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脂多糖通过调节iNOS表达影响人卵巢癌skov3/ddp细胞顺铂耐药性的研究

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毒理学杂志 2017年第5期31卷 350-354页

作者：于洋刘师兵李松岩徐路徐冶吉林医药学院医学科研实验室吉林吉林132013 吉林医药学院基础医学院

目的观察脂多糖诱导的skov3/ddp细胞内分泌型一氧化氮合酶(iNOS)表达变化对人卵巢癌skov3/ddp细胞株顺铂耐药性的影响,并初步探讨机制。方法体外培养skov3/ddp细胞,分为对照组、顺铂组、脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)组和联合用药组... 详细信息

目的观察脂多糖诱导的skov3/ddp细胞内分泌型一氧化氮合酶(iNOS)表达变化对人卵巢癌skov3/ddp细胞株顺铂耐药性的影响,并初步探讨机制。方法体外培养skov3/ddp细胞,分为对照组、顺铂组、脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)组和联合用药组共4组,对照组给予常规不加血清培养基,顺铂组给予10μg/ml顺铂,LPS组给予浓度为1μg/ml的LPS,联合用药组给予10μg/ml顺铂和1μg/ml LPS,均作用24 h。MTT法检测各组细胞活力;蛋白免疫印迹法观察各组iNOS表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;间接免疫荧光法观察各组细胞激活型Caspase-3表达。结果联合用药组细胞活力明显低于顺铂组(P0.05),LPS组和联合用药组iNOS表达水平明显高于对照组(P细胞术结果显示联合用药组细胞凋亡率明显高于顺铂组(P细胞激活型Caspase-3表达高于顺铂组(Pskov3/ddp细胞顺铂耐药性,这可能与其提高skov3/ddp细胞内iNOS表达水平有关。

关键词：脂多糖顺铂耐药性 i NOS skov3/ddp细胞

雷公藤多苷协同顺铂诱导skov3/ddp细胞凋亡及其与PI3K/AKT/NF-KB信号通路关系的研究

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雷公藤多苷协同顺铂诱导SKOV3/DDP细胞凋亡及其与PI3K/AKT/NF-KB...

作者：占欣璐南昌大学

学位级别：硕士

目的:本课题组前期研究发现雷公藤内酯醇（TP）与ddp联合应用可促进人卵巢癌细胞凋亡,产生协同抗癌作用。TP属于试验用品尚未应用于临床,是雷公藤多苷（Tripterygium wilfordii Hook.f.,GTW）的主要活性成份。雷公藤多苷具有抗炎、免疫... 详细信息

