检索结果-南通市图书馆

siRNA有限库筛选与颗粒抗原交叉递呈相关的rab gtpase

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

siRNA有限库筛选与颗粒抗原交叉递呈相关的Rab GTPase

rab gtpases interactome analysis of dendritic cells reveals anti-microbial functions of the rab32 complex in bacterial containment

中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议

作者：邹丽云万瑛周镜然李景怡吴玉章第三军医大学全军免疫研究所

目的:rab分子是细胞内囊泡转运中重要的蛋白,并且不同的rab分子分布在不同的细胞内囊泡,控制的胞内不同囊泡之间的分子和物质转运;而交叉递呈作为抗肿瘤和抗病毒免疫中发挥重要作用的机制,其分子机制目前研究甚少。因此,我们采用RNA干... 详细信息

目的:rab分子是细胞内囊泡转运中重要的蛋白,并且不同的rab分子分布在不同的细胞内囊泡,控制的胞内不同囊泡之间的分子和物质转运;而交叉递呈作为抗肿瘤和抗病毒免疫中发挥重要作用的机制,其分子机制目前研究甚少。因此,我们采用RNA干扰技术对树突状细胞株DC2．4细胞中不同的rab gtpase蛋白表达进行干扰,检测干扰后DC2．4细胞对外源性抗原交叉递呈能力的变化,从而筛选出与颗粒抗原交叉递呈相关的rab gtpase分子。

关键词：交叉递呈 rab gtpase RNA干扰

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

Rab GTPases interactome analysis of dendritic cells reveals ...

The biogenesis and secretion of exosomes and multivesicular bodies(MVBs):Intercellular shuttles and implications in human diseases

第十届全国免疫学学术大会

作者： Yuanyuan li Yu Wang Yi Yang Xiangyu Tang Liyun Zou Li Ma Qingsang Ni Lizhang Tang Siqi Liu Lin Regina Liting Wang Quanfang Wei Haiying Rang Qijing Li Ying Wan Biomedical Analysis Center Third Military Medical University Department of Immunology Duke University Medical Center

To assume their essential roles in innate immunity,dendritic cells(DCs)orchestrate complex membrane trafficking through an interconnected transportation network linked together by rab *** a tandem affinity purification strategy and mass spectrometry,we depicted an interactomic landscape of major members of the mammalian rab gtpase family including 649 high confidence *** comprehensive proteomics analysis provided a global view of intracellular membrane organization and when complemented by various imaging tools,inspired many novel hypotheses on the functions of rab subnetworks in ***,we investigated dynamic changes to the rab32 subnetwork in DCs induced by *** infection,and uncovered a novel and essential role of this subnetwork in controlling the intracellular proliferation of Listeria in vitro and in ***,rab32 formed a persistent complex with two newly identified interacting proteins PHB and PHB2–to encompass bacteria both during early phagosome formation and after Listeria escapes the original containment *** addition,all three proteins are indispensable for the process of phagosome to lysosome ***,the establishment of a functional compartmentalization overview and an organizational framework of intracellular rab-mediated vesicle trafficking underscore the importance of this work as a resource for future investigations.

关键词： Dendritic cell Membrane transport rab gtpase Listeria

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

Genes & Diseases 2023年第5期10卷 1894-1907页

作者： Minxue Xu Jie Ji Dandan Jin Yue Wu Tong Wu Renjie Lin Shengze Zhu Feng Jiang Yifei Ji Baijun Bao Mei Li Weisong Xu Mingbing Xiao Department of Gastroenterology and Research Center of Clinical Medicine Affiliated Hospital and Medical School of Nantong UniversityNantongJiangsu 226001China Third People's Hospital Affiliated to Nantong University NantongJiangsu 226001China Medical School of Nantong University Oral Medcine192 NantongJiangsu 226001China Department of Medical Oncology Affiliated Hospital of Nantong UniversityNantongJiangsu 226001China Department of Gastroenterology Affiliated Nantong Rehabilitation Hospital of Nantong UniversityNantongJiangsu 226001China

