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miRNA-191对前列腺癌的增殖、迁移侵袭能力的影响及其机制

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中国应用生理学杂志 2020年第6期36卷 637-641页

作者：聂永莉汤世敏彭芳许涛毛永荣国药汉江医院肿瘤科湖北丹江口442700 长江大学机能学部湖北荆州434023 十堰市人民医院肿瘤科湖北十堰442000 湖北省肿瘤医院病理科湖北武汉430079

目的:观察miRNA-191对前列腺癌的增殖、迁移和侵袭能力的影响,并探讨其机制。方法:分别检测4种人前列癌细胞系(PC-3、DU-145、LNCa P、22RU1)及人正常前列腺细胞RWPE-2中miRNA-191的表达水平,并选择前列腺癌细胞系PC-3作为实验对象。将P... 详细信息

目的:观察miRNA-191对前列腺癌的增殖、迁移和侵袭能力的影响,并探讨其机制。方法:分别检测4种人前列癌细胞系(PC-3、DU-145、LNCa P、22RU1)及人正常前列腺细胞RWPE-2中miRNA-191的表达水平,并选择前列腺癌细胞系PC-3作为实验对象。将PC-3细胞分为3组:空白对照组(不转染)、miRNA-191 NC组(Inhibitor NC转染PC-3细胞)、miRNA-191 Inhibitor组(miRNA-191 Inhibitor转染PC-3细胞),每组设置3个复孔。采用RTq PCR法检测PC-3细胞miRNA-191和PLCD1的mRNA表达水平;采用CCK8法检测PC-3细胞增殖水平;采用划痕实验和侵袭实验分别检测PC-3细胞迁移能力和侵袭能力;通过Targetscan靶基因预测网站,筛选PLCD1作为miRNA-191的靶向蛋白,并用双荧光素酶靶标实验验证;采用Western blot法检测PC-3细胞PLCD1的蛋白表达。结果:与RWPE-2细胞相比,人前列癌细胞中mi NRA-191的表达水平显著升高(P191的表达水平在PC-3中较其他3种细胞系显著上调(P191的表达水平后,PLCD1表达水平显著升高,PC-3细胞增殖能力受到抑制,迁移和侵袭能力较空白对照组和miRNA-191 NC组显著降低(PPLCD1基因是miRNA-191的靶基因。结论:miRNA-191通过靶向PLCD1促进前列腺癌PC-3细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

关键词：前列腺癌 miRNA-191 PLCD1 增殖迁移侵袭

PLCD1启动子甲基化沉默参与肾癌细胞生长与侵袭及其机制研究

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PLCD1启动子甲基化沉默参与肾癌细胞生长与侵袭及其机制研究

作者：周珺南华大学

学位级别：硕士

目的:PLCD1(Phospholipase C delta 1)基因位于3p22,编码一种可以介导细胞能量代谢、钙离子稳态和细胞内运动的酶。PLCD1在几种类型肿瘤中发挥抑瘤作用,但其在肾细胞癌(RCC)中的表达与作用尚不清楚。本研究观察PLCD1在肾细胞癌中的表达... 详细信息