目的:本课题组前期研究发现雷公藤内酯醇（TP）与ddp联合应用可促进人卵巢癌细胞凋亡,产生协同抗癌作用。TP属于试验用品尚未应用于临床,是雷公藤多苷（Tripterygium wilfordii Hook.f.,GTW）的主要活性成份。雷公藤多苷具有抗炎、免疫抑制的作用,是否具有和TP类似的抗肿瘤作用呢?本研究在前期研究基础上,探讨GTW对skov3/ddp细胞凋亡和细胞周期的影响及其机制,从而为GTW应用于晚期耐药性卵巢癌提供实验室依据。方法:（1）取对数生长期细胞,随机分为以下八组:j组RPMI 1640、k组10μg/ml ddp、l组50μg/ml GTW、m组800μg/ml GTW、n组3200μg/ml GTW、o组10μg/ml ddp+50μg/ml GTW、p组10μg/ml ddp+800μg/ml GTW、q组10μg/ml ddp+3200μg/ml GTW,药物作用24h后,于倒置相差显微镜及荧光倒置显微镜下观察细胞形态学变化。（2）取对数生长期细胞,随机分为以上八组,药物作用24h后,采用Hochest33258染色法计算细胞平均凋亡率。（3）取对数生长期细胞,随机分为以上八组,药物作用24h后,流式细胞术检测细胞周期变化。（4）取对数生长期细胞,随机分为以上八组,药物作用24h后,Western blot技术检测分析其PI3K/AKT/NF-kB信号通路相关因子PI3K、T-AKT、p-AKT（ser473）、Ik Bα、NF-kB、Bcl-2的表达变化。结果:（1）药物作用24h,与空白对照组及ddp组相比,GTW组、联合组均可见细胞发生凋亡样改变:细胞皱缩、伪足消失、细胞由短梭形变为圆形、细胞核染色质浓缩,并可见坏死细胞脱落漂浮于培养基上;ddp组与空白对照组相较无明显差异;GTW组及联合组与空白对照组相比,细胞发生凋亡样改变比例增加,且药物浓度越高,比例越大;联合组细胞凋亡比例均高于相应GTW组。（2）药物作用24h后,荧光倒置显微镜下观察发现:空白对照组细胞及ddp组细胞状态良好,伪足清晰,淡染、偶可见少量致密浓染细胞;GTW组、联合组细胞变小、细胞核内染色质高度浓缩、凝集、可见细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体;GTW组及联合组与空白对照组相比较,浓染细胞明显增多,且随药物浓度升高而增加;联合组浓染细胞均多于相应GTW组。（3）10μg/ml ddp组凋亡率（3.33±0.61）及50μg/ml GTW组凋亡率（4.27±0.66）与空白对照组细胞凋亡率（2.20±0.20）相比无显著差异（p＞0.05）,800μg/ml GTW组凋亡率（9.67±0.70）及3200μg/ml GTW组凋亡率（17.60±1.20）与与空白对照组凋亡率相比,凋亡率显著升高（p＜0.001）,GTW组凋亡率呈浓度依赖性（p＜0.05）;10μg/ml ddp+50μg/ml GTW组凋亡率（18.27±1.01）、10μg/ml ddp+800μg/ml GTW组凋亡率（24.20±0.80）及10μg/ml ddp+3200μg/ml GTW组凋亡率（38.33±0.50）与空白对照组凋亡率相比较,凋亡率显著升高（p＜0.001）,联合组凋亡率均呈浓度依赖性;联合组与相应GTW组相比凋亡率显著升高（p＜0.001）。（4）GTW组、联合组耐药性卵巢癌细胞skov3/ddp均发生细胞周期S期阻滞。10μg/ml ddp组S期细胞比例（24.24±2.40）与空白对照组（19.34±2.83）相比无明显差异（p＞0.05）,50μg/ml GTW组S期细胞比例（37.23±0.97）、800μg/ml GTW组（38.86±1.71）、3200μg/ml GTW组（43.40±2.09）、10μg/ml ddp+50μg/ml GTW组（51.51+0.82）、10μg/ml ddp+800μg/ml GTW组（53.10+0.48）及10μg/ml ddp+3200μg/ml GTW组（59.52+2.34）与空白对照组相比均明显升高（p＜0.001）;联合组S期细胞比例与相应GTW组相比均明显升高（p＜0.001）;各组S期细胞比例升高程度呈药物浓度依赖性（p＜0.05）。（5）各组细胞PI3K、T-AKT、Ik Bα蛋白表达一致,无明显差异;p-AKT（ser473）、NF-kB、Bcl-2蛋白的表达随GTW浓度升高,总体呈下降趋势（p＜0.05）,GTW与ddp联合组表达量显著低于相应GTW单药组（p＜0.05）。其中p-AKT（ser473）蛋白在800μg/ml GTW组、3200μg/ml GTW组、10μg/ml ddp+50μg/ml GTW组、10μg/ml ddp+800μg/ml GTW组、10μg/ml ddp+3200μg/ml GTW组相对表达量均较空白对照组降低（p＜0

关键词：雷公藤多苷 skov3/ddp细胞卵巢癌凋亡化疗增敏

BH3模拟物ABT737诱导人卵巢癌skov3/ddp细胞凋亡与自噬

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毒理学杂志 2019年第1期33卷 7-11页

作者：于洋徐路刘师兵李松岩徐冶吉林医药学院医学科研实验室吉林吉林132013 吉林医药学院基础医学院组织与胚胎学教研室吉林吉林132013

目的观察ABT737作用于人卵巢癌顺铂耐药skov3/ddp细胞后,细胞凋亡和自噬的发生,探讨抑制自噬后对凋亡的影响。方法体外培养skov3/ddp细胞,按ABT737药物终浓度0、2.5、5.0和10.0μmol/L分为4组,分别作用12和24 h。流式细胞术检测各组细... 详细信息