Exosomes carry and transmit signaling molecules used for intercellular *** generation and secretion of exosomes is a multistep interlocking process that allows simultaneous control of multiple regulatory *** molecules,mainly rab gtpases,cytoskeletal proteins and soluble N-ethylmaleimide-sensitive fusion attachment protein receptor(SNARE),are specifically regulated in response to pathological conditions such as altered cellular microenvironment,stimulation by pathogenic factors,or gene *** interferes with the smooth functioning of endocytosis,translocation,degradation,docking and fusion processes,leading to changes in the secretion of *** numbers of secreted exosomes are disseminated by the flow of body fluids and absorbed by the recipient *** transmitting characteristic functional proteins and genetic information produced under disease conditions,exosomes can change the physiological state of the recipient cells and their *** microenvironment,in turn,affects the occurrence and development of ***,this review will discuss the mechanism by which exosome secretion is regulated in cells following the formation of mature secretory multivesicular bodies(MVBs).The overall aim is to find ways to eliminate disease-derived exosomes at their source,thereby providing an important new basis for the clinical treatment of disease.

关键词： Cellular microenvironment Cytoskeleton Exosome secretion rab gtpase SNARE

Complementation and Expression Analysis of SorablA and Sorab2A in Sugarcane Demonstrates Their Functional Diversification

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

Journal of Integrative Plant Biology 2006年第12期48卷 1450-1457页

作者： Jia-Ming Zhang Anne W Sylvester Ding-Qin Li Xue-Piao Sun State Key Biotechnology Laboratory for Tropical Crops Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences Haikou 571101 China Department of Botany University of Wyoming Laramie Wyoming 82071 USA

Mammalian and plant rabl and rab2 are small gtpases that regulate vesicle trafficking in the endoplasmic reticulum （ER） to Golgi compartments. Little is known about their functional diversification or potential interaction. We cloned sugarcane （Saccharum officinarum L.） rab1A and rab2A genes and studied their functional differences by expression and complementation experiments. We found differential expression of the two genes during sugarcane leaf development： Sorab2A expression declined from the dividing base to the maturing tip of the growing leaves, whereas Sorab1A was constitutively expressed, suggesting that Sorab2A is required for cell division and expansion and SorablA is required for cells at all developmental stages. We used a yeast temperature sensitive ypt1-A 136D mutant strain to further investigate these shared and unique functions. Yptl is a small gtpase that regulates vesicle transport in the same cellular location as rabl and rab2. Neither Sorab1A nor Sorab2A alone could restore the growth of the mutant at restrictive temperatures when Sorab1A and Sorab2A were transformed separately. However, Sorab1A transformants maintained normal morphology and viability at non-permissive temperature, and resumed growth when returned to permissive temperature, whereas Sorab2A transformants died at non-permissive temperature, suggesting that SorablA function is required for a cell＇s viability. Mutant growth was fully restored when Sorab1A and Sorab2A were co-transformed, indicating that SorablA and Sorab2A complement each other and they both are needed to restore the function of ypt1-A136D. These results demonstrate that Sorab1A and Sorab2A serve distinct but overlapping functions, mostly by regulating the transportation of different sets of proteins.

关键词： complementation co-transformation functional diversification rab gtpase sugarcane temperature sensitivemutant

Actin-depolymerizing factors 8 and 11 promote root hair elongation at high pH

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

Plant Communications 2024年第3期5卷 232-247页

作者： Dong Qian Tian Li Chen Zheng Yue Niu Yingzhi Niu Chengying Li Muxuan Wang Yang Yang Lizhe An Yun Xiang Ministry of Education Key Laboratory of Cell Activities and Stress Adaptations School of Life SciencesLanzhou UniversityLanzhou 730000China These authors contributed equally to this article

