检索结果-南通市图书馆

柔嫩艾美耳球虫YZ株so7基因的克隆与序列分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

扬州大学学报（农业与生命科学版） 2006年第3期27卷 10-14页

作者：许金俊陶建平彭金彪王留扬州大学兽医学院江苏扬州225009

对柔嫩艾美耳球虫(E im eria tenella)YZ株折光体so 7基因进行克隆,并对其核苷酸及氨基酸进行序列分析。以纯化的发育7 h的*** YZ株卵囊孢子提取的总RNA为模板,设计特异性引物,应用两步法RT-PCR技术扩增出so 7基因特异性片段。将扩增出... 详细信息

对柔嫩艾美耳球虫(E im eria tenella)YZ株折光体so 7基因进行克隆,并对其核苷酸及氨基酸进行序列分析。以纯化的发育7 h的*** YZ株卵囊孢子提取的总RNA为模板,设计特异性引物,应用两步法RT-PCR技术扩增出so 7基因特异性片段。将扩增出的片段插入pUCm-T载体,随机选择经蓝白斑筛选、PCR及酶切鉴定为阳性的两个克隆分别进行测序分析,并对结果进行验证。结果表明:两个阳性克隆所含插入片段的DNA序列完全一致,含全长为651个核苷酸的开放阅读框,富含AGC和CTG重复序列,编码区核苷酸与LS18株和B J株的同源性都为99.5%,与HB株同源性为99.4%,与GD株同源性为99.7%。其推测的氨基酸序列与LS18株和GD株的同源性都为99.1%,与B J和HB株同源性为98.6%。通过对其蛋白抗原性、表面可能性、亲水性、柔性区、二级结构等参数预测表明,YZ株核苷酸的变异未引起其蛋白主要特性和B细胞表位的变化。该结果为研制***的基因工程疫苗奠定了基础。

关键词：柔嫩艾美耳球虫 so7基因克隆序列分析

***河北株so7基因在毕赤酵母系统中的表达及免疫保护力评价

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医学报 2020年第10期40卷 1960-1964页

作者：闫艳娟李蕴玉张东林李佩国庞洪泽张香斋河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室河北秦皇岛066600

为了确定重组质粒pPIC9-IL-2-so7在毕赤酵母系统中的表达及重组蛋白so7的免疫保护力,采用RT-PCR方法克隆***河北株so7基因并测序,将目的基因与IL-2及真核表达载体pPIC9串联,构建真核表达载体pPIC9-IL-2-so7,转染毕赤酵母细胞GS115,SDS-P... 详细信息

为了确定重组质粒pPIC9-IL-2-so7在毕赤酵母系统中的表达及重组蛋白so7的免疫保护力,采用RT-PCR方法克隆***河北株so7基因并测序,将目的基因与IL-2及真核表达载体pPIC9串联,构建真核表达载体pPIC9-IL-2-so7,转染毕赤酵母细胞GS115,SDS-PAGE电泳及Western blot方法验证其在毕赤酵母系统中的表达。将纯化后的重组蛋白so7分别在雏鸡7,21日龄以50,100,150μg/只进行免疫,28日龄时,除阴性对照组外的其他试验组口服接种***孢子化卵囊8×10^4个/只,测定各组存活率、相对增重率、盲肠病变值和卵囊值,并计算抗球虫指数(ACI)。结果显示,阳性重组子具有2条带,分别为2 200,1 100 bp,表明成功将重组质粒pPIC9-IL-2-so7转染毕赤酵母细胞GS115,Western blot检测证明表达的蛋白具有免疫原性;3个免疫组的ACI分别比阳性对照组提高了29.66%,33.33%和19.72%,其中以免疫剂量为100μg/只时,抗球虫效果最好。

关键词： E.tenella so7基因毕赤酵母系统免疫保护力

鸡柔嫩艾美耳球虫HN株so7基因的克隆与序列分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国家禽 2016年第3期38卷 52-54页

作者：张艳刘海隆曹宗喜林哲敏谭树义邢漫萍海南省农业科学院畜牧兽医研究所海南海口571100 海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海南海口571100

为研究鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)HN株so7基因的遗传变异情况,根据Gen Bank发表的so7基因的c DNA序列(登录号:X15898)的ORF设计一对引物,用RT-PCR方法从柔嫩艾美耳球虫HN株总RNA中扩增so7基因,将扩增产物与p MD18-T载体连接后... 详细信息

