词：宫腔粘连刮宫感染法大鼠模型二甲双胍转化生长因子β1 smad 3 纤维粘连蛋白 α-平滑肌肌动蛋白

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