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MiR-335通过作用于pou5f1负性调节骨肉瘤干细胞特性的实验研究

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现代生物医学进展 2017年第34期17卷 6607-6612页

作者：代国刘盖为孙祥然胡庆柱郑迪杨俭郭卫春武汉大学人民医院骨科湖北武汉430060

目的:研究表明骨肉瘤干细胞与骨肉瘤的发生发展及耐药密切相关。本文探讨miR-335在骨肉瘤干细胞中所起的作用。方法:利用不同方法筛选出骨肉瘤干细胞,检测miR-335的表达水平。利用分子探针技术将骨肉瘤细胞分选为miR-335高表达组和低表... 详细信息

目的:研究表明骨肉瘤干细胞与骨肉瘤的发生发展及耐药密切相关。本文探讨miR-335在骨肉瘤干细胞中所起的作用。方法:利用不同方法筛选出骨肉瘤干细胞,检测miR-335的表达水平。利用分子探针技术将骨肉瘤细胞分选为miR-335高表达组和低表达组,检测各组中骨肉瘤细胞的干细胞样特性。利用转染技术检测miR-335对骨肉瘤干细胞样特性的影响。利用荧光素酶报告基因系统,验证miR-335下游靶基因。最后,利用裸鼠移植瘤动物模型,检测pre-miR-335联合化疗药阿霉素对骨肉瘤的在体抑制效果。结果:miR-335在骨肉瘤干细胞中表达量明显减少。miR-335高表达细胞的干细胞特性明显降低。转染实验验证了上述结果。荧光素酶报告试验显示miR-335在转录后水平上负性调节pou5f1基因。动物实验表明pre-miR-335联合阿霉素在抑制骨肉瘤上明显优于单一阿霉素的抑制效果。结论:miR-335通过下调pou5f1负性调节骨肉瘤干细胞特性。miR-335联合传统化疗药可协同抑制骨肉瘤。

关键词：骨肉瘤干细胞 miRNA-335 pou5f1

肿瘤干细胞相关基因Bmi-1和pou5f1在子宫颈癌中的表达及临床意义

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临床肿瘤学杂志 2017年第7期22卷 633-636页

作者：李仕亮姜莉萍周淼邵国安张媛媛古扎丽努尔·阿布力孜攀枝花攀钢集团总医院甲状腺乳腺外科四川攀枝花617000 攀钢集团总医院妇产科攀枝花617000 新疆医科大学第五附属医院甲状腺乳腺外科 830011 新疆医科大学附属肿瘤医院妇科 830011

目的探讨肿瘤干细胞相关基因Bmi-1、pou5f1在子宫颈癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测69例子宫颈癌组织和16例子宫颈癌组织及其配对的癌旁新鲜组织标本中Bmi-1 mRNA、pou5f1 mRNA的表达水... 详细信息

目的探讨肿瘤干细胞相关基因Bmi-1、pou5f1在子宫颈癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测69例子宫颈癌组织和16例子宫颈癌组织及其配对的癌旁新鲜组织标本中Bmi-1 mRNA、pou5f1 mRNA的表达水平。结果子宫颈癌组织中Bmi-1 mRNA、pou5f1 mRNA相对表达量分别为1.51±0.05和1.75±0.17,高于配对癌旁组织的1.16±0.17和1.46±0.18,差异均有统计学意义(P5)。Bmi-1 mRNA、pou5f1 mRNA在宫颈癌组织与配对癌旁组织中表达的倍比关系分别为1.31±0.49和1.20±0.95。Bmi-1 mRNA表达与民族、淋巴结转移、临床分期及组织学分级有关(P5),而与年龄、肿瘤大小及病理类型无关(P>0.05)。pou5f1 mRNA表达与民族、肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期及组织学分级有关(P5),而与年龄及病理类型无关(P>0.05)。结论肿瘤干细胞相关基因Bmi-1、pou5f1在子宫颈癌组织中高表达,两者可能与子宫颈癌的不良生物学特性关系密切,可作为评估子宫颈癌生物学行为的潜在分子标志物。

关键词：子宫颈癌肿瘤干细胞相关基因 Bmi-1 pou5f1

子宫腔EWSR1-pou5f1融合小圆细胞未分化肉瘤临床病理观察

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诊断病理学杂志 2023年第5期30卷 464-467,471页

