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pp2ac在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

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PP2Ac在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

作者：李嘉豪广西医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨pp2ac在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法:收集2016年07月01日至2018年03月01日在广西医科大学附属肿瘤医院行根治性切除手术的100例肝癌患者的临床资料,对手术切除获得的上述肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,H... 详细信息

目的:探讨pp2ac在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法:收集2016年07月01日至2018年03月01日在广西医科大学附属肿瘤医院行根治性切除手术的100例肝癌患者的临床资料,对手术切除获得的上述肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织及相对应的癌旁组织进行研究,具体方法为采用Western蛋白印迹法分别检测在HCC组织及癌旁组织中pp2ac蛋白的表达情况,比较HCC组织与癌旁组织中pp2ac蛋白的表达水平,采用免疫组织化学法分别检测在HCC组织及癌旁组织中pp2ac蛋白的表达情况,比较HCC组织与癌旁组织中pp2ac蛋白的表达情况,根据免疫组化检测的结果将pp2ac蛋白的表达情况分为高表达组(中阳性和强阳性)和低表达组(阴性和弱阳性),然后用卡方检验分析pp2ac表达情况与HCC患者的临床资料的相关性,随访患者无复发生存时间以及总生存时间的情况,并通过Kaplan-Meier方法、单变量分析以及Cox多变量比例风险回归模型分析pp2ac对HCC患者无复发生存时间以及总生存时间的影响,比较pp2ac蛋白表达水平对肝癌患者无复发生存时间以及总生存时间的影响。结果:1.通过Western Blot检测HCC组织及癌旁组织pp2ac蛋白表达水平,HCC组织中pp2ac蛋白水平为3.01±0.47,癌旁组织中pp2ac蛋白水平为1.25±0.22,HCC组织中的pp2ac蛋白表达水平与癌旁组织中的pp2ac蛋白表达水平相比,差异具有统计学意义(P2.通过免疫组化检测HCC组织及癌旁组织pp2ac蛋白表达水平,pp2ac蛋白在100例HCC组织中高表达72例,高表达率为72%,pp2ac蛋白在100例癌旁组织中高表达5例,高表达率为5%。HCC组织中pp2ac蛋白表达情况与癌旁组织中pp2ac蛋白情况相比,差异具有统计学意义(P2ac高表达组与pp2ac低表达组在性别、年龄、淋巴结转移无明显相关性(P>0.05),而在肝癌肿瘤大小、肿瘤个数、分化程度、门静脉侵犯、BCLC分期、AFP以及微血管侵犯相关(P2ac高表达组患者的1、3年复发率(分别为28%和62%)显著高于低表达组患者的1、3年复发率(分别为19%和42%),pp2ac高表达组患者的1、3年生存率(分别为84%和68%)显著低于低表达组患者(分别为90%和81%)。pp2ac高表达组的患者无复发生存时间显著低于pp2ac低表达组的患者(Ppp2ac高表达组的患者总生存时间也显著低于pp2ac低表达组的患者(Ppp2ac是患者术后复发和生存的独立影响因素。结论:***组织中的pp2ac蛋白表达水平与癌旁组织中的pp2ac蛋白表达水平相比,前者的pp2ac蛋白表达水平较高;***组织中的pp2ac蛋白表达水平与肿瘤大小、肿瘤个数、分化程度、门静脉侵犯、BCLC分期、AFP以及微血管侵犯密切相关,pp2ac蛋白可能参与肝癌细胞增殖和侵袭转移;***2ac蛋白高表达组患者与低表达组患者相比,高表达组患者无复发生存时间和总生存时间更短。HCC组织中的pp2ac蛋白表达水平是HCC患者术后复发和生存的独立影响因素。

关键词： pp2ac 肝细胞性肝癌表达临床意义

pp2ac甲基化在衰老及肝脏糖代谢调控中作用的研究

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PP2Ac甲基化在衰老及肝脏糖代谢调控中作用的研究

作者：梁紫微广西医科大学

学位级别：硕士

目的:衰老是正常的生命过程,生物衰老机制极其复杂,与肝脏糖代谢功能紊乱有着密切的联系。蛋白磷酸酶2A（Protein phosphatase 2A,pp2A）是细胞内重要的蛋白磷酸酶,通过催化丝氨酸/苏氨酸去磷酸化修饰,参与信号转导、基因表达、细胞代... 详细信息