A root hair is a polarly elongated single-celled structure that derives from a root epidermal cell and func-tions in uptake of water and nutrients from the surrounding *** reports have demon-strated that short periods of high pH inhibit root hair extension;but the effects of long-term high-pH treat-ment on root hair growth are still ***,we report that the duration of root hair elongation is signicantly prolonged with increasing external pH,which counteracts the effect of decreasing root hair elongation rate and ultimately produces longer root hairs,whereas loss of actin-depolymerizing factor 8 and 11(ADF8/11)function causes shortening of root hair length at high pH(pH 7.4).Accumulation of ADF8/11 at the tips of root hairs is inhibited by high pH,and increasing environmental pH affects the actinlament(F-actin)meshwork at the root hair *** high pH,the tip-focused F-actin meshwork is absent in root hairs of the adf8/11 mutant,actinlaments are disordered at the adf8/11 root hair tips,and actin turn-over is *** and recycling vesicles do not aggregate in the apical region of adf8/11 root hairs at high ***,our results suggest that,under long-term exposure to high extracellular pH,ADF8/11 may establish and maintain the tip-focused F-actin meshwork to regulate polar trafcking of secretory/recycling vesicles at the root hair tips,thereby promoting root hair elongation.

关键词： pH ADF actin rab gtpase vesicle root hair

球孢白僵菌拴留蛋白BbVps3在转运环孢菌素A中的功能

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

球孢白僵菌拴留蛋白BbVps3在转运环孢菌素A中的功能

作者：赵玉涛西南大学

学位级别：硕士

环孢菌素A(Cyclosporin A,CsA)是由真菌产生的一种亲脂性的环状含11个氨基酸的多肽化合物。自被发现以来,CsA主要作为免疫抑制剂被广泛应用于临床。但由于其肾毒性,高血压等严重副作用,应用被受到限制。因此,研究CsA解毒机制具有重要的... 详细信息

