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piwil1在不同肿瘤细胞中的差异性表达

中国生物化学与分子生物学报 2008年第11期24卷 1072-1075页

作者：田瑞卿刘民李欣汤华天津医科大学基础医学院天津市生命科学中心实验室天津300070

PIWI作为AGO蛋白家族的成员,在睾丸中特异表达,在精子形成过程中扮演着重要角色.已有文献报道,piwil2也广泛存在于多种肿瘤中,与肿瘤的发生相关.本文旨在确定PIWL1在不同肿瘤细胞中的表达差异性,进而初步探讨piwil1的表达差异与肿瘤发... 详细信息

PIWI作为AGO蛋白家族的成员,在睾丸中特异表达,在精子形成过程中扮演着重要角色.已有文献报道,piwil2也广泛存在于多种肿瘤中,与肿瘤的发生相关.本文旨在确定PIWL1在不同肿瘤细胞中的表达差异性,进而初步探讨piwil1的表达差异与肿瘤发生发展的关系.半定量RT-PCR和Western印迹检测多种肿瘤细胞中,piwil1在mRNA水平及蛋白水平的表达情况,进一步用免疫组化和免疫荧光检测piwil1在细胞中的表达及定位.piwil1在多种肿瘤细胞中的表达存在差异,其中一些肿瘤细胞中的表达水平较高,包括卵巢癌,前列腺癌,肝癌,胃癌等细胞.对于肿瘤细胞而言,piwil1定位于细胞浆中.因此,piwil1在多种肿瘤细胞中的表达差异性可能为肿瘤发生发展的研究提供新的线索.

关键词： AGO蛋白 piwil1 肿瘤

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piwil1在肝细胞癌中的表达及临床意义

世界华人消化杂志 2014年第1期22卷 119-124页

作者：范正军杨飞龙孙涛程波郑州大学第一附属医院肝胆外科河南省郑州市450052 郑州大学第一附属医院急诊外科河南省郑州市450052

目的:探讨干细胞相关蛋白PIWI样蛋白1(PIWI-like protein-1,piwil1)在肝细胞癌组织中的表达及临床意义,并探索其表达与患者预后的关系.方法:应用免疫组织化学检测47例肝细胞癌标本中piwil1的表达,免疫印迹(Western blot)法检测31例肝细... 详细信息

目的:探讨干细胞相关蛋白PIWI样蛋白1(PIWI-like protein-1,piwil1)在肝细胞癌组织中的表达及临床意义,并探索其表达与患者预后的关系.方法:应用免疫组织化学检测47例肝细胞癌标本中piwil1的表达,免疫印迹(Western blot)法检测31例肝细胞癌组织中piwil1的表达,分析piwil1表达与临床特征及预后的关系.结果:piwil1在肝癌组织中高表达,在正常肝组织中低表达,piwil1同肿瘤分化程度、有无临近组织侵犯有关,与肿瘤大小及甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)水平无关;其阳性表达预示患者预后较差.结论:piwil1的高表达同病理分化程度、临近组织侵犯相关及患者预后相关.

关键词：肝细胞癌 piwil1 预后

EBV相关性胃癌中piwil1和piwil4表达及与预后的相关性

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临床与实验病理学杂志 2021年第6期37卷 637-642,649页

作者：林华妹邹长棪胡丹苏颖廖锦容林可焴相智声郑雄伟林贤东福建医科大学附属肿瘤医院/福建省肿瘤医院放射生物学及肿瘤放射治疗研究室福州350014 福建医科大学附属肿瘤医院/福建省肿瘤医院病理科福州350014 福建医科大学附属肿瘤医院/福建省肿瘤医院流行病研究室福州350014 福建医科大学附属肿瘤医院/福建省肿瘤医院福建省肿瘤转化医学重点实验室福州350014

目的探讨piwil1和piwil4表达与EBV相关性胃癌(EBV-associated gastric cancer,EBVaGC)临床病理学特征及预后的关系。方法收集胃腺癌111例,采用原位杂交技术鉴定EBVaGC,应用qRT-PCR检测正常胃黏膜上皮细胞株GES-1、EBV阴性胃癌细胞株MKN... 详细信息