目的:衰老是正常的生命过程,生物衰老机制极其复杂,与肝脏糖代谢功能紊乱有着密切的联系。蛋白磷酸酶2A（Protein phosphatase 2A,pp2A）是细胞内重要的蛋白磷酸酶,通过催化丝氨酸/苏氨酸去磷酸化修饰,参与信号转导、基因表达、细胞代谢、细胞增殖分化及细胞凋亡等过程的调控。pp2A 催化亚基 C 亚基（Protein phosphatase 2A catalytic subunit C,pp2ac）可在亮氨酸甲基转移酶（leucine carboxyl methyltransferase,LCMT1）催化下甲基化,并由竣基甲基酯酶（carboxy methylesterase 1,ppME-1）可逆性催化其去甲基,调控pp2A合酶组成、活性及底物特异性,进而影响其功能。目前pp2ac甲基化在衰老及肝脏糖代谢调节中的作用尚未明确。前期研究结果发现细胞衰老过程伴随pp2ac甲基化改变,但尚未知晓在动物模型中机体衰老过程pp2ac甲基化的变化规律。前期研究还发现,能量限制可调节糖异生及葡萄糖转运相关基因表达,增加肝脏糖原储存,调控衰老相关糖代谢平衡紊乱,但尚未知晓肝脏pp2ac甲基化是否参与糖代谢调控,以及二者之间的因果关系。因此,本研究利用动物模型探讨机体衰老过程各主要脏器pp2ac甲基化修饰的变化趋势,并在能量限制干预衰老的SD大鼠模型中探讨pp2ac活性与甲基化,以及糖代谢相关激素的变化,以明确pp2ac甲基化改变与前期研究结果中衰老相关糖代谢调控的相关关系。同时,在细胞模型利用对pp2A具有调节作用的白藜芦醇处理细胞,以及siRNA技术沉默LCMT1细胞模型,采用上述两种方式调控细胞内pp2ac甲基化水平,探讨pp2ac甲基化在肝细胞糖代谢调控作用中的因果关系。方法:1.自然衰老过程中大鼠主要脏器pp2ac及其甲基化修饰改变（1）分组:幼龄组（4周龄）、年轻组（5月龄）、中年组（15月龄）、老龄组（27月龄）。检测实验终点时各组大鼠体重、肝重及取大鼠肝脏组织切片HE染色观察形态变化。（2）蛋白免疫印迹检测幼龄组、年轻组、中年组及老龄组大鼠肝、肾脏、肺、心脏和大脑皮层组织pp2ac及其甲基化修饰的情况。2.能量限制干预衰老对pp2ac活性和甲基化修饰及血糖调节激素的影响（1）能量限制大鼠分组:老龄组（27月龄）及能量限制组（12月龄大鼠40%能量限制15个月）。检测实验终点时两组大鼠肝脏组织切片HE染色观察形态变化。（2）蛋白免疫印迹检测老龄组及能量限制组大鼠肝组织pp2ac及其甲基化修饰的情况（3）免疫沉淀法检测两组大鼠肝组织pp2A活性的表达情况。（4）酶联免疫吸附法检测老龄组及能量限制组大鼠血浆胰岛素、瘦素、脂联素的表达水平。***2ac甲基化在肝细胞糖代谢调控中的作用3.1白藜芦醇处理细胞探讨pp2ac甲基化对糖异生相关基因表达的影响（1）使用刃天青检测不同浓度白藜芦醇处理MIHA细胞的活性,确定最适白藜芦醇浓度。（2）蛋白免疫印迹检测白藜芦醇处理各组细胞pp2ac及其去甲基化变化情况。（3）实时荧光定量PCR检测糖异生相关基因丙酮酸羧化酶（PC）、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1（PCK1）和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶2（PCK2）的mRNA表达情况。3.2沉默LCMT1调控pp2ac甲基化对糖代谢调控的影响（1）siRNA LCMT1 MIHA细胞模型构建:设计和化学合成siRNA LCMT1干扰序列,脂质体Lipofectamine3000转染MIHA细胞,RT-PCR检测LCMT1 mRNA表达情况,蛋白免疫印迹检测LCMT1蛋白和pp2ac及其去甲基化变化情况。（2）实时荧光定量PCR检测siRNA沉默LCMT1细胞和对照组细胞糖异生相关基因PC、PCK1和PCK2的mRNA表达情况。（3）蒽酮法检测siRNA沉默LCMT1细胞和对照组细胞糖原含量。结果:1.自然衰老过程中大鼠主要脏器pp2ac及其甲基化修饰改变（1）大鼠体重从幼龄至中年随着年龄的增长体重逐渐增加（P＜0.05）。幼龄至中年随着年龄的增长大鼠肝脏重量逐渐增加,差异有统计学意义（p＜0.05）。大鼠肝脏系数变化趋势是从幼龄期至年轻期随着年龄的增加肝脏系数呈下降趋势,差异有统计学意义（p＜0.05）。肝脏组织HE染色形态学观察:大鼠从幼龄至老龄随着年龄的增长肝细胞逐渐变大,至中年及老龄肝组织有明显的病理改变,肝细胞索消失,核固缩,细胞肿胀,出现空泡样变性。（2）对于肝脏组织,与幼龄组相比,年轻组的pp2ac去甲基化蛋白明显上升,差异有统计学意义（p＜0.05）;老龄组的pp2ac去甲基化蛋白表达量明显较年轻组低,差异有统计学意义（p＜0.05）;四组大鼠总pp2ac、LCMT1及ppME-1蛋白表达量无明显变化,差异无统计学意义（p＞0.0