目的观察ABT737作用于人卵巢癌顺铂耐药skov3/ddp细胞后,细胞凋亡和自噬的发生,探讨抑制自噬后对凋亡的影响。方法体外培养skov3/ddp细胞,按ABT737药物终浓度0、2.5、5.0和10.0μmol/L分为4组,分别作用12和24 h。流式细胞术检测各组细胞凋亡率,分别采用免疫荧光和免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞自噬相关蛋白LC3和Beclin-1表达水平。将细胞分为对照组、ABT737组、3-Ma组和联合用药组,分别以细胞培养基、ABT737(5.0μmol/L)、3-Ma(1.0 mmol/L)和ABT737联合3-Ma作用于skov3/ddp细胞,Western blot法检测12和24 h后凋亡相关蛋白active Caspase-3和cyto C的表达水平。结果与对照组比较,12和24 h各剂量ABT737组细胞凋亡率均明显增高,差异有统计学意义(P3和Beclin-1蛋白表达,结果显示随着ABT737药物终浓度增加和作用时间的延长,两蛋白阳性表达亮度均越来越强,提示蛋白表达增强。Western blot检测LC3和Beclin-1蛋白表达水平,结果显示随着ABT737药物终浓度增加和作用时间的延长,细胞中LC3(F=10.878,F=13.256,P365,P3-Ma抑制自噬后,与ABT737组相比,联合用药组active Caspase-3 12和24 h表达水平明显增强,12和24 h cyto C表达水平也明显增强,差异有统计学意义(P37诱导人卵巢癌顺铂耐药skov3/ddp细胞凋亡的同时伴随着自噬的发生,抑制自噬能够促进凋亡。

关键词： ABT737 凋亡自噬 3-Ma skov3/ddp细胞

靶向干扰Akt对耐顺铂人卵巢癌细胞系skov3/ddp细胞体外生长的研究

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靶向干扰Akt对耐顺铂人卵巢癌细胞系SKOV3/DDP细胞体外生长的研究

作者：刘俊丽南昌大学

学位级别：硕士

目的：通过siRNA靶向沉默Akt基因，探讨其对卵巢癌细胞系skov3/ddp细胞生长的影响作用，为卵巢癌的基因治疗，提供新的实验依据。方法： 1、采用Lipofectamine2000脂质体介导法将特异性的Akt siRNA转染入人卵巢癌skov3/ddp细胞，检测s... 详细信息