目的探讨piwil1和piwil4表达与EBV相关性胃癌(EBV-associated gastric cancer,EBVaGC)临床病理学特征及预后的关系。方法收集胃腺癌111例,采用原位杂交技术鉴定EBVaGC,应用qRT-PCR检测正常胃黏膜上皮细胞株GES-1、EBV阴性胃癌细胞株MKN-28、EBV感染的胃癌细胞株AGS-BX1、胃腺癌组织及癌旁组织中piwil1和piwil4的表达,并分析其与临床病理特征的相关性;Kaplan-Meier和Logistic以及Cox分析piwil1和piwil4表达与EBVaGC预后的相关性。结果piwil1与piwil4在EBVaGC组中的表达均高于非EBV相关性胃癌(non-EBV-associated gastric cancer,EBVnGC)组(Ppiwil1和piwil4在EBVaGC中的表达量分别为0.556±0.096、0.778±0.440,在癌旁组织中的表达量为0.240±0.121、0.501±0.431,分别上调2.31倍及1.55倍(P=0.033,P=0.029)。AGS-BX1中piwil1与piwil4表达水平高于GES-1和MKN-28(Ppiwil1和piwil4表达与胃腺癌TNM分期和淋巴结转移密切相关(Ppiwil4高表达组患者的总生存期较低表达组差(P=0.007)。Logistic及Cox分析显示piwil4表达与EBVaGC的预后相关(Ppiwil1和piwil4过表达,并与TNM分期和淋巴结转移密切相关,且piwil4与患者总生存期相关,是EBVaGC预后的独立危险因素,piwil4可能是判断EBVaGC预后的分子标志物。

关键词：胃肿瘤 EBV piwil1 piwil4 预后

RNA干扰敲减piwil1表达对人结肠癌细胞SW620增殖,粘附及侵袭能力影响

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中国生物化学与分子生物学报 2010年第1期26卷 55-61页

作者：任超逸吴海东浦永汤石明李欣刘民汤华天津医科大学基础医学院天津市生命科学中心实验室天津300070

piwil1为AGO蛋白(Argonaute proteins)PIWI亚家族的成员之一,在睾丸中特异表达.其在干细胞自我更新、RNA干扰和翻译调节中起着重要的作用.本文采用实时PCR方法检测PIWI基因家族中piwil1、piwil2、piwil3、piwil4在人结肠癌SW620细胞中m... 详细信息

piwil1为AGO蛋白(Argonaute proteins)PIWI亚家族的成员之一,在睾丸中特异表达.其在干细胞自我更新、RNA干扰和翻译调节中起着重要的作用.本文采用实时PCR方法检测PIWI基因家族中piwil1、piwil2、piwil3、piwil4在人结肠癌SW620细胞中mRNA表达水平,首次证实了在SW620细胞中,piwil1相对piwil2、piwil3、piwil4,其表达水平最高(P(0.05).构建表达针对piwil1的小发卡结构干扰RNA的重组质粒,并用Western印迹验证其达到较高的干扰效率.用脂质体将重组质粒转染入SW620细胞中,通过MTT实验、集落形成实验、细胞聚集实验及细胞侵袭转移实验,分别观察到其可抑制SW620细胞的生长、增殖、侵袭转移能力,增强了SW620细胞的粘附能力.提示piwil1可能在结肠癌发生、发展过程中发挥作用.