为研究鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)HN株so7基因的遗传变异情况,根据Gen Bank发表的so7基因的c DNA序列(登录号:X15898)的ORF设计一对引物,用RT-PCR方法从柔嫩艾美耳球虫HN株总RNA中扩增so7基因,将扩增产物与p MD18-T载体连接后进行测序和序列分析,并与已发表的相关序列进行比较,分析so7基因的遗传变异情况。结果获得673 bp的目的片段,HN株的so7基因序列与已发表国内外虫株的so7基因序列相比,核苷酸有7个位点发生了变化,引起4个位点的氨基酸发生改变,其中有3个位点的变化未引起相应的氨基酸发生改变。系统发育树分析表明,同种间HN株so7基因与YZ株的遗传关系最近。

关键词：柔嫩艾美耳球虫海南株 so7基因遗传变异

鸡柔嫩艾美耳球虫so7基因的原核表达及动物免疫试验

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

动物医学进展 2016年第2期37卷 1-5页

作者：仇保丰宋鸿雁严若峰宋小凯徐立新李祥瑞南京农业大学动物医学院江苏南京210095 南通出入境检验检疫局江苏南通226004 南通大学实验动物中心江苏南通226001

为了研究鸡柔嫩艾美耳球虫so7基因原核表达重组蛋白的免疫效力,分析其在鸡抗柔嫩艾美耳球虫感染中对鸡平均增重、抗球虫指数(ACI)、减少盲肠病变和卵囊数量中的作用,从柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊中提取总RNA作为模板,用RT-PCR扩增出so7... 详细信息

为了研究鸡柔嫩艾美耳球虫so7基因原核表达重组蛋白的免疫效力,分析其在鸡抗柔嫩艾美耳球虫感染中对鸡平均增重、抗球虫指数(ACI)、减少盲肠病变和卵囊数量中的作用,从柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊中提取总RNA作为模板,用RT-PCR扩增出so7基因片段,再应用DNA重组技术将so7基因克隆到原核表达载体pET32a(+)中并用IPTG诱导表达。SDS-PAGE结果显示,pET32a(+)-so7表达的目的蛋白约为40ku,主要以包涵体形式存在。用纯化的重组蛋白进行动物免疫试验显示,so7重组蛋白在鸡抗柔嫩艾美耳球虫感染中有较好的免疫保护作用,能够显著提高鸡柔嫩艾美耳球虫感染鸡的平均增重和抗球虫指数(ACI),对减少盲肠病变和卵囊数量也有部分作用。

关键词：柔嫩艾美耳球虫 so7基因克隆表达免疫效力

鸡柔嫩艾美耳球虫海南株so7基因表达产物的免疫保护效果观察

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国家禽 2017年第3期39卷 17-20页

作者：张艳刘海隆林哲敏曹宗喜邢漫萍海南省农业科学院畜牧兽医研究所海南海口571100 海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海南海口571100

为研究鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,***)海南株so7基因原核表达产物对***攻击的免疫保护效力,分别于8和16日龄采用so7基因可溶性重组蛋白和包涵体重组蛋白经肌肉注射两次免疫文昌鸡公雏,同时设立攻虫对照组和空白对照组;其中,免... 详细信息

为研究鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,***)海南株so7基因原核表达产物对***攻击的免疫保护效力,分别于8和16日龄采用so7基因可溶性重组蛋白和包涵体重组蛋白经肌肉注射两次免疫文昌鸡公雏,同时设立攻虫对照组和空白对照组;其中,免疫组和攻虫对照组雏鸡于27日龄接种5×10~4个***卵囊,观察其诱导产生的保护力。结果显示,与攻虫对照组相比,so7可溶性蛋白组雏鸡的相对卵囊产量降低了82.9%,攻虫至试验结束的增重增加了76.3%,盲肠病变减少了29.8%;so7包涵体蛋白组雏鸡的相对卵囊产量降低了60.4%,攻虫至试验结束鸡增重增加了42%,盲肠病变减少了18.7%。结果表明,***海南株so7基因在大肠杆菌中的表达产物对鸡柔嫩艾美耳球虫的攻击有一定的免疫保护作用,且so7可溶性蛋白的抗球虫效力优于包涵体蛋白。

关键词： so7基因柔嫩艾美耳球虫海南株表达产物免疫效果

柔嫩艾美耳球虫so7基因重组乳酸菌的构建及保护性效果研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

柔嫩艾美耳球虫SO7基因重组乳酸菌的构建及保护性效果研究

作者：杨智勇吉林农业大学

学位级别：硕士

鸡球虫病作为养禽业中最常见也是危害最广泛的一种寄生虫病，给养鸡业造成了巨大的经济损失。由于其发病多为多种球虫混合感染，对鸡肠道的不同部位造成不同程度的损伤，故在防制方面面临较大困难。长期以来，对于本病的治疗和预防上都... 详细信息