目的：通过siRNA靶向沉默Akt基因，探讨其对卵巢癌细胞系skov3/ddp细胞生长的影响作用，为卵巢癌的基因治疗，提供新的实验依据。方法： 1、采用Lipofectamine2000脂质体介导法将特异性的Akt siRNA转染入人卵巢癌skov3/ddp细胞，检测siRNA靶向沉默Akt后对卵巢癌细胞生长的影响。 2、用转染试剂Lipofectamine2000包裹不同浓度荧光标记的siRNA（FAM-siRNA）转染skov3/ddp细胞，采用流式细胞仪检测其转染效率，确定siRNA最佳转染浓度。 3、筛选有效Akt siRNA片段，实验分为5组：①空白对照组（control）②Akt siRNA-1③Akt siRNA-2④Akt siRNA-3⑤阴性对照组（Negative Control，NC）。转染48h后，用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测各组Akt mRNA的表达情况，筛选出Akt siRNA片段。 4、Akt siRNA片段转染到卵巢癌skov3/ddp细胞后对细胞生长的影响。将筛选出的Akt siRNA片段经Lipofectamine2000转染到卵巢癌skov3/ddp细胞，实验分3组：①空白对照组（control）②Akt siRNA转染组③阴性对照组（NegativeControl，NC）。 5、转染48h后，采用流式细胞仪分别检测各组的细胞周期、细胞的凋亡变化;CCK8法检测细胞的增殖活性;Western Blot法检测Akt及p-Akt蛋白的表达水平。结果： 1、Lipofectamine2000分别包裹50nM、80nM、100nM的FAM-siRNA转染skov3/ddp细胞6h后，流式细胞仪检测结果示：转染效率都在80%以上，考虑lipo2000对细胞的毒害作用，siRNA为50nM时转染效率最佳。 2、转染48h后，qRT-PCR检测各组Akt mRNA的表达情况示：3个siRNA片段组Akt mRNA的表达水平与control组、NC组比较，表达水平明显下调，差异有统计学意义（P0.05）。本实验选取siRNA片段Ⅱ作为有效的siRNA片段。 3、转染48h后，采用流式细胞仪检测各组的细胞周期，结果示：Akt siRNA转染组G0/G1期所占比例与control组、NC组比较明显上调，S期、G2/M期所占比例与control组、NC组比较，各期所占比例明显下调，差异均具有统计学意义（P0.05）。 4、转染48h后，采用流式细胞仪检测各组的细胞凋亡，结果示：Akt siRNA转染组的早、晚期凋亡率，与control组及NC组相比，其凋亡率明显增高，差异有统计学意义（P0.05）。 5、转染24h、48h、72h后，CCK-8结果示：随着时间推移，Akt siRNA特异性转染组细胞生长明显受限，抑制率相应升高，转染后72h，细胞生长受到最明显的抑制，NC组与control组相比，细胞生长程度无明显改变。 6、转染48h后，Western Blot法结果示：Akt siRNA特异性转染组Akt、p-Akt的蛋白表达，与control组、NC组相比，明显降低蛋白表达水平，差异有显著性（Pskov3/ddp细胞的生长。 2、siRNA沉默Akt基因能明显抑制人卵巢癌skov3/ddp细胞的增殖活性，阻滞细胞周期在G0/G1期，并且下调Akt在skov3/ddp细胞中蛋白的表达，其抑制机制可能与敲除PI3K/Akt信号通路中Akt基因，阻断其对下游多种效应分子的活化，促进细胞凋亡有关。 3、siRNA特异性沉默人卵巢癌skov3/ddp细胞中Akt基因，抑制该肿瘤细胞的生长，有望成为卵巢癌基因治疗的新靶点。

关键词：卵巢癌 siRNA Akt skov3/ddp细胞细胞凋亡

柚皮苷逆转人卵巢癌耐药skov3/ddp细胞耐药性及逆转机制的研究

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临床肿瘤学杂志 2016年第7期21卷 598-602页

作者：王磊蔡丽萍南昌大学第一附属医院妇产科南昌330006

目的研究柚皮苷对卵巢癌顺铂（ddp）耐药细胞skov3/ddp体外增殖的影响及耐药逆转作用,并初步探讨相关耐药机制。方法采用MTT法测定ddp对skov3和skov3/ddp细胞的半数抑制浓度（IC_（50））,柚皮苷对skov3/ddp细胞的增殖抑制作用及柚皮... 详细信息