关键词：结肠癌 SW620细胞 piwil1 RNA干扰

piwil1基因对结肠癌细胞生物学特性的影响

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PIWIL1基因对结肠癌细胞生物学特性的影响

作者：任超逸天津医科大学

学位级别：硕士

目的PIWI基因家族是从果蝇卵巢中发现,睾丸中高表达,在干细胞自我更新、精子发生、RNA干扰和翻译调控中扮演重要角色。piwil1作为PIWI亚家族的成员之一,与多种肿瘤发生发展相关,但其对肿瘤细胞的影响目前尚未被完全了解。本文以结肠癌... 详细信息

目的PIWI基因家族是从果蝇卵巢中发现,睾丸中高表达,在干细胞自我更新、精子发生、RNA干扰和翻译调控中扮演重要角色。piwil1作为PIWI亚家族的成员之一,与多种肿瘤发生发展相关,但其对肿瘤细胞的影响目前尚未被完全了解。本文以结肠癌细胞系SW620为研究模型,旨在探讨piwil1对肿瘤细胞行为学的调控作用。方法本文应用Real-time PCR的方法检测PIWI基因家族中piwil1、piwil2、piwil3、piwil4在人结肠癌SW620细胞中表达水平。应用RNA干扰技术抑制piwil1在SW620中的表达,研究其对SW620细胞生物学功能的影响。利用Western blot 检测重组表达载体 pSilencer2.1/piwil1-shRNA 对 piwil1 在蛋白水平的干扰效率。MTT及克隆集落形成实验检测细胞增殖活性。细胞聚集实验检测piwil1沉默后对SW620细胞粘附能力的影响。利用细胞划痕实验检测PIWIIL1沉默后SW620细胞的运动能力。侵袭实验检测piwil1基因沉默对SW620细胞侵袭性的影响。5-Fu是结肠癌化疗的常用药物,使用MTT法检测PIWIIL1沉默后SW620细胞对5-Fu的敏感性的影响。结果证实了 piwil1、piwil2、piwil3、piwil4 在 SW620 细胞中都表达,piwil1表达水平最高。构建表达针对PIWBL1的小发卡结构干扰RNA的重组质粒,转染之后,用Western blot验证其干扰效率。通过MTT实验、集落形成实验、细胞聚集实验、细胞划痕及细胞侵袭转移实验分别观察到其对SW620细胞的增殖、运动、侵袭转移能力起到抑制作用,增强了 SW620细胞的粘附能力。通过MTT法检测药物抑制率,结果发现沉默piwil1基因的SW620细胞对化疗药物5-FU敏感性明显增高。结论上述结果初步证明了构建的PIWIIL1 shRNA表达载体能明显降低piwil1的表达,并抑制结肠癌细胞的增殖活性、运动性、侵袭性。但piwil1表达下调增强了 SW620细胞的粘附性及结肠癌细胞对5-FU的敏感性。piwil1对结肠癌细胞的生物学功能发挥着重要的调节作用。

关键词：结肠癌 SW620细胞 piwil1 RNA干扰增殖侵袭化疗药物敏感性

piwil1通过调节自噬促进多发性骨髓瘤疾病进展和耐药的研究

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PIWIL1通过调节自噬促进多发性骨髓瘤疾病进展和耐药的研究

作者：王亚君华中科技大学

学位级别：硕士

研究目的:1.明确piwil1在多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)原代细胞及MM细胞系中的表达情况;2.研究piwil1在MM细胞系生长及耐药中的作用;3.探索piwil1是否通过自噬介导MM进展和耐药及其调节的自噬通路方法:1.临床资料磁珠分选12例初... 详细信息

