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水稻osracd蛋白G15V、T20N点突变对其细胞定位的影响及其与靶蛋白的相互作用

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中国生物化学与分子生物学报 2009年第9期25卷 828-833页

作者：梁卫红刘肖飞毕佳佳吕超慧彭威风河南师范大学生命科学学院河南新乡453007

osracd是水稻小GTP结合蛋白Rho家族成员,功能之一是作为"分子开关",通过控制花粉管的延伸生长,参与光敏核不育水稻光周期育性转换过程.为研究该蛋白的作用机制,采用重叠延伸PCR方法,分别在其GTPase结构域中引入G15V、T20N点突变,模拟GTP... 详细信息

osracd是水稻小GTP结合蛋白Rho家族成员,功能之一是作为"分子开关",通过控制花粉管的延伸生长,参与光敏核不育水稻光周期育性转换过程.为研究该蛋白的作用机制,采用重叠延伸PCR方法,分别在其GTPase结构域中引入G15V、T20N点突变,模拟GTP和GDP结合形式的osracd.进一步构建了受控于CaMV35S的与绿色荧光蛋白融合表达的双元植物表达载体;采用农杆菌介导法转化洋葱表皮细胞,在荧光显微镜下观察蛋白在活细胞内定位的特点.结果显示,野生型蛋白在细胞质和细胞膜都有分布,组成型激活的蛋白主要分布在细胞膜上,而失活型蛋白则大都集中到细胞核周围.蛋白相互作用的酵母双杂交体系分析显示,osracd及其2个突变体具有不同的靶蛋白结合特性.研究证实,水稻osracd蛋白G15V和T20N点突变不仅影响其在活细胞内的定位,而且也影响了与靶蛋白的相互作用.说明处于不同鸟苷酸结合状态的osracd具有不同的胞内定位方式,可能通过结合不同的靶蛋白,引发不同的细胞应答事件.

关键词： osracd 定点突变绿色荧光蛋白蛋白相互作用

T20N点突变对水稻osracd蛋白GTP酶活性的影响

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中国生物工程杂志 2010年第1期30卷 56-61页

作者：刘肖飞梁卫红河南师范大学生命科学学院新乡453007

osracd是水稻小GTP结合蛋白Rho家族成员,其功能之一是作为"分子开关",通过控制花粉管的延伸生长,参与光敏核不育水稻光周期的育性转换。在序列同源性比对和蛋白保守结构域分析的基础上,采用重叠延伸PCR方法在水稻osracd基因的第一个高... 详细信息

osracd是水稻小GTP结合蛋白Rho家族成员,其功能之一是作为"分子开关",通过控制花粉管的延伸生长,参与光敏核不育水稻光周期的育性转换。在序列同源性比对和蛋白保守结构域分析的基础上,采用重叠延伸PCR方法在水稻osracd基因的第一个高度保守的基序G1区引入T20N点突变,模拟GDP结合形式的osracd。进一步构建了与组氨酸标签融合的原核表达载体,原核表达和纯化了野生型和突变型osracd蛋白,并通过Western blot证实了融合蛋白表达和纯化的正确性。纯化蛋白的GTP酶活性检测结果显示,突变后的osracd蛋白GTP水解活性显著降低,提示osracd在T20N突变前后具有不同的生化特性。

关键词： osracd 点突变原核表达和纯化 GTP酶活性

水稻OsMY1的C端与osracd的相互作用

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水稻OsMY1的C端与OsRacD的相互作用

中国遗传学会植物遗传和基因组学专业委员会2009年学术...