环孢菌素A(Cyclosporin A,CsA)是由真菌产生的一种亲脂性的环状含11个氨基酸的多肽化合物。自被发现以来,CsA主要作为免疫抑制剂被广泛应用于临床。但由于其肾毒性,高血压等严重副作用,应用被受到限制。因此,研究CsA解毒机制具有重要的理论意义与应用价值。另外,CsA还具有抗真菌、抗HIV和抗寄生虫等多种生物活性。而球孢白僵菌对CsA具有明显的耐受性。课题组前期研究发现球孢白僵菌通过由P4-ATPase BbCrpa介导的囊泡运输途径,把CsA经由反面高尔基网状结构(trans-Golgi network,TGN)、早期内体(Early endosomes,EEs)和晚期内体(Late endosomes,LEs)运送至液泡(Vacuoles,Vac)中储存或降解,达到解毒的目的。拴留蛋白[①C类核心液泡/内体拴留复合物(class C core vacuole/endosome tethering,CORVET)和②同型融合和蛋白分选复合物(homotypic fusion and protein sorting,HOPS)]及其招募蛋白rab gtpases在真核生物的膜融合过程中发挥着重要功能,rab gtpases负责招募拴留蛋白,拴留蛋白CORVET和HOPS将囊泡牵引靠近进行融合。CORVET和HOPS为异六聚体复合物,共用Vps11、Vps16、Vps18和Vps33四个核心亚基。另外,CORVET具有两个rab5结合亚基,Vps3和Vps8,HOPS具有两个rab7结合亚基,Vps39和Vps41。为进一步弄清球孢白僵菌转运CsA的机制,本文通过基因敲除、RNA干扰、蛋白定位观察和酵母双杂交等技术方法,筛选出了参与转运CsA的BbVps3,并对它的功能进行了研究,从而为明确该蛋白在CsA转运过程中的分子机制奠定了基础。主要结果:1.下调BbVPS3降低了球孢白僵菌对CsA的耐受性构建拴留蛋白各亚基和rab gtpases共11个蛋白的编码基因同源敲除载体,转化入球孢白僵菌后,获得ΔBbrab5-2、ΔBb VPS8、ΔBbVPS11、ΔBbVPS18和ΔBbVPS41共5个基因的敲除突变体。对未敲除成功的Bbrab5-1、Bbrab7-2、BbVPS3、BbVPS16、BbVPS33和BbVPS39构建RNA干扰载体,转化入球孢白僵菌中,筛选后获得各基因的RNA干扰转化子。对敲除突变体和RNAi转化子进行CsA耐受性分析,结果显示只有Bb VPS3RNAi菌株表现出CsA耐受性明显下降。表达量检测结果显示,对CsA敏感的BbVPS3RNAi-1转化子相比于野生型和未表现出CsA敏感的阴性菌株BbVPS3RNAi-2表达量具有大幅下调。说明该突变体由于BbVps3的表达受到干扰,而表现出对CsA敏感。同时暗示BbVps3参与了 CsA的转运。2.下调BbVPS3使球孢白僵菌孢子萌发速率增加,生长速率和产孢量下降观察下调BbVPS3对球孢白僵菌生长发育的影响,实验结果显示:1)在CZA条件下,Bb VPS3RNAi菌株与野生型菌株相比,生长速率下降了 11.44%,差异极显著;2)在正常条件和CsA条件下,Bb VPS3RNAi与野生型相比萌发中时(Median Germination Time,GT50)分别提前了 3.18%和 8.07%;3)无论 CsA 存在与否,Bb VPS3RNAi菌株产孢量与野生型菌株相比,都有明显的下降。上述结果表明,下调BbVPS3降低了球孢白僵菌的生长速率和孢子产量,并提前了分生孢子的萌发。***3参与了 CsA在球孢白僵菌中的转运为了进一步明确BbVps3参与了球孢白僵菌中CsA的转运,检测不同CsA浓度下,球孢白僵菌中BbVps3的表达量。结果显示在CsA浓度0-0.5(μg/mL)范围内,BbVps3的表达量大幅上调,说明适宜浓度的CsA可以上调BbVps3的表达。另外,用 5-羧基荧光素(5-carboxyfluorescein,5-FAM)标记 CsA,观察 CsA-5-FAM 在WT及Bb VPS3RNAi菌株中的分布情况。结果显示,下调BbVPS3减少了 CsA-5-FAM在球孢白僵菌液泡的积累,说明BbVps3参与了 CsA转运至液泡的过程。***3在EE阶段发挥功能将BbVps3与eGFP融合,观察BbVps3在球孢白僵菌的亚细胞定位,激光共聚焦显微镜观察结果显示,BbVps3::eGFP在球孢白僵菌菌丝胞质中呈点状分布,并且与标记EEs的mRFP::Bbrab5有明显共定位,而与标记TGN和LEs的mRFP::BbPHOSBP、mRFP::Bbrab7均无明显共定位情况。添加CsA后,未能改变BbVps3的定位,说明BbVps3在C

关键词：球孢白僵菌拴留蛋白 rab gtpase BbVps3 CsA

rab11-FIP3参与调控突触可塑性的机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

Rab11-FIP3参与调控突触可塑性的机制研究

作者：许涛浙江大学

学位级别：硕士

rab GTP酶主要通过水解GTP,在膜运输过程中起到提供能量的作用。在囊泡转运过程中rab激酶的作用尤为突显,rab4,rab5,rab11参与早期内吞体的形成,rab7,rab9参与晚期内吞体的形成,其中,rab4主要参与快速上膜过程,rab11主要参与慢速上膜,... 详细信息