鸡球虫病作为养禽业中最常见也是危害最广泛的一种寄生虫病，给养鸡业造成了巨大的经济损失。由于其发病多为多种球虫混合感染，对鸡肠道的不同部位造成不同程度的损伤，故在防制方面面临较大困难。长期以来，对于本病的治疗和预防上都依赖于化学合成类药物，然而化学合成类药物造成的耐药性及药物残留现象严重，致使化学合成类药物对于本病的防制效果越来越差，已经达不到预期的效果。乳酸菌是一类存在于自然界中的重要益生菌，其在肠道微生态平衡中起到重要作用。目前，已有乳酸菌等益生菌具有抗寄生虫作用的相关研究，但有与鸡球虫病相关研究很少。因此，本研究旨在通过基因工程技术构建具有免疫增强功能的重组乳酸菌并检测其的抗柔嫩艾美耳球虫效果，为抗球虫乳酸菌制剂的研制提供理论参考。本研究将IL2与pSIP409及球虫so7基因共同连接，构建了重组质粒pSIP409-so7-IL2，通过电转化将其转化至大肠杆菌，进行小提验证，证明成功后将其电转化进入受体菌乳酸菌*** NC8，通过小量提取鉴定、双酶切鉴定及PCR鉴定试验证明转化取得了成功，并可以生成表达蛋白。重组乳酸菌免疫雏鸡，检测其抗柔嫩艾美耳球虫保护效果。试验雏鸡随机分为四组，分别为：重组乳酸菌组、空载体乳酸菌组、不免疫攻虫组（红对照组）、不免疫不攻虫组（白对照组）。重组乳酸菌组与空载体组1日龄的雏鸡分别饲喂重组乳酸菌和空载体质粒稀释液1mL（浓度为1×108CFU/mL）连续饲喂7天。7日后对红对照组、重组乳酸菌组、空载体组的试验鸡人工感染球虫，感染量为5×104个/只。感染后每日检测体重，于感染后8d处死试验鸡，取脾脏、盲肠及外周血进行实验指标检测。分别检测增重、盲肠病变计分、OPG、抗球虫指数ACI、IgG及CD4+和CD8+，以评估重组乳酸菌对鸡的保护力。结果显示，重组乳酸菌能够有效的降低OPG，减小盲肠病变，提高增重，提高抗球虫指数，使机体产生更多的IgG和CD4+与CD8+细胞。红对照组与重组乳酸菌组的OPG值分别为3.7×105个和1.2×105个差异显著（p＜0.05）;增重分别为119.7g与164.96g差异显著（p＜0.05）;盲肠病变计分分别为2.8分与0.7分，差异明显（p＜0.05）;ACI分别为138.15与181.75，重组乳酸菌pSIP409-so7-IL2的抗球虫指数处在保护性优秀区间（ACI＞180）;IgG为5.9与14.7差异显著（p＜0.05）;CD4+含量为14.7%与26.3%;CD8+含量为30.4%与51.7%。综合各项数据结果，发现重组乳酸菌pSIP409-so7-IL2具有较优秀的保护效力，能有效的保护免疫鸡抵抗球虫。

关键词：柔嫩艾美耳球虫 so7基因 IL-2 乳酸菌免疫保护

柔嫩艾美耳球虫so7基因与树突状细胞诱导肽融合表达重组乳酸菌的制备

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

柔嫩艾美耳球虫SO7基因与树突状细胞诱导肽融合表达重组乳酸菌的...

作者：杜金粉吉林农业大学

学位级别：硕士

球虫病是由艾美耳属的球虫引起的一种危害性比较严重的细胞内寄生虫病,是世界禽类养殖业中最常见的疾病之一。7种艾美耳球虫分别寄生于鸡肠道不同部位的上皮细胞,从而引起鸡不同程度的发病和死亡。孢子化球虫侵入鸡肠道上皮细胞中经过4-... 详细信息

