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pfkfb3在缺氧条件下调节血管新生的作用

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复旦学报（医学版） 2019年第5期46卷 691-695页

作者：邹蓉袁源智复旦大学附属中山医院眼科

病理性血管新生是癌症和各种缺血性和炎性疾病的标志,尤其是眼部疾病,如年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)、增生性糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)等。目前抗血管新生的药物治疗主... 详细信息

病理性血管新生是癌症和各种缺血性和炎性疾病的标志,尤其是眼部疾病,如年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)、增生性糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)等。目前抗血管新生的药物治疗主要是针对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)等促血管生成因子,但是长期局部抑制VEGF或与神经元毒性和一些眼部并发症有关,因此需要寻找其他治疗靶点。内皮细胞代谢在血管新生过程中具有重要调节作用,可独立于VEGF等促血管生成分子的调节过程,有望成为抗血管新生的另一个治疗靶点。目前在一些疾病的血管新生过程中发现了糖酵解的重要调节剂6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-双磷酸酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 3,pfkfb3),本文将介绍pfkfb3的作用,并探讨其作为抗血管新生治疗的内皮细胞代谢靶点的潜力。

关键词： pfkfb3 血管内皮细胞血管新生糖酵解缺氧

pfkfb3参与了11'-deoxyverticillin A(C42)诱导的HeLa细胞自噬和凋亡

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微生物学报 2015年第11期55卷 1392-1401页

作者：秦鹏钧陈同洋鲁倩倩胡风庆杨怀义辽宁大学生命科学学院辽宁沈阳110036 中国科学院微生物研究所北京100101

【目的】明确糖酵解调节基因pfkfb3参与11-脱氧轮枝菌素A(11'-deoxyverticillin A,C42)诱导He La细胞自噬和凋亡中的作用。【方法】利用电镜、荧光显微镜、蛋白免疫杂交、转染、MTS活性检测、siRNA干扰、定量RT-PCR等对C42处理的He La... 详细信息

【目的】明确糖酵解调节基因pfkfb3参与11-脱氧轮枝菌素A(11'-deoxyverticillin A,C42)诱导He La细胞自噬和凋亡中的作用。【方法】利用电镜、荧光显微镜、蛋白免疫杂交、转染、MTS活性检测、siRNA干扰、定量RT-PCR等对C42处理的He La细胞自噬和凋亡情况进行了检测。【结果】C42能够引起He La细胞不同的死亡。敲降自噬关键基因BECN1或LC3后,明显增加PARP-1的切割和促进C42引起的细胞活性丢失。尽管高浓度C42能更明显地抑制细胞增殖,但却不能增加细胞的自噬流;C42促进的自噬能被糖酵解调节基因pfkfb3的抑制剂所降低;而过量表达糖酵解调节基因pfkfb3能促进细胞自噬。【结论】糖酵解调节基因pfkfb3直接参与了C42诱导的He La细胞自噬,这种自噬的发生抑制了其诱导的细胞凋亡。

关键词： C42 自噬凋亡糖酵解 pfkfb3

靶向内皮细胞糖酵解限速酶pfkfb3的抗肿瘤血管生成研究进展

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肿瘤 2016年第1期36卷 103-109页

作者：刘飞飞刘静吴谓刘颖罗瑛张继虹昆明理工大学医学院衰老与肿瘤分子遗传学实验室云南昆明650500

血管生成对肿瘤的发生、生长和转移至关重要。血管内皮细胞分化、形成新生血管的过程离不开新陈代谢的能量供给和调控作用,尤其是糖酵解途径对肿瘤血管生成的起始点——血管出芽具有非常重要的作用。研究发现,糖酵解过程中的一个关键限... 详细信息

血管生成对肿瘤的发生、生长和转移至关重要。血管内皮细胞分化、形成新生血管的过程离不开新陈代谢的能量供给和调控作用,尤其是糖酵解途径对肿瘤血管生成的起始点——血管出芽具有非常重要的作用。研究发现,糖酵解过程中的一个关键限速酶——磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶3(phosphofructokinase-2/fructose-2,6-bisphosphatase 3,pfkfb3)具有较强的激酶活性,若抑制其活性可降低糖酵解速率,从而抑制血管出芽,影响肿瘤血管生成。已经证实,pfkfb3的抑制剂3PO[3-(3-pyridinyl)-1-(4-pyridinyl)-2-propen-1-one]可以显著减少糖酵解,从而抑制病理性血管的生成。因此,近年来通过抑制或破坏肿瘤血管内皮细胞的新陈代谢来进行肿瘤治疗的新方案已成为肿瘤医学领域中一个新的研究热点。本文就内皮细胞糖酵解过程中pfkfb3对肿瘤血管生成的作用,以及以pfkfb3为靶点的肿瘤治疗研究进展进行综述。

