检索结果-南通市图书馆

作者：孟佩新重庆医科大学

学位级别：硕士

ska2(spindle and kinetochore associated complex subunit 2),也称FAM33A(family with sequence similarity 33,member A),是纺锤体与动粒相关复合物(spindle and kinetochore associated complex,ska)的一个亚基,在细胞周期调控和肿瘤等疾病发生发展过程中具有重要作用。我们前期发现,ska2在肺癌组织中的表达显著上调,参与调节肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,但其具体的分子行为机制仍不清楚。本研究旨在进一步探索ska2促进肺癌细胞增殖、迁移的分子机制。(1)ska2在肺癌中表达显著上调我们通过GEPIA数据库分析ska2在TCGA数据集肺癌组织中的表达情况,结果表明,与对照正常肺组织相比,ska2在肺癌组织表达显著上调,且ska2的表达水平与肺癌患者生存率呈显著负相关。(2)ska2基因沉默对肺癌细胞系A549基因表达谱的分析我们对Rice等发表的在肺癌细胞A549中沉默ska2基因的芯片数据进行了进一步生物信息学技术分析。对ska2基因沉默导致的差异表达基因进行了基因功能聚类(Gene ontology,GO)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)分析,结果表明,差异表达基因显著富集于物质转运、基因转录调控和氧化还原等生物学过程,同时提示ska2基因沉默可能导致PDSS2(Prenyl diphosphate synthase subunit2)等多个参与生物合成代谢途径的关键酶基因表达上调。采用RNA干扰技术抑制肺癌A549细胞中ska2的表达,RT-PCR结果初步验证确认,ska2基因沉默可导致ABCA1基因下调,PDSS2基因表达显著上调。PDSS2是参与CoQ10生物合成途径的第一个酶,也是其关键酶,值得进一步研究。(3)ska2抑制PDSS2的表达,降低CoQ10的含量为了进一步确认ska2是否可以调控PDSS2的表达和CoQ10的合成,我们构建了ska2过表达质粒pcDNA3.0-ska2并且使用RNA干扰技术沉默ska2。RT-PCR和免疫印迹分析结果表明,过表达ska2后,PDSS2表达显著降低,CoQ10B水平降低,而干扰ska2后,PDSS2表达明显增加,CoQ10B水平升高。该数据提示ska2可在m RNA和蛋白水平上抑制PDSS2基因的表达,并进而抑制CoQ10的合成。为了确认ska2是否可以调节PDSS2基因的转录,我们将PDSS2启动子的不同截短体和ska2过表达质粒pcDNA3.0-ska2共转染肺癌细胞A549,检测PDSS2基因启动子活性。结果表明,ska2对PDSS2核心启动子在内的多个启动子截短体的活性均有抑制作用。该结果表明,ska2可在转录水平上抑制PDSS2基因的表达。(4)CoQ10对肺癌细胞增殖和迁移能力的影响我们首先分析了CoQ10对肺癌细胞A549增殖和迁移能力的影响。在肺癌细胞A549中分别添加50μM和100μM的CoQ10,观察细胞增殖情况,结果显示,CoQ10对A549细胞的增殖无显著影响。同时,划痕愈合实验结果表明,CoQ10对肺癌细胞A549的迁移能力也没有显著影响。(5)CoQ10对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响接下来,我们进一步分析CoQ10是否调节其他癌细胞如结直肠癌细胞SW480和RKO的增殖和迁移能力。结果表明,CoQ10对结直肠癌细胞SW480的增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞迁移能力均无明显影响,对RKO的增殖也无明显影响,但可抑制RKO的迁移。(6)CoQ10抑制结直肠癌细胞RKO迁移能力的分子机制初探我们采用RNA-seq技术分析了划痕愈合实验条件下CoQ10处理所导致的RKO基因表达谱变化。GO和KEGG分析结果表明,差异表达基因显著富集于细胞粘附分子信号通路、细胞外基质受体信号通路和胆固醇信号通路等。定量RT-PCR验证结果表明,CoQ10处理确实可导致胆固醇合成通路中的PCSK9、HMGCR、HMGCS1和DHCR7基因以及胞外基质通路中的MMP10基因表达显著上调,提示CoQ10可能通过调节这些基因的表达来抑制结直肠癌细胞RKO的迁移能力。综上,本研究在前期研究基础上对ska2促进肺癌细胞增殖和迁移的分子机制进行了初步探索,发现ska2可以抑制PDSS2的表达,并可能进而抑制CoQ10合成,为进一步探索ska2在肺癌发生发展中的作用奠定了坚实的基础。同时,我们还发现CoQ10可能通过影响胆固醇代谢来抑制结直肠癌细胞的迁移能力,对进一步探索CoQ10在肺癌和结直肠癌等恶性肿瘤的分子机制和治疗价值有重要的理论和现实意义。