球虫病是由艾美耳属的球虫引起的一种危害性比较严重的细胞内寄生虫病,是世界禽类养殖业中最常见的疾病之一。7种艾美耳球虫分别寄生于鸡肠道不同部位的上皮细胞,从而引起鸡不同程度的发病和死亡。孢子化球虫侵入鸡肠道上皮细胞中经过4-5天的潜伏期才能排出成熟的卵囊,当人们通过显微镜看到粪便中含有成熟卵囊时已经是球虫病的晚期,而且球虫已经对鸡肠道黏膜造成了不可弥补的损伤,会影响肠道的正常消化、吸收,降低了饲料利用率,从而阻碍鸡的正常生长发育,造成体重下降,严重感染时可导致鸡死亡,死亡率可高达80%,甚至全群覆灭。长期以来,鸡球虫病的防治都依赖化学药物。然而,由于球虫对化学药物极易产生抗药性,不仅使用药量加大,防治的费用增加,而且还会造成药物残留、生态环境污染等问题,因此使得人们不得不寻求新的方法来预防鸡球虫病。为了更好的控制和预防鸡球虫病,研制出鸡球虫疫苗是当务之急。在已报道的球虫基因中,S07基因编码的抗原位于柔嫩艾美耳球虫子孢子折光体上,是一种保护性抗原,其表达产物免疫鸡后对球虫具有一定的防御作用,而且对其他球虫也有一定的交叉保护作用。本研究将融合有树突状细胞诱导肽(DCpep)的S07基因串联到乳酸菌穿梭表达载体pSIP409中,构建重组质粒pSIP409-so7-DCpep,将其在乳酸菌中表达并检测其免疫结果。根据GenBank上所发表的S07基因开放阅读框(ORF)设计一对特异性引物。将PCR扩增产物分别克隆至pMD18-T-Vector中,转化至感受态细胞DH5a中,通过质粒提取、酶切鉴定、PCR鉴定、序列测定与分析等方法鉴定,与GenBank所发表的S07基因比对,同源性达到了99%,同时成功融合了36个碱基的DCpep。本实验构建了重组质粒pSIP-409-so7,然后将其电转化至*** NC8中,筛选阳性克隆,进行western-blotting检测,结果表明该重组菌表达了23.87KDa的融合蛋白,符合预期结果。同样的方法制备pSIP-409-so7-DCpep重组乳酸菌,可见在25.04KDa处有明显的蛋白条带。给1日龄肉雏鸡连续喂服四种不同的菌种两周,然后用球虫感染雏鸡,同时设定对照组,观察一周。结果表明,与对照组相比,实验组鸡盲肠内的病变情况明显减轻,发病症状明显减轻,排出的卵囊量减少,差异显著。实验结果表明,so7-DCpep基因在*** NC8中获得成功表达,从而为研制抗鸡球虫益生菌制剂奠定基础。

关键词：球虫病 so7基因树突状细胞诱导肽融合重组乳酸菌

柔嫩艾美耳球虫YZ株so7基因的克隆、核苷酸及氨基酸序列分析

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

柔嫩艾美耳球虫YZ株SO7基因的克隆、核苷酸及氨基酸序列分析

柔嫩艾美耳球虫so7基因在以thyA基因为选择压力的非抗性载体中的表达

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会

作者：许金俊陶建平彭金彪王留扬州大学兽医学院

本研究对柔嫩艾美耳球虫(***)YZ株折光体S07抗原基因进行了克隆、核苷酸及氨基酸序列分析。以纯化的*** YZ株卵囊孢子化7h时提取的总RNA为模板,设计特异性引物,应用两步法RT- PCR技术扩增出so7基因特异性片段。将扩增出的片段插入pUCm-... 详细信息

本研究对柔嫩艾美耳球虫(***)YZ株折光体S07抗原基因进行了克隆、核苷酸及氨基酸序列分析。以纯化的*** YZ株卵囊孢子化7h时提取的总RNA为模板,设计特异性引物,应用两步法RT- PCR技术扩增出so7基因特异性片段。将扩增出的片段插入pUCm-T载体,随机选择经蓝白斑筛选、PCR 及酶切鉴定为阳性的两个克隆分别进行测序分析,并对结果进行验证。结果表明,两个阳性克隆所含插入片段的DNA序列完全一致,含一全长651个核苷酸的开放阅读框,富含AGC和CTG重复序列,编码区核苷酸与LS18株和BJ株的同源性都为99．5％,与HB株同源性为99．4％、与GD株同源性为99．7％。其推测的氨基酸序列与LS18株和GD株的同源性都为99．1％,与BJ和FIB株同源性为98．6％。通过对其蛋白抗原性、表面可能性、亲水性、柔性区、二级结构等参数预测表明,YZ株核苷酸的变异未引起其蛋白主要特性和B细胞表位的变化。研究结果为研制***的基因工程疫苗奠定了基础。

关键词：柔嫩艾美耳球虫 so7基因克隆序列分析

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

柔嫩艾美耳球虫SO7基因在以thyA基因为选择压力的非抗性载体中的...