作者：方威王笛唐婷程红安徽省黄山市人民医院病理科安徽黄山245000

目的探讨子宫腔EWSR1-pou5f1融合小圆细胞未分化肉瘤的临床病理特征、诊断及鉴别诊断。方法对1例子宫腔EWSR1-pou5f1融合小圆细胞未分化肉瘤进行组织学观察、免疫组化染色、NGS、fISH、qRT-PCR及Sanger测序,并结合相关文献讨论其临床病... 详细信息

目的探讨子宫腔EWSR1-pou5f1融合小圆细胞未分化肉瘤的临床病理特征、诊断及鉴别诊断。方法对1例子宫腔EWSR1-pou5f1融合小圆细胞未分化肉瘤进行组织学观察、免疫组化染色、NGS、fISH、qRT-PCR及Sanger测序,并结合相关文献讨论其临床病理特征。结果患者32岁,经量增多伴经期延长3个月余。肿瘤发生于子宫腔,呈弥漫菜花状,大小约10 cm×7 cm×3 cm。肿瘤细胞呈分叶状或巢状排列,伴丰富的血管纤维结缔组织。细胞呈小圆形或短梭形,细胞质较少,部分透亮,细胞核呈圆形或卵圆形,核型欠规则,核分裂象多见。肿瘤细胞Vimentin(弱+)、CD99(弱+)、Syn(+)、CD56(+)、S-100(-),上皮及平滑肌源性标记均阴性。NGS、qRT-PCR和Sanger测序均检测到EWSR1-pou5f1融合性基因,fISH检测示EWSR1分离阳性。结论EWSR1-pou5f1融合小圆细胞未分化肉瘤是一种较为罕见EWSR1-nonETS重排肉瘤,恶性程度较高,诊断及鉴别诊断需要结合临床、病理形态学及分子检测结果。

关键词： EWSR1 pou5f1 肉瘤临床病理鉴别诊断

在蝙蝠大脑中调控thermo-TRPs基因的转录因子研究

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在蝙蝠大脑中调控thermo-TRPs基因的转录因子研究

作者：吕青云华东师范大学

学位级别：硕士

已知“体温调节”(thermoregulation)对机体生存起到关键作用。温度敏感型TRP通道(thermosensitive TRPs,thermo-TRPs)是一类与温度感知密切相关的蛋白质分子,动物随着环境温度的不同,能主动调节thermo-TRPs的表达量,于是让机体在环境... 详细信息

已知“体温调节”(thermoregulation)对机体生存起到关键作用。温度敏感型TRP通道(thermosensitive TRPs,thermo-TRPs)是一类与温度感知密切相关的蛋白质分子,动物随着环境温度的不同,能主动调节thermo-TRPs的表达量,于是让机体在环境中保有更高的存活机率。根据各个thermo-TRPs蛋白质感知温度的阈值,它们被区分为3类:1)热敏TRP通道蛋白质(the heat-activated TRPs,h-TRPs),例如TRPV1、TRPV2、TRPV3、TRPV4;2)温热敏TRP通道蛋白质(the warm-activated TRPs,w-TRPs),例如TRPM2、TRPM4、TRPM5;3)冷敏TRP通道蛋白质(the cold-activated TRPs,c-TRPs),例如TRPA1、TRPC5、TRPM8。“冬眠”是动物用于对抗饥寒交迫并且经过长时间演化出的生存本领。在近期研究中我们发现h-TRPs在蝙蝠冬季蛰伏时表达量上升,而w-TRPs和cTRPs在蝙蝠夏季活跃时表达量上升;由此可见,处在低温环境下,冬眠中的蝙蝠可能对感知温度升高更为灵敏;而处在夏季温度高的环境下,蝙蝠对感知温度下降可能更为灵敏;研究结果同时提示thermo-TRPs在哺乳动物冬眠中扮演重要角色。为了深入研究thermo-TRPs在大足鼠耳蝠(Myotis ricketti)冬眠与非冬眠时期的表达与调控模式,我们从转录因子(transcription factors,Tfs)调控基因表达的方向着手。在本论文中,我们用生物信息学方法推测出某些pou和HOX家族转录因子可能调控thermo-TRPs基因的表达,再通过实时荧光定量PCR反应(quantitative real-time fluorescence PCR,qPCR)、蛋白质免疫印迹法(Western Blotting,WB)、双荧光素酶报告基因实验和小鼠实验探究之后,我们首次1)呈现了蝙蝠在不同生理状态下,其thermo-TRPs和相关Tfs的表达模式;2)证实了pou5f1可以调控TRPC5基因的表达;3)发现了HOXC13与TRPV2、TRPV3、TRPV4的表达有正相关;4)推测小鼠中的Trpa1很可能是热敏感通道。本篇研究首度揭示了冬眠蝙蝠体温调节的重要分子机制。