rab GTP酶主要通过水解GTP,在膜运输过程中起到提供能量的作用。在囊泡转运过程中rab激酶的作用尤为突显,rab4,rab5,rab11参与早期内吞体的形成,rab7,rab9参与晚期内吞体的形成,其中,rab4主要参与快速上膜过程,rab11主要参与慢速上膜,慢速上膜是受多种蛋白调控的,所以对于rab激酶我们主要关注rab11。rab GTP酶也依赖不同的效应因子帮助它们在不同环境下发挥作用。rab11的效应分子包括APPL,FIPs,AKAP10,MYO5,EEA1等。NMDA受体是中枢神经中重要的谷氨酸受体,对于学习记忆具有重要影响,NMDA受体异常会引起多种类型的神经退行性疾病。我们在研究RIM1参与调控小鼠海马中NMDA受体运输机制时通过打质谱发现了 4个蛋白既与NMDA受体有相互作用,又与RIM1蛋白有相互作用,这4个蛋白中我们比较感兴趣的是FIP3。我们尝试用电生理手段揭示FIP3在神经系统中的功能。FIP3的敲减对于突触的基本传递没有影响,但会影响NMDA受体依赖的LTP,但不影响NMDA受体依赖的LTD。为了进一步研究FIP3在突触可塑性中的功能,我们通过生化检测发现FIP3主要分布在海马组织中,在突触后富集,存在于NMDA受体复合物,但不存在于AMPA受体复合物中。免疫共沉淀的结果显示FIP3并不直接与NMDA受体亚基结合。我们进一步探究FIP3参与突触可塑性的功能机制,打质谱发现了一些有意思的蛋白,其中包括CaMKⅡ,通过GST-pull down及免疫共沉淀揭示了 FIP3与CaMK有直接的相互作用,且此相互作用受到钙离子调控,细胞成像揭示了 FIP3的敲减会使CaMKⅡ发生转位,与PSD95的共定位明显增加。因此,我们得到结论,FIP3可能参与调控CaMKⅡ的功能,进而影响突触可塑性。

关键词： FIP3 CaMKⅡ LTP rab gtpase NMDA 受体

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

rab35正性调控心肌KATP通道再循环

Rab35正性调控心肌KATP通道再循环

作者：杨波苏州大学

学位级别：硕士

研究目的:KATP通道即ATP敏感钾离子通道(ATP-sensitive K+channel),是一种位于细胞膜上的钾离子通道。KATP通道分布广泛,高表达于心肌、骨骼肌、胰腺等,在心脏缺血和高胰岛素血症等病理条件下,KATP通道在细胞膜上的表达密度下降,而且有... 详细信息

