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ski基因干扰对人视网膜色素上皮细胞增生和迁移的影响

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中华临床医师杂志(电子版) 2013年第15期 7033-7038页

作者：郭斌刘晓娟王莉范钦华江苏南京解放军八一医院眼科山东青岛解放军第401医院崂山分院眼科重庆第三军医大学大坪医院野战外科研究所

目的设计并化学合成针对ski的siRNA分子片段,转染人视网膜色素上皮（hRPE）细胞抑制ski表达,观察其对hRPE细胞增生和迁移等生物学功能方面的影响。方法设计并化学合成3对针对人ski mRNA（NM;03036）中910、1912和389靶位的siRNAs,以脂... 详细信息

目的设计并化学合成针对ski的siRNA分子片段,转染人视网膜色素上皮（hRPE）细胞抑制ski表达,观察其对hRPE细胞增生和迁移等生物学功能方面的影响。方法设计并化学合成3对针对人ski mRNA（NM;03036）中910、1912和389靶位的siRNAs,以脂质体方法转染hRPE细胞,运用RT-PCR法和Western印迹法检测细胞中ski基因在mRNA水平和蛋白水平的变化。然后利用MTT法和Transwell模型检测转染ski-siRNA的hRPE细胞增生活力和迁移能力等生物学功能方面指标的变化。结果 RT-PCR和Western印迹检测结果证实3条ski-siRNA转染48 h后,均不同程度降低了hRPE细胞中ski基因的mRNA和蛋白表达水平（Pski-siRNA后2;d hRPE细胞的增生能力明显受到抑制（Pski基因。靶向ski基因的siRNA转染可以有效地抑制hRPE细胞增生,但可能促进细胞迁移。ski对hRPE增生和迁移调控可能是PVR治疗的一个新的方向。

关键词： RNA干扰色素上皮,眼增生细胞运动玻璃体视网膜病,增生性 ski基因

ski基因多态性与中国华东地区部分人群非综合征性唇腭裂的相关研究

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中国美容医学 2008年第3期17卷 378-380页

作者：高侠刘嘉茵崔毓桂周小平万伟东南京东南大学附属中大医院整形外科江苏南京210009

目的:探讨ski基因257C>G多态与中国华东地区部分人群非综合征性唇腭裂(NSCL/P)发生的关系。方法:采用病例对照设计,应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP),进行ski基因257C>G多态性检测,并进行遗传统计分析。结果:对于ski... 详细信息

目的:探讨ski基因257C>G多态与中国华东地区部分人群非综合征性唇腭裂(NSCL/P)发生的关系。方法:采用病例对照设计,应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP),进行ski基因257C>G多态性检测,并进行遗传统计分析。结果:对于ski基因257C>G,8个杂合子父母及患儿的核心家庭TDT检验(χ2=3.56,P>0.05);50例NSCL/P患儿和50例正常儿童基因型及等位基因频数病例对照研究(χ2=2.08,P>0.05)。结论:ski基因257C>G位点多态与中国华东地区部分人群NSCL/P的发生无相关性,可能不是NSCL/P的主要易感基因。

关键词：非综合征性唇腭裂基因多态性 ski基因

干扰ski基因对视网膜色素上皮细胞增生和周期的影响

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中华眼外伤职业眼病杂志 2015年第11期37卷 820-823页

作者：郭斌王莉刘晓娟范钦华江苏南京解放军八一医院眼科 210002 江苏南京解放军八一医院消化内科 210002 解放军第401医院崂山分院眼科青岛

目的观察siRNA干扰c—ski对视网膜色素上皮（RPE）细胞增生和周期的影响。方法RPE细胞分为3组：空白对照组（转染时加脂质体）、阴性对照组（无关序列非特异性siRNA转染）和ski—siRNA转染组，另设阳性对照转染组（采用B—actinsiRNA转... 详细信息

目的观察siRNA干扰c—ski对视网膜色素上皮（RPE）细胞增生和周期的影响。方法RPE细胞分为3组：空白对照组（转染时加脂质体）、阴性对照组（无关序列非特异性siRNA转染）和ski—siRNA转染组，另设阳性对照转染组（采用B—actinsiRNA转染）。采用蛋白电泳检测转染24h和48h时的***和CyclinD1蛋白表达变化；比色法检测转染1、2、3、4d时细胞的增生速率；流式细胞术检测转染24h和48h细胞周期的变化。结果与空白对照组和阴性对照组相比，siRNA转染hRPE细胞增生在各个时间点均受到明显抑制（P〈0．05）；3组间RPE细胞c—ski和CyclinD1蛋白表达比较，差异有统计学意义（P〈0．05），与空白对照组和阴性对照组相比，c—skisiRNA转染组c—ski、CyclinD1蛋白表达下降（P〈0．05）。各组GO／G1、S和G2／M期RPE细胞比例比较，差异有统计学意义（P〈0．01），c-skisiRNA组GO／G1期细胞比例高于空白对照组和阴性对照组siRNA组（P〈0．05），S期细胞比例低于空白对照组和阴性对照组siRNA组（P〈0．05）。结论c—ski基因干扰可以有效地抑制RPE细胞增生，该分子机制可能是抑制RPE细胞G1期的调节子cyclinD，造成G0／G1期阻滞，不能进入S期。