目的研究柚皮苷对卵巢癌顺铂（ddp）耐药细胞skov3/ddp体外增殖的影响及耐药逆转作用,并初步探讨相关耐药机制。方法采用MTT法测定ddp对skov3和skov3/ddp细胞的半数抑制浓度（IC_（50））,柚皮苷对skov3/ddp细胞的增殖抑制作用及柚皮苷联合ddp对skov3/ddp细胞的增殖抑制作用。筛选出非细胞毒性的柚皮苷浓度,将实验细胞分为空白对照组、2.5μg/ml ddp组、10μmol/L柚皮苷组、10μmol/L柚皮苷联合2.5μg/ml ddp组,分别采用RTPCR和Western blotting测定各组作用48 h后耐药基因MDR1 mRNA及MRP2 mRNA的表达及其相应的表达产物P-gp、MRP2蛋白的表达水平。结果 1-32μg/ml ddp处理skov3及skov3/ddp细胞48 h后,skov3细胞的IC_（50）为5.48μg/ml,skov3/ddp细胞为14.93μg/ml,耐药指数为2.72。柚皮苷对skov3/ddp细胞有明显的增殖抑制作用,且呈剂量和时间依赖性。选取10μmol/L柚皮苷作为逆转耐药实验浓度,10μmol/L柚皮苷联合ddp作用48 h后,skov3/ddp细胞对ddp的耐药指数为1.62,逆转倍数为1.68。RT-PCR及Western blotting检测显示,柚皮苷联合ddp组与ddp单药组比较,MDR1mRNA、MRP2 mRNA表达及P-gp、MRP2蛋白表达均明显下降,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论柚皮苷对卵巢癌skov3/ddp细胞的体外增殖具有明显抑制作用,并能逆转skov3/ddp细胞的耐药性,其逆转耐药的机制可能与下调耐药基因MDR1 mRNA及MRP2 mRNA及相应的P-pg、MRP2蛋白的表达有关。

关键词：柚皮苷卵巢癌化疗耐药 skov3/ddp细胞 MDR1 MRP2 P-gp

雷公藤内酯醇对耐顺铂卵巢癌skov3/ddp细胞体外活性的影响研究

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雷公藤内酯醇对耐顺铂卵巢癌SKOV3/DDP细胞体外活性的影响研究

表皮生长因子受体信号通路与卵巢癌细胞skov3/ddp耐药的相关性研究

全国中西医结合生殖系统炎症性疾病专题学术会议

作者：谭布珍钟焰英胡辉占伏良丰颖唐丽娟南昌大学第二附属医院妇产科

顺铂(cisplatin,ddp)是目前治疗卵巢癌的一线化疗药物,但铂类耐药的产生严重影响化疗的临床效果,逆转化疗耐药和提高患者疗效及生存率一直是卵巢癌治疗的难题。雷公藤内酯醇(triptolide,TPL)是从卫矛科植物雷公藤中提取的主要有效成分,... 详细信息

顺铂(cisplatin,ddp)是目前治疗卵巢癌的一线化疗药物,但铂类耐药的产生严重影响化疗的临床效果,逆转化疗耐药和提高患者疗效及生存率一直是卵巢癌治疗的难题。雷公藤内酯醇(triptolide,TPL)是从卫矛科植物雷公藤中提取的主要有效成分,研究表明其具有广谱的抗肿瘤作用,表现为抑制体内外肿瘤的生长及诱导多种肿瘤细胞凋亡。本课题组前期研究发现小剂量TPL可诱导耐顺铂卵巢癌细胞株COC1/ddp凋亡,C0C1/ddp株为国内建系,是从人卵巢腺癌细胞中分离出的对ddp耐药的细胞亚株,而skov3/ddp细胞株为国际公认的经典ddp耐药细胞株,故本研究采用skov3/ddp为研究用细胞株。目的:通过体外实验观察雷公藤内酯醇(triptolide,TPL)对耐顺铂人上皮性卵巢癌细胞株(skov3/ddp)的凋亡诱导作用,评价其临床应用价值,为使雷公藤内酯醇有望成为失去手术机会的晚期或耐化疗卵巢癌病人的有效治疗和/或增敏药物提供体外实验与理论依据。方法:1.人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株skov3/ddp细胞培养于含0.375 ug/ml ddp、10%FBS、含100 U/ml双抗RPMI-1640培养基中,置于37℃,5%C02孵箱中常规培养。skov3/ddp细胞为贴壁细胞,当细胞生长融合成致密单层后(覆盖率大约达到80-90%),以1:3比率传代,2天可传代一次。2.用不同浓度(0 nM、12.5 nM、25 nM、50 nM、100 nM)的TPL分别处理耐顺铂人上皮性卵巢癌细胞株skov3/ddp 24 h、48 h后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测skov3/ddp细胞的存活率。3.用不同浓度(0 nM、12.5 nM、25 nM、50 nM、100 nM)的TPL分别处理耐顺铂人上皮性卵巢癌细胞株skov3/ddp 24 h后,应用流式细胞术检测TPL对skov3/ddp细胞凋亡率的影响。结果:1.用不同浓度(12.5 nM、25 nM、50 nM、100 nM)的TPL分别处理skov3/ddp细胞24、48 h后,细胞平均存活率分别为95.192%±0.048%、87.106%±0.379%、65.943%±0.112%、56.426%±0.285%、77.165%±0.228%、64.313%±0.656%、34.452%±0.798%、24.824%±1.450%。2.用不同浓度(12.5 nM、25 nM、50 nM、100 nM)的TPL分别处理skov3/ddp细胞24 h后,细胞平均凋亡率分别为12.53%±0.42%、22.87%±0.31%、35.47%±0.16%、52.19%±0.27%。结论:TPL具有显著抑制耐顺铂人上皮性卵巢癌细胞skov3/ddp的增殖,并诱导其凋亡的作用。本实验结果可为雷公藤内酯醇应用于耐顺铂卵巢癌患者的临床治疗提供科学的理论依据,使得提高恶性卵巢肿瘤铂类耐药的治疗效果,延长恶性卵巢肿瘤患者生存期、提高其生存质量成为可能。

