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DC靶向适配体修饰的载铜绿假单胞菌DNA疫苗递送系统的构建及体外评价

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中国药科大学学报 2019年第6期50卷 743-752页

作者：黄仕琴石敏何颖娜岳瀚勋余娴重庆医科大学附属第二医院I期临床试验研究室重庆400010 河北中医学院药学院石家庄050200 重庆医科大学药学院生物化学与分子药理学重点实验室重庆400010

构建了一种DC靶向适配体修饰的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)DNA疫苗递送系统。采用乙醇注入法制备阳离子脂质体,静电吸附法制备载pVAX1-oprf-VP22的阳离子脂质体(Lip-poprf-VP22),探讨不同DOTAP/pDNA质量比的Lip-poprf-VP22对pVAX1-oprf-VP22的包封效果、对DC2.4的细胞毒性及转染率,筛选最佳质量比的Lip-poprf-VP22测定其粒径及Zeta电位;后插法制备DC靶向适配体修饰的载pVAX1-oprf-VP22的阳离子脂质体(Apt-Lip-poprf-VP22),检测其转染DC2.4后oprf蛋白的表达量及对小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)成熟的影响。结果表明,Lip-poprf-VP22随着DOTAP/pDNA质量比增加包封率逐渐增加,当质量比为5∶1时即能很好的包封pVAX1-oprf-VP22;当Lip-poprf-VP22作用于DC2.4 24 h或48 h后,不同质量比的Lip-poprf-VP22对DC2.4的存活率均在80%以上;当DOTAP/pDNA质量比由2∶1增加到10∶1,转染率表现为先增加、后降低的趋势,其中DOTAP/pDNA质量比为4∶1、5∶1时转染率相对较高;当DOTAP/pDNA质量比为5∶1时,Lip-poprf-VP22粒径为(171.67±1.27)nm,Zeta电位为(11.30±0.57)mV;Apt-Lip-poprf-VP22转染DC2.4后可表达更多oprf蛋白且可明显促进BMDCs的成熟。

关键词：铜绿假单胞菌 DNA疫苗 DC靶向适配体 oprf

铜绿假单胞菌重组Bb-oprf疫苗构建及鉴定

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中国人兽共患病学报 2011年第4期27卷 303-306页

作者：朱佑明罗永艾李文桂重庆医科大学附属第一医院呼吸内科重庆400016 重庆市第一人民医院重庆400022

目的构建和鉴定铜绿假单胞菌重组双歧杆菌(rBb)-oprf疫苗。方法以铜绿假单胞菌PAOl标准株提取总RNA为模板,自行设计引物,RT-PCR扩增获得oprf抗原编码基因,经酶切、连接定向克隆入大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒... 详细信息

目的构建和鉴定铜绿假单胞菌重组双歧杆菌(rBb)-oprf疫苗。方法以铜绿假单胞菌PAOl标准株提取总RNA为模板,自行设计引物,RT-PCR扩增获得oprf抗原编码基因,经酶切、连接定向克隆入大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-oprf。转化E.coliBL21(DE3)感受态细胞,抽提质粒行酶切电泳和测序验证后,电穿孔转化到Bb中,构建铜绿假单胞菌rBb-oprf疫苗,抽提质粒进行PCR扩增鉴定。结果 RT-PCR扩增出1 016bp的oprf编码基因;重组质粒经双酶切鉴定,切出4 947bp的载体片段和10 16bp的目的基因片段;以rBb抽提质粒为模板进行PCR扩增可得到1 016bp的oprf基因片段。结论成功构建了铜绿假单胞菌rBb-oprf疫苗,为该疫苗的进一步研究奠定基础。

关键词：铜绿假单胞菌 oprf 疫苗

铜绿假单胞菌外膜蛋白oprf基因的克隆与原核表达

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现代预防医学 2009年第5期36卷 926-928+930页

作者：陈建国苏兆亮柳迎昭戴晓莉薛渊王胜军邵启祥许化溪江苏大学附属人民医院江苏大学医学技术学院

[目的]克隆铜绿假单胞菌oprf基因,并进行原核表达,以期进一步开展铜绿假单胞菌基因工程疫苗的研究。[方法]利用PCR技术从铜绿假单胞菌基因组中扩增出oprf基因。采用T-A克隆构建pMD18-T-oprf重组质粒,测序正确后经BamHⅠ、HindⅢ双酶切获... 详细信息

[目的]克隆铜绿假单胞菌oprf基因,并进行原核表达,以期进一步开展铜绿假单胞菌基因工程疫苗的研究。[方法]利用PCR技术从铜绿假单胞菌基因组中扩增出oprf基因。采用T-A克隆构建pMD18-T-oprf重组质粒,测序正确后经BamHⅠ、HindⅢ双酶切获得oprf片段,插入到表达载体pET32a,获得pET32a-oprf重组表达质粒并在表达宿主菌E.ColiBL21中诱导表达,利用Ni-NTA柱对目的蛋白进行纯化,通过SDS-PAGE电泳和蛋白质印迹进行鉴定。[结果]克隆oprf基因(459bp)并经DNA测序证实,表达重组蛋白oprf并获得纯化蛋白,经SDS-PAGE电泳和蛋白质印迹鉴定正确。[结论]成功克隆了oprf基因并获得原核表达物,为铜绿假单胞菌的致病性研究和开展基因工程疫苗的研制奠定了基础。

关键词：铜绿假单胞菌 oprf 克隆与表达疫苗

铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-oprf的构建及其表达

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中国病原生物学杂志 2011年第6期6卷 420-423页

作者：朱佑明罗永艾李文桂重庆医科大学附属第一医院呼吸内科重庆400016 重庆市第一人民医院重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所