目的:PLCD1(Phospholipase C delta 1)基因位于3p22,编码一种可以介导细胞能量代谢、钙离子稳态和细胞内运动的酶。PLCD1在几种类型肿瘤中发挥抑瘤作用,但其在肾细胞癌(RCC)中的表达与作用尚不清楚。本研究观察PLCD1在肾细胞癌中的表达情况,并探索PLCD1表达异常的原因,进一步揭示PLCD1在肾细胞癌中的作用与初步机制。方法:本研究通过生信分析PLCD1在肾癌组织中的表达情况,RT-PCR验证PLCD1在肾癌细胞系中的表达;通过MSP与BGS实验检测PLCD1的启动子甲基化情况;对低表达PLCD1的肾癌细胞A498、HH244转染PLCD1过表达质粒后,通过CCK8、克隆形成实验检测细胞增殖能力,划痕、Transwell迁移实验检测细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,流式实验检测PLCD1对肾癌细胞系的周期与凋亡影响情况,免疫荧光、蛋白印迹实验检测蛋白质的表达与细胞定位情况,双荧光素酶报告实验进行转录因子与启动子相互作用等机制探讨。结果:1.生信分析表明:PLCD1在肾癌中低表达,且PLCD1低表达患者预后较差;肾癌中PLCD1启动子高甲基化,且PLCD1启动子高甲基化患者预后较差。2.RT-PCR结果显示PLCD1广泛表达于包括肾在内的正常成人组织,PLCD1在大多数肾癌细胞系中低表达。3.MSP与BGS实验显示,肾癌细胞系中PLCD1低表达与启动子高甲基化相关。4.过表达PLCD1质粒转染肾癌细胞,结果显示:过表达PLCD1可以抑制肾癌细胞系的增殖、迁移、侵袭。5.Western Blot和免疫荧光检测结果都证实PLCD1能明显减弱肾癌细胞中Vimentin以及上调E-Cadherin的表达。6.流式实验显示PLCD1可使肾癌细胞阻滞于G2/M期,并诱导其凋亡。并且Western Blot检测显示PLCD1过表达细胞中凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase3、Cleaved-PARP表达量升高。7.双荧光素酶报告基因结果显示PLCD1可抑制API、TOP Flash、WNT、P53、GRR5、SRE、PAI启动子元件。8.PLCD1可以抑制肾癌细胞中WNT/β-catenin信号通路及其下游靶基因cyclin D1、MMP7和c-Myc的启动子元件,并且与Western Blot结果相一致。9.Western Blot检测处理各组的ERK1/2、Src、EGFR、FAK的总蛋白与磷酸化蛋白情况,结果发现,过表达PLCD1时,其相应的磷酸化蛋白降低,信号通路受到抑制。结论:1、PLCD1在肾癌细胞中因启动子Cp G岛高甲基化而沉默。2、PLCD1可抑制肾癌细胞增殖、迁移、侵袭与EMT,诱导肾癌细胞G2/M期阻滞与凋亡。3、PLCD1可能通过负调控肾癌细胞中Wnt/β-catenin、EGFR-Src-ERK1/2和FAK-Src信号通路发挥抗肿瘤作用。

关键词： PLCD1 肾癌甲基化迁移侵袭 EMT WNT/β-catenin

磷脂酶C δ1(PLCD1)抑制CAPAN-1和BXPC-3胰腺癌细胞增殖和侵袭迁移

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第6期32卷 739-745页

作者：胡丹姜政重庆医科大学附属第一医院消化内科重庆400016

目的探讨转染磷脂酶Cδ1(PLCD1)对胰腺癌细胞生物学行为的影响。方法培养HPDE6C7人正常胰腺导管上皮细胞和CAPAN-1、PANC-1、ASPC-1及BXPC-3胰腺癌细胞,反转录PCR筛选出低表达PLCD1的胰腺癌细胞;将挑选出的CAPAN-1和BXPC-3胰腺癌细胞转... 详细信息

目的探讨转染磷脂酶Cδ1(PLCD1)对胰腺癌细胞生物学行为的影响。方法培养HPDE6C7人正常胰腺导管上皮细胞和CAPAN-1、PANC-1、ASPC-1及BXPC-3胰腺癌细胞,反转录PCR筛选出低表达PLCD1的胰腺癌细胞;将挑选出的CAPAN-1和BXPC-3胰腺癌细胞转染pc DNA3.1-PLCD1,并设置空载体pc DNA3.1转染组。反转录PCR检测CAPAN-1和BXPC-3细胞PLCD1 mRNA的表达水平,Western blot法检测其PLCD1蛋白水平。CAPAN-1和BXPC-3细胞转染PLCD1后,CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期和凋亡情况,Transwell^(TM)法检测细胞的侵袭和迁移能力。结果筛选出低表达PLCD1的CAPAN-1和BXPC-3细胞,转染pc DNA3.1-PLCD1的CAPAN-1和BXPC-3细胞PLCD1 mRNA和PLCD1蛋白水平明显增加;细胞增殖、侵袭和迁移受到抑制;细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞凋亡增加。结论转入PLCD1促进CAPAN-1和BXPC-3胰腺癌细胞凋亡并使细胞周期阻滞于G0/G1期,同时抑制其增殖、侵袭和迁移。

关键词： PLCD1 胰腺癌周期凋亡迁移侵袭

PLCD1对胰腺癌CAPAN-1和BXPC-3细胞上皮间充质转化的影响

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重庆医科大学学报 2020年第2期45卷 245-250页