关键词：雷公藤内酯醇 skov3/ddp细胞凋亡

来源： cnki会议评论

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表皮生长因子受体信号通路与卵巢癌细胞SKOV3/DDP耐药的相关性研究

作者：王娜河北医科大学

学位级别：硕士

上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer, EOC）在妇科恶性肿瘤中死亡率居于首位，由于缺乏早期诊断方法和预防筛查措施，约75%的患者发现时已属于晚期。目前卵巢癌的治疗采用手术联合化疗的综合治疗手段，尽管治疗手段的进步使卵巢... 详细信息

上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer, EOC）在妇科恶性肿瘤中死亡率居于首位，由于缺乏早期诊断方法和预防筛查措施，约75%的患者发现时已属于晚期。目前卵巢癌的治疗采用手术联合化疗的综合治疗手段，尽管治疗手段的进步使卵巢癌患者的治疗取得了成效，但仍有60-80%的患者死于该病，最主要的原因就是术后高复发率及化疗耐药，因此，迫切需要一种新的治疗手段用于卵巢癌的临床治疗。表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor, EGFR）信号通路引起了学者们的广泛关注。有证据显示，许多肿瘤中存在EGFR的过表达和异常活化，其中包括卵巢癌[1-2]，EGFR活化后通过激活PI3K/Akt及Ras/Raf/MEK/ERK等在内的下游信号通路参与肿瘤的增殖、凋亡、血管生成、粘附、侵袭、转移等过程[3]，另外，研究表明EGFR信号通路可能介导化疗耐药的形成。吉非替尼（Iressa）是一种EGFR小分子酪氨酸激酶抑制剂，通过与ATP竞争受体胞内区结合位点抑制EGFR的自身磷酸化过程。已有报道应用吉非替尼阻断EGFR信号通路的活化，可以增加化疗药物的敏感性。因此将EGFR信号通路作为药物作用靶点为逆转卵巢癌耐药提供了可能。目的：通过抑制EGFR信号通路的活化，观察其对顺铂耐药卵巢癌细胞株skov3/ddp增殖、凋亡的影响，及逆转顺铂耐药的效果，初步探讨EGFR信号通路的活化与顺铂耐药的关系。方法： 1Western blot检测skov3及skov3/ddp细胞中EGFR、p-EGFR（活化的EGFR）蛋白的基础表达状态。 2Western blot检测顺铂对skov3及skov3/ddp细胞中EGFR、p-EGFR蛋白表达的影响。 3MTT法检测不同浓度的顺铂（0.625、1.25、2.5、5、10、20μg/ml）对skov3及skov3/ddp细胞增殖的影响，获得半数抑制浓度（IC50），并计算耐药指数。 4MTT法检测不同浓度的吉非替尼（0.01、0.1、1、10、100μM）对skov3及skov3/ddp细胞增殖的影响。 5MTT法检测1μM吉非替尼联合不同浓度的顺铂（0.625、1.25、2.5、5、10、20μg/ml）对skov3/ddp细胞增殖的影响，获得联用后顺铂的IC50，并计算耐药逆转倍数。 6流式细胞术检测吉非替尼、顺铂、吉非替尼联合顺铂对卵巢癌细胞凋亡的影响。 