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鸡stard3胞外域的原核表达及其抗血清制备

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畜牧与兽医 2019年第10期51卷 54-56页

作者：吴悠马宇驰赵祎云隋国燕石辛月唐峰锦州医科大学/辽宁省畜产品质量与安全工程重点实验室

为获得鸡类固醇激素合成急性调节蛋白结构域3(stard3)胞外域融合蛋白的特异性抗血清,采用人工合成方法获得鸡stard3胞外域基因,利用pGEX6P-1质粒及BL21(DE3)进行原核表达,将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,利用Western blot及间接ELISA方法测... 详细信息

为获得鸡类固醇激素合成急性调节蛋白结构域3(stard3)胞外域融合蛋白的特异性抗血清,采用人工合成方法获得鸡stard3胞外域基因,利用pGEX6P-1质粒及BL21(DE3)进行原核表达,将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,利用Western blot及间接ELISA方法测定抗体特异性和效价。结果显示:获得了stard3胞外域融合蛋白的特异性抗血清,效价大于1∶6 400。本试验为研究鸡stard3蛋白功能奠定了基础。

关键词：鸡 stard3 胞外域原核表达抗血清

栉孔扇贝FOXL2与SIRT1的互作验证，SIRT1及stard3的表达模式研究

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栉孔扇贝FOXL2与SIRT1的互作验证，SIRT1及STARD3的表达模式研究

作者：罗冬艳烟台大学

学位级别：硕士

栉孔扇贝(Chlamys farreri)是我国北部沿海的重要经济贝类,其性腺发育相关研究可为性别控制、杂交育种、多倍体育种等提供一定的理论基础。本实验室前期研究发现:FOXL2(forkhead box protein L2,叉头框蛋白L2)是栉孔扇贝成体卵巢发育的... 详细信息

栉孔扇贝(Chlamys farreri)是我国北部沿海的重要经济贝类,其性腺发育相关研究可为性别控制、杂交育种、多倍体育种等提供一定的理论基础。本实验室前期研究发现:FOXL2(forkhead box protein L2,叉头框蛋白L2)是栉孔扇贝成体卵巢发育的关键基因,并结合FOXL2 RNA干扰前后的转录组差异分析和全基因组染色质免疫共沉淀技术(Ch IP-seq)分析筛选出多个靶基因,结合KEGG分析推测出受FOXL2调控的几条通路,其中包含卵巢功能维持通路和类固醇激素合成通路。本论文选择上述通路中FOXL2直接调控的SIRT1基因(silent mating type information regulation 2 homolog 1,沉默信息调节因子1)(Ch IP-seq和差异转录组都显示的靶基因)和FOXL2间接调控的stard3(St AR-related lipid transfer protein 3)基因(仅转录组差异表达分析显示的靶基因)开展研究。转录组差异表达显示,FOXL2上调SIRT1的表达,下调stard3的表达。对Ch IP-seq分析出的SIRT1基因上的一段与FOXL2结合的片段进行了深入研究,扩增获得该片段对应的基因序列,与SIRT1基因的CDS(Coding sequence)比较,分析了该片段的构成,将其命名为SIF(SIRT1 Interaction fragment),酵母单杂交(Y1H)技术研究了FOXL2与SIF的结合,凝胶滞缓(EMSA)技术确定其调控的位点,荧光定量PCR(q RT-PCR)对SIRT1在不同组织和性腺发育周期中的表达模式进行了研究,结合SIRT1的序列和保守功能结构域分析,通过白藜芦醇刺激实验对SIRT1的功能进行了初步探索;同时对stard3的序列和表达模式进行了探究,为该基因的功能研究奠定基础。论文研究结果如下:(1)SIF总长91bp,起始于SIRT1基因上的一段内含子,含该内含子CATTAG共6bp序列,其余85bp序列位于SIRT1 CDS+1172位～+1257位,结合文献及Ch IP-seq的motif分析,分析SIF中含两个FOXL2结合核心位点,分别命名为SIF1(位于SIF的+28～+35)和SIF2(位于SIF的+53～+60),序列分别为:ACAAATC和CTCAAGA;(2)酵母单杂交实验结果显示,同时转化FOXL2-AD融合蛋白的表达载体和SIF-p His2克隆载体的酵母菌在特定培养基中能正常生长(对照组中酵母不长),表明栉孔扇贝FOXL2蛋白能够与SIF片段结合,从而激活下游报告基因的表达,即FOXL2能直接结合在SIF上从而与SIRT1发生互作;(3)原核表达的FOXL2蛋白包涵体复性(复性后的活性蛋白用于EMSA实验)结果显示,采用透析法复性,FOXL2易蛋白错误折叠而聚集沉淀;采用稀释法复性,FOXL2溶解在上清液中,无沉淀产生,认为稀释法相比透析法更适合该蛋白复性;(4)在上述基础上,进一步通过凝胶滞缓实验体外验证SIF、SIF1和SIF2与FOXL2蛋白的结合,结果显示:仅SIF、SIF1和SIF2三条序列能与FOXL2蛋白结合从而发生凝胶滞缓,将SIF1和SIF2核心位点突变的SIF探针不与FOXL2结合,说明除核心位点外的其他序列不与FOXL2蛋白结合,即FOXL2仅通过SIF1和SIF2两个核心位点与SIRT1相互作用;(5)选择生长期进行各组织表达模式研究,发现SIRT1在不同组织中均有表达,但在卵巢和精巢中表达量显著性高于其他组织(P382bp,编码793个氨基酸,编码的蛋白具有三个保守功能结构:NTERM激活基序、催化活性中心以及ESA结构域;(7)对生长期前期栉孔扇贝注射白藜芦醇(SIRT1激活剂),q RT-PCR结果显示实验组SIRT1表达量显著高于对照组,表明白藜芦醇刺激SIRT1高表达;卵巢组织切片显示实验组卵母细胞数量明显多于对照组,且对照组正常状态下滤泡中出现少量成熟卵子,但实验组未出现。推测SIRT1一方面可以促进卵母细胞增殖,另一方面可以延缓卵子形成,从而在防止卵巢衰老中发挥作用;(8)stard3基因CDS长1512bp,编码503个氨基酸,含有START和MENTAL 2个主要结构域及FF

