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ship2抑制剂ship2-IN-1改善阿尔兹海默病认知障碍以及缓解帕金森氏病多巴胺能神经退行性变的研究

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SHIP2抑制剂SHIP2-IN-1改善阿尔兹海默病认知障碍以及缓解帕金森...

作者：董玲中国医科大学

学位级别：硕士

目的:神经系统退行性疾病(Neurodegenerative diseases,NDs),其经典病理特征是人的大脑和脊髓中的神经元在结构和功能上发生不可逆性的永久性损伤,这种情况会随着病情的进展而逐渐恶化,最终会导致人的认知功能障碍。常见的NDs主要包括... 详细信息

目的:神经系统退行性疾病(Neurodegenerative diseases,NDs),其经典病理特征是人的大脑和脊髓中的神经元在结构和功能上发生不可逆性的永久性损伤,这种情况会随着病情的进展而逐渐恶化,最终会导致人的认知功能障碍。常见的NDs主要包括阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease,AD)、帕金森氏病(Parkinson’s disease,PD)等,这些疾病的发生可能与年龄和衰老有关。但是就目前来说,人们对于NDs的发病机制并不是完全清楚。目前,研究者们认为,NDs或许与氧化应激、免疫炎症反应、神经毒素和线粒体功能障碍等因素有关。含SH2结构域的Ⅱ型肌醇5’磷酸酶(ship2)主要是一种催化磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸肌醇(PtdIns(3,4,5)P3,PIP3)的5号位点脱磷酸化,生成磷脂酰肌醇3,4-二磷酸(PtdIns(3,4)P2,PIP2)的酶。ship2可以通过调节PIP3和PIP2的水平来影响细胞生长和发育、细胞增殖和凋亡以及神经元的发育和功能等过程。有研究表明,ship2抑制剂可以通过降低β-淀粉样蛋白(Amyloid beta,Aβ)造成的糖原合成酶激酶3β(Glycogen synthetase kinase,GSK3β)的活性抑制,导致Tau蛋白进一步过度磷酸化。这些证据表明,靶向ship2可能是治疗AD的一种有效的治疗策略。ship2-IN-1是研究人员开发的一种新型有效的ship2抑制剂,它具有良好的物理化学性质,特别是高脑渗透性,能够轻易地穿透血脑屏障。体外实验已经证实ship2-IN-1可以对Aβ造成的神经元毒性起保护作用。本研究首次应用3xTg-AD(APP/P S 1/Tau)的三转基因AD小鼠模型和以C 5 7BL/6小鼠为背景构建的PD小鼠模型为研究对象,应用小鼠神经母瘤细胞N2a和N2a/APP swe细胞为AD细胞模型,采用行为学实验、形态学实验以及分子生物学实验等研究方法,来检测ship2-IN-1对AD和PD病理机制的影响,同时试图揭示参与调节的通路,为ship2-IN-1成为有效治疗AD和PD的潜在药物提供实验依据。研究方法:采用3xTg-AD小鼠模型探讨ship2-IN-1对小鼠学习、记忆的影响,以及大脑皮层和海马中Tau蛋白磷酸化的影响;采用C57BL/6小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱导亚急性PD小鼠模型为研究对象,探讨ship2-IN-1对PD小鼠神经退行性变的影响;1.使用Morris水迷宫实验检测3xTg-AD小鼠行为学的变化。2.使用免疫组化检测3xTg-AD小鼠大脑皮层和海马中磷酸化Tau蛋白水平。3.使用银染色检测神经纤维缠结(NFTs)的情况。4.使用Western blotting检测ship2-IN-1对3xTg-AD小鼠海马中淀粉样前体蛋白(amyloid precusor protein,APP)及其磷酸化水平和Tau蛋白磷酸化的影响。5.使用Western blotting检测ship2-IN-1对N2a和N2a/APPswe细胞中Tau蛋白磷酸化的影响及机制。6.使用旷场实验和牵引实验检测PD小鼠行为学的变化。7.使用免疫组化检测ship2-IN-1对MPTP诱导的PD小鼠模型黑质中多巴胺能神经元的影响。8.使用Western blotting检测ship2-IN-1对PD小鼠模型黑质中多巴胺能神经元的影响及机制。结果:一、ship2-IN-1在AD细胞和动物模型中的作用:***2-IN-1改善3xTg-AD小鼠模型的学习和记忆障碍。***2-IN-1减少3xTg-AD小鼠大脑海马中p-Tau(S396)和NFTs的水平。***2-IN-1对3xTg-AD小鼠大脑海马中APP及其磷酸化水平无明显影响。***2-IN-1增加3xTg-AD小鼠海马中p-GSK3 β和p-Akt的水平。***2-IN-1 减少N2a/APPswe细胞中 p-Tau(S396)的水平。***2-IN-1 增加N2a/APPswe细胞中p-GSK3β和p-Akt 的水平。二、ship2-IN-1在PD动物模型中的作用:***2-IN-1改善PD小鼠模型的运动障碍。***2-IN-1缓解PD小鼠黑质(substantia nigra,SN)中MPTP诱导的多巴胺能神经元的减少。***2-IN-1使MPTP诱导的PD小鼠黑质中酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)蛋白表达水平的下降得到缓解,但对多巴胺转运体(dopamine transporter