关键词： pp2ac 甲基化衰老肝脏糖代谢

pp2ac调控脂质自噬在苯并芘促进肝细胞脂质沉积中的作用

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PP2Ac调控脂质自噬在苯并芘促进肝细胞脂质沉积中的作用

作者：李韵晴广西医科大学

学位级别：硕士

目的:近年来非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)发病快速增长,已成为我国第一大慢性肝脏疾病,环境内分泌干扰物日常暴露可能是NAFLD的促进因素。苯并[a]芘(BaP)是常见环境污染物,可干扰细胞脂代谢,但低剂量BaP暴露是否能诱导肝细胞脂质沉积,从... 详细信息

目的:近年来非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)发病快速增长,已成为我国第一大慢性肝脏疾病,环境内分泌干扰物日常暴露可能是NAFLD的促进因素。苯并[a]芘(BaP)是常见环境污染物,可干扰细胞脂代谢,但低剂量BaP暴露是否能诱导肝细胞脂质沉积,从而促进NAFLD发生,目前尚未知晓。本研究通过构建低剂量BaP暴露的小鼠原代肝细胞模型,研究体外低剂量BaP暴露对肝细胞脂质沉积的影响及其作用机制,为深入理解环境化学污染物对NAFLD的贡献及其作用机制提供线索,为NAFLD的预防和治疗提供有价值的科学依据。方法:1.小鼠原代肝细胞分离及鉴定使用2步灌注法分离原代肝细胞,使用差速离心法提纯原代肝细胞。通过形态学观察和PAS糖原染色鉴定原代肝实质细胞。2.原代肝细胞脂质沉积的检测使用油红O染色观察细胞内脂滴沉积情况并拍照,使用图像分析软件image J分析红染脂滴面积;甘油三酯(TG)含量试剂盒检测BaP暴露后细胞内TG含量变化。3.原代肝细胞内脂肪酸合成与分解关键基因检测实时荧光定量PCR检测脂肪酸从头合成关键基因LXR-α、FANS,脂质摄取关键基因FABP1、FATP2,脂肪酸β-氧化关键基因CPT1a、CPT2及脂蛋白合成关键基因DGAT1表达。4.原代肝细胞mTOR通路及脂质自噬的检测实时荧光定量PCR检测脂质自噬标志物SIRT1的m RNA表达;蛋白免疫印迹实验检测mTOR、磷酸化mTOR及自噬标志蛋白Atg5、p62、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达。5.原代肝细胞pp2ac甲基化状态以及调控其甲基化相关酶的检测蛋白免疫印迹实验检测原代肝细胞总pp2ac、甲基化pp2ac、去甲基化pp2ac,以及调控pp2ac甲基化的酶LCMT1、调控去甲基化的酶PME蛋白表达。结果:1.小鼠原代肝细胞分离及鉴定细胞贴壁良好,包膜清晰,细胞未见皱缩。可见被染成蓝紫色的糖原小圆点散在均匀分布于贴壁后的原代细胞胞质内,原代肝细胞纯度>90%。***处理小鼠原代肝细胞活性测定原代肝细胞经0,0.001,0.01,0.1,1nmol/L的BaP处理72h后,各组细胞贴壁良好,包膜清晰,细胞未见皱缩。除BaP处理后的细胞内可见明显脂肪空泡外,各组细胞形态均未发生明显改变。台盼蓝染色结果显示各剂量组肝细胞活性均在97%以上。选择该剂量范围及处理时间进行后续研究。***暴露促进原代肝细胞脂质沉积的检测原代肝细胞经0,0.001,0.01,0.1,1nmol/L BaP处理后,与对照组比较,随BaP浓度增加,细胞内被油红O染色的脂滴逐渐增加。细胞TG含量逐渐增加,P2和调控脂蛋白合成的关键基因DGAT1的m RNA表达均未有显著改变,调控脂肪酸β-氧化的关键酶CPT1a和CPT2的m RNA表达增加,P2、LC3-Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达量增加,P2、LC3-Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达量降低,P2)rapamycin与0,0.001,0.01,0.1,1nmol/L BaP共孵育后,细胞内被油红O染色的脂滴减少,细胞内TG含量减少。Ppp2ac及其甲基化水平BaP暴露促进原代肝细胞脂质沉积过程中,pp2ac及其甲基化状态的检测结果显示,原代肝细胞经0,0.001,0.01,0.1,1nmol/L BaP处理后,总pp2ac、甲基化pp2ac、LCMT1蛋白表达增加,去甲基化pp2ac、PME蛋白表达降低,Ppp2ac激活mTOR通路抑制脂质自噬促进脂质沉积pp2ac抑制剂OA干预增加脂质自噬通量,缓解BaP暴露促进原代肝细胞脂质沉积:(1)OA与低剂量BaP共孵育后,总pp2ac、