关键词：肿瘤糖酵解内皮细胞磷酸果糖激酶2 抗血管生成 pfkfb3

甲状腺乳头状癌组织pfkfb3表达及其意义

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中华肿瘤防治杂志 2018年第4期25卷 250-257页

作者：陈永诚卢冠铭潘运龙陆金兰韦忠恒李震东马燕飞覃强黄前方罗志斋右江民族医学院附属医院腺体外科广西百色533000 暨南大学第一临床学院华侨医院胃肠外科广东广州510630 右江民族医学院附属医院口腔科广西百色533000 右江民族医学院附属医院肿瘤科广西百色533000

目的肿瘤细胞产生能力的方式是糖酵解,且糖酵解与恶性肿瘤的发生、发展及转移关系非常密切。本研究的目的是评估甲状腺中糖酵解限速酶6磷酸果糖2激酶/果糖-2,6-二磷酸酶(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 3,pfkfb3... 详细信息

目的肿瘤细胞产生能力的方式是糖酵解,且糖酵解与恶性肿瘤的发生、发展及转移关系非常密切。本研究的目的是评估甲状腺中糖酵解限速酶6磷酸果糖2激酶/果糖-2,6-二磷酸酶(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 3,pfkfb3)的表达水平,及其在甲状腺细胞生长、迁移、体内成瘤的影响,以期为甲状腺治疗提供新思路。方法收集2015-01-01-2016-12-31右江民族医学院附属医院病理科存档蜡块标本28例及11例癌周正常甲状腺组织标本。应用免疫组织化学技术检测甲状腺和正常甲状腺组织中pfkfb3的表达。采用pfkfb3的抑制剂PFK15抑制甲状腺细胞pfkfb3的表达,并观察pfkfb3抑制对甲状腺癌细胞生长、迁移、体内成瘤的影响。结果免疫组化结果显示,pfkfb3在甲状腺组织中表达阳性率达85.7%(24/28),明显高于正常甲状腺组织中的pfkfb3的18.2%(2/11),F=3.24,Ppfkfb3蛋白表达水平明显高于正常甲状腺组织。MTT试验表明,与对照组(1.1±0.12)相比,0.25(0.82±0.08)、2.5(0.61±0.16)和5μmol/L(0.15±0.05)PFK15可明显抑制SW579细胞的增殖活性(F值分别为3.47、2.35和3.77,均P3.52,P3。Transwell小室表明,0.25、2.5和5μmol/L PFK15处理组中,穿过基质胶的SW579细胞数量分别为71±6(F=2.35,P3.68,P38,P3,F=3.42,P3,F=2.87,P3,且0.25、2.5和5μmol/L PFK15组肿瘤质量[(201±74)mg,F=1.27,P>0.05;(142±42)mg,F=3.56,P32)mg,F=3.57,P3±87)mg。裸鼠肺转移模型结果显示,0.25、2.5和5μmol/L PFK15组裸鼠肺部转移灶数目[(12±4)个,F=3.66,P3)个,F=2.86,P3.31,Ppfkfb3在甲状腺组织中高表达,且在甲状腺癌的增殖、迁移、侵袭和转移中起重要作用。抑制pfkfb3可作为甲状腺生物治疗的潜在分子靶点。

关键词：甲状腺癌糖酵解 pfkfb3 PFK15

pfkfb3在高糖环境下对人脐静脉内皮细胞的作用及机制研究

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PFKFB3在高糖环境下对人脐静脉内皮细胞的作用及机制研究

作者：曹阳西南医科大学

学位级别：硕士

目的:作为糖尿病性视网膜病变分级的重要标志性特征,新生血管是整个DR发展中的关键性事件,大量研究发现血管内皮细胞依靠无氧糖酵解产生能量来维持细胞功能,即形成“分支”,产生新生血管。但高血糖环境下内皮细胞糖酵解对新生血管的作... 详细信息