关键词：阿尔兹海默病帕金森氏病 Akt通路 Tau蛋白 ship2 多巴胺能神经元

ship2通过上调Bim表达增强胃癌细胞BGC-823对紫杉醇的敏感性

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中国药理学通报 2014年第5期30卷 701-706页

作者：葛燕梅叶艳张林杰安徽医科大学基础医学院免疫学教研室安徽合肥230032

目的探讨ship2(SH2 domain containing inositol 5-phosphatase 2)基因转染人胃癌细胞BGC-823后对紫杉醇敏感性的影响。方法流式细胞仪PI单染法检测细胞凋亡率。应用免疫蛋白印迹法(Western blot)检测各组细胞蛋白表达情况。实时荧光定... 详细信息

目的探讨ship2(SH2 domain containing inositol 5-phosphatase 2)基因转染人胃癌细胞BGC-823后对紫杉醇敏感性的影响。方法流式细胞仪PI单染法检测细胞凋亡率。应用免疫蛋白印迹法(Western blot)检测各组细胞蛋白表达情况。实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)分析mRNA的变化水平。将pCMV6-ship2质粒在脂质体介导下转染人胃癌BGC-823细胞,同时以转染空载体和未转染细胞作为对照组。将GV112-Puromycin空载体和GV112-Puromycin-Bim(Bcl-2 interacting mediator of cell death)慢病毒颗粒分别感染BGC-823细胞,建立稳定细胞株,再将pCMV6-ship2质粒分别转染空载体和稳定干扰Bim表达细胞株。结果与SGC-7901细胞相比,BGC-823细胞对紫杉醇诱导的凋亡相对不敏感,0.3μmol·L-1紫杉醇诱导BGC-823 48 h后细胞凋亡率仅为(25.6±1.6)%,在紫杉醇作用不同时间点Bim蛋白和mRNA表达均无明显变化;与对照组相比,转染ship2基因能明显增加Bim的表达,紫杉醇作用48 h后,细胞凋亡率上升到(50.8±0.9)%;GV112-Puromycin-Bim慢病毒颗粒感染的BGC-823细胞,Bim的表达明显被抑制,在GV112-Puromycin-Bim慢病毒颗粒感染的稳定BGC-823细胞中转入pCMV6-ship2,紫杉醇作用48 h后,凋亡率为(27.6±1.6)%。结论转染外源性ship2基因能有效提高BGC-823细胞内Bim的表达,诱导BGC-823细胞凋亡,明显增加BGC-823细胞对紫杉醇的敏感性。

关键词： ship2 胃癌 Bim 紫杉醇细胞凋亡 Akt

ship2对喉癌Hep-2细胞生物学行为的影响及对放疗增敏的机制

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武汉大学学报（医学版） 2019年第2期40卷 226-234页

作者：唐甜肖祝雅曾峰武汉大学人民医院肿瘤Ⅱ科湖北武汉430060

目的:探究抑制ship2对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和侵袭、迁移的影响;探究X射线处理喉癌Hep-2细胞后细胞增殖、凋亡和周期的变化及ship2的表达情况;探究靶向抑制ship2基因联合放射治疗对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和周期的影响及对放疗增敏... 详细信息

