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real-time TaqMan RT-PCR快速检测犬瘟热病毒方法的研究

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现代生物医学进展 2007年第2期7卷 265-268页

作者：王君玮孙承英姜平王志亮张维李林赵永刚王珊任炜杰南京农业大学动物医学院南京210095 中国动物卫生与流行病学中心青岛266114

按照犬瘟热(CDV)N基因序列,设计合成了特异性引物和探针,经各反应条件的优化,建立了real-time荧光定量RT-PCR技术,对细胞培养物、肝脏、肺脏、脑、脾脏、淋巴结以及鼻腔拭子等组织病料中的CDV进行了特异性检测和敏感性试验。同时,利用... 详细信息

按照犬瘟热(CDV)N基因序列,设计合成了特异性引物和探针,经各反应条件的优化,建立了real-time荧光定量RT-PCR技术,对细胞培养物、肝脏、肺脏、脑、脾脏、淋巴结以及鼻腔拭子等组织病料中的CDV进行了特异性检测和敏感性试验。同时,利用建立的real-time荧光定量RT-PCR方法与常规RT-PCR以及韩国BIOINDIST生产的BIT RAPID CDV检测试剂盒对57份临床样品进行了检测。结果:用20pmol/mL的引物浓度各1uL和20pmol/mL的探针浓度0．3uL,获得的荧光信号最强,曲线平滑。敏感性高,可检测到1．24×10—3ng/uL的病毒RNA;特异性强,与NDV、AIV、NiPV等RNA病毒不发生交叉反应。试验重复性的变异系数(CV)分别为2．3%、2．5%和4．2%;与常规RT-PCR和BIOINDIST生产的BIT RAPID CDV检测试剂盒相比较,该方法具有快速、特异、敏感、可定量,并可同时检测大量样品等优点。

关键词：犬瘟热病毒荧光定量RT—PCR real—time PCR 检测

real-time PCR 在流感哨点监测中的应用效果观察

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中国卫生检验杂志 2019年第3期29卷 284-286页

作者：谢朝梅罗敏王辉刘保湘谢燕湘邓海斌常德市疾病预防控制中心湖南常德415000 桃源县疾病预防控制中心湖南桃源415700

目的分析研究real-time PCR在流感哨点监测中的应用效果和实际作用,进一步提高流感监测的工作效率。方法按照2017版《全国流感监测方案》,收到哨点医院流感样病例标本后,在2个工作日内利用real-time PCR进行流感病毒亚型或系鉴定,对于... 详细信息

目的分析研究real-time PCR在流感哨点监测中的应用效果和实际作用,进一步提高流感监测的工作效率。方法按照2017版《全国流感监测方案》,收到哨点医院流感样病例标本后,在2个工作日内利用real-time PCR进行流感病毒亚型或系鉴定,对于检测结果阳性的标本,1周内利用状态良好的MDCK细胞进行病毒分离,检测结果在检测完成后48 h内录入"中国流感监测信息系统"。结果全年共分离流感毒株373株,病毒分离率为17.36%;分离的三类流感病毒H1N1型、B型、H3N2型的分离率分别为93.83%、76.49%、49.07%,三类流感病毒分离率比较,差异有统计学意义(χ~2=61.99,Preal-time PCR进行初筛分型,可以提高病毒分离率,及时发现病毒变异株,更加有效地防控流感疫情。

关键词： real—time PCR 流感哨点监测效果观察

real-time PCR及预测微生物学在白酒酿造中的应用构想

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中国酿造 2012年第10期31卷 7-10页

作者：孙超卢慧丽刘勇山东大学生命科学学院山东济南250100 古井贡酒厂安徽亳州236000

利用实时荧光定量PCR技术及预测微生物学建立可培养酿酒微生物资源数据库和预测微生物学数学模型,可探究在白酒酿造过程中可培养酿酒微生物的变化规律及不同环境因素对可培养酿酒微生物菌群变化的影响,为白酒酿造工艺优化提供重要参数。

关键词： real—time PCR 预测微生物学白酒酿造

一步法real-time RT-PCR检测结直肠癌前哨淋巴结CK20 mRNA的表达

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中国农村卫生 2013年第1Z期5卷 3-4页

作者：黄建华张鑫侯军民荆晓岳新乡医学院第一附属医院河南新乡455003

目的探讨结直肠癌前哨淋巴结定位和检测CK20 mRNA的意义.方法对49例结直肠癌患者术中注射美蓝定位前哨淋巴结,用一步法real-time RT-PCR检测前哨淋巴结CK20 mRNA表达以确定转移病灶.结果 49例结直肠癌患者中成功确定了前哨淋巴结47例,... 详细信息