关键词：视网膜色素上皮 ski基因增生细胞周期蛋白增生性玻璃体视网膜病变

基因治疗用pUC118-ski质粒DNA纯化工艺的建立及其质量控制

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中国生物制品学杂志 2013年第10期26卷 1483-1487页

作者：彭艳李平刘苹周元国第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所分子生物学中心创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的建立基因治疗用pUC118-ski质粒DNA的纯化工艺,并进行质量鉴定。方法采用碱裂解法粗提质粒,PEG/MgCl2沉淀法初步纯化后,依次通过Sepharose 6 FF分子筛层析、PlasmidSelect Xtra亲和层析和SOURCE30Q离子交换层析纯化质粒DNA。纯化的质... 详细信息

目的建立基因治疗用pUC118-ski质粒DNA的纯化工艺,并进行质量鉴定。方法采用碱裂解法粗提质粒,PEG/MgCl2沉淀法初步纯化后,依次通过Sepharose 6 FF分子筛层析、PlasmidSelect Xtra亲和层析和SOURCE30Q离子交换层析纯化质粒DNA。纯化的质粒DNA经琼脂糖凝胶电泳分析超螺旋质粒的比例;紫外分光光度计测定质粒的A260和A280值,以A260/A280比值评价其纯度;CCK-8法检测质粒促原代培养的大鼠皮肤成纤维细胞的增殖活性;BCA法和鲎试剂凝胶法分别检测质粒DNA中残留的蛋白质和内毒素含量;PCR法检测质粒中细菌基因组DNA的含量。结果经Sepharose 6 FF分子筛层析可有效去除质粒DNA中的RNA,经PlasmidSelect Xtra亲和层析能将超螺旋质粒DNA(scDNA)与开环质粒DNA(ocDNA)有效分离,经SOURCE30Q离子交换层析获得的质粒DNA纯度很高,但出现了少量ocDNA。获得的质粒DNA纯品中超螺旋质粒所占比例大于90.5%;纯度(A260/A280)为1.83;促原代培养的大鼠成纤维细胞的增殖活性与空载体组相比提高了22.9%(P基因组DNA残留量小于1.2μg/mg。结论建立了基因治疗用pUC118-ski质粒DNA的纯化工艺,纯化产品的质量指标均符合国家食品药品监督管理局(SFDA)的标准,为申请该基因药物的临床试验及大规模制备质粒DNA奠定了基础。

关键词： ski基因重组质粒基因治疗层析质量控制

pUC118-ski/DH5α工程菌发酵工艺的优化

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中国生物制品学杂志 2012年第4期25卷 495-498页

作者：彭艳李平刘苹周元国第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所分子生物学中心创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的优化pUC118-ski/DH5α工程菌的发酵工艺。方法筛选高拷贝质粒工程菌,通过优化培养基组分、发酵温度、补料成分和补料方式及培养时间,确定最佳发酵参数;以最佳发酵参数在50 L发酵罐中连续发酵3批,验证优化的发酵工艺的重复性。结果... 详细信息

目的优化pUC118-ski/DH5α工程菌的发酵工艺。方法筛选高拷贝质粒工程菌,通过优化培养基组分、发酵温度、补料成分和补料方式及培养时间,确定最佳发酵参数;以最佳发酵参数在50 L发酵罐中连续发酵3批,验证优化的发酵工艺的重复性。结果最佳发酵参数为:以甘油为碳源的培养基,发酵温度25℃,以50%Glycerol梯度恒速流加方式补料,培养时间为12 h;以最佳发酵参数在50 L发酵罐中连续发酵3批工程菌,菌体湿重和质粒含量分别达52.7～60.3 g/L和1.79～1.95 mg/g湿菌,质粒拷贝数为1012copies/μl,超螺旋质粒的比例达90%以上。结论优化了pUC118-ski/DH5α工程菌的发酵工艺,为重组质粒的规模化生产及下游纯化奠定了基础。

关键词：质粒DNA ski基因工程菌发酵工艺优化

一个Shprintzen-Goldberg综合征家系的表型与基因变异分析

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中华医学遗传学杂志 2022年第7期39卷 703-707页

作者：石佳旻孙君慧陈源朱棉棉王楸卢朝升王丹温州医科大学附属第一医院儿科浙江325000 温州医科大学附属第一医院生殖医学中心浙江325000

目的对1例Shprintzen-Goldberg综合征患儿的临床表型和基因变异进行分析,明确其致病原因。方法应用全外显子组测序筛选与表型相关的基因变异,用Sanger测序在其家系成员中进行验证。结果先证者ski基因(NM_003036)第1外显子存在c.94C>G(**... 详细信息

目的对1例Shprintzen-Goldberg综合征患儿的临床表型和基因变异进行分析,明确其致病原因。方法应用全外显子组测序筛选与表型相关的基因变异,用Sanger测序在其家系成员中进行验证。结果先证者ski基因(NM_003036)第1外显子存在c.94C>G(***32Val)杂合变异,其父母未携带相同变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会指南,判断该变异为致病性(PS1+PS2+PM1+PM2+PP2+PP3)。结论ski基因c.94C>G(***32Val)杂合变异可能是该患者的遗传学病因。

关键词： Shprintzen-Goldberg综合征 ski基因杂合变异常染色体显性遗传

大鼠腓肠肌横断伤模型的建立和损伤修复的评价

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大鼠腓肠肌横断伤模型的建立和损伤修复的评价