目的:探究抑制ship2对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和侵袭、迁移的影响;探究X射线处理喉癌Hep-2细胞后细胞增殖、凋亡和周期的变化及ship2的表达情况;探究靶向抑制ship2基因联合放射治疗对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和周期的影响及对放疗增敏的可能机制。方法:(1)应用小分子干扰RNA技术抑制喉癌Hep-2细胞ship2的表达,实验分为5组:空白对照组(Control)、阴性对照组(Negative)、干扰组1(siRNA1)、干扰组2(siRNA2)、干扰组3(siRNA3)],RT-qPCR、Western Blot检测转染24 h后干扰效果;(2)取对数生长期的喉癌Hep-2细胞,分别给予0,4 Gy X射线(SSD=100 cm)处理,CCK-8检测细胞增殖活力,AnnexinPI-FITC/PI双染检测细胞凋亡,PI单染检测细胞周期,RT-qPCR、Western Blot检测ship2 mRNA和蛋白的相对表达量;(3)取对数生长期的喉癌Hep-2细胞,实验分4组(空白对照组Control、单纯放射组4 Gy、干扰组siRNA-ship2、联合处理组siRNAship2+4 Gy)。Western Blot检测ship2、pship2、pAKT、caspase-3、P21和P27蛋白的相对表达量。结果:(1)转染24 h后干扰组2 siRNA2下调作用最显著,较空白对照组ship2 mRNA下调达60. 1%(Pship2蛋白下调达57. 8%(P2抑制ship2表达后喉癌Hep-2细胞增殖活力、侵袭和迁移能力降低,凋亡增加(P2)与0 Gy组比较,放射组各组细胞增殖活力降低,凋亡和G2期阻滞增加(Pship2 mRNA、ship2和pship2蛋白的相对表达量较空白对照组降低(Pship2组和4 Gy组比较,联合处理组细胞增殖活力降低,凋亡和G2期阻滞增加(Pship2和pship2、pAKT的相对表达量降低(P21和P27蛋白的相对表达量升高(Pship2可与放射治疗协同抑制喉鳞癌Hep-2细胞的增殖活力,促进细胞凋亡和细胞周期G2期阻滞,从而发挥放射增敏的作用。其可能机制是靶向抑制ship2表达通过下调PI3K/Akt信号通路活性,进而解除对下游促凋亡因子caspase3和周期阻滞因子P21和P27的抑制作用,与放射线协同增强对喉癌Hep-2细胞的杀伤作用,从而发挥放疗增敏作用。

关键词：喉鳞癌 ship2 PI3K/Akt 放射增敏细胞生物学行为

PLEK2-ship2 Axis Premotes Non-Small Cell Lung Cancer Cells migration and Vascular Invasion through TGF-β/PI3K/Akt Signaling

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PLEK2-SHIP2 Axis Premotes Non-Small Cell Lung Cancer Cells m...

ship2对胃癌细胞生长和凋亡的影响以及增强胃癌细胞对紫杉醇敏感性的研究

2018年中国肿瘤标志物学术大会暨第十二届肿瘤标志物青...

作者： Dong-ming Wu Shi-hua Deng Rong Han Teng Liu Ting Zhang Jing Li Ying Xu Clinical Laboratory The First Affiliated Hospital of Chengdu Medical College