研究目的:1.明确piwil1在多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)原代细胞及MM细胞系中的表达情况;2.研究piwil1在MM细胞系生长及耐药中的作用;3.探索piwil1是否通过自噬介导MM进展和耐药及其调节的自噬通路方法:1.临床资料磁珠分选12例初治多发性骨髓瘤患者骨髓样本及4例健康志愿者骨髓样本中CD138+细胞,利用q RT-PCR、Western Blot检测CD138+细胞中piwil1m RNA和piwil1蛋白的表达水平。2.体外实验(1)利用q RT-PCR、Western Blot检测MM细胞系RPMI8226、NCL-H929、U266、ARH-77中piwil1m RNA和piwil1蛋白的表达水平。(2)利用piwil1c DNA慢病毒和空载病毒转染NCL-H929细胞,上调NCL-H929细胞中piwil1的表达水平,实验组和对照组分别标记为:piwil1+929,piwil1+929 NC;同样利用piwil1c DNA慢病毒和空载病毒转染RPMI8226细胞,上调RPMI8226细胞中piwil1的表达水平,实验组和对照组分别标记为:piwil1+8226,piwil1+8226NC;利用piwil1 RNAi慢病毒和空载病毒转染NCL-H929细胞,下调NCL-H929细胞中piwil1的表达水平,实验组和对照组分别标记为:piwil1—929,piwil1—929NC。1)利用q RT-PCR和Western Blot分别检测各组细胞中piwil1 m RNA及蛋白的表达,确定转染效率;2)采用CCK-8检测各组细胞增殖的差异,以及对化疗药物地塞米松(Dexamethasone,Dex)、硼替佐米(Bortezomib)、阿霉素(Doxorubicin)敏感性的差异;3)采用流式细胞术检测各组细胞凋亡的差异;4)采用Western Blot检测各组细胞BCL-2,Caspase-3等凋亡蛋白的表达变化;5)通过透射电镜观察MM细胞自噬小体的形态特点和数目;6)采用Western Blot检测各组细胞m TOR,p-m TOR,P62,LC3A/B,Parkin,TBK-1,p-TBK-1,OPTN等自噬蛋白,以及p AKT的表达水平;7)采用CCK-8检测线粒体自噬抑制剂环孢素A(Cs A)处理前后各组细胞对化疗药物地塞米松敏感性的差异。3.体内实验NOD/SCID小鼠建立多发性骨髓瘤皮下移植瘤模型,分别皮下注入piwil1+929、piwil1+929 NC;piwil1—929、piwil1—929NC细胞,比较各组肿瘤的体积并记录各组成瘤时间。通过免疫组织化学方法检测瘤体内P62、p-m TOR、OPTN、BCL-2等蛋白的表达情况。研究结果:1.初治骨髓瘤患者CD138+细胞及骨髓瘤细胞系中piwil1表达水平均高于正常对照组;2.CCK-8结果显示,上调piwil1表达可提高MM细胞增殖能力,下调piwil1表达可抑制MM细胞增殖能力;上调piwil1表达后MM细胞对化疗药物地塞米松、硼替佐米、阿霉素的敏感性降低,下调piwil1表达后提高了MM细胞对以上化疗药物的敏感性。3.流式细胞术结果显示,上调或下调piwil1表达对MM细胞的凋亡无明显影响。4.透射电镜下观察到上调piwil1后MM细胞内自噬小体数目明显增加,且可明显看到线粒体自噬。5.Western Blot结果显示上调piwil1后,LC3A/B-II,Parkin、p-TBK-1,OPTN、p-AKT等蛋白表达水平明显升高,m TOR,p-m TOR,P62表达水平显著下降;下调piwil1后p-AKT的表达水平明显升高,以上蛋白表达水平呈现相反变化趋势。上调或下调piwil1后凋亡蛋白BCL-2,Caspase-3的表达水平无明显差异。6.CCK-8结果显示,Cs A预处理各组转染细胞,与阴性对照相比上调或下调piwil1后MM细胞对地塞米松的敏感性无显著差异;7.上调piwil1可以显著促进NOD/SCID鼠皮下种植瘤的生长,下调piwil1可以抑制NOD/SCID鼠皮下种植瘤的生长。瘤体免疫组化结果显示,上调piwil1后自噬蛋白P62,p-m TOR表达水平下降,OPTN表达增加,下调piwil1表达后,上述蛋白的表达水平呈现相反变化趋势;上调或下调piwil1后凋亡蛋白BCL-2的表达水平无明显差异。结论:1.piwil1在多发性骨髓瘤原代细胞及多发性骨髓瘤细胞系中高表达2.piwil1可在体内外促进多发性骨髓瘤疾病进展3.piwil1可通过自噬促进多发性骨髓瘤疾病的进展及对地塞米松耐药,且线粒体自噬可能是piwil1介导MM细胞对地塞米松耐药的机制之一