关键词：非酒精性脂肪性肝病苯并芘 pp2ac mTOR 脂质自噬

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作者：葛鑫鑫苏州大学

学位级别：硕士

第一部分:TAMs在肺癌进展中的作用目的:探讨TAMs(Tumor Associated Macrophages,肿瘤相关巨噬细胞)浸润是否促进肺癌的进展。方法:免疫组化方法检测339例肺癌患者中CD163、Ki67蛋白水平的表达,并分析CD163与Ki67之间的关系;建立裸鼠慢... 详细信息

第一部分:TAMs在肺癌进展中的作用目的:探讨TAMs(Tumor Associated Macrophages,肿瘤相关巨噬细胞)浸润是否促进肺癌的进展。方法:免疫组化方法检测339例肺癌患者中CD163、Ki67蛋白水平的表达,并分析CD163与Ki67之间的关系;建立裸鼠慢性肺炎模型及原位肺癌模型,观察TAMs在体内对肺癌生长的影响;MTT实验检测TAMs在体外对肺癌细胞生长的影响;划痕实验检测TAMs在体外对肺癌细胞迁移的影响;免疫荧光检测TAMs在体外对肺癌细胞EMT(Epithelial-mesenchymal transition,上皮间质转化)的影响。结果:肺癌患者标本中CD163与Ki67表达呈正相关;TAMs可促进肺癌生长、迁移及EMT的发生。结论:TAMs可以促进肺癌的进展。第二部分:TAMs促进肺癌进展关键基因的预测目的:预测TAMs促进肺癌进展的关键基因。方法:利用GEO(Gene Expression Omnibus)数据库(https://***/geo/)下载公共数据进行分析,并利用R语言进行差异表达基因热图的绘制;利用GO(Gene Ontology)分析(http://***/)来进行差异表达基因的注释和视觉化以及KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,http://***/kegg/***)进行差异基因所富集的通路分析;利用STRING数据库(http://***/)来建立差异基因间的蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,ppI)网络,并用Cytoscape(http://***/)来使之可视化。结果:GEO数据库公用数据分析出MCM处理组和对照组有176个差异基因,GO分析发现这些基因涵盖了强大的生物学功能,例如细胞外基质、血管生成、蛋白整合等,KEGG分析发现这些基因参与了许多信号通路,如ECM-receptor interaction、P13K-Akt、TNF、TGF-beta、MAPK、NF-κB、p53等信号通路,Cytoscape软件进行差异基因ppI(蛋白互作)分析,发现pp2acβ、POLR2F、POLR2D、RBBP4等关键节点基因下调,PTGS2、PDGFB等关键节点基因上调。结论:预测出pp2ac(protein phophatase 2A,pp2A,蛋白磷酸酶2A)可能是TAMs促进肺癌的进展的关键基因。第三部分:TAMs促进肺癌进展关键基因的验证目的:证实TAMs是否通过下调pp2ac从而促进肺癌的进展。方法:免疫组化检测肺癌患者及裸鼠原位肺癌中pp2ac蛋白水平的表达,并分析CD163与pp2ac之间的关系;western blot方法检测肺癌细胞中pp2ac蛋白的表达;四环素(tetracycline,Tet)诱导表达调控系统建立过表达pp2acα的肺癌H292细胞株并建立裸鼠皮下移植瘤检测过表达pp2acα在体内对于肺癌生长的影响;划痕实验检测过表达pp2ac在体外对肺癌细胞迁移的影响;免疫荧光检测过表达pp2acα对肺癌细胞EMT的影响。结果:肺癌患者标本pp2ac与CD163表达呈负相关;MCM处理后的肺癌H292细胞pp2ac的表达下降;过表达pp2acα组裸鼠肿瘤明显小于对照组;过表达pp2acα可削弱TAMs促进肺癌细胞的迁移能力及发生EMT的能力。结论:TAMs依赖于下调pp2ac表达的方式从而促进肺癌的进展。