Metastasis is the leading cause of death in cancer patients. PLEK2 is a widely expressed paralog of pleckstrin. Previous research suggested that PLEK2 may play a critical role in REF52,COS-1 cell Spreading and T lymphocyte migration. However, the role of PLEK2 in lung cancer is not clear. In this study, datas in GEO and TCGA datasets was used to analysis the differentially expressed genes in TGFβ1 treated non-small cell lung cancer（NSCLC） line A549 cells and pancreatic cancer Panc-1 cell. we found that PLEK2 was highly expressed in NSCLC tissues and is negatively correlated with NSCLC patients’ overall survival（OS） and disease-free survival（DFS）. Meanwile, we determined that overexpression of PLEK2 significantly promoted NSCLC epithelial-to-mesenchymal transition（EMT） and migration as well as promoted human lung microvascular endothelial cells（HMVEC-L） endothelial-to-mesenchymal transition（EndoMT） and destroyed the vascular endothelial barriers, whereas knock down of PLEK2 could inhibit the TGFβ1 induced EMT and ***,we show that PLEK2 directly interacts with ship2 and targets ship2 for ubiquitination and degradation in NSCLC cell. In addition, we confirmed that overexpression ship2 inhibited EMT,migration and invasion in NSCLC cells. Moreover we proved that the ship2 related TGF-β/PI3 K/Akt Signaling can be activated by PLEK2 overexpression. Together, these results suggest that PLEK2 could be a novel reliable prognostic marker and a Potential therapeutic target for NSCLC Metastasis.

关键词： PLEK2 NSCLC EMT GEO ship2

来源： cnki会议评论

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SHIP2对胃癌细胞生长和凋亡的影响以及增强胃癌细胞对紫杉醇敏感...

作者：葛燕梅安徽医科大学

学位级别：硕士

研究背景及目的胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，在世界范围内的发病率仅次于肺癌，位居第二位;而在我国位居所有恶性肿瘤死亡率第一位。因此，深入了解有关胃癌发生和发展过程中肿瘤细胞的多种分子失衡机制，以寻求胃癌靶向治疗的特异性... 详细信息

研究背景及目的胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，在世界范围内的发病率仅次于肺癌，位居第二位;而在我国位居所有恶性肿瘤死亡率第一位。因此，深入了解有关胃癌发生和发展过程中肿瘤细胞的多种分子失衡机制，以寻求胃癌靶向治疗的特异性分子靶点对胃癌的治疗具有重要意义。目前已有研究表明，PI3K/Akt信号通路在胃癌细胞中被高度激活，这可能导致了胃癌对化疗的抵抗。PTEN表达的降低或缺失正是导致PI3K/Akt信号通路在肿瘤细胞中活化的重要机理。然而对于与PTEN类似的多磷酸肌醇-5-磷酸酶在胃癌发生和发展中的作用尚无相关研究报道。抗微管化疗药物紫杉醇作为一种化疗药物应用于胃癌的治疗，其主要杀伤机制在于能够诱导胃癌细胞凋亡。Bim（Bcl-2interacting mediator of cell death）是BH3-only（Bcl-2homology3(BH3)-only）蛋白家族中促凋亡成员之一，被报道在多种肿瘤细胞凋亡过程中发挥了重要作用。目前研究认为抗微管化疗药物作用于肿瘤细胞可通过上调Bim活性，诱导细胞凋亡。本研究旨在探讨多磷酸肌醇-5-磷酸酶分子-ship2对胃癌细胞生长和凋亡的影响，以及是否增强胃癌细胞对紫杉醇的敏感性及其分子机制，为胃癌的治疗提供一个新的分子靶点。方法采用Western blot检测胃癌细胞中ship2、PTEN和磷酸化Akt的表达水平，实时定量PCR检测ship2mRNA的水平。选择两株低表达ship2的胃癌细胞株SGC-7901和MGC-803瞬时转染ship2cDNA，用Western blot检测ship2和磷酸化Akt的表达，MTT检测细胞的生存率，流式细胞术检测细胞凋亡。对过表达ship2的SGC-7901细胞同时转染myr-Akt，检测其对ship2促进胃癌细胞凋亡作用的逆转效果。选择对紫杉醇低敏感的BGC-823细胞，瞬时转染ship2cDNA，用Westernblot检测ship2、磷酸化Akt和Bim的表达，紫杉醇作用48h后，收集细胞，流式细胞术检测细胞凋亡情况。将GV112-Puromycin空载体和GV112-Puromycin-Bim（Bcl-2interacting mediator of cell death）慢病毒颗粒分别感染BGC-823细胞，建立稳定细胞株，再将pCMV6-ship2质粒转染该稳定细胞株，流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果与正常胃粘膜上皮细胞相比，在胃癌细胞中ship2蛋白和mRNA的表达水平是明显降低的;在胃癌细胞中过表达ship2能降低pAkt的表达水平，伴随Akt下游分子Bim和p27的上调;过表达ship2抑制胃癌细胞的生长，促进胃癌细胞的凋亡，而共转染myr-Akt能逆转ship2对胃癌细胞促凋亡的作用。在对紫杉醇低敏感的BGC-823细胞中转染ship2基因，紫杉醇作用48h后，细胞凋亡率明显上升，同时伴随Bim表达的上调;在BGC-823细胞中“knockdown”Bim基因后，再转染ship2cDNA，紫杉醇作用48h后，细胞凋亡率明显降低。结论ship2的下调表达所引起的胃癌中PI3K/Akt信号通路被激活，可能是造成胃癌生长和凋亡的一个重要因素;ship2通过上调Bim的表达增强胃癌细胞BGC-823对紫杉醇的敏感性。