关键词： ska2 PDSS2 CoQ10 肺癌细胞细胞迁移

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

沉默ska2基因对人胶质瘤细胞增殖的影响

引用

安徽医科大学学报 2016年第7期51卷 930-934页

作者：贺小军马春春卞尔保王洪亮宗钢赵兵安徽医科大学第二附属医院神经外科合肥230601

目的采用siRNA沉默ska2基因,探讨其对人胶质瘤细胞生长的影响及其潜在的分子机制。方法对照组人胶质瘤细胞予以siRNA阴性序列转染,实验组予以siRNAska2序列转染。每组细胞转染48 h后应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)分析ska2 m... 详细信息

目的采用siRNA沉默ska2基因,探讨其对人胶质瘤细胞生长的影响及其潜在的分子机制。方法对照组人胶质瘤细胞予以siRNA阴性序列转染,实验组予以siRNAska2序列转染。每组细胞转染48 h后应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)分析ska2 mRNA表达情况。Western blot法分析ska2、PCNA和Cyclin D1蛋白表达情况,MTT法及细胞克隆实验分析ska2对A172细胞增殖及克隆形成能力的影响。结果 qRT-PCR结果显示实验组ska2mRNA表达较对照组显著减少(Pska2、PCNA和Cyclin D1蛋白表达水平亦较对照组显著降低(Pska2基因、减少人胶质瘤细胞ska2基因的表达能够抑制胶质瘤细胞的增殖。

关键词： ska2 胶质瘤细胞增殖

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

PRR11和ska2在宫颈癌组织中的表达及与预后的关系

PRR11和SKA2在宫颈癌组织中的表达及与预后的关系

引用

作者：赵郑青岛大学

学位级别：硕士

宫颈癌（Cervical Cancer）在全球女性妇科恶性肿瘤发病率中占据第四位。2018年,国际癌症研究中心（International Angency for Research on Cancer,IARC）报告,全球宫颈癌的新发病例达到57000例,死亡病例也达到31000万。2019年WHO（Wor... 详细信息

