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食管癌易感性与stk15基因Phe31Ile多态性的关联研究

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中华流行病学杂志 2007年第4期28卷 394-397页

作者：王娜王贵英郭炜董秀娟李琰河北医科大学第四医院分子生物学室石家庄050011 河北医科大学第四医院外二科石家庄050011

目的研究stk15基因Phe31Ile（91T→A）单核苷酸多态性（SNP）与河北省涉县人群食管鳞状细胞癌（ESCC）发病易感性的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测了涉县296例ESCC患者和302例健康对照stk15 Phe3... 详细信息

目的研究stk15基因Phe31Ile（91T→A）单核苷酸多态性（SNP）与河北省涉县人群食管鳞状细胞癌（ESCC）发病易感性的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测了涉县296例ESCC患者和302例健康对照stk15 Phe31Ile（91T→A）SNP的基因型。结果吸烟及上消化道肿瘤（UGIC）阳性家族史均能显著增加ESCC的患病风险（OR值分别为1．68和1．77,95%CI分别为1．34～2．10和1．44～2．19）。stk15 Phe31Ile三种基因型（Phe/Phe、Phe/Ile、Ile/Ile）频率在ESCC患者组中分别为11．5%、34．8%和53．7%,与健康对照组（11．9%、36．8%和51．3%）相比差异无统计学意义（X^2=0．35,P=0．84）。以Phe/Phe基因型作参照,Phe/Ile基因型及IIe/Ile基因型分别与其相比,均未增加ESCC的发病风险（OR值分别为0．98和1．09,95%CI分别为0．57～1．69和0．65～1．82）。根据性别、吸烟状况及上消化道肿瘤（UGIC）家族史进行分层分析,也未发现病例组与对照组之间的差异有统计学意义。结论stk15基因Phe31Ile（91T→A）SNP可能与河北涉县人群ESCC的患病风险无关。

关键词：食管鳞状细胞癌发病易感性 stk15基因单核苷酸多态性

喉癌stk15基因表达和染色体不稳定的研究

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Acta Genetica Sinica 2002年第12期29卷 1048-1051页

作者：李英慧李福才赵旭赵震孙开来孙兴和中国医科大学医学遗传学教研究沈阳110001 空军463医院耳鼻喉科沈阳110042

为研究喉鳞状细胞癌中stk15基因表达及其与染色体不稳定的相关性 ,提取 5 0例喉鳞状细胞癌及配对癌旁正常组织和人喉鳞状细胞癌Hep - 2细胞系的RNA ,反转录合成cDNA ,以 β -actin为内对照进行PCR扩增 ,用软件分析电泳结果 ,研究喉癌中S... 详细信息

为研究喉鳞状细胞癌中stk15基因表达及其与染色体不稳定的相关性 ,提取 5 0例喉鳞状细胞癌及配对癌旁正常组织和人喉鳞状细胞癌Hep - 2细胞系的RNA ,反转录合成cDNA ,以 β -actin为内对照进行PCR扩增 ,用软件分析电泳结果 ,研究喉癌中stk15基因表达的水平 ;以Hep - 2细胞系为代表应用常规和高分辨G显带方法进行核型分析。在 5 0例喉癌中 ,癌组织stk15表达高于配对癌旁正常组织的有 34例 ,占 6 8% ,经统计学分析 ,肿瘤组与对照组差异显著 ,Hep - 2细胞系中stk15基因表达高于内对照 β-actin ;Hep - 2细胞系中存在显著的染色体不稳定 :染色体数目变化于 4 3～ 84条之间 ,众数为 6 9～ 74条 ,结构畸变主要表现为 13条标记染色体。本研究首次发现stk15基因在喉癌中表达增高 ,它可能通过中心体异常而引起染色体不稳定 ,在喉癌的发生、发展中发挥一定作用。