目的:作为糖尿病性视网膜病变分级的重要标志性特征,新生血管是整个DR发展中的关键性事件,大量研究发现血管内皮细胞依靠无氧糖酵解产生能量来维持细胞功能,即形成“分支”,产生新生血管。但高血糖环境下内皮细胞糖酵解对新生血管的作用机制仍不清楚,本研究将探讨磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶3(phospofructokinase-2/fructose-2,6-bisphosphatase 3,pfkfb3)在高糖环境下对血管新生的可能作用及其机制。方法:研究主要分为五个部分:第一部分采用正常糖(5 mmol/L glucose,NG)和高糖(30 mmol/L glucose,HG)分别培养人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs)24 h后,采用免疫印迹实验(Western Blot,WB)和实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测正常糖和高糖环境下pfkfb3的表达;第二部分采用正常糖(5 mmol/L glucose,NG)、正常糖加SiRNA-1(NG+SiRNA-1)、正常糖加SiRNA-2(NG+SiRNA-2)和正常糖加SiRNA-3(NG+SiRNA-3)转染HUVECs后,继续培养24 h,采用WB方法检测每组中pfkfb3的表达。第三部分采用正常糖(NG)、正常糖加SiRNA(NG+SiRNA)、高糖(HG)和高糖加SiRNA(HG+SiRNA)培养HUVECs后,分别将每组中的HUVECs加入对应的基质胶中继续培养,对每个孔进行照相,最后采用ImageJ angiogenesis软件对每组进行管腔形成能力检测。第四部分采用正常糖(NG)和正常糖加SiRNA(NG+SiRNA)培养HUVECs,采用WB方法检测磷酸化蛋白激酶B(Phosphorylation Protein kinase B,pAkt)及蛋白激酶B(Protein kinase B,PKB or Akt)的表达。第五部分采用正常糖(NG)、高糖(HG)和高糖加SiRNA(HG+SiRNA)培养HUVECs,采用WB方法检测pAkt及Akt的表达。结果:第一部分高糖培养基培养的HUVECs相较于正常糖环境下的pfkfb3蛋白表达明显升高(t=5.457,P=0.000,Ppfkfb3 mRNA表达也明显升高(t=4.466,P=0.000,Ppfkfb3的抑制效果最为明显,差异具有统计学意义(P=0.000,P31,P3,P>0.05);第四部分正常糖培养基中加入SiRNA抑制pfkfb3后,HUVECs的pAkt的表达量相较于单纯正常糖培养基中明显减少(t=16.91,P=0.00,Ppfkfb3可以明显减轻高糖环境诱导的病理性新生血管,明显提高因高糖环境降低的保护性因子pAkt的表达,从而起到保护HUVECs细胞的作用。pfkfb3有望作为防治因高糖环境诱导的新生血管的一个新靶点。

关键词： pfkfb3 高糖新生血管磷酸化Akt

pfkfb3在骨肉瘤中的表达及对骨肉瘤细胞增殖、转移的作用研究

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PFKFB3在骨肉瘤中的表达及对骨肉瘤细胞增殖、转移的作用研究

作者：饶利栋南昌大学

学位级别：硕士

背景与目的:6-磷酸果糖-2-激酶3（pfkfb3）是细胞糖酵解发生过程中关键限速酶,与肿瘤细胞的分子生物学行为紧密相关,且在肿瘤的恶性生长及远处转移中发挥关键作用。本研究旨在分析骨肉瘤组织中pfkfb3的表达水平及其对骨肉瘤细胞增殖及... 详细信息