关键词：多发性骨髓瘤 piwil1 自噬线粒体自噬耐药

piwil1基因启动子调控的特异表达Cre重组酶的转基因猪的构建

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PIWIL1基因启动子调控的特异表达Cre重组酶的转基因猪的构建

作者：段新平吉林大学

学位级别：硕士

非编码小RNA （non-coding RNA, ncRNA），主要包括siRNA （smallinterfering RNA）、miRNA（microRNA）和piRNA （PIWI-interacting RNA）三类，其中piRNA是科学家们持续关注的热点研究区域。2006年，piRNA被发现于动物（果蝇、小鼠、大鼠、人等）生殖细胞中，它是一类内源的新小分子非编码RNA。piRNA基因在整个基因组上几乎都有分布，但高度不连续，其长度集中在26～32nt，因其特异地与PIWI家族蛋白结合作用，所以piRNA才被称为PIWI-interacting RNA[1-4]。piRNA基因簇则主要分布于转座子、重复序列等区域，在染色体上的位置具有物种间保守性。piRNA主要表达于生殖细胞系，代表了一个独特小RNA通路，它能使生殖细胞转座子沉默。可能通过表观遗传调控及转录后调控等方式，参与生殖干细胞的自我维持和分化命运决定、减数分裂、精子形成等生殖相关过程。对维持生殖系DNA完整、抑制转座子转录、抑制翻译、参与异染色质的形成、执行表观遗传调控和生殖细胞发生等均有重要作用[5-7]。 Argonaute（AGO）蛋白家族主要分为两大亚家族，即类似于植物拟南芥Argonautel的AGO蛋白亚家族和类似果蝇PIWI的PIWI蛋白亚家族。人类AGO蛋白家族由8名成员组成，通过序列比较，它们分别是eIF2C/AGO亚家族的4个成员（EIF2C1/hAGO1，EIF2C2/hAGO2，EIF2C3/hAGO3和EIF2C4/hAGO4），以及PIWI亚家族的4个成员（piwil1/HIWI，piwil2/HILI，piwil3和piwil4/HIWI2）[8]。eIF2C/AGO亚家族的4个成员在成人各个组织中包括睾丸、心脏、肾、胸腺等都有表达，而PIWI亚家族的4个成员主要在睾丸的精原细胞或精母细胞中表达。AGO蛋白亚族和PIWI蛋白亚族均能与非编码小RNA结合，在转录、转录后甚至翻译水平上对靶基因及蛋白的调节发挥关键作用[9-10]。Argonaute蛋白家族是RNA沉默途径的关键因子[11]，而PIWI成员则伴随着piRNA的生物发生和生物学功能行使等一系列过程[5]，包括参与沉默转录基因过程、维持生殖系和干细胞功能以及调节翻译和mRNA的稳定性等。虽然科学家们已经对于piRNA展开非常广泛的研究，并且已经取得了阶段性的成果，但仍然存在许多问题亟待我们进一步探索，如piRNA和PIWI蛋白相互作用的机制及调控作用等。有研究报道，在非生殖器官中PIWI蛋白也有高表达，提示piRNA在配子发育的过程中起重要作用外，在其他组织中可能也具有重要的调控作用。本实验的目的是建立piwil1基因启动子调控的特异性表达Cre重组酶的转基因猪，为后续在猪体内实现时空特异性缺失PIWI家族蛋白同一时空表达的基因，为研究piRNA的功能、揭示piRNA与PIWI蛋白的相互作用机制提供可靠的动物平台奠定基础。本实验以上述研究成果为背景，将piwil1启动子连接于猪源Cre重组酶的表达载体pET28a-MHC-Cre-BGHpo1yA-FRT2neor上，获得piwil1特异性启动Cre重组酶表达的ppiwil1-Cre载体。转染小型猪胎儿成纤维细胞，药物筛选获得细胞阳性克隆后进行核移植和胚胎移植，最终获得piwil1特异性表达Cre重组酶的转基因猪，为研究piRNA的功能、揭示PIWI与PIWI蛋白的相互作用机制提供可靠的动物平台奠定基础。