7Western blot检测吉非替尼、顺铂、吉非替尼联合顺铂对skov3/ddp细胞EGFR、p-EGFR及下游信号通路Akt、p-Akt（活化的Akt）、ERK、p-ERK（活化的ERK）蛋白表达的影响。 8统计学方法：采用SPSS13.0统计软件进行数据统计，计量资料以均数±标准差表示，方差齐性检验，三组以上采用方差分析，组间差异采用LSD法，两组数据比较采用t检验，以α﹦0.05为检验水准，当P＜0.05时，差异有统计学意义;当P＞0.05时，差异无统计学意义。结果： 1Western blot检测skov3及skov3/ddp细胞的EGFR、p-EGFR蛋白表达结果： skov3及skov3/ddp细胞中均存在EGFR及p-EGFR蛋白的表达，EGFR蛋白在亲本株与耐药株的表达量无显著差别（P>0.05），skov3/ddp细胞中p-EGFR蛋白的表达显著高于skov3细胞的表达，差异有统计学意义（P skov3及skov3/ddp细胞的EGFR、p-EGFR蛋白表达结果：顺铂处理前后，skov3及skov3/ddp细胞中EGFR蛋白的表达量无显著差别（P>0.05），顺铂处理后的skov3及skov3/ddp细胞中p-EGFR蛋白的表达量相比于顺铂未处理组的细胞明显增高，差异有统计学意义（P 3MTT法检测顺铂对skov3及skov3/ddp细胞增殖影响的结果：顺铂对skov3细胞的IC50为3.74±0.03，skov3/ddp细胞的IC50为17.66±0.58，耐药指数为4.72。 4MTT法检测吉非替尼对skov3及skov3/ddp细胞增殖影响的结果：吉非替尼可以抑制skov3及skov3/ddp细胞的生长，这种抑制作用呈剂量依赖性，当浓度为1μM时，抑制作用明显增加。同一浓度下吉非替尼对skov3细胞的抑制率高于skov3/ddp细胞的抑制率，差异有统计学意义（P skov3/ddp细胞增殖影响的结果：与单独应用顺铂相比，1μM的吉非替尼联合顺铂可增加对skov3/ddp细胞的抑制作用，联合作用后顺铂的IC50为7.42±0.15，逆转耐药倍数为2.38。 6流式结果：在skov3/ddp细胞中，吉非替尼、顺铂、吉非替尼+顺铂的凋亡率分别为

关键词：上皮性卵巢癌 skov3/ddp细胞 EGFR信号通路吉非替尼顺铂化疗耐药

磁性纳米Fe_3O_4对卵巢癌细胞耐药性的逆转作用及其与凋亡相关基因的关系

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癌症 2009年第11期28卷 1158-1162页

作者：姜智陈宝安吴强夏国华张宇高峰洪铁艳徐翠荣程坚李国宏陈文姬刘莉洁李小毛王雪梅东南大学临床医学院江苏南京210009 江苏省肿瘤医院妇瘤科江苏南京210009 东南大学生理教研室江苏南京210009 萨尔大学医学部德国萨尔布吕肯d66041 东南大学生物电子学国家重点实验室江苏南京210096

背景与目的:目前认为多药耐药(multi-drug resistance,MDR)是卵巢癌化疗失败和复发的主要原因。本研究探讨磁性纳米Fe3O4颗粒对卵巢癌细胞(skov3/ddp)耐药性的逆转作用及其与凋亡相关基因的关系。方法:将卵巢癌细胞的耐药株skov3/ddp分... 详细信息