目的探讨结直肠癌前哨淋巴结定位和检测CK20 mRNA的意义.方法对49例结直肠癌患者术中注射美蓝定位前哨淋巴结,用一步法real-time RT-PCR检测前哨淋巴结CK20 mRNA表达以确定转移病灶.结果 49例结直肠癌患者中成功确定了前哨淋巴结47例,共115枚,每例1～5枚,平均2.4枚/例,检出成功率为95.92％.47例患者前哨淋巴结中,常规病理学证实有11例为肿瘤细胞所浸润,阳性检出率为23.40％；一步法real-time RT-PCR检测有20例CK20呈阳性表达,阳性检出率为42.55％.两种方法的阳性检出率有显著差异（P＜0.05）.结论利用一步法real-time RT-PcR技术检测CK20 mRNA表达可明显提高结直肠癌前哨淋巴结转移病灶的检出率.

关键词：结直肠肿瘤前哨淋巴结细胞角蛋白20 real—time RT—PcR

金华市首起诺如病毒感染性腹泻real-time RT-PCR检测

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中国卫生检验杂志 2008年第11期18卷 2410-2411页

作者：陈志清卢亦愚王鸽吴国平浙江省金华市疾病预防控制中心浙江金华321000 浙江省疾病预防控制中心杭州310051

诺如病毒是引起儿童和成人非细菌性腹泻的主要病原,常在社区、学校、托儿所、孤儿院、休养所、旅游船、养老院、医院、军队及其他人群中引起暴发,具有发病急、传播速度快、涉及范围广等特点.据统计,每年诺如病毒在美国引起的感染占各种... 详细信息

诺如病毒是引起儿童和成人非细菌性腹泻的主要病原,常在社区、学校、托儿所、孤儿院、休养所、旅游船、养老院、医院、军队及其他人群中引起暴发,具有发病急、传播速度快、涉及范围广等特点.据统计,每年诺如病毒在美国引起的感染占各种已知肠道传染病的60%.

关键词：诺如病毒感染性腹泻 real—time RT—PCR

应用real-time PCR法快速定量人类粪便中双歧杆菌的研究

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中国微生态学杂志 2009年第10期21卷 869-873页

作者：于静文姝唐立大连医科大学微生态学教研室辽宁大连110044

目的建立快速、准确从粪便标本中定量双歧杆菌的RT—PCR技术。方法传统培养定量法，普通PCR定量法，real—timePCR比较测量。结果（I）粪便标本前处理采取简单的离心和清洗、稀释步骤能去除粪便标本中的抑制物，实现不提取DNA直接进行PC... 详细信息

目的建立快速、准确从粪便标本中定量双歧杆菌的RT—PCR技术。方法传统培养定量法，普通PCR定量法，real—timePCR比较测量。结果（I）粪便标本前处理采取简单的离心和清洗、稀释步骤能去除粪便标本中的抑制物，实现不提取DNA直接进行PCR、real—time定量粪便中双歧杆菌。（2）本实验建立的PCR方法直接半定量粪便双歧杆菌技术在双歧杆菌值介于10^3～10^7CFU／ml时具有较好的分辨率，粪便标本普通PCR得理论菌数与培养得菌数值之间差异无显著性（P〉0．05）；real-timePCR直接定量双歧杆菌技术在双歧杆菌值介于10^1-10^7CFU／ml时具有较好的分辨率，粪便标本RT—PCR得理论菌数与培养得菌数值之间差异无显著性（P〉0．05）。结论利用PCR、real—timePCR直接半定量和定量粪便中的双歧杆菌可行。

关键词：定量双歧杆菌 real—time PCR

利用real-time PCR从无症种薯上快速检测马铃薯环腐病菌

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2005年第B8期33卷 261-261页

作者：赵文军朱水芳夏明星陈红运中国检验检疫科学研究院北京100029 西北农林科技大学植保学院陕西杨凌712100

马铃薯环腐病是一种典型的维管束病害,病原菌为密执安棒杆菌马铃薯环腐致病变种(Clavibacter michiganense ***,Cms),发病块茎切开可见维管束变为乳黄色至黑褐色,皮层内表现环形或弧形坏死部.贮藏后块茎芽眼变黑干枯或外表爆裂,播种后... 详细信息

马铃薯环腐病是一种典型的维管束病害,病原菌为密执安棒杆菌马铃薯环腐致病变种(Clavibacter michiganense ***,Cms),发病块茎切开可见维管束变为乳黄色至黑褐色,皮层内表现环形或弧形坏死部.贮藏后块茎芽眼变黑干枯或外表爆裂,播种后不出芽或出芽后枯死或形成病株.病株的根、茎部维管束常变褐,病蔓有时溢出白色菌脓.