关键词： ship2 胃癌 PI3K Akt Bim

ship2基因在慢性粒细胞性白血病细胞中的表达及意义的研究

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SHIP2基因在慢性粒细胞性白血病细胞中的表达及意义的研究

作者：郭晓静河北医科大学

学位级别：硕士

目的:慢性粒细胞性白血病是一种起源于异常造血干细胞克隆的骨髓增生性疾病其病变克隆中存在t(9,22)染色体的异常,形成BCR/ABL融合基因,其编码的蛋白具有酪氨酸激酶活性,可异常激活PI3K途径,促进CML的发病发展。ship2属于肌醇5-磷酸酶家... 详细信息

目的:慢性粒细胞性白血病是一种起源于异常造血干细胞克隆的骨髓增生性疾病其病变克隆中存在t(9,22)染色体的异常,形成BCR/ABL融合基因,其编码的蛋白具有酪氨酸激酶活性,可异常激活PI3K途径,促进CML的发病发展。ship2属于肌醇5-磷酸酶家族,表达非常广泛,可将PI3K途径最重要的第二信使磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸(PI(3,4,5)P(3)) 5‘端去磷酸化。而且ship2可选择性地与ABL的SH3区结合提示其在CML发病过程中可能发挥着非常重要的作用。因而有必要对人类慢性粒细胞性白血病患者及应用酪氨酸激酶抑制剂后的慢粒患者细胞中ship2的表达情况进行检测以了解其与该病的联系及作用机制。另外,CXCR4是近来备受关注的一种受体。已证实它与多种细胞生物学行为如归巢、黏附等为有关。在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中ship2可促进CXCR4的表达以及细胞的迁移。鉴于慢性粒细胞性白血病患者绝大多数有髓外侵润的现象(主要表现为脾脏肿大)我们在检测ship2的同时对慢粒病人进行了CXCR4的检测,以明确其与慢粒及ship2的关系,进而了解其有无临床意义。方法:本实验研究对象包括48例慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)患者,10名健康志愿者。其中28名为CML慢性期初治病人,10名为经过格列卫治疗的慢性期患者,10名急变期患者。用实时定量PCR的方法检测慢性粒细胞性白血病人及正常对照骨髓细胞ship2基因及CXCR4的表达水平。结果:1经检测,48例CML患者Bcr/abl融合基因均为阳性,其中b3a2型24例,b2a2型18例b2a2,b3a2混合6例。2各组ship2基因的表达水平2.1在10例健康志愿者中,均表达ship2基因,基因表达水平范围为0.0107-0.2736 ,表达水平均数为0.1172±0.0701。2.2在28例CML慢性期初治病人中,均表达ship2基因,表达水平范围为0.0016-0.0268 ,平均水平为0.0166±0.0118,其表达水平与正常对照组相比差异有统计学意义,P2.3经格列卫治疗的慢性期患者均表达ship2基因,基因表达水平范围为0.0107-0.0560 ,表达水平均数为0.0314±0.0187。其表达水平与正常对照组相比差异有统计学意义,P2.4 10例急变期患者中均表达ship2基因,表达水平范围为0.0041-0.1782,表达水平均数为0.0094±0.0060。其表达水平与正常对照组相比差异有统计学意义,P2736,表达水平均数为0.01323.2在28例CML慢性期初治病人细胞中,均表达CXCR4基因,基因表达水平范围为0.005586-0.046844,平均水平为0.097571±0.040272,其表达水平与正常对照组相比差异有统计学意义,P287813 ,表达水平均数为0.185235±0.049900。其表达水平与正常对照组相比差异有统计学意义,Pship2与CXCR4表达水平呈负相关(直线相关分析,r=-0.719,Pship2基因的表达低于正常人,提示ship2基因与慢性粒细胞性白血病的发生有关。2经格列卫治疗的慢性期病人细胞ship2基因表达高于初治组,说明酪氨酸激酶抑制剂可以使ship2基因表达提高,推测提示Bcr/abl融合基因可能抑制了ship2基因的表达。3急变期患者细胞ship2基因表达低于初治组,提示ship2基因与CML的进展有关。4 ship2基因可做为格列卫治疗效果的评价因素及判断CML患者预后的因素之一。5慢性粒细胞性白血病慢性期病人细胞CXCR4表达高于正常人,急变期高于慢性期,推测CXCR4参与了CML的发生及进展。6 ship2