关键词：喉癌 stk15基因表达染色体不稳定喉鳞状细胞癌中心体 Hep-2细胞

p53基因突变和stk15基因过表达与喉癌发生的关系

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中华肿瘤杂志 2005年第3期27卷 134-137页

作者：赵旭李福才李英慧富伟能黄带发叶燕徐振明孙开来中国医科大学医学遗传学教研室沈阳110001 解放军第四六三医院耳鼻喉科

目的　探讨p5 3基因突变和stk15基因表达与喉癌发生发展的关系。方法　自 5 5例术前未经化疗和放疗的喉鳞状细胞癌患者的新鲜手术标本中 ,分别取配对癌组织和癌旁正常组织进行以下检测 :(1)提取DNA ,采用聚合酶链反应单链构象多态性 (P... 详细信息

目的　探讨p5 3基因突变和stk15基因表达与喉癌发生发展的关系。方法　自 5 5例术前未经化疗和放疗的喉鳞状细胞癌患者的新鲜手术标本中 ,分别取配对癌组织和癌旁正常组织进行以下检测 :(1)提取DNA ,采用聚合酶链反应单链构象多态性 (PCR SSCP)银染结合DNA直接测序 ,检测喉鳞癌组织中p5 3基因第 7外显子 (p5 3E7)和第 8外显子 (p5 3E8)的突变情况 ;(2 )提取总RNA ,反转录合成cDNA ,以 β actin为内对照进行PCR扩增 ,分析stk15基因表达的水平。结果　 5 5例喉癌组织中 ,17例 (30 .9% )发生p5 3E7突变 ,未发现p5 3E8突变 ;癌组织stk15基因表达与 β actin表达平均密度比值 (ADV)为 1.2 2± 0 .4 9。癌旁正常组织发生p5 3E7突变 1例 (1.8% ) ,p5 3E8突变 1例 (1.8% ) ;癌旁正常组织ADV为 0 .99± 0 .5 4。喉癌组织p5 3E7突变率显著高于癌旁正常组织 (χ2 =8.6 6 ,P stk15基因表达高于癌旁正常组织 (t=4 .5 39,P 基因突变的患者中 ,14例 (82 .4 % )癌组织stk15基因表达高于癌旁正常组织 ;38例癌组织stk15基因表达高于癌旁正常组织的患者中 ,14例 (36 .8% )存在p5 3E7突变。 2 5 .5 %的喉癌患者同时发生p5 3E7突变与stk15基因表达增高。结论　同时发生p5

关键词： stk15基因癌旁正常组织表达喉癌 p53基因突变癌组织癌发生 DNA 银染反转录

人喉癌组织中p15、p16基因缺失和stk15基因过表达的研究

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中华医学杂志 2003年第4期83卷 316-319页

作者：李福才李英慧赵旭康宁富伟能徐振明李增刚孙开来中国医科大学医学遗传学教研室沈阳110001 空军第四六三医院耳鼻喉科国家新药安全评价研究中心

目的探讨p15、p16基因和stk(丝氨酸/苏氨酸激酶)15基因表达与喉癌发生、发展的关系。方法自50例术前未经化疗和放疗的喉鳞状细胞癌患者的新鲜手术标本中,分别取癌组织和癌旁正常组织进行以下检测:(1)提取DNA,采用聚合酶链反应(PCR)技... 详细信息

目的探讨p15、p16基因和stk(丝氨酸/苏氨酸激酶)15基因表达与喉癌发生、发展的关系。方法自50例术前未经化疗和放疗的喉鳞状细胞癌患者的新鲜手术标本中,分别取癌组织和癌旁正常组织进行以下检测:(1)提取DNA,采用聚合酶链反应(PCR)技术,进行p15基因第二外显子(p15E2)和p16基因第二外显子(p16E2)纯合缺失研究;(2)提取RNA,反转录合成cDNA,以β-肌动蛋白基因为内对照进行PCR扩增,分析stk15基因表达的水平。同时检测人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞系stk15基因表达水平。结果喉癌组织p15E2纯合缺失率为12％(6/50),p16E2纯合缺失率为14％(7/50),p15E2、p16E2共同缺失率为6％(3/50)。50例患者中34例(68％)癌组织stk15基因表达高于癌旁正常组织;全组患者癌组织stk15基因表达/β-肌动蛋白基因表达平均密度比值(ADV)为1.03±0.30,癌旁正常组织stk15基因表达/β-肌动蛋白基因表达ADV为0.89±0.22,其间差异有非常显著意义(t=4.333,Pstk15基因表达高于内对照β-肌动蛋白基因。结论p15E2、p16E2纯合缺失和stk15基因过表达可能在喉癌的发生及恶性进展中发挥一定作用。