作者：张桐姜政重庆医科大学附属第一医院消化内科重庆400016

目的:进一步探索肿瘤相关基因磷脂酶Cδ1(phospholipase Cδ1,PLCD1)对胰腺癌细胞系增殖、侵袭及迁移的影响和潜在分子行为机制。方法:用脂质体法将pcDNA3.1-PLCD1质粒转入肿瘤,同时设立空载体组;综合利用CCK-8、克隆形成实验、划痕实验... 详细信息

目的:进一步探索肿瘤相关基因磷脂酶Cδ1(phospholipase Cδ1,PLCD1)对胰腺癌细胞系增殖、侵袭及迁移的影响和潜在分子行为机制。方法:用脂质体法将pcDNA3.1-PLCD1质粒转入肿瘤,同时设立空载体组;综合利用CCK-8、克隆形成实验、划痕实验和Transwell验证PLCD1对胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响,Western blot实验研究其潜在机制。结果:瞬时转染过表达质粒后的胰腺癌细胞CAPAN-1和BXPC-3中,PLCD1表达明显提高(PPLCD1抑制胰腺癌细胞增殖速度(P1/2,间质细胞标志分子N-cadherin和Vimentin表达受抑制(PPLCD1可能通过抑制MAPK/ERK通路来抑制上皮间充质转化,从而抑制胰腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移。本研究为进一步探索PLCD1在胰腺癌中的作用机理奠定了基础。

关键词：胰腺癌 PLCD1 侵袭迁移上皮间充质转化

PLCD1对胰腺癌细胞迁移侵袭影响的初步研究

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PLCD1对胰腺癌细胞迁移侵袭影响的初步研究

作者：张桐重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:磷脂酶Cδ1（Phospholipase Cδ1,PLCD1）在既往的研究中,被发现是一个发挥抑癌作用的肿瘤相关基因。前期研究发现,过表达的PLCD1在胰腺癌细胞系中阻滞肿瘤细胞周期于G1期并促进肿瘤细胞凋亡。现在进一步探索PLCD1对胰腺癌细胞系... 详细信息

目的:磷脂酶Cδ1（Phospholipase Cδ1,PLCD1）在既往的研究中,被发现是一个发挥抑癌作用的肿瘤相关基因。前期研究发现,过表达的PLCD1在胰腺癌细胞系中阻滞肿瘤细胞周期于G1期并促进肿瘤细胞凋亡。现在进一步探索PLCD1对胰腺癌细胞系的增殖、侵袭及迁移的影响和潜在机制。方法:用脂质体法将pcDNA3.1-PLCD1质粒转入肿瘤细胞,同时设立空载体组;综合利用CCK-8、克隆形成实验、划痕实验和transwell验证PLCD1对胰腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭的影响,采用Western blot实验研究其潜在机制。结果:瞬时转染过表达质粒后的胰腺癌细胞CAPAN-1和BXPC-3中PLCD1表达显著提高（P＜0.05）;CCK8和克隆形成实验结果表明:高表达的PLCD1抑制胰腺癌细胞增殖速度（P＜0.05）;划痕实验和transwell实验结果表明:细胞运动、侵袭及迁移能力下降（P＜0.05）。Western blot实验中发现MAPK/ERK通路中磷酸化的ERK 1/2,间质细胞标志分子N-cadherin和Vimentin表达受抑制（P＜0.05）,同时上皮细胞标志分子E-cadherin表达上调（P＜0.05）。结论:我们发现:PLCD1可能通过抑制MAPK/ERK通路来抑制上皮间充质转化,从而抑制胰腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移。我们的研究为进一步探索PLCD1在胰腺癌中的作用机理奠定了基础。

关键词：胰腺癌 PLCD1 侵袭迁移 EMT

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PLCD1基因对胰腺癌细胞抑制作用的研究

PLCD1基因对胰腺癌细胞抑制作用的研究

作者：胡丹重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨pcDNA3.1-PLCD1质粒转染胰腺癌细胞CAPAN-1和BXPC-3后,对CAPAN-1和BXPC-3的PLCD1 mRNA和PLCD1蛋白表达的影响以及对CAPAN-1和BXPC-3细胞的增殖、周期、凋亡、迁移、侵袭的影响。方法:首先培养人正常胰腺导管上皮细胞株HPDE6C7... 详细信息