关键词： piRNA piwil1 Cre/LoxP重组系统转基因猪

黄鳝性腺DNA甲基化及piwil1基因表达特征分析

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黄鳝性腺DNA甲基化及piwil1基因表达特征分析

作者：陈梅上海海洋大学

学位级别：硕士

鱼类不仅种类繁多,而且其性别决定方式也十分多样,包括雌雄异体,雌雄同体和单性生殖。其中雌雄同体又分为雌性先熟型、雄性先熟型、雌雄同步发育型和双向逆转型。黄鳝(Monopterus albus)是一种先雌后雄的雌雄同体鱼类,其雌性个体小,怀... 详细信息

鱼类不仅种类繁多,而且其性别决定方式也十分多样,包括雌雄异体,雌雄同体和单性生殖。其中雌雄同体又分为雌性先熟型、雄性先熟型、雌雄同步发育型和双向逆转型。黄鳝(Monopterus albus)是一种先雌后雄的雌雄同体鱼类,其雌性个体小,怀卵量低,黄鳝在第一次性成熟产完卵后,性逆转为雄性个体且终生不会再逆转为雌性个体。多年来,已有一系列通过转录组学和蛋白组织学研究黄鳝性逆转过程的报道,发现了许多呈现出性别二态性的基因和micro RNA。但很少涉及该过程中全基因组DNA甲基化变化的研究,而DNA甲基化是一种重要的表观遗传修饰,在性别决定和分化过程中起着至关重要的作用。本研究以人工养殖黄鳝为研究对象,通过全基因组DNA甲基化测序和转录组测序以及piwil1基因表达特征对黄鳝的性腺发育和性别转换机制进行初步探讨,主要研究结果如下:1.黄鳝卵巢和精巢全基因组DNA甲基化和转录组测序分析通过对黄鳝卵巢和精巢进行全基因组亚硫酸氢盐测序,两组样本均获得约30Gb有效数据。通过计算全基因组C、CG、CHG和CHH(H=A、C或T)不同位点甲基化胞嘧啶的数量,发现精巢基因组的m C、m CG、m CHG和m CHH占C、CG、CHG和CHH不同位点甲基化率分别为6.06%、78.29%、0.38%和0.38%,在卵巢基因组不同位点的甲基化率分别为4.86%、76.09%、0.31%和0.31%。精巢甲基化水平比卵巢高,且精巢和卵巢CG位点甲基化胞嘧啶占总甲基化胞嘧啶的比例最大(94%)。利用CG位点的甲基化胞嘧啶比率变化,确定卵巢和精巢全基因组之间的差异甲基化区域(DMRs),共确定了20402个DMRs,随后鉴定出1718个差异甲基化基因(DMGs);利用top GO软件对DMGs进行GO富集分析,发现DMGs的生物学功能分为生物过程、细胞组件和分子功能三大类,主要富集在DNA binding、nucleic acid binding和molecular function regulator等通路中。通过转录组测序共获得45.5 Gb有效数据。利用DEseq2软件在这些数据中筛选出了11479个差异表达基因(DEGs)。结合甲基化数据分析发现DEGs和DMGs之间共有的基因(DMEGs)有901个,其中有457个DMEGs在卵巢和精巢中的基因表达水平与DNA甲基化水平呈负相关;利用top GO软件对这457个DMEGs进行GO富集分析,发现这些基因显著富集在meiotic cell cycle、meiosis I cell cycle process、reproduction、reproductive process、meiotic cell cycle process和mismatch repair通路中。挑选出8个可能在黄鳝雄性性腺发育过程中发挥重要作用的基因(dnmt3a、piwil1、tdrd1、sox30、nanos2、socs2、mei4和zmiz1),分别用亚硫酸氢盐测序PCR和实时荧光定量PCR(q RT-PCR)进一步验证其甲基化水平和基因表达水平,结果显示:dnmt3a、piwil1、tdrd1、sox30、nanos2、socs2和mei4基因在卵巢中呈现出高甲基化,相对应的基因表达水平则在精巢中较高;与精巢相比,zmiz1基因在卵巢中甲基化程度低,其表达量高。这为以后黄鳝性逆转过程中的基因甲基化及表达差异研究奠定了基础。2.黄鳝piwil1基因的表达特征分析选取甲基化程度和基因表达水平均表现出性别二态性的piwil1基因进行进一步表达特征分析。根据石蜡切片结果,我们选取了III期卵巢、间性中期性腺和II期精巢作为研究对象。III期卵巢主要为第III时相卵母细胞;间性中期性腺出现了大量精巢结构和残留着少量第II时相卵母细胞;II期精巢已出现精小叶且出现了部分裂腔,以精原细胞和初级精母细胞为主。q RT-PCR结果显示,piwil1基因主要在黄鳝性腺中表达,在端脑、中脑、下丘脑垂体、肠和皮肤中有少量表达,而在其它组织中表达微弱或不表达,其中在黄鳝精巢中表达量最高,其次是间性性腺和卵巢。Western Blot结果显示,Ma-piwil1蛋白在卵巢、间性性腺和精巢中均有表达,其它组织中未检测到Ma-piwil1蛋白;利用免疫组化对Ma-piwil1蛋白在卵巢、间性性腺和精巢组织中定位进行分析,发现Ma-piwil1蛋白定位于卵巢的各个时相卵母细胞细胞质中,当发育为第IV时相卵母细胞时,Ma-piwil1仅定位于其周围的颗粒细胞细胞质中;在间性性腺中,Ma-piwil1蛋白定位于第II、III时相卵母细胞、精原细胞、初级精母细胞细胞质中;在精巢中,Ma-piwil1蛋白定位于精原细胞和初级精母细胞的细胞质中,在次级精母细胞细胞质中也有微弱表达,而在精子细胞中未检测到Ma-piwil1蛋白信号。综上所述,piwil1对黄鳝