第四部分:TAMs促进肺癌进展所涉及的关键通路目的:探讨NF-κB通路是否为参与TAMs下调pp2ac表达从而促进肺癌进展中所涉及的关键通路。方法:免疫组化检测肺癌患者及裸鼠原位和移植瘤中CD163和p-IKK蛋白水平的表达并分析CD163与p-IKK之间的关系;western blot方法检测p-IKK、IKK蛋白的水平;利用Tet-ON诱导可调控系统建立显性负性突变体(dominant negative,DN)DN-IKKα(S176/180A)、DN-IκBα(S32/36A)的细胞株,并检测这些细胞株中pp2ac的表达。结果:CD163和p-IKK水平呈正相关;MCM处理组p-IKK及IKK蛋白水平较对照组高;DN-IKKα(S176/180A)、DN-IκBα(S32/36A)组的肺癌细胞株中pp2ac蛋白的表达水平较对照组低。结论:TAMs可激活NF-κB通路并可依赖于激活NF-κB通路的方式下调pp2ac从而促进肺癌的进展。第五部分:TAMs与NF-κB/pp2ac通路下游靶基因的生物学预测目的:探讨

关键词：肿瘤相关巨噬细胞肺癌 pp2ac NF-κB CXCL1 COL6A1

LPS通过抑制pp2ac的表达促进胰腺癌细胞的侵袭

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LPS通过抑制PP2Ac的表达促进胰腺癌细胞的侵袭

作者：沈丽苏州大学

学位级别：硕士

目的：炎症微环境在胰腺癌的演进过程当中起着重要作用。有研究发现，炎症刺激可以抑制肿瘤抑制因子蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase2A, pp2A）的表达。本研究中，采用脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）作为炎症刺激方式，研究炎... 详细信息

目的：炎症微环境在胰腺癌的演进过程当中起着重要作用。有研究发现，炎症刺激可以抑制肿瘤抑制因子蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase2A, pp2A）的表达。本研究中，采用脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）作为炎症刺激方式，研究炎症对胰腺癌细胞pp2A催化性C亚基（pp2ac）表达的影响及对细胞侵袭转移能力的影响。方法： 1、收集11例经病理确诊的胰腺癌标本（包括癌组织和癌旁组织），检测标本和7类胰腺癌细胞系pp2ac mRNA的表达水平;2、胰腺癌细胞SW1990经LPS处理后检测pp2ac表达水平及侵袭能力;3、构建pp2acα表达质粒pIRES2-EGFP-pp2acα，通过瞬时转染，构建pp2ac过表达胰腺癌细胞SW1990;4、将胰腺癌细胞SW1990分空载体组和pp2ac过表达组，组内再分对照组和LPS处理组，分别检测各组细胞的侵袭能力，通过比较探讨LPS对细胞侵袭力的影响是否通pp2ac依赖性机制。 5、pp2ac mRNA和蛋白表达水平通过Real time-PCR和Western Blot检测;胰腺癌细胞侵袭能力通过Transwell侵袭实验检测。结果： 1、胰腺癌组织中pp2ac mRNA的表达水平显著低于癌旁组织（P pp2ac mRNA也呈低水平表达。 2、LPS作用后胰腺癌细胞SW1990pp2ac mRNA的表达水平较对照组下降（P pp2ac蛋白表达水平也下降。 3、LPS处理后胰腺癌细胞SW1990穿过聚碳酸酯膜的细胞数较对照组增多（P pp2acα表达质粒pIRES2-EGFP-pp2acα瞬时转染入SW1990细胞后pp2ac蛋白表达水平较对照组和空载体组升高。 5、空载体组中LPS处理组中穿过聚碳酸酯膜的细胞数较对照组增加（P pp2ac过表达组中LPS处理组的细胞数与对照组之间差异无统计学意义（P>0.05）;空载体组与pp2ac过表达组的诱导倍数之间有显著性差异（P pp2ac的表达促进胰腺癌细胞的侵袭。