关键词： ship2 慢性粒细胞性白血病 PI3K CXCR4 格列卫

ship2在肝细胞性肝癌中的表达及临床意义

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SHIP2在肝细胞性肝癌中的表达及临床意义

作者：王继龙中南大学

学位级别：硕士

目的：研究ship2蛋白在肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)组织中的表达情况及其与肝癌临床病理特征之间的关系,探讨ship2在HCC发生发展过程中的可能作用及临床意义。方法：将标本分为3组,分别为35例术前未经放化疗的HCC组织... 详细信息

目的：研究ship2蛋白在肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)组织中的表达情况及其与肝癌临床病理特征之间的关系,探讨ship2在HCC发生发展过程中的可能作用及临床意义。方法：将标本分为3组,分别为35例术前未经放化疗的HCC组织、35例对应的癌旁组织(距肿瘤边缘≥2cm)以及10例正常肝组织(来源于肝外伤但无肝炎及肝硬化背景患者),运用免疫组织化学技术和Western blot技术检测ship2蛋白在三组组织中的表达水平,比较其表达差异并分析ship2蛋白在HCC组织中的表达与肝癌临床病理特征之间的关系。结果：1.免疫组织化学检测显示ship2蛋白主要定位于细胞质中,呈斑片状、棕黄色染色。2.免疫组织化学检测结果显示ship2蛋白在HCC组织组、癌旁组织组、正常肝组织组的阳性表达率分别为77.1%(27/35),31.4%(11/35)和30.0%(3/10),Western blot检测结果显示ship2蛋白在三组肝组织的相对表达量分别为(0.296±0.066),(0.174±0.033)和(0.156±0.009),两种方法的检测结果均提示ship2蛋白在HCC组织中呈高表达,其阳性表达率及相对表达量均明显高于癌旁组织和正常肝组织,差异均具有显著统计学意义(Pship2在癌旁组织中阳性表达率及相对表达量均高于正常肝组织,但差异均无统计学意义(P>0.05)3. ship2蛋白表达与HCC临床病理特征的关系：Western blot实验结果分析显示ship2相对表达量与肿瘤分化程度(P=0.016)、有无卫星灶(P=0.004)、有无门静脉癌栓(P=0.006)具有显著相关性,而ship2蛋白表达水平与患者年龄、性别、AFP、HBsAg、肝硬化、肿瘤大小无相关性。结论：***2蛋白在HCC组织中表达水平明显高于癌旁组织和正常肝组织,提示ship2蛋白在HCC中呈高表达状态。2. ship2蛋白表达水平与HCC分化程度、有无卫星灶、有无门静脉癌栓具有显著相关性,提示ship2高表达可能与HCC恶性行为有关。

关键词： HCC ship2 免疫组化 Western blot

ship2与IQGAP2相互作用抑制胃癌细胞迁移和侵袭

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SHIP2与IQGAP2相互作用抑制胃癌细胞迁移和侵袭

作者：邵玉玲安徽医科大学

学位级别：硕士

研究背景及目的胃癌(GC)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,其发病率位居第五位,死亡率位居第三位,占消化道恶性肿瘤的首位。ship2(Src-homology2-containing inositol 5–phosphatase 2)作为多磷酸肌醇-5-磷酸酶家族成员,在人类2型糖... 详细信息

