濒危植物望天树SSR-PCR反应体系的优化

作     者：张美玲 李巧明 

作者机构：中国科学院西双版纳植物园植物系统与保护生物学试验室云南昆明650223 中国科学院研究生院北京100039 

出 版 物：《云南大学学报（自然科学版）》 (Journal of Yunnan University(Natural Sciences Edition))

年 卷 期：2011年第33卷第S2期

页      面：425-432页

核心收录：

学科分类：07[理学] 08[工学] 

主　　题：望天树 SSR 正交设计 PCR反应 优化 

摘      要：为探索适宜望天树(Parashorea chinensis)的SSR-PCR反应体系,利用L16(45)正交试验设计,对SSR-PCR反应体系中的5个反应组分(dNTPs、引物、DNA模板、Mg2+、Taq DNA聚合酶)进行优化.结果显示,各因素水平的变化对望天树SSR-PCR反应的影响由大到小依次为:模板DNAdNTPs引物Mg2+TaqDNA聚合酶.最终建立了适合望天树SSR-PCR分析的最佳反应体系:在25μL反应体系中,10×buffer(Mg2+Free)2.5μL,模板DNA 30 ng,dNTPs 20 mmoL/L,引物13μmoL/L,Mg2+50 mmoL/L,Taq DNA聚合酶0.5 U.利用该优化体系,采用3对不同引物对12份分布于不同地区的望天树材料进行了检验,证明此反应体系具有较好的稳定性和可重复性.