关键词：胰腺癌 LPS pp2ac 侵袭

磷酸酶pp2ac在大肠癌中正向调节mTORC1的功能及机制研究

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磷酸酶PP2AC在大肠癌中正向调节mTORC1的功能及机制研究

作者：蔡未央上海交通大学

学位级别：硕士

研究目的探讨pp2ac蛋白在大肠癌中的表达及其恶性生物学作用。探讨氨基酸饥饿条件下pp2ac对mTORC1信号通路的作用及调节机制。研究方法1.应用大肠癌组织芯片（Hcol-Ade150CS-01）技术,收集75例大肠癌组织及与其配对的癌旁正常组织,进行... 详细信息

研究目的探讨pp2ac蛋白在大肠癌中的表达及其恶性生物学作用。探讨氨基酸饥饿条件下pp2ac对mTORC1信号通路的作用及调节机制。研究方法1.应用大肠癌组织芯片（Hcol-Ade150CS-01）技术,收集75例大肠癌组织及与其配对的癌旁正常组织,进行免疫组织化学染色,评估大肠癌组织和癌旁正常组织的pp2ac蛋白表达水平（H-Score评分）,统计学分析pp2ac蛋白表达水平与临床病理参数的关系。通过GEO与TCGA数据库,下载大肠癌芯片pp2ac mRNA数据,并进行统计学分析。2.通过裸鼠皮下移植瘤实验,探讨knockdown（KD）pp2ac对大肠癌移植瘤生长的影响。3.应用western blot等技术研究氨基酸饥饿条件下,过表达以及KD pp2ac对mTORC1信号通路的调节。应用单细胞克隆形成实验和软琼脂集落形成实验,探讨氨基酸饥饿条件下,pp2ac对大肠癌细胞生长和克隆形成能力的影响。4.应用免疫共沉淀和western blot技术探究氨基酸饥饿条件下,pp2ac对c-Myc的调节。应用cycloheximide chase assay探讨氨基酸饥饿下pp2ac对c-Myc蛋白稳定性的影响。构建并转染c-Myc野生型和c-Myc（T58A）突变体质粒,观察氨基酸饥饿条件下pp2ac对c-Myc磷酸化状态的调节。研究结果1.大肠癌组织pp2ac蛋白表达水平明显高于癌旁正常粘膜组织表达水平,并具有统计学差异（P＜0.01）。Meta分析GEO与TCGA数据中所有符合要求的大肠癌mRNA芯片结果,发现大肠癌组织中的pp2ac mRNA表达水平明显高于正常肠粘膜上皮,且具有统计学意义（P＜0.05）。pp2ac mRNA水平与DNA copy number具有显著的相关性（r=0.57,P＜0.01）。pp2ac表达水平与大肠癌较高T分期（P=0.008）、较差的TNM分期（P=0.015）相关。2.与转染空载质粒细胞相比,KD pp2ac明显抑制大肠癌裸鼠皮下移植瘤生长,并具有统计学差异。3.在氨基酸饥饿条件下,过表达pp2ac明显增强mTORC1通路活性,介导大肠癌细胞抵抗氨基酸饥饿,促进大肠癌细胞的增殖能力和软琼脂克隆形成能力;在氨基酸饥饿条件下,KD pp2ac进一步抑制mTORC1通路活性,抑制大肠癌细胞的增殖能力和软琼脂克隆形成能力。在氨基酸饥饿-回复实验中,过表达pp2ac使大肠癌细胞对氨基酸饥饿后再灌注更加敏感。4.在氨基酸饥饿条件下,pp2ac通过稳定c-Myc,进一步活化mTORC1信号通路,促进大肠癌细胞的增殖生长。KD c-Myc基因,可完全阻断pp2ac过表达所促进的mTORC1活化。过表达pp2ac明显提高c-Myc蛋白半衰期,上调c-Myc蛋白量。pp2ac促进c-Myc（T58）去磷酸化,增加c-Myc（S62）的磷酸化,进而提高c-Myc蛋白稳定性。研究结论pp2ac mRNA和蛋白在大肠癌组织中高表达,与促进大肠癌的生长增殖相关。在氨基酸饥饿条件下,高表达pp2ac通过稳定c-Myc正向调节mTORC1活性,致使大肠癌细胞抵抗氨基酸饥饿,促进大肠癌细胞在氨基酸饥饿的不利环境中生长增殖

