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动物医学进展 2010年第1期31卷 21-23页

作者：王晓杜陈培君沈阳马志永中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

猪流感病毒pb1蛋白在其复制中起着转录作用,是病毒复制所必需的蛋白。克隆了猪流感病毒的pb1基因,构建重组真核表达载体p3xFLAG-CMV-7.1-pb1,利用脂质体转染Vero细胞后,分别用Western blot和IFA检测重组蛋白FLAG-pb1蛋白的表达,结果表... 详细信息

猪流感病毒pb1蛋白在其复制中起着转录作用,是病毒复制所必需的蛋白。克隆了猪流感病毒的pb1基因,构建重组真核表达载体p3xFLAG-CMV-7.1-pb1,利用脂质体转染Vero细胞后,分别用Western blot和IFA检测重组蛋白FLAG-pb1蛋白的表达,结果表明重组蛋白能在真核细胞中得到表达,其亚细胞定位为细胞核表达,与其功能密切相关,为以后流感病毒的相关研究打下了基础。

关键词：猪流感病毒 pb1蛋白亚细胞定位

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甲型流感病毒pb1-PA蛋白作用位点的发现与分析

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中山大学学报（自然科学版） 2011年第2期50卷 81-86页

作者：何淼林强乾赵艳超张淑波陈维田中山大学生命科学学院广东广州510275 香港理工大学屋宇设备工程系

基于共进化理论,探究了甲型流感病毒pb1蛋白与PA蛋白上具有共同进化可能性的保守九聚片段(C9MP)。结构信息显示pb1蛋白的第1-15位氨基酸与PA蛋白的第239-716位氨基酸具有相互作用域;对该区域变异分布的分析发现,PA蛋白第670位氨基酸Q所... 详细信息

基于共进化理论,探究了甲型流感病毒pb1蛋白与PA蛋白上具有共同进化可能性的保守九聚片段(C9MP)。结构信息显示pb1蛋白的第1-15位氨基酸与PA蛋白的第239-716位氨基酸具有相互作用域;对该区域变异分布的分析发现,PA蛋白第670位氨基酸Q所在的C9MP与pb1蛋白的第9位氨基酸F、第12位氨基酸V和第13位氨基酸P所在的C9MP在pb1MP1相互作用面上具有最低的共进化值。结合DSSP程序的分析表明,由PA蛋白第670位氨基酸Q与pb1蛋白的第9位氨基酸F、第12位氨基酸V与第13位氨基酸P构成的区域可能成为潜在的相互作用位点。

关键词：共进化理论甲型流感病毒 pb1蛋白 PA蛋白相互作用位点

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Mutator转座子介导的玉米叶色突变体侧翼序列的克隆及遗传分析

Mutator转座子介导的玉米叶色突变体侧翼序列的克隆及遗传分析

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作者：杨伟峰河北农业大学

学位级别：硕士

玉米基因组测序完成为玉米功能基因组学研究开辟了新的篇章,也为玉米种质资源创制和分子育种奠定了重要基础。突变体是反向遗传学研究进行基因分离、克隆和功能解析的最理想、最有效的材料。Mutator(Mu)转座子是玉米的内源转座子,具有... 详细信息

玉米基因组测序完成为玉米功能基因组学研究开辟了新的篇章,也为玉米种质资源创制和分子育种奠定了重要基础。突变体是反向遗传学研究进行基因分离、克隆和功能解析的最理想、最有效的材料。Mutator(Mu)转座子是玉米的内源转座子,具有高诱变特点,极易获得遗传多样的突变体。与此同时转座子标签技术是开展玉米功能基因组学研究的重要策略。本研究中以含活性MuDR转座子的W22::Mu为父本,与优良自交系综31杂交,经多代自交或回交,筛选出了Mu转座子诱导的叶色突变体,作为本研究Mu转座子标签技术的分离叶色突变目标基因的材料。利用改良的MuTail-PCR、MuAFLP和illumina测序方法,分离Mu因子插入位点侧翼序列,并对Mu因子插入位点进行了真实性验证和生物信息学分析,获得了以下结果:1、共获得含Mu-TIR的侧翼序列129条,其中重复序列36条,特异性序列93条。特异性序列中插入位点为多拷贝序列的有18条占18.9%,对其余75条特异性单拷贝序列在玉米染色体上的分布进行定位:其中第4、第6和第7染色体分布较少,所占比例分别为2.67%,1.33%和4%,合计为8%;第2、第5、第8和第9染色体分布较多,所占比例分别为13.33%,13.33%,16%和18.67%,合计为61.33%。这75条序列平均长度约为600bp,其中在200～400 bp范围内有6条序列,在400～600 bp范围内有26条序列,在600～1000 bp范围内有43条序列,没有低于200 bp的序列。2、对75个9 bp正向重复序列进行分析,发现了5个Mu因子插入热点序列:GTCACGCAC,GTTAGCAGA,CHTTYCTAG,ATTCTCTAK和TGCAGTACA。3、对叶色突变群体利用MuAFLP的方法分离侧翼序列,对获得的差异条带进行回收、测序,将测序结果去载体和Mu-TIR序列,共获得14条Mu插入位点的目标序列,去除冗余序列2条和重复序列8条,获得4条目标序列作为进一步研究的对象,经验证共有2条为真实性插入位点。4、PPR突变位点,定位在玉米第6染色体上,Mu因子插入在基因5’UTR区,位于第121个碱基和第122个碱基之间;此突变位点的分离群体基因型比例符合孟德尔分离规律,但与表型不关联。5、pb1突变位点,定位在玉米第5染色体上,Mu因子插入在基因第1外显子中;突变位点其分离群体基因型比例符合孟德尔分离规律,但与表型不关联。

关键词：玉米 Mutator转座子 MuTail-PCR MuAFLP PPR基因 pb1蛋白

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