宫颈癌（Cervical Cancer）在全球女性妇科恶性肿瘤发病率中占据第四位。2018年,国际癌症研究中心（International Angency for Research on Cancer,IARC）报告,全球宫颈癌的新发病例达到57000例,死亡病例也达到31000万。2019年WHO（World Health Organization）将宫颈癌列为世界十大公共卫生安全威胁之一,宫颈癌的发病率和死亡率依据地区不同而有呈现出明显的差异,而其中绝大部分的宫颈癌患者来自于发展中国家。我国宫颈癌的发病率和死亡率均高于世界平均水平。相关数据表明,2018年中国女性宫颈癌的发病率（6.6%）和死亡率（7.5%）依然保持的较高水平,且育龄期女性占其中大多数。随着科学研究的不断深入,高危型人乳头瘤病毒（HPV）与宫颈癌发病的相关因素也逐渐被揭露。HPV疫苗的问世给无数的女性患者带来了希望,但由于各种原因,宫颈癌的发病率依然占据女性生殖系统恶性肿瘤的第二位。目前宫颈癌患者主要的治疗方式包括手术、放疗、化疗,针对不同的患者,制定个体化的治疗方案。早期宫颈癌患者多采取以手术为主,放化疗为辅的治疗方式,而中晚期宫颈癌患者多采用放化疗的姑息性治疗。放化疗带来的不良后果,严重影响患者的生活质量。近年来,学者们对宫颈癌的分子机制的研究越来越深入,其中包括不同的宫颈癌RNA分子、宫颈癌上皮-间质转化、不同作用位点的信号通路等。因此,我们为了进一步研究宫颈癌发病机制,为宫颈癌的诊疗提供新的思路和方法。目的:本研究拟观察PRR11和ska2蛋白在宫颈癌组织中的表达,并分析与宫颈癌临床病理参数、预后间的关系。统计学方法:利用SPSS统计软件进行数据分析,利用χ~2检验分析其在宫颈癌组织及癌旁正常组织中表达情况,采用Spearman法分析PRR11和ska2表达的相关性,Kaplan-Meier分析不同蛋白表达组间生存率,Cox单因素及多因素回归分析PRR11和ska2与宫颈癌患者预后之间的相关性。实验材料与方法:收集来自青岛大学附属烟台毓璜顶医院病理科2012年1月-2015年12月期间住院患者宫颈组织共289例。采用免疫组织化学方法检测PRR11和ska2在289例宫颈癌组织及其癌旁正常组织标本中的阳性表达率,探讨其与宫颈癌患者临床病理特点之间的关系,讨论其与宫颈癌患者预后之间的相关性。结果:PRR11在宫颈癌组织和癌旁正常组织中阳性表达率分别为60.21%（174/289）和16.96%（49/289）,ska2在宫颈癌组织和癌旁正常组织中阳性表达率分别为69.55%（201/289）和37.37%（108/289）,宫颈癌组织中PRR11和ska2阳性表达率明显高于癌旁组织（60.21%VS 16.96%,χ~2=1114.081,P＜0.001;69.55%VS 37.37%,χ~2=60.143,P＜0.001）,差异具有统计学意义;Spearman相关分析结果显示,PRR11和ska2阳性表达呈正相关关系（r=0.725,P＜0.001）,PRR11和ska2蛋白的表达均与FIGO分期、组织分化程度及淋巴结转移有关（P＜0.05）,但与年龄、肿瘤直径、肌层浸润和脉管浸润无关（P＞0.05）。PRR11、ska2阳性表达患者的3年OS均明显低于阴性表达者（78.16%VS94.78%,P＜0.05;82.09%VS90.91%,P＜0.05）;多因素Cox回归分析结果显示,FIGOⅢ期-Ⅳ期、PRR11阳性表达和ska2阳性表达是影响宫颈癌预后的关键风险因素（HR=1.698,95%CI:1.369-2.876,P＜0.001;HR=2.392,95%CI:1.294-3.596,P＜0.001;HR=1.597,95%CI:1.024-2.302,P＜0.001）。结论:1.PRR11在宫颈癌中呈现高表达,分期越高,阳性表达率越高,且与组织分化程度、有无淋巴结转移相关,患者预后OS明显下降。2.ska2在宫颈癌中呈现高表达,分期越高,阳性表达率越高,且与组织分化程度、有无淋巴结转移相关,患者预后OS明显下降。3.PRR11和ska2在宫颈癌患者中表达且呈正相关,是影响患者不良预后的独立危险因素,PRR11和ska2表达水平可能成为宫颈癌诊断和预后评估的有效性指标。