关键词： pp2ac mTORC1信号通路大肠癌氨基酸饥饿 c-Myc

炎症通过NF-κB/pp2ac信号通路促进胰腺癌转移的机制研究

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炎症通过NF-κB/PP2Ac信号通路促进胰腺癌转移的机制研究

作者：汪明云苏州大学

学位级别：硕士

目的:炎症在胰腺癌进展中扮演着了重要角色。有研究发现,在炎症刺激下,抑癌基因蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2A,pp2A）表达被抑制。然而,炎症是否通过抑制pp2A参与了胰腺癌的进展尚未得到证实。本实验探讨炎症在促进胰腺癌转移... 详细信息

目的:炎症在胰腺癌进展中扮演着了重要角色。有研究发现,在炎症刺激下,抑癌基因蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2A,pp2A）表达被抑制。然而,炎症是否通过抑制pp2A参与了胰腺癌的进展尚未得到证实。本实验探讨炎症在促进胰腺癌转移中信号通路核因子kappa B（nuclear factor kappa B,NF-?B）/pp2ac的作用。方法:1.采用脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）处理胰腺癌细胞,建立体外炎症模型2.采用二丁基二氯化锡（dibutyltin dichloride,DBTC）处理C57BL/6小鼠,建立小鼠慢性胰腺炎模型3.通过Real time-PCR,Western blot检测炎症对体外、体内模型中pp2A催化性C亚基（pp2A catalytic subunit,pp2ac）表达的影响4.通过液相蛋白芯片和荧光素酶报告基因检测LPS对胰腺癌细胞NF-κB通路的激活作用5.通过Western blot检测LPS对胰腺癌细胞激酶信号通路的激活作用6.通过MTT检测LPS对胰腺癌细胞增殖能力的影响7.通过Transwell检测LPS对胰腺癌细胞侵袭力的影响。结果:LPS可显著抑制胰腺癌细胞pp2ac的表达,在小鼠慢性胰腺炎模型中胰腺组织pp2ac亦呈低表达。NF-?B通路为炎症反应中至关重要的信号转导通路,LPS可导致IKK持续磷酸化、IκBα磷酸化和降解,以及p65入核,激活胰腺癌细胞NF-?B通路。分别用IKKα显性负性突变体（dominant negative IKKα,DN-IKKα）、IκBα显性负性突变体（DN-IκBα）、Bay 11-7082（IκBα抑制剂）、EF-24（IKK抑制剂）阻断NF-?B通路,削弱了LPS对胰腺癌细胞pp2ac的抑制作用,说明LPS抑制胰腺癌细胞pp2ac的表达是通过NF-?B通路依赖性途径。同时荧光素酶报告基因证实LPS通过NF-?B通路依赖性途径抑制pp2ac的转录。进一步研究发现,LPS通过抑制pp2ac的表达激活胰腺癌细胞JNK、ERK、Akt、PKC激酶信号通路。另外,细胞生物学行为研究显示LPS对胰腺癌细胞生长没有影响,但通过pp2ac依赖性途径促进胰腺癌细胞侵袭。结论:LPS通过NF-κB信号通路依赖性机制抑制pp2ac的表达,促进胰腺癌演进。我们的研究为炎症驱动肿瘤进展提供了新的思路。

关键词： LPS NF-κB pp2ac 炎症胰腺癌

pp2ac去甲基化在锰暴露诱导大鼠肝脏炎症性损伤中的作用研究

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广西医科大学学报 2022年第12期39卷 1911-1917页

