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正交设计优化星星草ISSR-pcr反应体系研究

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中国草地学报 2006年第6期28卷 52-55,102页

作者：沙伟滕兆岩倪红伟齐齐哈尔大学生命科学与工程学院黑龙江齐齐哈尔161006 黑龙江省科学院自然资源研究所黑龙江哈尔滨150000

采用正交设计法优化适合于星星草的ISSR体系,对影响ISSR—pcr的多个因素,包括引物浓度、Taq酶的用量、Mg2+和dNTP浓度进行了比较、优化;同时又对DNA模板浓度,pcr扩增程序中的退火温度及循环次数进行了筛选。结果确定了星星草ISSR—pcr... 详细信息

采用正交设计法优化适合于星星草的ISSR体系,对影响ISSR—pcr的多个因素,包括引物浓度、Taq酶的用量、Mg2+和dNTP浓度进行了比较、优化;同时又对DNA模板浓度,pcr扩增程序中的退火温度及循环次数进行了筛选。结果确定了星星草ISSR—pcr反应体系的最佳方案为:pcr扩增程序,94℃预变性5min;进行40个循环的94℃变性45s,55℃复性45 s,72℃延伸2 min;72℃延伸10 min,4℃保存。20μl反应体系包括10%buffer 2μl、模板DNA60ng、dNTP 100μmol/L、TaqDNA聚合酶1.5U、引物0.8mmol/L、Mg2+2.0mmol/L。

关键词：星星草 ISSR 正交设计 pcr反应体系优化

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pcr反应条件的选择及污染控制

空军医高专学报 1995年第3期17卷 199-200页

作者：吕世杰潘文干张凤英梅丹空军医学高等专科学校吉林市132011

1 方法我们在应用pcr技术检测HBV-DNA时,对反应条件及污染控制进行了研究.(l)临床标本的处理:比较NP-40、酚/氯仿抽提、裂解液(0.25%SDS、5mmol/LEDTA、

关键词： pcr反应污染控制医学高等专科学校反应条件 HBV-DNA 循环次数 pcr技术吉林市临床标本福尔马林熏蒸消毒

pcr反应仪温度的Fuzzy-PID控制方法

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机电一体化 2005年第2期11卷 63-65页

作者：邹宗峰俞涛上海大学CIMS及机器人中心上海200072

分析了在pcr反应仪的温度控制过程中,由于升降温速度快,精度要求高,被控对象具有非线性、不确定性等因素,常规PID控制方法很难满足实际的要求。采用了一种模糊PID控制方法,利用模糊推理在线调节PID控制算法的参数。试验表明,这种控制方... 详细信息

分析了在pcr反应仪的温度控制过程中,由于升降温速度快,精度要求高,被控对象具有非线性、不确定性等因素,常规PID控制方法很难满足实际的要求。采用了一种模糊PID控制方法,利用模糊推理在线调节PID控制算法的参数。试验表明,这种控制方法较好地达到了控制的要求。

关键词：制方 pcr反应升降方法因素要求常规 Fuzzy-PID控制模糊推理模糊PID控制

真菌通用引物pcr反应鉴别兔眼真菌性和细菌性角膜溃疡

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医学新知 2004年第3期14卷 161-162页

作者：吴建国丁进亚金中秋周和政广州军区武汉总医院眼科湖北武汉430070 广州军区武汉总医院检验科湖北武汉430070

目的　利用真菌通用引物pcr反应 ,鉴别兔眼真菌性和细菌性角膜溃疡。方法　根据临床上常见的致病细菌菌株 (金葡菌、绿脓菌 ) ,真菌菌株 (烟曲霉菌、白念菌、镰刀菌 ) ,制作兔眼角膜溃疡的动物模型 ,选取一对真菌通用引物 ,一对寡核苷... 详细信息

目的　利用真菌通用引物pcr反应 ,鉴别兔眼真菌性和细菌性角膜溃疡。方法　根据临床上常见的致病细菌菌株 (金葡菌、绿脓菌 ) ,真菌菌株 (烟曲霉菌、白念菌、镰刀菌 ) ,制作兔眼角膜溃疡的动物模型 ,选取一对真菌通用引物 ,一对寡核苷酸引物B2F(5 'ACTTTCGTAGGATAG - 3')和B4R(5 ' TGATCGTCTTCGATAAATA 3') ,对标本进行聚合酶链反应。结果　在 6 87bp处出现DNA扩增带者为阳性。造模后第 3d真菌组出现扩增带阳性的 90 % ,第 5d真菌组出现扩增带阳性的 96 .6 %。细菌组始终未出现阳性结果。

关键词：兔眼细菌性角膜溃疡真菌性阳性鉴别通用引物 pcr反应 DNA扩增寡核苷酸标本

正交设计优化杂交油菜ISSR-pcr反应体系研究

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中国农技推广 2013年第S1期29卷 104-107页

作者：彭秉玉青海省种子管理站青海西宁810000

采用正交设计法优化适合于杂交油菜的ISSR体系,对影响ISSR-pcr的多个因素,包括Mg2+、dNTP、TaqDNA聚合酶、引物用量等进行了比较、优化;对DNA模扳浓度,退火温度进行了筛选。结果确定了杂交油菜ISSR-pcr反应体系的最佳方案为:94℃预变性... 详细信息