背景与目的:6-磷酸果糖-2-激酶3（pfkfb3）是细胞糖酵解发生过程中关键限速酶,与肿瘤细胞的分子生物学行为紧密相关,且在肿瘤的恶性生长及远处转移中发挥关键作用。本研究旨在分析骨肉瘤组织中pfkfb3的表达水平及其对骨肉瘤细胞增殖及转移的影响。方法:1、免疫组织化学染色、q RT-PCR、Western blot检测骨肉瘤组织及其相应的癌旁组织样本中pfkfb3的表达量。2、采用sh RNA沉默骨肉瘤细胞中pfkfb3的表达,Cell Counting Kit-8（CCK-8）及5-ethynyl-29-deoxyuridine（EdU）检测骨肉瘤细胞的增殖情况;Transwell及划痕愈合实验检测细胞侵袭及迁移情况;流式实验检测细胞凋亡比例变化。3、体内实验检测降低pfkfb3的表达后对荷瘤鼠大小及肺转移率的影响。结果:1、免疫组织化学染色、q RT-PCR、Western blot结果证实骨肉瘤组织中pfkfb3 m RNA及蛋白表达水平显著升高（p＜0.05）。2、下调骨肉瘤细胞中pfkfb3的表达后,其增殖能力明显被抑制（p＜0.01）,细胞凋亡水平增加（p＜0.05）。同样,骨肉瘤细胞转移能力明显下降（p＜0.01）3、下调骨肉瘤细胞pfkfb3的表达后,其荷瘤鼠体积及重量明显低于其对照组,其肺转移发生率也低于正常对照组。结论:1、pfkfb3在骨肉瘤组织中的表达明显上升。2、下调骨肉瘤细胞中pfkfb3的表达可以显著抑制骨肉瘤的增殖和转移,并促进细胞凋亡的发生。3、动物实验表明抑制pfkfb3的表达后,其生长及肺转移显著被抑制。

关键词： pfkfb3 骨肉瘤生长迁移侵袭

pfkfb3在PDR患者玻璃体和血清中的表达及其相关性分析

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PFKFB3在PDR患者玻璃体和血清中的表达及其相关性分析

作者：唐敏西南医科大学

学位级别：硕士

目的:通过定量检测增殖型糖尿病性视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)患者玻璃体和血清中磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶3(phospofructokinase-2/fructose-2,6-bisphosphatase 3,pfkfb3)和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达水平,并进行相关性分析,探讨pfkfb3在PDR发生发展中可能的作用机制。方法:本研究纳入2015年12月5日至2017年1月19日经门诊诊断为PDR拟行单眼玻璃体切除术的患者42例(A组),其中男24例,女18例,平均年龄55.43±9.29岁,并据患者玻璃体切除术前是否行玻璃体腔注射抗VEGF药物进一步分为非注药组(A1组)和注药组(A2组),其中,A1组16例,男9例,女7例,平均年龄54.88±9.46岁;A2组26例,男15例,女11例,平均年龄55.77±9.35岁。将同期诊断为全层黄斑裂孔(full thickness macular hole,FTMH)及黄斑前膜(preretinal membrane of the macula,PRMM)并符合纳入标准的20例患者作为对照组(B组),其中,男12例,女8例,平均年龄53.95±10.21岁,各组年龄及性别构成比无统计学差异(P=0.054)。所有患者均经睫状体平坦部行25G+微创玻璃体切除术,所有手术均由同一位教授完成。收集各组患者的玻璃体和血清标本,离心取上清,分装后冻存。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)定量检测玻璃体和血清标本中的pfkfb3和VEGF表达水平,采用SPSS19.0统计学软件对各组数据进行统计学分析。结果:1、A组患者玻璃体中pfkfb3水平(463.17±381.28pg/mL)明显高于B组(158.43±86.88pg/ml)(t=4.919,ppfkfb3水平(153.45±83.78pg/ml)明显高于b组(92.72±32.42pg/ml)(t=4.098,ppfkfb3水平(797.29±387.44pg/ml)明显高于a2组(257.56±181.49pg/ml)(t=5.230,ppfkfb3水平(164.72±102.57pg/ml)与a2组(146.52±71.18pg/ml)差异无统计学意义(t=0.679,p=0.501)。a1、a2和b组患者玻璃体和血清中的pfkfb3水平未见相关性(a1组r=0.194,p=0.471;a2组r=0.071,p=0.731;b组r=0.254,p=0.279)2、a组患者玻璃体中vegf水平(1713.50±1386.90pg/ml)明显高于b组(205.52±92.93pg/ml)(t=7.014,p36.51pg/ml)(t=5.082,p3399.72±510.06pg/ml)明显高于a2组(675.82±242.57pg/ml)(t=20.014,p373.40±174.23pg/ml)亦明显高于a2组(133.65±73.10pg/ml)(t=5.228,p3,p=0.031;b组r=0.776,p3、a1、a2和b组患者玻璃体中pfkfb3与vegf水平均存在正相关关系(a1组r=0.865,ppfkfb3与vegf水平存在正相关关系(r=0.444,p=0.023),a1组和b组均无明显相关性(a1组r=-0.130,p=0.631;b组r=0.045,p=0.849)。结论:pdr患者玻璃体和血清中的pfkfb3水平均较对照组患者升高,其可能参与了PDR的发生发展过程;玻璃体腔注射抗VEGF药物后可引起玻璃体及血清中VEGF降低,同时可降低玻璃体腔pfkfb3水平降低,提示VEGF可能通过上调pfkfb3的表达而参与PDR的发生发展,为DR发病机制的进一步研究提供新的理论依据;玻璃体腔注射抗VEGF药物后血清中pfkfb3浓度差异无统计学意义。