关键词：宫颈癌 PRR11 ska2 预后

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

PRR11-ska2“基因对”在乳腺癌中的功能及表达调控机制初探

PRR11-SKA2“基因对”在乳腺癌中的功能及表达调控机制初探

引用

作者：张春学重庆医科大学

学位级别：硕士

肿瘤相关基因PRR11(proline-rich 11)和ska2(spindle and kinetochore associated complex subunit 2),均定位于染色体17q22区,两者共享一个独特的双向启动子,组成一个独特的转录单元,是一个典型的“头对头”“基因对”(head-to-head gene pair)。我们课题组在前期研究中发现,肺癌细胞中,PRR11和ska2受到转录因子NF-Y和p53的调控,并与细胞周期调控和肿瘤发生发展均密切相关。肺癌组织中,PRR11和ska2基因表达水平均显著升高,且高水平的基因表达与肺癌病人的预后水平显著负相关;此外在肺癌细胞中,PRR11和ska2的敲降能够显著抑制细胞的增殖、迁移、侵袭等生理过程。在此基础上,本研究将对PRR11-ska2“基因对”在乳腺癌中的功能及表达调控机制进行初步探索。(1)PRR11-ska2“基因对”与乳腺癌预后的关联性分析利用GEO数据库,获得乳腺癌芯片GSE3494及GSE4922中PRR11和ska2的表达信息以及预后数据,分析PRR11和ska2在乳腺癌中的预后价值。即采用生物信息学方法,分析PRR11及ska2的表达水平与乳腺癌预后的关联性。结果表明,PRR11与ska2低表达组的病人生存期明显高于高表达组。(2)抑制PRR11与ska2的表达对乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响采用si RNA干扰技术,分别在MCF-7、MDA-MB-231细胞中将PRR11与ska2单独沉默或联合沉默。细胞表型分析结果表明,在两种乳腺癌细胞系中,与阴性对照组细胞相比,PRR11与ska2单独沉默组和联合沉默组细胞的增殖、迁移及侵袭能力均明显降低;与单独沉默组细胞相比,PRR11与ska2联合沉默后,细胞迁移及侵袭能力的降低程度更为显著。由此可以推测,PRR11与ska2在乳腺癌的发生发展中起到重要作用,且两者在功能上可能具有一定的协同或互补效应。定量RT-PCR验证结果分析表明,PRR11与ska2单独沉默或联合沉默后,多个与细胞增殖、迁移或侵袭相关基因的表达表现出不同程度的变化。该结果提示,PRR11与ska2有可能通过影响这些基因的表达变化参与乳腺癌的发生发展过程。(3)NF-Y对PRR11-ska2“基因对”的转录调控分析以前期构建的启动子荧光素酶报告基因重组体为模板,构建不同长度的PRR11-ska2启动子截短突变重组体,将这些重组体单独转染或与NFYB真核表达质粒共转入MCF-7细胞,并检测各重组体启动子活性。分析结果发现,PRR11-ska2启动子在乳腺癌细胞中具有双向启动子活性,NFYB对PRR11和ska2方向的转录无明显驱动作用;但是,在乳腺癌细胞中干扰NFYB表达,用定量RT-PCR检测PRR11及ska2的m RNA表达水平,结果发现NFYB基因沉默后可导致PRR11的转录下调,但不影响ska2的表达;进一步采用生物信息学方法分析乳腺癌组织中NFYB与PRR11-ska2表达的相关性,发现NFYB与PRR11的表达相关,而与ska2的表达不相关。(4)转录因子p53对PRR11-ska2“基因对”的转录调控及临床意义分析将PRR11-ska2启动子报告基因系列截短体分别单独转染或与p53真核表达质粒共转染MCF-7细胞,并检测各重组体启动子活性。实验结果显示,p53能够显著抑制各截短体的启动子活性。乳腺癌芯片数据分析发现,与野生型p53组相比,突变型p53组乳腺癌组织中PRR11及ska2的表达显著升高。p53与PRR11-ska2“基因对”的联合预后分析发现,p53未突变、PRR11及ska2低表达的病人生存期,明显高于p53突变、PRR11及ska2高表达的病人。综上所述,本研究发现PRR11-ska2“基因对”的表达与乳腺癌的预后负相关,可作为乳腺癌预后因子,PRR11-ska2“基因对”在乳腺癌的发生发展过程中具有重要作用,且转录因子NF-Y、p53可调控PRR11-ska2“基因对”的表达。本研究丰富了对PRR11-ska2“基因对”的认识,为深入探索该“基因对”在肿瘤发生发展的作用和表达调控机制奠定了坚实的基础,对其在乳腺癌的分子诊断与靶向治疗中的潜在应用具有积极的理论和现实意义。

关键词： PRR11 ska2 基因对乳腺癌 p53

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

长链非编码RNA SPRY4-IT1通过上调ska2基因表达对人胶质瘤细胞增殖和侵袭性的相关影响

长链非编码RNA SPRY4-IT1通过上调SKA2基因表达对人胶质瘤细胞增...

引用

作者：贺小军安徽医科大学

学位级别：硕士

目的采用RNA干扰技术(RNAi)使得长链非编码RNA SPRY4-IT1及ska2基因沉默,阐述长链非编码RNA SPRY4-IT1对人胶质瘤细胞增殖和侵袭性的相关影响。方法采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(q RT-PCR)及蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测正常... 详细信息

目的采用RNA干扰技术(RNAi)使得长链非编码RNA SPRY4-IT1及ska2基因沉默,阐述长链非编码RNA SPRY4-IT1对人胶质瘤细胞增殖和侵袭性的相关影响。方法采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(q RT-PCR)及蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测正常脑组织、人胶质瘤组织、人胶质瘤细胞株及相关处理细胞中长链非编码RNA SPRY4-IT1、ska2基因的表达状况,采用RNAi技术构建相关细胞模型,利用噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞增殖活力,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,划痕实验及Transwell方法检测胶质瘤细胞的迁移及侵袭能力。观察并探究长链非编码RNA SPRY4-IT1及ska2基因对人胶质瘤细胞增殖活力、成瘤能力及细胞侵袭性的相关影响。结果与正常脑组织相比,不同级别的人脑胶质瘤中长链非编码RNA SPRY4-IT1及ska2的表达均有上升,并且随胶质瘤级别的上升SPRY4-IT1及ska2表达水平也随之升高。采用RNAi技术使得长链非编码RNA SPRY4-IT1沉默后能够使得人脑胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力均受到不同程度的抑制。进一步的研究显示长链非编码RNA SPRY4-IT1与ska2基因在人胶质瘤中的表达呈正相关,并且敲除掉ska2基因之后也能使得人胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力受到抑制。结论长链非编码RNA SPRY4-IT1能通过上调ska2基因的表达促进人胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力,并且可以作为胶质瘤检测及化疗中的潜在分子靶标。