关键词：黄鳝甲基化测序转录组分析 piwil1 蛋白定位

piwil1基因沉默对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

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济宁医学院学报 2019年第2期42卷 117-121页

作者：张淑君单梦圆翟羽佳李闯季丙元济宁医学院精神卫生学院济宁272013

目的 piwil1基因沉默对人乳腺癌MCF-7细胞增殖活性的影响,为乳腺癌的基因诊断和治疗提供理论依据。方法针对piwil1 mRNA序列设计合成siRNA并筛选最佳siRNA,构建pGCsilencer^(TM)H1/GFP/Neo/piwil1 RNAi和pGCsilencer^(TM)H1/GFP/Neo/Non RNAi重组质粒;将重组质粒导入乳腺癌MCF-7细胞株,G418筛选获得稳定转染的细胞株;实验分为脂质体对照组、阴性质粒转染对照组(阴性对照组)及piwil1-shRNA重组质粒转染组(piwil1-shRNA组),实时荧光定量PCR法检测piwil1 mRNA表达水平的变化,Western blot检测细胞中piwil1蛋白表达,CCK-8检测干扰质粒对MCF-7细胞增殖活性的影响。结果荧光显微镜检测显示稳定表达重组质粒pGCsilencer^(TM)H1/GFP/Neo/piwil1 RNAi的乳腺癌MCF-7细胞株筛选成功,其piwil1 mRNA抑制率(74%)明显高于阴性对照组(5.4%),piwil1-shRNA组细胞piwil1蛋白表达水平显著低于脂质体对照组和阴性对照组细胞,MCF-7细胞增殖活性显著低于阴性对照组和脂质体对照组差异具有统计学意义(P 1/GFP/Neo/piwil1 RNAi可抑制乳腺癌细胞中piwil1基因的表达,进而降低细胞活性。

关键词： shRNA piwil1 乳腺癌 MCF-7细胞株