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柔嫩艾美耳球虫SO7基因重组乳酸菌的构建及保护性效果研究

柔嫩艾美耳球虫SO7基因重组乳酸菌的构建及保护性效果研究

作     者:杨智勇 

作者单位:吉林农业大学 

学位级别:硕士

导师姓名:赵权

授予年度:2014年

学科分类:090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题:柔嫩艾美耳球虫 SO7基因 IL-2 乳酸菌 免疫保护 

摘      要:鸡球虫病作为养禽业中最常见也是危害最广泛的一种寄生虫病,给养鸡业造成了巨大的经济损失。由于其发病多为多种球虫混合感染,对鸡肠道的不同部位造成不同程度的损伤,故在防制方面面临较大困难。长期以来,对于本病的治疗和预防上都依赖于化学合成类药物,然而化学合成类药物造成的耐药性及药物残留现象严重,致使化学合成类药物对于本病的防制效果越来越差,已经达不到预期的效果。乳酸菌是一类存在于自然界中的重要益生菌,其在肠道微生态平衡中起到重要作用。目前,已有乳酸菌等益生菌具有抗寄生虫作用的相关研究,但有与鸡球虫病相关研究很少。因此,本研究旨在通过基因工程技术构建具有免疫增强功能的重组乳酸菌并检测其的抗柔嫩艾美耳球虫效果,为抗球虫乳酸菌制剂的研制提供理论参考。 本研究将IL2与pSIP409及球虫SO7基因共同连接,构建了重组质粒pSIP409-SO7-IL2,通过电转化将其转化至大肠杆菌,进行小提验证,证明成功后将其电转化进入受体菌乳酸菌*** NC8,通过小量提取鉴定、双酶切鉴定及PCR鉴定试验证明转化取得了成功,并可以生成表达蛋白。 重组乳酸菌免疫雏鸡,检测其抗柔嫩艾美耳球虫保护效果。试验雏鸡随机分为四组,分别为:重组乳酸菌组、空载体乳酸菌组、不免疫攻虫组(红对照组)、不免疫不攻虫组(白对照组)。重组乳酸菌组与空载体组1日龄的雏鸡分别饲喂重组乳酸菌和空载体质粒稀释液1mL(浓度为1×108CFU/mL)连续饲喂7天。7日后对红对照组、重组乳酸菌组、空载体组的试验鸡人工感染球虫,感染量为5×104个/只。感染后每日检测体重,于感染后8d处死试验鸡,取脾脏、盲肠及外周血进行实验指标检测。分别检测增重、盲肠病变计分、OPG、抗球虫指数ACI、IgG及CD4+和CD8+,以评估重组乳酸菌对鸡的保护力。结果显示,重组乳酸菌能够有效的降低OPG,减小盲肠病变,提高增重,提高抗球虫指数,使机体产生更多的IgG和CD4+与CD8+细胞。红对照组与重组乳酸菌组的OPG值分别为3.7×105个和1.2×105个差异显著(p0.05);增重分别为119.7g与164.96g差异显著(p0.05);盲肠病变计分分别为2.8分与0.7分,差异明显(p0.05);ACI分别为138.15与181.75,重组乳酸菌pSIP409-SO7-IL2的抗球虫指数处在保护性优秀区间(ACI180);IgG为5.9与14.7差异显著(p0.05);CD4+含量为14.7%与26.3%;CD8+含量为30.4%与51.7%。综合各项数据结果,发现重组乳酸菌pSIP409-SO7-IL2具有较优秀的保护效力,能有效的保护免疫鸡抵抗球虫。

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