关键词：喉癌 p15 p16 基因缺失 stk15基因过表达

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喉癌中stk15基因扩增及表达的研究

中华医学遗传学杂志 2006年第3期23卷 326-329页

作者：叶燕李福才王淑云李婵媛袁海明赵旭富伟能徐振明孙开来中国医科大学基础医学院医学遗传学教研室沈阳110001 空军463医院耳鼻喉科

目的研究喉癌中stk15基因扩增、mRNA和蛋白表达增高在喉癌发生、发展中的作用。方法应用差异PCR方法检测40例喉鳞状细胞癌及癌旁正常对照组织stk15基因扩增的情况;应用逆转录PCR方法检测同批标本stk15mRNA表达情况;用免疫组织化学方法分... 详细信息

目的研究喉癌中stk15基因扩增、mRNA和蛋白表达增高在喉癌发生、发展中的作用。方法应用差异PCR方法检测40例喉鳞状细胞癌及癌旁正常对照组织stk15基因扩增的情况;应用逆转录PCR方法检测同批标本stk15mRNA表达情况;用免疫组织化学方法分析stk15蛋白表达。结果肿瘤组织中stk15基因扩增率为35%(14/40);stk15mRNA表达增高占67.5%(27/40);stk15蛋白表达的阳性率为72.5%(29/40);将扩增与表达的结果与喉癌患者的临床各项指标进行统计学分析,stk15基因扩增、stk15mRNA表达增高与肿瘤的分化程度显著相关(Pstk15蛋白表达与肿瘤的分化程度和病理分级显著相关(Pstk15基因扩增、mRNA和蛋白表达水平增高,导致中心体复制异常、染色体不稳定,可能在喉癌的发生及恶性进展中起一定作用。

关键词：喉鳞状细胞癌 stk15基因差异-聚合酶链反应基因扩增

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stk15基因在胃癌中高表达的研究

武警医学 2004年第9期15卷 667-670页

作者：王曦李英慧宗振久武警辽宁总队医院外一科沈阳110034 中国医科大学医学遗传学教研室沈阳110001

目的研究胃癌中stk15基因的mRNA表达水平。方法提取52例胃癌组织样本及相应癌旁正常组织的RNA,反转录合成cDNA,以β-actin为内对照,进行PCR扩增,产物进行电泳,应用软件分析电泳结果。结果在检测的52例胃癌中,有31例(60%)存在stk15基因... 详细信息

目的研究胃癌中stk15基因的mRNA表达水平。方法提取52例胃癌组织样本及相应癌旁正常组织的RNA,反转录合成cDNA,以β-actin为内对照,进行PCR扩增,产物进行电泳,应用软件分析电泳结果。结果在检测的52例胃癌中,有31例(60%)存在stk15基因的高表达,经统计学分析,肿瘤组与对照组差异显著(Pstk15基因mRNA的高表达,这可能是导致胃癌发生的多因素之一。

关键词： stk15基因胃癌高表达肿瘤 RNA 癌旁正常组织对照组电泳反转录 DNA

喉癌p53基因突变和stk15基因过表达与中心体异常相关性研究

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喉癌p53基因突变和STK15基因过表达与中心体异常相关性研究

作者：赵旭中国医科大学

学位级别：硕士

前言中心体是哺乳类细胞主要的微管组织中心。它通过在细胞分裂时建立双极纺锤体、在有丝分裂期执行精确的染色体分离而保持基因组稳定。中心体复制周期的异常会导致单极或多极纺锤体的形成，后者一直被认为是染色体不稳定和肿瘤发生... 详细信息