关键词： FOXL2 SIRT1 stard3 凝胶滞缓酵母单杂交白藜芦醇

ERBB2扩增子单核苷酸多态性及胃癌组织stard3表达与胃癌风险性研究

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ERBB2扩增子单核苷酸多态性及胃癌组织STARD3表达与胃癌风险性研究

作者：裘越安徽医科大学

学位级别：硕士

目的研究ERBB2扩增子(包括stard3,PPP1R1B/DARPP32，TCAP，PERLD1/CAB2，ERBB2/HER2，ZNFN1A3/IKZF3和TOP2A七个基因)单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphisms, SNPs)及单体型频率变化与汉族人群胃癌易感性关系。并且探讨stard3表达与胃癌临床病理特征的相关性。以探讨本地区胃癌患者遗传学发病机制。方法采用Sequnomn基因分型仪对安徽地区311例胃癌患者及425例正常对照组血样ERBB2扩增子26个SNPs多态性进行基因分型。采用组织芯片及免疫组织化学染色技术对311例中的243例胃癌组织和20例癌旁组织的stard3表达进行分析。结果ERBB2扩增子26个SNPs位点的遗传变异在胃癌和对照组之间分布无显著性差异。单倍型分析提示stard3相关连锁单倍型影响胃癌易感性。临床病理资料分层分析stard3rs1877031杂合子TC与野生型CC相比增加胃粘液腺癌和印戒细胞癌的易感性(P=0.021, OR=2.882,95%CI=1.173-7.084)。免疫组化结果表明：胃癌组织中stard3的表达与性别(P=0.004)、饮酒(P3)有关。结论stard3rs1877031C/T与胃癌的组织学形态相关。stard3位点可能连锁影响胃癌易感性。stard3蛋白在胃癌组织的表达提示其与中国人群散发性胃癌的发生与分化程度相关。

关键词：胃癌单核苷酸多态性 stard3 ERBB2扩增子

stard3在人类表皮生长因子受体2阳性乳腺癌中的研究进展

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汕头大学医学院学报 2022年第2期35卷 126-128页

作者：郑彩华林丹霞汕头大学医学院附属肿瘤医院广东汕头515041

类固醇合成急性调节相关脂质转运蛋白3(steroidogenic acute regulatory protein related lipid transfer domain containing3,stard3)是类固醇激素急性调节蛋白家族成员之一,参与细胞内胆固醇非囊泡转运过程。目前已有研究证明人类表... 详细信息