关键词：胶质瘤长链非编码RNA SPRY4-IT1 ska2

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

PRR11-ska2“基因对”在肺癌中的表达与功能分析

PRR11-Ska2“基因对”在肺癌中的表达与功能分析

引用

作者：王义涛重庆医科大学

学位级别：硕士

PRR11（Proline-rich protein11）是我们最近发现并鉴定的一个参与细胞周期调控和肺癌等肿瘤发生发展的新基因。ska2(spindle andkinetochore associated complex subunit2)，又称FAM33A(family withsequence similarity33, member A)，也是新近发现的一个与细胞周期调控和肿瘤发生发展均密切相关的新基因，但其在肺癌中的作用仍不甚清楚。我们前期已发现，这两个基因均定位于染色体17q23区，两者共享一个独特的双向启动子，以“头对头”（head-to-head）的方式排列形成一个基因对（gene pairs），且该“基因对”作为一个独立的转录单元发挥作用并受NFYB和p53调控。本研究将在此基础上对ska2以及PRR11-ska2“基因对”在肺癌中的表达水平及功能进行初步探索。（1）ska2在肺癌中的表达水平及临床意义分析采用定量RT-PCR技术检测肺癌组织和肺正常组织中ska2的表达水平，结果表明，ska2在肺癌组织中表达水平高于正常肺组织，且与肺癌的病理分级和临床分期密切相关，随着分化和恶性程度的增加ska2的表达水平不断升高。同时，采用生物信息学手段，分析了ska2在肺癌中的预后价值，结果表明，ska2高表达组的病人的总体生存期和预后无复发生存期显著低于低表达组。（2）PRR11-ska2“基因对”在肺癌中的表达水平及临床意义分析对PRR11与ska2在各种正常人体组织、肺癌组织和肺癌微阵列数据GSE13213中的表达水平相关性进行了分析。结果表明，在各种正常人体组织中，PRR11与ska2的表达呈正相关;肺癌组织中PRR11与ska2的表达呈高度正相关。在肺癌微阵列数据GSE13213中，PRR11与ska2的表达呈高度正相关，两者的表达水平还与NFYB的表达呈正相关，两者的表达水平在野生型的p53肺癌病人组的表达水平均低于突变型p53肺癌病人组。这些结果提示，PRR11与ska2在肺癌组织细胞中作为一个独立转录单元发挥作用，两基因在该转录单元中同时高效协调地转录，两者功能相关且同时受p53和NFYB的协调调控。同时，采用生物信息学手段，分析了PRR11-ska2“基因对”在肺癌中的预后价值，结果显示，PRR11与ska2同时高表达组的病人的总体生存期和预后无复发生存期显著低于PRR11与ska2的单独高表达组，表明PRR11-ska2“基因对”是个更具预后价值的标志物。（3）PRR11-ska2“基因对”在肺癌中的功能分析采用慢病毒介导的RNA干扰技术，分别在肺癌细胞系A549、H1299中构建了阴性对照以及PRR11与ska2基因单独沉默和联合沉默的稳定细胞株，分别命名为LV-shRNA-NC、LV-shRNA-PRR11、LV-shRNA-ska2和LV-shRNA-P+S。Western bloting结果表明，稳定细胞株中PRR11与ska2基因的表达被有效沉默。细胞表型分析结果表明，在H1299和A549两种肺癌细胞系中，与LV-shRNA-NC阴性对照组稳定细胞株相比，PRR11与ska2基因单独沉默和联合沉默的LV-shRNA-PRR11、 LV-shRNA-ska2和LV-shRNA-P+S组稳定细胞株的增殖、迁移及侵袭能力均显著降低;且与PRR11或ska2基因单独沉默组相比，PRR11与ska2联合沉默组稳定细胞株的增殖、迁移及侵袭能力的降低程度更为明显。该结果提示，PRR11与ska2对于肺癌发生发展过程均是必需的，两者功能不仅高度相关，且其功能具有一定的协同或互补效应。进一步通过定量RT-PCR技术检测了各组稳定细胞株中与细胞周期和肿瘤发生发展相关基因（包括CCNA1、CDC2、MAP4K4、RRM1、EPB41L3、CCNA2、NFIB和DHRS2）的表达变化。结果表明，与LV-shRNA-NC阴性对照组稳定细胞株相比，PRR11与ska2基因单独沉默和联合沉默组稳定细胞株中，上述基因均发生了不同程度的变化（减低或升高），且在H1299和A549两种肺癌细胞系中有所不同。该结果提示，虽然PRR11与ska2的功能高度相关，但其具体的功能和分子行为机制可能不同，且在不同的细胞系中也有所不同。综上，本研究结果不仅初步证实了ska2是一个新的参与肺癌发生与发展的新基因，而且也证实了PRR11-ska2“基因对”对于肺癌的发生发展过程是必需的，在肺癌的分子诊断和靶向治疗中具有潜在应用价值。

