SHIP2对胃癌细胞生长和凋亡的影响以及增强胃癌细胞对紫杉醇敏感性的研究

作     者：葛燕梅 

作者单位：安徽医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张林杰;叶艳

授予年度：2014年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：SHIP2 胃癌 PI3K Akt Bim 

摘      要：研究背景及目的胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，在世界范围内的发病率仅次于肺癌，位居第二位;而在我国位居所有恶性肿瘤死亡率第一位。因此，深入了解有关胃癌发生和发展过程中肿瘤细胞的多种分子失衡机制，以寻求胃癌靶向治疗的特异性分子靶点对胃癌的治疗具有重要意义。目前已有研究表明，PI3K/Akt信号通路在胃癌细胞中被高度激活，这可能导致了胃癌对化疗的抵抗。PTEN表达的降低或缺失正是导致PI3K/Akt信号通路在肿瘤细胞中活化的重要机理。然而对于与PTEN类似的多磷酸肌醇-5-磷酸酶在胃癌发生和发展中的作用尚无相关研究报道。抗微管化疗药物紫杉醇作为一种化疗药物应用于胃癌的治疗，其主要杀伤机制在于能够诱导胃癌细胞凋亡。Bim（Bcl-2interacting mediator of cell death）是BH3-only（Bcl-2homology3(BH3)-only）蛋白家族中促凋亡成员之一，被报道在多种肿瘤细胞凋亡过程中发挥了重要作用。目前研究认为抗微管化疗药物作用于肿瘤细胞可通过上调Bim活性，诱导细胞凋亡。本研究旨在探讨多磷酸肌醇-5-磷酸酶分子-SHIP2对胃癌细胞生长和凋亡的影响，以及是否增强胃癌细胞对紫杉醇的敏感性及其分子机制，为胃癌的治疗提供一个新的分子靶点。 方法采用Western blot检测胃癌细胞中SHIP2、PTEN和磷酸化Akt的表达水平，实时定量PCR检测SHIP2mRNA的水平。选择两株低表达SHIP2的胃癌细胞株SGC-7901和MGC-803瞬时转染SHIP2cDNA，用Western blot检测SHIP2和磷酸化Akt的表达，MTT检测细胞的生存率，流式细胞术检测细胞凋亡。对过表达SHIP2的SGC-7901细胞同时转染myr-Akt，检测其对SHIP2促进胃癌细胞凋亡作用的逆转效果。选择对紫杉醇低敏感的BGC-823细胞，瞬时转染SHIP2cDNA，用Westernblot检测SHIP2、磷酸化Akt和Bim的表达，紫杉醇作用48h后，收集细胞，流式细胞术检测细胞凋亡情况。将GV112-Puromycin空载体和GV112-Puromycin-Bim（Bcl-2interacting mediator of cell death）慢病毒颗粒分别感染BGC-823细胞，建立稳定细胞株，再将pCMV6-SHIP2质粒转染该稳定细胞株，流式细胞术检测细胞凋亡情况。 结果与正常胃粘膜上皮细胞相比，在胃癌细胞中SHIP2蛋白和mRNA的表达水平是明显降低的;在胃癌细胞中过表达SHIP2能降低pAkt的表达水平，伴随Akt下游分子Bim和p27的上调;过表达SHIP2抑制胃癌细胞的生长，促进胃癌细胞的凋亡，而共转染myr-Akt能逆转SHIP2对胃癌细胞促凋亡的作用。在对紫杉醇低敏感的BGC-823细胞中转染SHIP2基因，紫杉醇作用48h后，细胞凋亡率明显上升，同时伴随Bim表达的上调;在BGC-823细胞中“knockdownBim基因后，再转染SHIP2cDNA，紫杉醇作用48h后，细胞凋亡率明显降低。 结论SHIP2的下调表达所引起的胃癌中PI3K/Akt信号通路被激活，可能是造成胃癌生长和凋亡的一个重要因素;SHIP2通过上调Bim的表达增强胃癌细胞BGC-823对紫杉醇的敏感性。