目的:探讨pcDNA3.1-PLCD1质粒转染胰腺癌细胞CAPAN-1和BXPC-3后,对CAPAN-1和BXPC-3的PLCD1 mRNA和PLCD1蛋白表达的影响以及对CAPAN-1和BXPC-3细胞的增殖、周期、凋亡、迁移、侵袭的影响。方法:首先培养人正常胰腺导管上皮细胞株HPDE6C7和胰腺癌细胞株CAPAN-1、PANC-1、ASPC-1及BXPC-3,并提取五组细胞的RNA后逆转录,再进行PCR扩增反应筛选出低表达PLCD1的胰腺癌细胞株;再将挑选出的胰腺癌细胞株CAPAN-1和BXPC-3进行转染,实验分为pcDNA3.1-PLCD1转染组和pcDNA3.1转染组;再进行RT-PCR检测转染后CAPAN-1和BXPC-3细胞PLCD1 mRNA的表达情况,进行Western blot检测其PLCD1蛋白的表达情况,CCK-8和集落形成检测转染后细胞CAPAN-1和BXPC-3增殖情况,流式测定和分析其周期和凋亡情况,Transwell检测转染后CAPAN-1和BXPC-3的迁移及侵袭能力。结果:成功筛选出低表达PLCD1的CAPAN-1和BXPC-3细胞用于进行后续实验,CAPAN-1和BXPC-3细胞的pcDNA3.1-PLCD1转染组高表达PLCD1 mRNA和PLCD1蛋白;同时CAPAN-1和BXPC-3细胞的pcDNA3.1-PLCD1转染组可抑制细胞增殖、迁移及侵袭;另外pcDNA3.1-PLCD1转染组可促进CAPAN-1和BXPC-3细胞周期阻滞于G1期,并可促进细胞凋亡。结论:PLCD1基因可促进胰腺癌CAPAN-1和BXPC-3细胞凋亡并使细胞停在G1期,并可抑制细胞增殖、迁移及侵袭能力。

关键词： PLCD1 胰腺癌周期凋亡迁移和侵袭

抑癌基因PLCD1在乳腺癌中的甲基化状态及功能研究

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抑癌基因PLCD1在乳腺癌中的甲基化状态及功能研究

作者：李倩倩重庆医科大学

学位级别：硕士

目的：检测PLCD1在乳腺癌中的表达及甲基化状态，探讨PLCD1的表达及甲基化状态与乳腺癌患者临床病理特点的相关性及其在乳腺癌中的抑癌作用。方法：通过RT-PCR、免疫组化检测PLCD1在乳腺癌中的表达。在线GOBO数据库分析PLCD1的表达... 详细信息

目的：检测PLCD1在乳腺癌中的表达及甲基化状态，探讨PLCD1的表达及甲基化状态与乳腺癌患者临床病理特点的相关性及其在乳腺癌中的抑癌作用。方法：通过RT-PCR、免疫组化检测PLCD1在乳腺癌中的表达。在线GOBO数据库分析PLCD1的表达与乳腺癌组织学分级、分期、受体的相关性。通过甲基化特异的PCR（MSP）、BGS等实验检测乳腺癌中PLCD1甲基化情况;并将96例乳腺癌患者PLCD1甲基化状态与对应的临床病理资料进行相关性分析。将PLCD1质粒转染乳腺癌细胞株MB231、MCF-7（缺失表达PLCD1），通过克隆形成实验、划痕实验和流式细胞周期测定，分别检测表达PLCD1后对乳腺癌细胞的增殖、迁移及细胞周期的影响。通过裸鼠成瘤实验，进一步验证PLCD1在体内的抑癌作用。结果：PLCD1在乳腺永生化上皮细胞株及乳腺正常组织中普遍表达，但在乳腺癌细胞株及癌组织中的表达明显下降。GOBO分析结果显示，PLCD1在正常乳腺样型及雌激素受体阳性、组织学分级Ⅰ级的乳腺癌中表达较高。MSP检测PLCD1在67%乳腺癌细胞株（6/9）和57%乳腺癌组织（55/96）中存在启动子区高甲基化。临床相关性分析显示，PLCD1的甲基化状态与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、分级及受体等特征无明显相关性。外源表达PLCD1后乳腺癌细胞株MB231、MCF-7的增殖和迁移能力明显降低，细胞周期阻滞于G2/M期（P＜0.001）。体内裸鼠成瘤实验显示PLCD1可明显抑制乳腺癌的生长（P＜0.001）。结论：乳腺癌中PLCD1因启动子区高甲基化而表达普遍降低。PLCD1在乳腺癌中具有抑癌功能，作为乳腺癌新的候选抑癌基因，为乳腺癌的早期诊断及治疗提供了可能。