关键词： PRR11 ska2 肺癌增殖迁移侵袭

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

HEDGEHOG/GLI通路调节肺鳞癌细胞PRR11-ska2基因对的表达

HEDGEHOG/GLI通路调节肺鳞癌细胞PRR11-SKA2基因对的表达

引用

作者：孙艺耘重庆医科大学

学位级别：硕士

我们前期发现PRR11(proline-rich protein 11)与ska2(spindle and kinetochore associated complex subunit 2)构成“头对头”基因对,受到双向启动子驱动转录,协同促进非小细胞肺癌的发生发展。但导致该基因对在非小细胞肺癌中高表达的... 详细信息

我们前期发现PRR11(proline-rich protein 11)与ska2(spindle and kinetochore associated complex subunit 2)构成“头对头”基因对,受到双向启动子驱动转录,协同促进非小细胞肺癌的发生发展。但导致该基因对在非小细胞肺癌中高表达的信号通路尚不清楚。本研究首先根据TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库中肺鳞癌组织的RNA测序数据进行基因表达相关性分析和GSEA(Gene Set Enrichment Analysis)富集分析,发现PRR11-ska2表达相关基因群与Hh通路活化的基因背景高度相似。随后,采用GLI1/2的抑制剂GANT-61或GLI1/2-si RNA抑制肺鳞癌细胞的Hh通路,PRR11和ska2的表达水平也随之下降。接着,采用RNA测序技术进一步检测GANT-61处理的肺鳞癌细胞的m RNA表达谱,发现抑制肺鳞癌细胞的Hh通路后,397个基因表达发生明显改变(包括203个表达上调基因和194个表达下调基因)。经RT-PCR验证,与细胞分裂相关且与PRR11和ska2存在相互作用的一组基因(如BIRC5、NCAPG、CCNB2和BUB1)在GANT-61处理的细胞中显著下调。这组基因的高表达均显示肺鳞癌患者总体存活时间显著缩短。该研究的结果提示,GLI1/2调控着以PRR11-ska2基因对为核心的基因群的表达,后者高表达与肺鳞癌患者预后差密切关联。上述发现不仅有助于解析基因对PRR11-ska2在肺鳞癌中高表达的分子机制,也为围绕基因对PRR11-ska2的肺鳞癌个体化联合诊疗策略提供新思路。

关键词： hedgehog GLI PRR11 ska2 肺鳞癌

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

老年头颈部鳞状细胞癌中Mir-301a对PTEN基因表达的调控

引用

中国老年学杂志 2012年第22期32卷 4967-4968页

作者：许颖曹明根上海市徐汇区中心医院耳鼻喉科上海200031

目的研究老年头部和颈部鳞状细胞癌(HNSCC)的分子机制。方法利用基因组浏览器分析基因之间关系,并基于RealtimePCR检测头颈部鳞状细胞癌及癌旁样本中ska2、PIK3CA、AKT1、mir-301a、PTEN基因表达量。结果发现mir-301a具有调控PTEN基因... 详细信息

目的研究老年头部和颈部鳞状细胞癌(HNSCC)的分子机制。方法利用基因组浏览器分析基因之间关系,并基于RealtimePCR检测头颈部鳞状细胞癌及癌旁样本中ska2、PIK3CA、AKT1、mir-301a、PTEN基因表达量。结果发现mir-301a具有调控PTEN基因的靶向结合位点。RealtimePCR检测发现癌旁组织中各个指标在不同的临床分期间没有显著性差异,但是癌组织中ska2、PIK3CA、AKT1、mir-301a基因表达随着肿瘤的恶化显著增强,而PTEN的表达量则显著下降。结论 PI3K/Akt信号通路异常活化导致肿瘤的发生、发展。