前言中心体是哺乳类细胞主要的微管组织中心。它通过在细胞分裂时建立双极纺锤体、在有丝分裂期执行精确的染色体分离而保持基因组稳定。中心体复制周期的异常会导致单极或多极纺锤体的形成，后者一直被认为是染色体不稳定和肿瘤发生的原因。许多类型的肿瘤有这样一个特点，即大部分细胞有中心体异常，后者也被证明出现于肿瘤发生的早期阶段且随肿瘤进展。肿瘤中心体扩增与许多遗传改变相关，包括p53基因突变和stk15基因过表达。在几乎所有人类肿瘤中都检测到了p53基因突变。在多数肿瘤中最常见的点突变发生于外显子5～8，在人喉鳞状细胞癌(ISCC)中亦如此。然而，对LSCC内含子突变研究却很少。内含子突变可以通过引起剪接异常或关键性DNA-蛋白反应中断而影响基因调控。内含子的嘧啶富集区[the polypyrimidine(py)tract]和支点一致序列(the branch point consensus sequence)中的任何突变都将通过干扰剪接体组装效率和mRNA前体(premRNA)的剪接直接影响剪接过程。p53蛋白功能受损将导致中心体异常，此过程可能通过p53蛋白的转激活-非依赖性(transactivation-independent)方式介导stk15蛋白过表达完成。 stk15(也称BTAK，Aurora-A)是人类丝氨酸／苏氨酸激酶15／胸部肿瘤扩增激酶，它对染色体分离和中心体功能都至关重要。在多种肿瘤中stk15基因都出现扩增，其转录本也有高表达。stk15过表达诱导中心体数目增多，异倍体形成和细胞转化。为探讨p53基因内含子突变及其对p53蛋白表达的影响，以及p53基因突变和stk15基因异常表达相关性与喉癌中心体异常的关系，本研究应用PCR-SSCP银染结合DNA测序和Western Blot，检测了55例喉鳞癌患者的新鲜或冰冻肿瘤组织及配对正常组织的p53基因外显子7、8(p53E7和p53E8)、内含子7、8(p53I7和p53I8)的突变，及p53蛋白表达情况;同时对相同的55例配对标本用半定量RT-PCR方法检测stk15基因的表达情况;并结合实体瘤培养，对上述55例配对标本冰冻切片及实体瘤细胞用免疫荧光方法检测喉癌中心体扩增情况。本研究为探索喉癌发生机理，早期诊断和治疗提供了科学依据。实验材料与方法 1.实验材料 1 .1喉鳞状细胞癌组织标本 ***一PCR、PCR一SSCP及PCR产物纯化相关试剂 1.3 Westem Blot相关试剂 1 .4鼠抗，微管蛋白单克隆抗体、FITC偶联山羊抗鼠IgG及相关试剂 1.5实体瘤培养相关试剂 2.实验方法 2.1应用PCR一SSCP方法结合DNA测序检测上述55例配对组织必3基因第7、8外显子和第7、8内含子突变。 2.2应用Westem Blot方法检测上述55例配对组织p53蛋白表达情况。 2.3应用半定量RT一PCR方法，以癌旁正常组织为对照检测55例喉癌组织中stk15基因mRNA表达水平。 2.4应用免疫荧光方法检测上述55例配对组织冰冻切片及8例实体瘤细胞中心体扩增情况。实验结果在55例喉癌组织中有17例(30.9%)存在p53基因第7外显子突变，有21例(38.2%)存在第7内含子突变。未检测到P53基因第8外显子和第8内含子突变。经统计学分析，肿瘤组织中户3E7和户317突变率均高于正常组织。p53I7突变主要发生于户3第7内含子3’一剪接受位的支点序列和喻吮富集区。在55例喉癌组织中有40例(72.7%)存在户3蛋白表达异常，其中17例有p53基因第7外显子突变和21例存在第7内含子突变的肿瘤组织均发生了p53蛋白表达降低或电泳带位置迁移。 55例喉癌组织中有38例(69.1%)存在stk巧基因第8、9外显子mR-NA高表达，经统计学分析，肿瘤组与对照组差异显著。