类固醇合成急性调节相关脂质转运蛋白3(steroidogenic acute regulatory protein related lipid transfer domain containing3,stard3)是类固醇激素急性调节蛋白家族成员之一,参与细胞内胆固醇非囊泡转运过程。目前已有研究证明人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)阳性乳腺癌的stard3基因可与HER2基因共扩增、共高表达,且stard3表达水平与肿瘤转移、局部复发和较短的总生存期呈正相关。本文就stard3调节细胞内胆固醇分配过程以及与HER2阳性乳腺癌的关系进行综述,并分析其可能的致病机制。

关键词： stard3 胆固醇 HER2阳性乳腺癌

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猪stard3NL基因克隆和表达谱分析

畜牧兽医学报 2015年第9期46卷 1678-1685页

作者：邢晋祎贾坤航李艳平临沂大学生命科学学院临沂276005 山东农业大学动物科技学院泰安271018

本研究旨在克隆猪stard3 NL(stard3N-terminal like protein)基因,对其基因结构进行分析,并研究该基因在猪不同组织中的表达特性。采用5′和3′-RACE以及RT-PCR方法克隆猪stard3 NL基因,利用生物信息学方法预测蛋白结构,应用qRT-PCR技... 详细信息

本研究旨在克隆猪stard3 NL(stard3N-terminal like protein)基因,对其基因结构进行分析,并研究该基因在猪不同组织中的表达特性。采用5′和3′-RACE以及RT-PCR方法克隆猪stard3 NL基因,利用生物信息学方法预测蛋白结构,应用qRT-PCR技术检测组织表达特性。结果表明,猪stard3 NL基因的cDNA序列长度为1 319bp(GenBank登录号:HQ634946),编码235个氨基酸,该氨基酸序列与其他物种相比一致性较高;进化树分析表明,猪stard3NL氨基酸序列与牛和绵羊的关系较近,与斑马鱼的进化关系最远。stard3NL氨基酸序列包含保守的MENTAL结构域,为疏水蛋白,包含4个跨膜螺旋区;二级结构主要是α-螺旋,占60%;该蛋白不存在信号肽,不是分泌蛋白;亚细胞定位显示,该蛋白存在于内质网的概率为39.1%。qRT-PCR分析表明,stard3 NL基因在所检测猪的14种组织均有表达,在肝中表达水平最高,在眼肌中的表达水平最低;莱芜猪和大长猪被圆环病毒感染后,stard3 NL基因在2种猪肺组织中的表达水平差异不显著(P>0.05)。研究结果将为进一步研究stard3 NL基因的结构和功能以及猪抗病育种提供资料。

关键词：猪 stard3 NL基因克隆猪圆环2型病毒

Overexpression of the cholesterol-binding protein MLN64 induces liver damage in the mouse

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World Journal of Gastroenterology 2007年第22期13卷 3071-3079页

作者： Juan Enrique Tichauer María Gabriela Morales Ludwig Amigo Leopoldo Galdames Andrés Klein Verónica Quiones Carla Ferrada Alejandra Alvarez R Marie-Christine Rio Juan Francisco Miquel Attilio Rigotti Silvana Zanlungo Departamento de Gastroenterología Facultad de Medicina Pontifi cia Universidad Católica Santiago Chile Departamento de Biología Celular y Molecular Facultad de Ciencias Biológicas Pontificia Universidad Católica Santiago Chile Institut de Génétique et de Biologie Moléculaire et Cellulaire INSERM U596 67404 Illkirch France

AIM： To examine the in vivo phenotype associated with hepatic metastatic lymph node 64 （MLN64） overexpression.METHODS： Recombinant-adenovirus-mediated MLN64 gene transfer was used to overexpress MLN64 in the livers of C57BL/6 mice. We measured the effects of MLN64 overexpression on hepatic cholesterol content, bile flow, biliary lipid secretion and apoptosis markers. For in vitro studies cultured CHO cells with transient MLN64 overexpression were utilized and apoptosis by TUNEL assay was measured.RESULTS： Livers from ***64-infected mice exhibited early onset of liver damage and apoptosis. This response correlated with increases in liver cholesterol content and bilian/bile acid concentration, and impaired bile flow. We investigated whether liver MLN64 expression could be modulated in a murine model of hepatic injury. We found increased hepatic MLN64 mRNA and protein levels in mice with chenodeoxycholic acid-induced liver damage. In addition, cultured CliO cells with transient MLN64 overexpression showed increased apoptosis.CONCLUSION： In summary, hepatic MLN64 overexpression induced damage and apoptosis in murine livers and altered cholesterol metabolism. Further studies are required to elucidate the relevance of these findings under physiologic and disease conditions.

关键词： Metastatic lymph node 64 Apoptosis Cholesterol Liver stard3