研究背景及目的胃癌(GC)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,其发病率位居第五位,死亡率位居第三位,占消化道恶性肿瘤的首位。ship2(Src-homology2-containing inositol 5–phosphatase 2)作为多磷酸肌醇-5-磷酸酶家族成员,在人类2型糖尿病、阿尔兹海默病等疾病中发挥着重要作用,然而ship2在肿瘤发生发展中的作用较为复杂,其发挥“促瘤”还是“抑瘤”作用具有组织类型特异性。究其原因,ship2作为多结构域蛋白,除了含有中间的5-磷酸酶催化结构域可以调控PI3K/Akt信号通路,还可以利用自身N端的SH2结构域以及C端的PRD和SAM结构域,通过和多种细胞因子受体、接头蛋白、细胞骨架蛋白以及磷酸酶相互作用,调控细胞的胰岛素信号通路(参与糖尿病和代谢性疾病的病理过程)、细胞骨架的组织和功能(影响细胞受体介导的内吞、黏附、迁移、增殖以及凋亡等生物学行为)及免疫系统功能。本课题组前期研究发现,相对于正常胃黏膜上皮细胞,ship2在胃癌细胞中的表达普遍降低,并且低表达的ship2可通过激活PI3K/Akt信号通路促进胃癌的发生发展。为进一步阐明ship2在胃癌中作为抑癌因子的具体分子机制,本研究首先通过免疫沉淀和蛋白质谱分析的方法,筛选出ship2的互作蛋白IQGAP2,并进一步验证二者的结合及其对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法采用免疫沉淀和蛋白质谱分析筛选胃癌细胞中ship2的结合蛋白IQGAP2,利用westernblot和qPCR检测正常胃黏膜上皮细胞GES-1和一组胃癌细胞系中IQGAP2、ship2蛋白和mRNA水平;通过免疫共沉淀试验验证IQGAP2能与ship2相互作用,并利用免疫荧光共定位试验验证两者的内源性结合;通过构建ship2各结构域及C端的缺失突变体,并与野生型IQGAP2质粒同时转染人胚肾细胞293T,利用免疫共沉淀试验确定与IQGAP2相互作用的ship2结构域;后续的功能实验,我们通过建立shRNA单独敲低ship2或IQGAP2以及共敲的稳定胃癌细胞系***2、***2、***2/IQGAP2、***2、***2、***2/IQGAP2,利用western blot检测胃癌细胞中ship2、IQGAP2、磷酸化Akt以及下游黏附分子E-钙粘蛋白、β-连环蛋白、N-钙粘蛋白的表达情况,利用细胞划痕试验和Transwell试验检测ship2与IQGAP2在胃癌细胞迁移和侵袭中的作用;为进一步明确二者的相互作用对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响,我们在慢病毒感染ship2 cDNA的稳定胃癌细胞系(***2)中利用shRNA敲低IQGAP2,利用western blot检测胃癌细胞中ship2、IQGAP2、磷酸化Akt以及下游黏附分子E-钙粘蛋白、β-连环蛋白、N-钙粘蛋白的表达情况,通过细胞划痕试验和Transwell试验验证功能的改变。另外,利用***2的稳定敲低细胞系,转染野生型ship2和缺失突变体ship2(缺失与IQGAP2互作的结构域),利用western blot检测胃癌细胞中ship2、IQGAP2、磷酸化Akt以及下游黏附分子E-钙粘蛋白、β-连环蛋白、N-钙粘蛋白的表达情况,Transwell试验检测外源性过表达ship2以及ship2对胃癌细胞迁移和侵袭功能的影响。结果1)相对于ship2在胃癌细胞系中的普遍低表达状态,IQGAP2在正常胃黏膜上皮细胞和胃癌细胞系中的表达水平变化没有明显差异。2)在胃癌细胞中,ship2通过PRD和SAM结构域与IQGAP2内源性结合,共定位于胃癌细胞胞质中。3)ship2和IQGAP2可协同抑制胃癌细胞迁移和侵袭作用,并且此作用与Akt的活化以及下游黏附分子E-钙粘蛋白、β-连环蛋白、N-钙粘蛋白表达水平相关。4)ship2通过PRD和SAM结构域与IQGAP2的相互作用,降低Akt的磷酸化水平,引起E-钙粘蛋白、β-连环蛋白表达上调以及N-钙粘蛋白表达下调,从而抑制胃癌细胞的迁移和侵袭。结论在胃癌细胞中,ship2通过PRD和SAM结构域与IQGAP2相互作用,导致Akt活性降低,继而引起E-钙粘蛋白、β-连环蛋白表达上调以及N-钙粘蛋白表达下调,从而抑制胃癌细胞的迁移与侵袭。