关键词： pfkfb3 VEGF 增殖型糖尿病性视网膜病变血管新生机制

靶向糖酵解酶pfkfb3抑制头颈鳞癌的生长和转移

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靶向糖酵解酶PFKFB3抑制头颈鳞癌的生长和转移

作者：李慧敏武汉大学

学位级别：硕士

研究目的:肿瘤通过有氧糖酵解摄取大量葡萄糖以供肿瘤的发生发展。探讨抗肿瘤新靶点磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-双磷酸酶3（pfkfb3）的特异性抑制剂PFK15对头颈部鳞状细胞癌糖酵解及对肿瘤细胞侵袭伪足和转移及生长的影响,同时探究其潜在... 详细信息

研究目的:肿瘤通过有氧糖酵解摄取大量葡萄糖以供肿瘤的发生发展。探讨抗肿瘤新靶点磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-双磷酸酶3（pfkfb3）的特异性抑制剂PFK15对头颈部鳞状细胞癌糖酵解及对肿瘤细胞侵袭伪足和转移及生长的影响,同时探究其潜在的抗肿瘤治疗前景。研究方法:利用免疫组织化学检测pfkfb3在头颈鳞癌和正常粘膜中的表达,通过测定2-[1-14C]-脱氧-右旋葡萄糖摄入和胞内果糖-2,6-双磷酸、乳酸和三磷酸腺苷的含量检测头颈鳞癌细胞系Cal27和FaDu中糖酵解水平,进一步利用MTT增殖实验、EdU、细胞周期、克隆形成实验和TUNEL法检测细胞生长、增殖、周期和凋亡等细胞学特点。共聚焦显微镜下通过基质胶降解实验观察PFK15对细胞板状和侵袭伪足的作用,细胞划痕、侵袭实验和追踪实时成像技术研究细胞迁移和侵袭能力。通过构建动物体内实验,研究头颈鳞癌细胞注射于裸鼠皮下后,PFK15对HNSCC移植瘤的生长及远处转移的影响。研究结果:相比正常粘膜组织,头颈鳞癌组织中pfkfb3明显高表达。PFK15呈剂量依赖性降低胞内糖酵解水平,糖摄入、乳酸和ATP产量减少。PFK15明显抑制细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,同时阻碍侵袭伪足形成,显著降低迁移、细胞外基质降解和侵袭能力。体内实验显示,PFK15明显抑制HNSCC移植瘤的生长和远处转移,延长裸鼠寿命。研究结论:PFK15通过靶向抑制糖酵解酶pfkfb3可降低糖酵解水平,阻碍板状伪足和侵袭伪足的形成,削弱鳞癌细胞转移和侵袭能力,同时抑制肿瘤生长。

关键词：头颈部鳞状细胞癌糖酵解 pfkfb3 伪足细胞外基质转移

ROCK2通过稳定pfkfb3的表达促进骨肉瘤生长和转移作用研究

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ROCK2通过稳定PFKFB3的表达促进骨肉瘤生长和转移作用研究

作者：邓雪强南昌大学

学位级别：硕士

研究背景和目的:骨肉瘤是最为常见的骨组织来源的恶性肿瘤,同时也是儿童恶性肿瘤的主要类型之一。其具有恶性程度高、生长迅速、易发生侵袭及迁移等特点,患者整体预后差,术后生存率低下。因此,有效的分子靶点对骨肉瘤的治疗极其重要。RO... 详细信息