关键词：体温调节温度敏感型TRP通道(thermo-TRPs) pou HOX pou5f1 TRPC5

小鼠Rbm15核心启动子的验证与转录调节因子初探

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小鼠Rbm15核心启动子的验证与转录调节因子初探

作者：唐成怡东北林业大学

学位级别：硕士

N6-腺苷甲基化(N6-methyladenosine),简称m6A甲基化,是RNA最保守最广泛的修饰,在信使RNA(Messenger RNA,mRNA)、核糖体RNA(ribosomal RNA,rRNA)、长非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)中广泛存在,可调节RNA的出核、可变剪接、翻译、降解等过程,是生命过程中重要的一环,也是当下的研究热点。m6A有写入、擦除、读取三个过程,RNA结合基序蛋白15(RNA binding motif protein 15,RBM15)即是写入器复合体的一个组成蛋白,参与了m RNA的选择性剪接、Xist RNA(X-inactive specific transcript RNA)介导的X染色体失活等重要调控过程,在维持造血细胞的稳态、神经和大脑发育等方面发挥重要作用。尽管目前已有许多关于RBM15功能的研究,但Rbm15启动子的转录调节机制还不明确,探索Rbm15的启动子的和转录调控机制,有助于更深一层地理解m6A的调控机制。课题组前期研究发现,RBM15基因在马鹿(Cervus canadensis)的再生器官鹿茸的不同组织的m RNA表达水平依次为茸皮>软骨>间充质>前软骨,但是由于鹿茸相关的细胞平台技术不成熟,无法在鹿茸细胞中进行进一步的遗传学和细胞分子生物学研究。而小鼠(Mus musculus)是生物研究中常用的模式物种,与人的基因组有很高的相似度,研究数据翔实,所以本次以小鼠的Rbm15为研究对象,使用预测软件和网页预测了小鼠Rbm15的核心启动子、转录因子及转录因子结合位点,在3T3和293T细胞中通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time Quantitative polymerase chain reaction,QPCR)、蛋白质印迹(Western Blot,WB)、双荧光素酶报告基因检测(Dual Luciferase Reporter Gene Assay)等方法进行研究,主要研究结果如下:(1)构造了小鼠Rbm15启动子逐段截短的荧光素酶载体,找到了小鼠Rbm15基因的核心启动子,在起始密码子上游-347到-171的区域内。(2)预测了调控鼠Rbm15的转录因子,预测了TRIM28在Rbm15启动子上可能的结合位点,并在3T3细胞内验证了TRIM28对鼠Rbm15的转录有抑制作用,(3)发现并验证了在293T细胞系内,TRIM28促进人Rbm15的转录水平和蛋白表达水平。(4)发现并验证了在293T细胞系内,pou5f1是人RBM15的转录激活因子,促进Rbm15的m RNA和蛋白水平的表达。本试验对Rbm15基因启动子的研究,为Rbm15基因调控的进一步研究打下基础,旨在为研究调控m6A甲基化提供新的方式,为研究m6A甲基化参与的疾病提供新的思路。

关键词： Rbm15 TRIM28 pou5f1 转录调控

Activin A对人胚胎干细胞神经分化效率的影响

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广东化工 2019年第23期46卷 7-8页

作者：卢嘉怡李秋鸿广东药科大学生命科学与生物制药学院

目的:研究ActivinA对人胚胎干细胞体外神经外胚层诱导效率的影响。方法:对照组细胞在神经外胚层诱导培养基中培养5天;实验组细胞在神经外胚层诱导培养基中培养2天后换成含100 ng/mL Activin A培养基中继续诱导3天。通过免疫荧光检测细胞... 详细信息

目的:研究ActivinA对人胚胎干细胞体外神经外胚层诱导效率的影响。方法:对照组细胞在神经外胚层诱导培养基中培养5天;实验组细胞在神经外胚层诱导培养基中培养2天后换成含100 ng/mL Activin A培养基中继续诱导3天。通过免疫荧光检测细胞中PAX6蛋白的表达情况,利用RT-qPCR检测PAX6、pou5f1等基因的表达水平。结果:实验组中PAX6阳性的细胞明显多于对照组细胞,其PAX6基因表达结果也证实了这一点,pou5f1基因表达下调更为显著。结论:Activin A能够显著促进胚胎干细胞向神经外胚层细胞的转变。

关键词： ActivinA 人胚胎干细胞神经外胚层 PAX6 pou5f1