关键词：胃癌 ship2 IQGAP2 迁移侵袭

ship2在急性白血病中的表达及其临床意义

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SHIP2在急性白血病中的表达及其临床意义

作者：庞艳彬河北医科大学

学位级别：硕士

目的:ship2(Src homology 2 domain containing inositol polyphosphate 5'phosphatase 2 )属于5’磷酸酶家族,在造血细胞和非造血细胞中广泛表达,通过其5′磷酸酶特异性水解磷脂酰肌醇3 ,4 ,5(PI-3,4,5-P3)三磷酸为磷脂酰肌醇3 ,4(PI-3,4-P2)二磷酸,从而抑制其下游信号分子Akt的磷酸化。研究表明,ship2可能作为潜在的肿瘤抑制基因对造血细胞的发生发展及功能起着关键的负调控作用。本研究旨在初步探讨ship2基因在急性白血病中的表达情况及其临床意义。方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应方法检测78例急性白血病患者(包括初治、复发和缓解患者,其中根据FAB分型将初治组分为AML和ALL组;以WBC 50×109/L为界分为高白细胞白血病组和非高白细胞白血病组)骨髓单个核细胞、15例正常人外周血单个核细胞ship2 mRNA的表达水平。结果:1.在初治AL组患者ship2 mRNA阳性率为62.7% (32/51),平均表达水平为0.338±0.200;在正常对照组ship2 mRNA的阳性率为26.7%(4/15),平均表达水平0.127±0.084;缓解组ship2的阳性率为mRNA 25%(4/16),平均表达水平0.08±0.04,初治组明显高于对照组和缓解组(P2. 11例复发组中ship2 mRNA的阳性率为81.8% (9/ 11),平均表达水平0.286±0.09,明显高于对照组和缓解组患者,具有显著性差异(Pship2 mRNA的阳性率为68.4% (13/19),平均表达水平0365±0.264;ANLL组患者中ship2 mRNA阳性率为59.4%(19/32),平均表达水平0.322±0.155;两者比较无统计学意义.可能和样本量小有关。4.高白细胞组患者中ship2 mRNA的阳性率为71.4% (10/14),平均表达水平0.289±0.122;非高白细胞组中ship2 mRNA的阳性率为59.5% (22/37),平均表达水平0.283±0.222,两组比较无统计学意义(P>0.05)。5.按照ship2 mRNA表达情况,将初治组患者分为两组,ship2 mRNA阳性组和ship2 mRNA阴性组,阳性组患者的完全缓解率为65.6%(21/32),ship2 mRNA阴性组的缓解率为94.7%(18/19),两组之间有统计学差异(P2例缓解患者中ship2 mRNA阳性患者有56.25%(9/16)复发,而ship2 mRNA阴性患者有12.5%(2/16)复发,两组之间有统计学差异,显示ship2阳性表达与复发率呈正相关。结论:1. ship2在初治和复发急性白血病患者中表达水平增高,缓解后降低,复发后再次升高,提示ship2表达异常与急性白血病发生有密切关系。2.在初治或复发AL患者中,ship2表达增高与AL的FAB分型和外周血白细胞水平无相关性。3.初治组患者ship2 mRNA阳性组完全缓解率低于ship2 mRNA阴性组的缓解率。4.在随访的32例缓解患者中ship2 mRNA阳性患者复发率高于ship2 mRNA阴性患者,提示预后不良,监测ship2 mRNA表达有助于判定急性白血病的预后。

关键词：急性白血病 ship2 实时荧光定量PCR 完全缓解复发