研究目的:KATP通道即ATP敏感钾离子通道(ATP-sensitive K+channel),是一种位于细胞膜上的钾离子通道。KATP通道分布广泛,高表达于心肌、骨骼肌、胰腺等,在心脏缺血和高胰岛素血症等病理条件下,KATP通道在细胞膜上的表达密度下降,而且有大量研究表明,维持KATP在细胞膜上的密度与心脏保护、维持正常血压和胰岛素分泌等息息相关。由此可见,维持KATP在细胞膜上的密度具有重要治疗潜力。细胞膜上KATP通道密度的维持主要依赖其内吞与再循环的动态平衡,但KATP通道再循环的分子机制尚不清楚。真核细胞中的rab gtpase家族是膜蛋白转运的关键调控者,包括膜蛋白再循环过程。因此,本课题旨在研究与再循环直接相关的rab家族成员,通过探究其对KATP通道再循环的调控作用,为KATP通道转运缺陷相关疾病的治疗提供新的治疗策略。研究方法:1.构建心肌细胞中的KATP通道亚基类型的质粒Kir6.2和SUR2A以及rab gtpase家族中与再循环直接相关的成员的显性负性突变型(Dominant-negative mutant,DN)质粒:rab4-S22N,rab11a-S25N,rab11b-S25N,rab35-S22N。2.为了探究哪一个rab成员影响KATP通道在细胞膜上的表达密度,以及是否影响KATP通道性质,本研究将KATP通道两种亚基的质粒,和空载质粒或rab-DN质粒,共转染到HEK 293t细胞中,做KATP通道单细胞内膜向外膜片钳(Inside-out patch clamp)记录、生物素标记的细胞表面膜蛋白提取和蛋白质免疫印迹(Western blotting),分析电流幅度、单通道电流与开放概率,以及Western blotting灰度值。3.为了探究rab-DN是否是通过作用于KATP通道再循环影响KATP通道在细胞膜上的表达密度,本研究将KATP通道两种亚基的质粒,和空载质粒或rab-DN质粒,共转染到Hela细胞中。通过对正常培养的细胞孵育一抗来标记已经转运到细胞膜上可以参与内吞与再循环的KATP通道,分别检测共定位和再循环的细胞免疫荧光。对图像进行共定位分析,统计不同rab影响下KATP通道所在囊泡的大小,并定量再循环到细胞膜上的通道信号。4.为了探究PI3K-Akt信号通路是否参与rab对KATP通道在细胞膜表达密度的调节,本研究构建相应rab的组成性激活突变型(constitutively active mutant,CA)质粒,和KATP通道两种亚基的质粒共转染进HEK 293t细胞,用PI3K-Akt信号通路的抑制剂LY294002处理,做KATP通道单细胞内膜向外膜片钳与Western blotting,分析电流幅度、单通道电流与开放概率,以及Western blotting灰度值。5.为了验证在细胞系中所得实验结果是否适用于原代心肌细胞,本实验包装相应rab的失活突变型(rab-DN)和激活突变型(rab-CA)的腺病毒,以mCherry为阴性对照,分离大鼠心肌细胞进行腺病毒侵染,做KATP通道单细胞内膜向外膜片钳记录,分析电流幅度、单通道电流与开放概率。实验结果:***35-DN下调KATP通道在细胞膜上的密度。将rab-DN转染进HEK 293t细胞中,做KATP通道单细胞内膜向外膜片钳实验得到:对照组与四种rab-DN组中,单通道电流与通道开放概率各组间无显著性差异,但rab35-DN组KATP通道电流幅度显著低于其他组。提取膜蛋白做Western blotting实验得到:对照组与四种rab-DN组中,rab35-DN组细胞膜上KATP通道的数量显著小于其他组。***35-DN减缓KATP通道再循环,导致KATP通道在细胞内的积累。rab-DN转染进Hela细胞中,检测共定位的细胞免疫荧光实验得到:四种rab-DN组中,rab35-DN与KATP通道共定位系数M2显著高于其他组,KATP通道在rab35-DN组中所在囊泡大小显著高于其他组。检测再循环的细胞免疫荧光得到:再循环的KATP通道信号,对照再循环0h组与rab35-DN再循环0h组之间无显著性差异,rab35-DN再循环2 h组回到细胞膜的KATP通道信号显著小于对照再循环2 h组。***35-CA上调KATP通道在细胞膜上的密度,PI3K-Akt信号通路不参与rab35对KATP通道细胞膜表达密度的调控。rab35-CA转染进HEK293t细胞中,LY294002处理细胞。KATP通道单细胞内膜向外膜片钳实验得到:单通道电流与通道开放概率在各组间无显著性差异;LY294002处理使Akt的磷酸化水平显著下调;rab35-CA组的电流幅度显著大于对照组,但LY294002处理无显著影响。KATP通道

关键词： ATP敏感的钾离子通道(KATP) rab gtpase 再循环心肌细胞

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

作者：李颖南京农业大学

学位级别：硕士

小麦赤霉病是小麦生产上一种重要的真菌病害,在世界各产麦国普遍发生。小麦赤霉病发病时导致小麦穗部呈现白穗症状,并导致谷粒感病。在造成严重经济损失的同时,感病麦粒中含有脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol)和玉米赤霉烯酮(zearale... 详细信息