作者：黄丽媛陆建勇梁宁静袁江浪孔星星李习艺唐深陆彩玲广西医科大学公共卫生学院南宁530021 广西医科大学基础医学院南宁530021

目的:研究亚急性及慢性锰暴露对SD大鼠肝脏的损伤效应,探索pp2ac去甲基化修饰在锰暴露致肝脏炎症性损伤中的作用。方法:40只雄性SD大鼠按体重随机入组,分别设置4周(4W)和16周(16W)两个暴露时间点,每个时间点分两组(即4W、16W对照组和4W... 详细信息

目的:研究亚急性及慢性锰暴露对SD大鼠肝脏的损伤效应,探索pp2ac去甲基化修饰在锰暴露致肝脏炎症性损伤中的作用。方法:40只雄性SD大鼠按体重随机入组,分别设置4周(4W)和16周(16W)两个暴露时间点,每个时间点分两组(即4W、16W对照组和4W、16W锰暴露组),每组10只;锰暴露组腹腔注射MnCl_(2)·4H_(2)O(15 mg/kg),对照组注射同体积的生理盐水,每天1次,持续4W、16W。实验终点时分离大鼠肝脏,ICP-MS法检测血液及肝组织中锰的含量。苏木精—伊红(HE)染色观察肝脏的病理改变。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测肝脏炎症相关因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、趋化因子CCL-2的表达。Western blotting法检测肝组织总pp2ac、去甲基化pp2ac及pp2ac甲基化调控蛋白LCMT-1及PME-1的表达。结果:与4 W对照组相比,4 W、16 W锰暴露组全血锰含量显著升高(P2、IL-6的mRNA表达与16 W对照组相比呈升高趋势,并且TNF-α的mRNA表达显著升高(Ppp2ac表达水平升高(Ppp2ac修饰蛋白LCMT-1表达水平降低(Ppp2ac蛋白表达无明显变化。结论:锰诱导大鼠肝脏产生炎症性损伤,可能与上调肝脏pp2ac去甲基化有关。

关键词：锰暴露肝损伤炎症 pp2ac

pp2ac在人不同类型肺癌组织和肺癌细胞中的表达

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昆明医学院学报 2007年第6期28卷 68-72页

作者：李彩霞张林白鹏王秦秦昆明医学院第一附属医院临床实验研究中心云南昆明650031 昆明医学院第一附属医院病理科南通大学附属医院神经外科江苏南通226001

目的研究pp2ac在人不同类型肺癌组织和肺癌细胞中的表达.方法用免疫组化方法从组织水平上观测临床获取人不同类型肺癌标本组织的pp2ac蛋白表达;用Western blot分子生物学方法从细胞水平上测定两种人肺癌细胞株(YTLMC-90和GLC-82)的pp2ac... 详细信息

目的研究pp2ac在人不同类型肺癌组织和肺癌细胞中的表达.方法用免疫组化方法从组织水平上观测临床获取人不同类型肺癌标本组织的pp2ac蛋白表达;用Western blot分子生物学方法从细胞水平上测定两种人肺癌细胞株(YTLMC-90和GLC-82)的pp2ac和p-AKT蛋白表达.结果免疫组化结果显示:在人肺鳞癌、腺癌和小细胞肺癌三种肺癌组织中的pp2ac蛋白表达与肺癌患者的性别、年龄和肿瘤分化程度均无明显相关性(P>0.05);在人肺鳞癌组织和小细胞肺癌组织细胞浆中均未见有pp2ac蛋白表达,但在其间质有阳性表达;在人肺腺癌组织中pp2ac蛋白呈阴性表达,而p-AKT蛋白却呈现强阳性表达.Western blot结果表明:在人正常肺组织细胞中pp2ac蛋白呈正常表达;YTLMC-90细胞中pp2ac蛋白较人正常肺组织表达稍弱,而在GLC-82细胞中表达明显减弱,甚至缺失;在人正常肺组织细胞中p-AKT蛋白呈低表达,给予GLC-82细胞加入pp2A抑制剂OA(岗田酸),在6 h、12 h、24 h的不同时间点,p-AKT蛋白的表达均较未加OA组明显增强,pp2ac和p-AKT蛋白表达呈反相关.结论pp2ac可能参与肺癌的发生,其表达水平可能与肺癌细胞病理类型有关.AKT的活化(p-AKT)可能与肺癌的发生发展密切相关.

关键词： pp2ac 人肺癌 P-AKT 细胞株