关键词：头颈部鳞状细胞癌 PTEN Mir-301a ska2 PI3K Akt

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

内含子miRNA反馈调节其宿主基因表达和功能的研究

内含子miRNA反馈调节其宿主基因表达和功能的研究

引用

作者：黄宝春中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

microRNA是近年来非编码RNA研究的热点。miRNA是一类约22nt大小的内源RNA,它们在组织发育和细胞分化的特定阶段表达,可以在转录后水平对许多基因的表达起着重要的调控作用,参与发育、细胞增殖、凋亡、糖代谢、应激和肿瘤的发生的生命活... 详细信息

microRNA是近年来非编码RNA研究的热点。miRNA是一类约22nt大小的内源RNA,它们在组织发育和细胞分化的特定阶段表达,可以在转录后水平对许多基因的表达起着重要的调控作用,参与发育、细胞增殖、凋亡、糖代谢、应激和肿瘤的发生的生命活动。目前认为,大多数miRNA首先是通过pol II启动子转录,产生较长的,带有帽子结构和约80nt茎环结构的初始转录元(pri-miRNA),然后通过两种RNase III酶(Drosha和Dicer)加工成为成熟的miRNA,并组装成复合体(RISC或miRNP)。miRNA作为引导者,通过其5`端7 nt的种子区序列与靶基因的3′非翻译区序列的完全互补,介导靶基因mRNA水平的降低或者抑制其蛋白的翻译。随着研究逐渐深入,各种miRNA的功能越来越被了解。根据miRNA在基因组中的定位将其分为两类——基因间miRNA和内含子miRNA。内含子miRNA的研究逐渐引起人们的关注,它们来自编码蛋白基因(宿主基因)的内含子中,大多数的内含子miRNA与其宿主基因的表达具有一致性,这就提示它们之间在功能上有一定的关联。文献也报道有一些内含子miRNA能够反馈调节其宿主基因的表达和功能。本研究研究的目的就是对这种反馈调节的普遍性进行进一步的探究。本研究分主要为两部分: 第一部分:A549细胞中miRNA-301反馈调节其宿主基因ska2的表达和功能肺癌是全世界癌症死因的第一位,而且每年死亡人数都在上升,因此肺癌成为众多肿瘤中的研究热点。我们发现肺腺癌A549细胞中内含子miRNA-301表达很高,用miRNA-301特异抑制剂降低内源性miRNA-301后发现其宿主基因的表达下调,同时A549细胞的分裂指数增加和克隆形成能力降低,这与用siRNA敲除其宿主基因ska2产生的效果相同,说明miRNA-301在表达和功能上反馈调节其宿主基因。为找到miRNA-301反馈调节其宿主基因的信号通路,我们首先通过生物信息学确定miRNA-301的直接靶基因——MEOX2,后续的荧光素酶试验和mRNA表达水平实验进一步证明MEOX2是miRNA-301的靶基因。MEOX2的功能是抑制ERK信号通路。在A549细胞中由于miRNA-301的高表达导致MEOX2表达下降,进而ERK信号通路加强。ERK信号通路的加强增加其下游分子——CREB的活性。通过生物信息学和ChIP实验证实CREB是ska2的转录激活因子,CREB的活性增加从而导致上调ska2的表达。同时还发现CREB还上调ska2的相互作用蛋白ska1,这就说明miRNA-301功能上反馈调节其宿主基因的功能。CREB是肺癌发生中重要因子,由于它的活性增加导致其下游的相关癌基因——如c-fos和egr1高表达,这可能是肺癌发生的一个重要原因。本部分的实验结果一方面说明内含子miRNA-301在A549细胞反馈调节其宿主基因ska2,另一方面为肺癌的发生提供一种可能的机制。第二部分:内含子miRNA反馈调节其宿主基因表达现象的普遍性研究我们第一部分的研究和已发表文献表明这种反馈调节可能有一定的普遍性。直接验证内含子miRNA对其宿主基因功能上的反馈调节有难度,所以我们先从其对宿主基因表达上的反馈调节入手。为验证这种普遍性,我们我们从Sanger数据库将所有的miRNA下载,从中找出高度保守的内含子miRNA(大约65个),再参考ambion的miRNA在常见癌细胞中表达谱,从中再找出在我们所选的五个细胞系(HeLa、HepG2、A549、MCF-7、T24)中大部分较高表达的10个miRNA,分别是miR-26a/93/107/140-5p/191/153-1/196b/208a/218-1/338-5p。根据它们的序列合成它们的抑制(二氧甲基化的反义寡核苷酸)。然后将这些抑制剂分别转染上述五种细胞中,48小时后提总RNA,反转录,通过实时定量PCR检测它们宿主基因的表达变化。实验的结果表达大部分的miRNA会对其宿主基因的表达产生反馈调节,同时我们也发现在不同的细胞系中这种反馈调节的方向不同,譬如说miRNA-93在HeLa细胞中正向反馈其宿主基因MCM7,而在HepG2细胞中miRNA-93却是反向反馈其宿主基因MCM7。这部分结果为内含子miRNA的存在和功能提供了更好的理解。