关键词： real—time PCR 马铃薯环腐病菌病菌检测

应用SYBR实时荧光定量real—timePCR法检测人宫颈癌MCPH1 mRNA表达

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医学分子生物学杂志 2011年第5期8卷 415-418页

作者：苟小燕袁成福胡仁智麦力卜友泉易发平武向梅刘革力宋方洲重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆市400016 重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆市400016

目的应用SYBR实时荧光定量RT-PCR法检测MCPH1/BRIT1 mRNA的表达.方法提取人宫颈癌总RNA,经逆转录PCR获得靶基因（MCPH1）及管家基因（GAPDH）的CDNA,采用SYBR Green 荧光实时定量法检测,以GAPDH基因作为内参,计算各组MCPH1 mRNA的相... 详细信息

目的应用SYBR实时荧光定量RT-PCR法检测MCPH1/BRIT1 mRNA的表达.方法提取人宫颈癌总RNA,经逆转录PCR获得靶基因（MCPH1）及管家基因（GAPDH）的CDNA,采用SYBR Green 荧光实时定量法检测,以GAPDH基因作为内参,计算各组MCPH1 mRNA的相对表达量.结果在31例宫颈癌标本中,MCPH1基因mRNA的表达,19例癌比正常低,1 例癌比正常高,其余标本无统计学意义;6例癌比癌旁低,1例癌比癌旁高,其余无统计学意义.结论利用SYBR实时荧光定量RT-PCR检测出人宫颈癌中MCPH1基因mRNA的表达下调,为进一步研究MCPH1在宫颈癌中的作用及功能奠定了基础.

关键词： MCPH1 real—time PCR 宫颈癌

温榆河中硝化和反硝化基因的real-timePCR定量

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环境科学研究 2013年第1期26卷 64-71页

作者：张健伟孙卫玲邵军孙海美北京大学深圳研究生院环境与能源学院、深圳市重金属污染控制与资源化重点实验室广东深圳518055 北京大学环境科学与工程学院水沙科学教育部重点实验室北京100871

以温榆河为研究对象,采用real-time PCR研究了温榆河不同断面水样和沉积物样品中TB(总细菌)、硝化和反硝化(nosZ和narG)基因数量的变化.水样中TB基因数量在丰水期为1.05×109～7.38×1011copies/L,枯水期为1.06×109～2.69×1012copies... 详细信息

以温榆河为研究对象,采用real-time PCR研究了温榆河不同断面水样和沉积物样品中TB(总细菌)、硝化和反硝化(nosZ和narG)基因数量的变化.水样中TB基因数量在丰水期为1.05×109～7.38×1011copies/L,枯水期为1.06×109～2.69×1012copies/L;氨氧化细菌(AOB)基因数量在丰水期和枯水期分别为nd(未检出)～4.11×108和nd～1.15×109copies/***和narG基因数量在丰水期分别为nd～2.37×108和3.61×108～1.13×1010copies/L,枯水期分别为2.0×106～3.04×109和nd～1.39×1010copies/L.枯水期沉积物样品中TB基因数量为1.35×109～7.32×1010copies/g,nosZ基因数量为nd～1.06×107copies/g,narG基因数量为1.99×107～1.02×108copies/g.枯水期TB基因数量略高于丰水期,枯水期水样中ρ(NH4+-N)较高导致其AOB基因数量要远高于丰水期,nosZ和narG基因数量并没有明显的水期变化.相关分析表明,沉积物样品中微生物基因数量与水样中微生物基因数量不相关,而是水质变化长期作用的结果.冗余度分析表明,丰水期和枯水期水样中影响微生物基因数量的主要环境因子不同,丰水期微生物基因数量是温度、ρ(CODCr)、ρ(NH4+-N)、ρ(NO2--N)、ρ(NO3--N)等共同作用的结果,而温度和ρ(CODCr)对枯水期微生物基因数量影响显著.

关键词：温榆河氨氧化细菌反硝化基因 real—time PCR