研究背景和目的:骨肉瘤是最为常见的骨组织来源的恶性肿瘤,同时也是儿童恶性肿瘤的主要类型之一。其具有恶性程度高、生长迅速、易发生侵袭及迁移等特点,患者整体预后差,术后生存率低下。因此,有效的分子靶点对骨肉瘤的治疗极其重要。ROCK2在肿瘤的进展中扮演着重要角色,目前认为其可以调节细胞的收缩与粘附、侵袭及迁移、增殖和凋亡,然而其在骨肉瘤中的表达及影响机制并不清楚。在肿瘤的恶性进展中糖酵解水平显著提升,pfkfb3作为糖酵解及能量代谢的调节者,研究证实其在肿瘤的发展中起着关键性作用,然而,pfkfb3在骨肉瘤中的作用及机制研究却很少。本研究旨在探讨骨肉瘤中ROCK2及pfkfb3的表达及相关性,进一步深入探究其影响骨肉瘤生长及转移的机制。方法:1、免疫组化、荧光定量PCR及免疫印迹法分析ROCK2在骨肉瘤组织中的表达。2、筛选出下调效果最佳的shROCK2质粒并下调骨肉瘤细胞中ROCK2的表达,通过CCK8、EdU实验观察细胞生长能力的变化。然后采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡比例变化。接下来通过划痕愈合和Transwell实验观察细胞侵袭及迁移能力的影响。最后我们利用稳定转染shNC/U2-OS、shROCK2/U2-OS骨肉瘤细胞株建立人骨肉瘤皮下瘤模型,观察裸鼠的成瘤情况。并通过尾静脉注射转染shNC/U2-OS、shROCK2/U2-OS骨肉瘤细胞,观察双肺骨肉瘤细胞转移的发生情况。3、改变ROCK2表达后,分析骨肉瘤细胞中pfkfb3的表达情况。并检测骨肉瘤组织及相应非癌组织中pfkfb3的表达,进一步分析肿瘤组织中pfkfb3与ROCK2表达的相关性。最后在稳定低表达ROCK2的细胞中同时上调pfkfb3及过表达ROCK2的细胞中同时降低pfkfb3的表达,采用EdU观察肿瘤细胞生长情况,通过Transwell实验分析其转移能力。4、采用Co-IP检测U2-OS及MG-63细胞中ROCK2与pfkfb3之间能否直接相互结合。阻断细胞蛋白降解及合成的基础下,免疫印迹法检测过表达及沉默ROCK2后对pfkfb3表达的影响。Co-IP检测过表达及沉默肿瘤细胞中ROCK2对pfkfb3的泛素化水平影响。结果:1、免疫组化结果显示,ROCK2在72.55%(37/51)肿瘤组织中表达提升,而相应的正常骨组织中升高仅为13.73%(7/51)(p3细胞中ROCK2的表达后,CCK8、EdU实验表明其生长能力减弱(p3、下调肿瘤细胞中ROCK2的表达后,pfkfb3的表达水平也随之下降。相反过表达ROCK2后,pfkfb3随之上升。骨肉瘤组织中pfkfb3的表达水平显著提升,且与ROCK2的表达水平呈正相关。另外,我们研究发现上调pfkfb3的表达可以逆转沉默ROCK2所导致的骨肉瘤增殖及转移能力下降,而降低pfkfb3的表达则可以抑制过表达ROCK2所导致的骨肉瘤增殖及转移能力增强。4、Co-IP结果证实ROCK2与pfkfb3直接结合。进一步采用蛋白酶抑制剂MG132作用骨肉瘤细胞,pfkfb3的表达随着MG132的作用时间的累积而增加。在阻断蛋白酶体降解的情况下,沉默及过表达ROCK2后,pfkfb3蛋白表达无明显变化且pfkfb3在肿瘤细胞中的降解速率明显减低。进一步我们研究发现ROCK2能够抑制骨肉瘤细胞中pfkfb3的泛素化降解过程。结论:ROCK2通过稳定pfkfb3的表达进而促进骨肉瘤的生长与转移。我们的结果为研究骨肉瘤生长及转移机制提供了新的理论基础,并将为骨肉瘤的靶向治疗提供一个新的理论研究方向。

关键词： ROCK2 pfkfb3 骨肉瘤生长转移泛素化