关键词： PLCD1 乳腺癌 DNA甲基化抑癌基因

利用CRISPR/Cas9技术制备PLCD1敲除小鼠

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利用CRISPR/Cas9技术制备PLCD1敲除小鼠

下调微RNA-191靶向促进PLCD1表达抑制舌鳞癌细胞侵袭和迁移

第十三届中国实验动物科学年会

作者：刘玉敏刘薇贾俊双陈傍柱顾鹏别亚男林晓琳肖东顾为望南方医科大学比较医学研究所暨实验动物中心南方医科大学肿瘤研究所

目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除小鼠PLCD1基因,引起其毛发生长受抑制,以获得无毛/稀毛品系。方法针对小鼠PLCD1基因设计sgRNA,构建sgRNA表达质粒;体外转录获取sgRNA和Cas9 mRNA;显微注射法将体外转录产物注射到小鼠受精卵,移植到... 详细信息

目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除小鼠PLCD1基因,引起其毛发生长受抑制,以获得无毛/稀毛品系。方法针对小鼠PLCD1基因设计sgRNA,构建sgRNA表达质粒;体外转录获取sgRNA和Cas9 mRNA;显微注射法将体外转录产物注射到小鼠受精卵,移植到假孕母鼠体内;对获得的PLCD1敲除小鼠进行基因型和表现型的检测和鉴定。结果所制备的PLCD1基因敲除小鼠在出生后第15天开始出现逐渐严重的掉毛现象,三月龄时部分小鼠腹部无毛,背部毛发稀疏;通过TA克隆和测序分析,鉴定26只出生的F0代小鼠中有25只发生了基因敲除。PLCD1基因及下游基因表达下调,组织学观察发现稀毛的PLCD1敲除小鼠皮肤毛囊数量减少、排列不整齐、弯曲,皮肤角质化亢进。结论本研究成功制备了稀毛的PLCD1敲除小鼠,可作为毛发发育研究的一种新的动物模型。

关键词：稀毛小鼠 PLCD1 基因敲除 CRISPR/Cas9

来源： cnki会议评论

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中华生物医学工程杂志 2019年第3期25卷 313-317页

作者：蔡敏武云霞王翔宇长治医学院附属和平医院口腔科山西长治046000 山西医科大学附属第一临床医院口腔科太原030001 山西医科大学口腔医院牙体牙髓科太原030001

目的研究微RNA(miR)-191对舌鳞癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法Realtime PCR方法测定舌鳞癌Cal-27、CTST-1、SCC9细胞和正常口腔上皮HOK细胞中miR-191表达变化。在舌鳞癌细胞中转染miR-191 inhibitors,MTT方法测定细胞增殖变化,Transw... 详细信息

目的研究微RNA(miR)-191对舌鳞癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法Realtime PCR方法测定舌鳞癌Cal-27、CTST-1、SCC9细胞和正常口腔上皮HOK细胞中miR-191表达变化。在舌鳞癌细胞中转染miR-191 inhibitors,MTT方法测定细胞增殖变化,Transwell小室测定细胞侵袭和迁移。预测转染磷脂酶Cδ1(PLCD1)可能是miR-191的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在舌鳞癌细胞中共转染miR-191 inhibitors和PLCD1 siRNA,检测细胞增殖、侵袭和迁移能力变化。结果舌鳞癌Cal-27、CTST-1、SCC9细胞中miR-191水平高于正常口腔上皮HOK细胞。转染miR-191 inhibitors后的舌鳞癌细胞中miR-191表达水平降低,细胞增殖、侵袭和迁移能力降低。miR-191靶向调控PLCD1。共转染miR-191 inhibitors和PLCD1 siRNA后的舌鳞癌细胞中PLCD1蛋白水平有所降低,细胞增殖、侵袭和迁移能力有所升高。结论下调miR-191靶向促进PLCD1表达抑制舌鳞癌细胞侵袭和迁移。

关键词：舌鳞癌微RNA-191 PLCD1 侵袭