关键词： miRNA-301 ska2 内含子miRNA 反馈调节普遍性

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

vMIP-Ⅱ N端肽调控LncRNA SPRY4-IT1和GAS5抗乳腺癌作用研究

vMIP-Ⅱ N端肽调控LncRNA SPRY4-IT1和GAS5抗乳腺癌作用研究

引用

作者：吴海华蚌埠医学院

学位级别：硕士

目的:探讨v MIP-ⅡN端肽(NT21MP)通过调控LncRNA SPRY4-IT1和GAS5抗乳腺癌的作用及分子机制。方法:1.qRT-PCR检测SPRY4-IT1和GAS5在人乳腺癌细胞株SKBR-3,MCF-7及过表达CXCR4的MDA-MB-231(pc DNA-CXCR4-MDA-MB-231)细胞中的表达差异;筛选SPRY4-IT1和GAS5的最佳干扰片段,鉴定SPRY4-IT1和GAS5过表达细胞株;2.qRT-PCR检测NT21MP和CXCR4对人乳腺癌细胞株中SPRY4-IT1和GAS5表达的影响;3.干扰及过表达SPRY4-IT1和GAS5,分别联合NT21MP,利用磺酰罗丹明(SRB)染色法检测细胞增殖能力;划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡;4.qRT-PCR及Western blot检测干扰或过表达SPRY4-IT1和GAS5,对细胞周期和凋亡相关基因m RNA及蛋白水平表达的影响;5.qRT-PCR检测SPRY4-IT1调控蛋白ska2在乳腺癌细胞株中的表达差异,干扰或过表达SPRY4-IT1对ska2表达的影响;6.qRT-PCR及Western blot筛选ska2的最佳干扰片段;7.干扰ska2,并分别联合SPRY4-IT1干扰或过表达,或NT21MP后,利用SRB法检测细胞增殖能力;划痕实验及Transwell实验检测细胞侵袭及转移能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果:1.SPRY4-IT1在pc DNA-CXCR4-MDA-MB-231细胞中表达最高,在MCF-7细胞中表达最低;GAS5在MCF-7细胞中表达最高,在SKBR-3细胞中表达最低;SPRY4-IT1干扰片段3的干扰效果最好(p2.NT21MP阻断SDF-1α的诱导作用,下调SPRY4-IT1的表达(p2/Bax比值和周期调控分子(CyclinD1)的表达(p2/Bax比值和周期调控分子(Cyclin D1)的表达(p2/Bax比值和周期调控分子(Cyclin D1)的表达(p2/Bax比值和周期调控分子(Cyclin D1)的表达(p21MP和si-SPRY4-IT1单独处理组,联合作用对细胞的增殖、侵袭及转移抑制作用更显著,G0/G1期细胞数比例和凋亡细胞数比例增加更明显;反之,过表达SPRY4-IT1与NT21MP联合作用,细胞的增殖、侵袭及转移能力高于NT21MP组,但低于pc DNA-SPRY4-IT1组,G0/G1期比例和凋亡细胞数低于NT21MP组,但高于pc DNA-SPRY4-IT1组;6.干扰GAS5与NT21MP联合作用,细胞的增殖、侵袭及转移能力高于NT21MP组,但低于si-GAS5组,G0/G1期细胞数比例和凋亡细胞数比例低于NT21MP组,但高于si-GAS5组;而相对于NT21MP和pc DNA-GAS5单独处理组,联合作用对细胞的增殖、侵袭及转移抑制作用更明显,G0/G1期细胞数比例和凋亡细胞数比例增加更明显;7.ska2在MCF-7细胞中表达最高,在SKBR-3细胞中表达最低;ska2干扰片段1的干扰效果最好(pska2的表达(pska2的表达(pska2表达后,细胞的增殖、侵袭及转移能力下降,阻滞细胞周期于G0/G1期(pska2和SPRY4-IT1,细胞的增殖、侵袭及转移能力比单独处理组降低更明显,G0/G1期比例和凋亡细胞数增加更明显;9.干扰ska2与过表达SPR

关键词：乳腺癌 NT21MP SPRY4-IT1 GAS5 ska2

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：