作者：侯成千王军梁卫红河南师范大学生命科学学院

水稻ROP蛋白osracd是光敏核不育水稻农垦58S光周期育性转换信号通路中的重要分子开关。通过酵母双杂交筛选,从水稻幼穗中分离到一种与osracd相互作用的潜在肌球蛋白重链编码基因的cDNA片段,命名为OsMYl。生物信息学分析显示,序列中含有... 详细信息

水稻ROP蛋白osracd是光敏核不育水稻农垦58S光周期育性转换信号通路中的重要分子开关。通过酵母双杂交筛选,从水稻幼穗中分离到一种与osracd相互作用的潜在肌球蛋白重链编码基因的cDNA片段,命名为OsMYl。生物信息学分析显示,序列中含有一个在Rho效应物中普遍存在的保守的卷曲螺旋结构域。

关键词：水稻 OsMY1 osracd 相互作用

G15V和T20N点突变对水稻osracd胞内定位和蛋白互作特性的影响

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G15V和T20N点突变对水稻OsRacD胞内定位和蛋白互作特性的影响

中国遗传学会植物遗传和基因组学专业委员会2009年学术...

作者：刘肖飞梁卫红河南师范大学生命科学学院

osracd是水稻小GTP结合蛋白Rho家族成员,功能之一是作为"分子开关",通过控制花粉管的延伸生长,参与光敏核不育水稻光周期育性转换过程。为研究该蛋白的作用机制,采用重叠延伸PCR方法,分别在其GTPase结构域中引入G15V、T20N点突

关键词： osracd 点突变绿色荧光蛋白蛋白相互作用

T20N点突变对水稻osracd蛋白GTP酶活性的影响

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T20N点突变对水稻OsRacD蛋白GTP酶活性的影响

河南省细胞生物学学会第二届会员代表大会暨学术研讨会

作者：刘肖飞梁卫红河南师范大学生命科学学院

osracd是水稻小GTP结合蛋白Rho家族成员,其功能之一是作为"分子开关",通过控制花粉管的延伸生长,参与光敏核不育水稻光周期的育性转换。本研究在序列同源性比对和蛋白保守结构域分析的基础上,采用重叠延伸PCR方法在水稻osracd基因的第... 详细信息

osracd是水稻小GTP结合蛋白Rho家族成员,其功能之一是作为"分子开关",通过控制花粉管的延伸生长,参与光敏核不育水稻光周期的育性转换。本研究在序列同源性比对和蛋白保守结构域分析的基础上,采用重叠延伸PCR方法在水稻osracd基因的第一个高度保守的基序G1区引入T20N点突变,模拟GDP结合形式的osracd。进一步构建了与组氨酸标签融合的原核表达载体,原核表达和纯化了野生型和突变型osracd蛋白,并通过Westernblot证实了融合蛋白表达和纯化的正确性。纯化蛋白的GTP酶活性检测结果显示,突变后的osracd蛋白GTP水解活性显著降低,提示osracd在T20N突变前后具有不同的生化特性。

关键词： osracd 点突变原核表达和纯化 GTP酶活性

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水稻osracd及其相互作用蛋白的研究

水稻OsRacD及其相互作用蛋白的研究

河南省细胞生物学学会第二届会员代表大会暨学术研讨会

作者：刘肖飞侯成千王军张利娟梁卫红河南师范大学生命科学学院

osracd是水稻小GTP结合蛋白Rho家族成员,功能之一是作为"分子开关",通过控制花粉管的延伸生长,参与光敏核不育水稻光周期育性转换过程。通过酵母双杂交筛选,获得了一些潜在互作蛋白的编码基因。为研究osracd蛋白及其互作蛋白的结合特征... 详细信息

osracd是水稻小GTP结合蛋白Rho家族成员,功能之一是作为"分子开关",通过控制花粉管的延伸生长,参与光敏核不育水稻光周期育性转换过程。通过酵母双杂交筛选,获得了一些潜在互作蛋白的编码基因。为研究osracd蛋白及其互作蛋白的结合特征和作用机制,采用重叠延伸PCR方法,分别在其GTPase结构域中引入G15V、T20N点突变,模拟GTP和GDP结合形式的osracd;构建了受控于CaMV35S的与绿色荧光蛋白融合表达的双元植物表达载体,采用农杆菌介导法转化洋葱表皮细胞,观察突变前后蛋白在活细胞内定位的特点;在酵母双杂交体系和体外pulldown实验对不同活性形式osracd与靶蛋白的结合进行了鉴定。结果显示,G15V、T20N点突变可以模拟GTP和GDP结合形式的osracd,野生型蛋白在细胞质和细胞膜都有分布,组成型激活的蛋白主要分布在细胞膜上,而失活型蛋白则大都集中到细胞核周围;蛋白相互作用的酵母双杂交体系分析和pulldown实验显示,osracd及其两个突变体具有不同的靶蛋白结合特性。本研究证实在不同的鸟苷酸结合状态下,osracd蛋白具有不同的活细胞内定位特点,通过与不同靶蛋白的相互作用,引发不同的细胞应答事件。