小麦赤霉病是小麦生产上一种重要的真菌病害,在世界各产麦国普遍发生。小麦赤霉病发病时导致小麦穗部呈现白穗症状,并导致谷粒感病。在造成严重经济损失的同时,感病麦粒中含有脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol)和玉米赤霉烯酮(zearalenon)等真菌毒素,食用后严重威胁着人、畜的生命健康。然而目前还没有有效方法来控制赤霉病的发生,现阶段主要利用杀菌剂来防治赤霉病,但大规模的使用化学药剂给环境及生物带来不利影响。因此,解析小麦赤霉病菌的致病分子机制,可为寻找新的赤霉病菌防治方法提供理论依据。在真核生物的内膜系统中,囊泡携带着蛋白、脂质等物质,从供体运送到受体,在这个过程中膜融合作用起着重要作用。Mon1和Ccz1是在细胞质向液泡定向运输途径(Cvt)中首先被发现的基因,更深入的研究表明Mon1和Ccz1在酵母液泡的同型融合和调控囊泡运输过程中发挥重要作用。近期的文章表明,Mon1-Ccz1作为rab7的鸟甘酸交换因子(GEF)调控胞吞作用。本文通过同源序列比对,在小麦赤霉病菌基因组数据库中找到一个与酵母MON1同源的基因,命名为FgMON1。通过系统发育分析,发现Mon1在丝状真菌的进化过程中是保守的。通过对小麦赤霉病菌中的FgMON1敲除后发现其在小麦赤霉病菌的生长发育、有性生殖和致病性及毒素的产生中起着重要作用。另外,我们还发现FgMon1参与小麦赤霉病菌的分生孢子的产生、孢子形态建成和菌丝细胞壁完整性过程。通过FM4-64染色发现△Fgmon1突变体胞吞作用延缓,CMAC染色发现突变体液泡融合受阻、细胞自噬过程受到影响。进而对FgMon1蛋白进行了亚细胞定位,发现该蛋白主要定位在小麦赤霉病菌分生孢子的液泡及胞质中,这可能与其参与液泡融合、细胞自噬作用相关。通过酵母双杂交和体外GST-pull down发现FgMon1与rab gtpase Fgrab7存在互作关系。对Fgrab7敲除后发现其在小麦赤霉病菌的生长、致病性、膜泡融合及自噬过程中发挥重要作用。进一步研究发现FgMon1与Fgrab7Q67L、Fgrab7T22N都有互作关系。FgMon1可能作为Fgrab7的GEF,能够将Fgrab7激活。上述结果表明,FgMon1与Fgrab7作为关键组分调控囊泡运输、胞吞作用和细胞自噬,进而影响小麦赤霉病菌的生长发育、致病性和毒素的产生。在酵母和哺乳动物细胞中,早期内涵体发育成熟为晚期内涵体需要rab5到rab7的转化,Mon1-Ccz1复合物能被rab5-GTP招募到晚期内涵体膜上,同时Mon1-Ccz1作为rab7的GEF,能够招募rab7并将其激活,从而促进囊泡通过晚期内涵体到液泡中进行降解。为了探究rab5-Mon1-rab7作用模块在小麦赤霉病菌囊泡运输过程中的作用,首先通过酵母双杂发现FgMon1与rab5在小麦赤霉病菌中的同源蛋白Fgrab5A、Fgrab5B都相互作用,进而对Fgrab5B的功能进行分析。利用同源重组原理,通过基因敲除的方法获得相应的突变体。结果表明Fgrab5A、Fgrab5B影响小麦赤霉病菌的营养生长、有性生殖、分生孢子形成、致病力及毒素的合成,并且参与调控小麦赤霉病菌的液泡融合与胞吞作用。由此推测,FgMon1与Fgrab5A、Fgrab5B、Fgrab7作为一个模块共同调控囊泡运输、胞吞作用和细胞自噬,进而影响小麦赤霉病菌的生长发育、致病性和毒素的产生。综上所述,rab蛋白、GEF和效应蛋白SNARE蛋白构成了一个rab蛋白调控囊泡运输的作用模块。本文通过对小麦赤霉病菌中囊泡运输作用模块相关基因FgMON1、Fgrab5、Fgrab7的研究推测,FgMon1通过激活Fgrab7并与Fgrab5、Fgrab7之间的动态结合而可能参与调控囊泡与内涵体的融合过程,通过调控液泡融合,进而影响胞吞作用和细胞自噬作用,进而影响了小麦赤霉病菌的生长发育及致病性过程。

关键词：小麦赤霉病菌致病性囊泡运输胞吞作用细胞自噬 FgMon1 Fgrab7 rab gtpase