背景与目的:目前认为多药耐药(multi-drug resistance,MDR)是卵巢癌化疗失败和复发的主要原因。本研究探讨磁性纳米Fe3O4颗粒对卵巢癌细胞(skov3/ddp)耐药性的逆转作用及其与凋亡相关基因的关系。方法:将卵巢癌细胞的耐药株skov3/ddp分为对照组、顺铂组(ddp组)、磁性纳米Fe3O4颗粒组(Fe3O4-MNPs组)、ddp+磁性纳米Fe3O4颗粒组(ddp+Fe3O4-MNPs组)4个组,用MTT比色法检测对细胞增殖的抑制作用,流式细胞术测定细胞凋亡,电感耦合等离子体原子发射光谱法测细胞内顺铂的含量,RT-PCR检测凋亡相关基因Bcl-2和Survivin mRNA在skov3/ddp中的表达。结果:Fe3O4-MNPs组细胞耐药性的逆转倍数为2.259。ddp+Fe3O4-MNPs组细胞凋亡率[(42.1±5.6)%vs.(26.9±4.1)%]及细胞内铂含量[(0.074±0.006)μmol/Lvs.(0.057±0.003)μmol/L]均高于ddp组(Pddp+Fe3O4-MNPs组细胞bcl-2、survivin mRNA表达均低于ddp组,其差异有统计学意义(P3O4颗粒可逆转卵巢癌细胞对顺铂的耐受性,作用机制可能与其降低抗凋亡基因bcl-2和survivin mRNA表达有关。

关键词：磁性纳米Fe3O4颗粒卵巢肿瘤 skov3/ddp细胞耐药逆转凋亡相关基因

雷公藤多甙对耐顺铂人上皮卵巢癌细胞体外活性的影响及机制研究

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中国免疫学杂志 2018年第7期34卷 1017-1022页

作者：占欣璐谭布珍钟焰英刘文成胡辉曹青何远桥南昌大学第二附属医院妇产科南昌334000 南昌大学第二附属医院分子中心南昌334000 南昌大学动物科学部南昌334000

目的:探讨传统中药雷公藤多甙(Tripterygium Wilfordii Hook.F.,GTW)对耐顺铂人上皮卵巢癌细胞体外活性的影响及机制研究。方法:将顺铂、不同浓度雷公藤多甙及二者联合处理skov3/ddp细胞24 h,于倒置相差显微镜及荧光倒置显微镜下观察细... 详细信息

目的:探讨传统中药雷公藤多甙(Tripterygium Wilfordii Hook.F.,GTW)对耐顺铂人上皮卵巢癌细胞体外活性的影响及机制研究。方法:将顺铂、不同浓度雷公藤多甙及二者联合处理skov3/ddp细胞24 h,于倒置相差显微镜及荧光倒置显微镜下观察细胞形态学变化;采用Hochest 33258染色法计算细胞平均凋亡率;流式细胞术检测细胞周期变化;Western blot检测P13K/Akt/NF-κB信号通路相关因子PI3K、T-AKT、p-AKT(ser473)、IκBα、NF-κB、Bcl-2的表达变化。结果:skov3/ddp细胞经不同浓度雷公藤多甙处理24 h后,出现典型的凋亡样改变;且凋亡率呈浓度依赖性,顺铂联合组凋亡率较相应单药组明显升高;skov3/ddp细胞经雷公藤多甙处理24 h后,S期细胞比例明显升高,升高程度呈浓度依赖性(P细胞比例与相应单药组相比均明显升高;雷公藤单药及雷公藤、顺铂联合处理skov3/ddp细胞24 h后,p-AKT、NF-κB、Bcl-2蛋白表达明显下调。结论:雷公藤多甙可使耐顺铂人上皮卵巢癌skov3/ddp细胞周期阻滞于S期并诱导其凋亡,与小剂量顺铂联用效用明显增加,其机制可能与p-AKT、NF-κB、Bcl-2表达下调,抑制P13K/Akt/NF-κB信号通路有关。

关键词：雷公藤多甙 skov3/ddp细胞卵巢癌凋亡化疗增敏