关键词：喉癌实体瘤 p53基因 p53蛋白 stk15基因中心体扩增

裸鼠喉癌细胞系Hep-2移植瘤中stk15基因的表达及意义

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裸鼠喉癌细胞系Hep-2移植瘤中STK15基因的表达及意义

作者：姜亮中国医科大学

学位级别：硕士

实验目的观察裸鼠喉癌细胞系Hep-2移植瘤的成瘤率,绘制肿瘤生长曲线,用免疫组化方法观察移植瘤中stk15基因的表达情况。实验方法将符合条件的17只nu/nu纯系裸小鼠随机分成两组,实验组10只,对照组7只。实验组每只裸鼠右侧前肢腋下皮下注... 详细信息

实验目的观察裸鼠喉癌细胞系Hep-2移植瘤的成瘤率,绘制肿瘤生长曲线,用免疫组化方法观察移植瘤中stk15基因的表达情况。实验方法将符合条件的17只nu/nu纯系裸小鼠随机分成两组,实验组10只,对照组7只。实验组每只裸鼠右侧前肢腋下皮下注射0.2mlHep-2细胞悬液,直至皮下形成0.5cm大小皮丘。对照组每只裸鼠相同部位注射0.2ml生理盐水,直至皮下形成0.5cm大小皮丘,定期观察两组裸鼠接种部位液体的吸收情况,计算成瘤率,绘制成瘤曲线。5周后处死实验动物,剥离肿瘤,用免疫组化方法观察移植瘤中stk15基因的表达情况。实验结果实验组裸鼠成瘤率100%,免疫组化可证实裸鼠喉癌细胞系Hep-2移植瘤中stk15过表达。实验结论通过动物实验证实stk15基因是喉癌的发生发展的原因之一。

关键词：裸鼠喉癌细胞成瘤率 stk15基因

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喉癌stk15基因异常与中心体扩增的研究

中华医学遗传学杂志 2004年第3期21卷 240-244页

作者：李英慧李福才王曦赵旭叶燕孙兴和孙开来中国医科大学医学遗传学教研室沈阳110001 武警辽宁省总队医院外一科空军463医院耳鼻喉科

目的　研究喉癌中 stk15基因的异常及中心体扩增情况。方法　应用逆转录 -聚合酶链反应方法 ,检测 6 2例喉鳞状细胞癌和人喉鳞状细胞癌细胞系 Hep- 2中 stk15基因 m RNA表达水平 ;应用聚合酶链反应 -单链构象多态性检测上述组织及细胞中... 详细信息

目的　研究喉癌中 stk15基因的异常及中心体扩增情况。方法　应用逆转录 -聚合酶链反应方法 ,检测 6 2例喉鳞状细胞癌和人喉鳞状细胞癌细胞系 Hep- 2中 stk15基因 m RNA表达水平 ;应用聚合酶链反应 -单链构象多态性检测上述组织及细胞中 stk15基因第 6、7外显子突变 ;以 Hep- 2细胞系为代表应用免疫荧光方法检测中心体扩增情况。结果　在 39例 ( 6 3% )喉癌及 Hep- 2细胞系中检测到了stk15基因的高表达 ;在上述组织和细胞中均未检测到 stk15基因第 6、7外显子的突变 ;Hep- 2细胞系有明显的中心体扩增 :单个细胞中心体数目变化范围为 1～ 7,有中心体扩增的细胞数为 11%～ 2 3%。结论　在 Hep- 2细胞系中发现了 stk15基因高表达与中心体扩增 ,提示 stk15基因高表达引起中心体扩增 ,可能是导致该细胞系染色体不稳定的重要因素 ;在喉癌组织中观察到了stk15基因高表达。

关键词：喉癌 stk15基因基因异常中心体扩增