采用正交设计法优化适合于杂交油菜的ISSR体系,对影响ISSR-pcr的多个因素,包括Mg2+、dNTP、TaqDNA聚合酶、引物用量等进行了比较、优化;对DNA模扳浓度,退火温度进行了筛选。结果确定了杂交油菜ISSR-pcr反应体系的最佳方案为:94℃预变性5分钟,1个循环;每个循环94℃变性20s;56.2℃退火1分钟,72℃延伸80s,38个循环;72℃完全延伸6分钟;4℃保存。20μl pcr反应体系包括10×Buffer 2.5μL、模板20ng 1μl、2.5mmol/L dNTP1μl、10μmol/L Primer 1.2μl、5U TaqE0.2μl、25mmol/L Mg2+1.4μl。

关键词：杂交油菜 ISSR 正交设计 pcr反应体系优化

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如何解除pcr反应中的抑制现象

哈尔滨师范大学自然科学学报 2003年第3期19卷 81-84页

作者：赵阳国高崇洋王继华王敏邢德峰赵秋实哈尔滨师范大学哈尔滨工业大学

多种因素均能影响 pcr反应的顺利进行 ,尤其是菌体中的各种杂蛋白以及在模板提取过程中混入的各种化学试剂 ,对 Taq DNA聚合酶均有很强的抑制作用 .本文以扩增细菌的 1 6Sr DNA为例 ,说明了这些成分对 pcr的抑制 ,同时提出了克服不利因... 详细信息

多种因素均能影响 pcr反应的顺利进行 ,尤其是菌体中的各种杂蛋白以及在模板提取过程中混入的各种化学试剂 ,对 Taq DNA聚合酶均有很强的抑制作用 .本文以扩增细菌的 1 6Sr DNA为例 ,说明了这些成分对 pcr的抑制 ,同时提出了克服不利因素的方法 .

关键词： pcr反应抑制现象抑制物聚合酶链式反应 TaqDNA聚合酶 16SrDNA

石蜡包埋组织中提取DNA应用于pcr反应影响因素的研究

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中国实验诊断学 2003年第4期7卷 330-331页

作者：赵吉生盖宝东森隆弘滕盛启成大内宪明里见进张德恒吉林大学中日联谊医院基本外科吉林长春130031 日本东北大学医学部

目的　探讨石蜡包埋组织中提取DNA应用于pcr反应的影响因素。方法　应用从石蜡包埋组织中提取的DNA ,pcr反应扩增甲状腺髓样癌RET基因第 11外显子 ,分析石蜡包埋组织中提取DNA应用于pcr反应的影响因素。结果　 10 .0 μm× 1组织切片组 ... 详细信息

目的　探讨石蜡包埋组织中提取DNA应用于pcr反应的影响因素。方法　应用从石蜡包埋组织中提取的DNA ,pcr反应扩增甲状腺髓样癌RET基因第 11外显子 ,分析石蜡包埋组织中提取DNA应用于pcr反应的影响因素。结果　 10 .0 μm× 1组织切片组 ,pcr反应循环次数 4 0次组 ,pcr反应模板量 0 .0 5 μg组pcr反应取得高质量目的基因DNA。结论　减少提取组织用量有利于减少抑制pcr物质的量 ,有利于反应的成功 ;pcr反应循环次数一般应大于 4 0次 ;pcr反应时减少模板量有利于pcr反应成功。

关键词：石蜡包埋组织 DNA pcr反应影响因素研究

基因工程实验教学中pcr反应条件的正交优化

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安徽农业科学 2012年第24期40卷 12276-12278页

作者：刘顺枝邓剑锋田长恩王小兰胡位荣广州大学生命科学学院广东广州510006

采用碱裂解法提取大肠杆菌的质粒DNA,检测提取到的DNA浓度和纯度,并以提取的DNA作为pcr反应体系中的模板,采用搜索性正交设计试验法探求pcr反应体系中4个因素(dNTPs、DNA模板、引物和Taq酶)在5个水平上的最适用量,在此基础上,进一步设... 详细信息

采用碱裂解法提取大肠杆菌的质粒DNA,检测提取到的DNA浓度和纯度,并以提取的DNA作为pcr反应体系中的模板,采用搜索性正交设计试验法探求pcr反应体系中4个因素(dNTPs、DNA模板、引物和Taq酶)在5个水平上的最适用量,在此基础上,进一步设计细调性正交试验筛选pcr反应的最适条件。结果表明,在20μl pcr反应体系中,DNA模板5 ng/μl,dNTPs 0.25 mmol/L,引物0.6μmol/L,Taq酶1.5 U/μl,Mg2+浓度1.5 mmol/L时,pcr的效果最好。

关键词：大肠杆菌 pcr反应正交设计条件优化实验教学

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利用随机引物对pcr反应条件的筛选及优化试验

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石河子大学学报（自然科学版） 2002年第4期6卷 271-275页

作者：赵宗胜马兵钢崔百明王金富石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 石河子大学农学院园艺园林工程系新疆石河子832003 石河子大学生物工程学院新疆石河子832003

不同试验pcr反应的条件是不完全一致的 ,在pcr反应进行前就有必要对反应条件进行筛选和优化 ,因此 ,提出了对关键实验条件的正交筛选 ,结合反应的增强与抑制条件 ,从而筛选出适用于本实验室的最佳反应条件。

关键词：随机引物 pcr反应正交筛选反应条件条件优化聚合酶链反应 DNA复制