关键词： osracd 定点突变蛋白相互作用

水稻OsMY1和osracd基因互作的分子鉴定

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中国生物工程杂志 2008年第7期28卷 63-66页

作者：侯成千梁卫红王军河南师范大学生命科学学院新乡453007

osracd是光敏核不育水稻农垦58S光周期育性转换信号通路中的重要分子开关,通过酵母双杂交筛选,从水稻幼穗中分离到一种与osracd互作的新的肌球蛋白重链编码基因的cDNA片段,命名为OsMY1。在酵母双杂交体系鉴定的基础上,构建了OsMY1和OsR... 详细信息

osracd是光敏核不育水稻农垦58S光周期育性转换信号通路中的重要分子开关,通过酵母双杂交筛选,从水稻幼穗中分离到一种与osracd互作的新的肌球蛋白重链编码基因的cDNA片段,命名为OsMY1。在酵母双杂交体系鉴定的基础上,构建了OsMY1和osracd的原核表达载体,表达和纯化了融合蛋白GST-OsMY1和His6-osracd,通过pulldown实验进一步确认了上述互作关系。提示OsMY1和osracd可能在功能上相关,为深入研究二者在水稻生理功能上的联系提供了重要线索和依据。

关键词： osracd OsMY1 基因互作酵母双杂交

光敏核不育水稻osracd启动子的分离及其育性相关性分析

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中国水稻科学 2006年第2期20卷 216-218页

作者：梁卫红吴乃虎中国科学院遗传与发育生物学研究所

以水稻osracd的cDNA序列为探针筛选光敏核不育水稻农垦58S基因组文库,获得了一个包含2kb的Os-RacD启动区和396bp编码区序列的阳性克隆。与反向PCR克隆的水稻农垦58N该基因的启动区比较,证实该基因的启动区在农垦58S和农垦58N的同源性达... 详细信息

以水稻osracd的cDNA序列为探针筛选光敏核不育水稻农垦58S基因组文库,获得了一个包含2kb的Os-RacD启动区和396bp编码区序列的阳性克隆。与反向PCR克隆的水稻农垦58N该基因的启动区比较,证实该基因的启动区在农垦58S和农垦58N的同源性达到99.8%,且在预测的调控元件上不存在碱基差异。说明农垦58S和农垦58N在长日照条件下表现出的育性差别,并非两者在osracd调控序列结构上的差别所致,而与基因表达的发育调控有关。

关键词：光敏核不育性水稻基因组文库 osracd 基因启动子

G15V点突变对水稻osracd基因蛋白产物效应的影响

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中国生物化学与分子生物学报 2006年第4期22卷 338-342页

作者：梁卫红吴乃虎中国科学院遗传与发育生物学研究所

在水稻osracd基因编码GTPase结构域处,采用PCR方法引入G15V点突变模拟GTP结合形式的osracd.原核表达并纯化了突变前后的osracd蛋白,用于蛋白生化活性的分析.结果显示,突变后的osracd蛋白在GTP水解活性上有显著的提高,提示osracd在激活... 详细信息

在水稻osracd基因编码GTPase结构域处,采用PCR方法引入G15V点突变模拟GTP结合形式的osracd.原核表达并纯化了突变前后的osracd蛋白,用于蛋白生化活性的分析.结果显示,突变后的osracd蛋白在GTP水解活性上有显著的提高,提示osracd在激活前后具有不同的蛋白生化特性,而且可能通过不同的胞内互作蛋白,引发不同的信号传递,证实了osracd在Rho信号转导通路中“分子开关”的重要作用.

关键词： osracd 点突变 GTPase活性