目的构建并鉴定铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-oprf,研究该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达。方法以铜绿假单胞菌PAOl标准株总RNA为模板,自行设计引物,采用RT-PCR方法扩增oprf抗原编码基因,经酶切、连接后定向克隆入大肠埃希菌-双歧杆菌... 详细信息

目的构建并鉴定铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-oprf,研究该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达。方法以铜绿假单胞菌PAOl标准株总RNA为模板,自行设计引物,采用RT-PCR方法扩增oprf抗原编码基因,经酶切、连接后定向克隆入大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-oprf,转化E.coliBL21(DE3)感受态细胞,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行分析和鉴定。结果 RT-PCR扩增出1 016 bp的oprf编码基因;重组质粒经双酶切和测序鉴定证实oprf基因成功插入pGEX-1λT中;SDS-PAGE分析表达产物分子质量单位约为61 ku,与预期结果一致,表达的蛋白质占菌体总蛋白的16%;Western blot鉴定重组蛋白能被Pa外膜粗抗原免疫小鼠血清识别。结论成功构建了铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-oprf,该质粒在E.coliBL21(DE3)中高效融合表达,表达的融合蛋白具有抗原特异性。

关键词：铜绿假单胞菌 oprf 大肠埃希菌表达

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车联网场景下的抗泄露安全协议研究

车联网场景下的抗泄露安全协议研究

作者：王金花西安电子科技大学

学位级别：硕士

随着汽车保有量的持续增长和道路交通的饱和,车联网被视为提高交通效率,改善驾乘体验的有效技术之一。目前,车联网的应用领域不断增加,如娱乐、导航等,车辆和各种信息服务器的通信越来越频繁。安全通信协议是保证车辆与信息服务器安全... 详细信息

随着汽车保有量的持续增长和道路交通的饱和,车联网被视为提高交通效率,改善驾乘体验的有效技术之一。目前,车联网的应用领域不断增加,如娱乐、导航等,车辆和各种信息服务器的通信越来越频繁。安全通信协议是保证车辆与信息服务器安全交互的关键手段。安全通信协议所需的密钥通常被存储于车辆的内存中。然而,由于车辆常处于无人值守状态,车辆被盗事件时有发生,车辆容易遭受攻击者的物理攻击。目前国内外已经提出了大量的车联网场景下的安全通信协议。但是,这些协议大多没有考虑私钥的安全存储问题,或假设密钥存储在抗篡改设备上。然而,现实中几乎不存在满足上述条件的抗篡改设备。因此,设计一个面向车联网的安全通信协议以防止车辆被盗取后的密钥泄露是一个具有挑战性的难题。本文以车联网为背景,利用不经意伪随机函数（Oblivious Pseudo-Random Function,oprf）和部分不经意伪随机函数（Partial Oblivious Pseudo-Random Function,Poprf）的特性,设计了基于oprf的双因子认证密钥协商协议（oprf-based two factor authentication,oprf-2FA）和基于TPoprf的安全导航信息通信协议（TPoprf-based secure navigation communication,TPoprf-NC）。具体的研究成果如下:1、oprf-2FA方案通过结合oprf技术和两方协同签名技术防止车辆被盗取后的密钥泄露。首先,车辆的私钥被分成两个部分:一部分使用辅助设备的公钥加密,另一部分通过拥有输入的车载单元和拥有oprf密钥的辅助设备运行oprf协议恢复。即使车辆被攻击者盗取,由于车辆中没有存储和私钥有关的秘密信息,攻击者仍然无法获取私钥。其次,oprf-2FA使用基于两方计算的协同签名实现了车辆与服务器的双向认证和密钥协商。最后,本文对提出的oprf-2FA方案进行了全面的安全性分析和性能比较。结果表明所提出的oprf-2FA方案可以抵抗各种已知的攻击,特别是防止车辆被盗取后的密钥泄露,且提出的oprf-2FA协议具有更优的性能。2、基于车辆导航系统中对通信时延和通信带宽的要求,本文结合最简单的秘密共享-（2.2）门限和无证书认证方案提出了TPoprf-NC方案。首先,用户向车载单元输入口令,通过与辅助设备交互执行TPoprf协议计算密钥材料,进而恢复解密密钥并通过解密获得车辆的私钥。然后,车辆与导航服务器执行CL-ICAE实现双向认证,认证之后,导航服务器为车辆提供路线规划的服务。此外,在辅助设备的帮助下,TPoprf-NC使用随机数共享算法实现了对密钥的定期更新。密钥的定期更新增加了密钥的安全性,即使车载单元或辅助设备被盗取,敌手也无法获得更新后的密钥。最后,通过对协议TPoprf-NC的安全性分析和性能比较,证明了TPoprf-NC具有抗密钥泄露的安全属性,且提出的TPoprf-NC具有更优的性能。

关键词：车联网抗密钥泄露 oprf TPoprf 认证协同签名

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视频直播平台中的用户隐私保护研究

视频直播平台中的用户隐私保护研究

作者：赵威浙江工商大学

学位级别：硕士

随着我国信息技术的发展与科技的进步,各种直播平台层出不穷,目前直播平台已经渗透到我们生活中的方方面面。而除了娱乐直播和商务类直播持续火热之外,教育直播这一新兴领域也逐渐受到资本市场和平台机构的青睐,不少直播平台相继推出教... 详细信息

随着我国信息技术的发展与科技的进步,各种直播平台层出不穷,目前直播平台已经渗透到我们生活中的方方面面。而除了娱乐直播和商务类直播持续火热之外,教育直播这一新兴领域也逐渐受到资本市场和平台机构的青睐,不少直播平台相继推出教育直播。教育直播以其互动性强、自主性高和高效性等特点受到广大受教育人群和在线教育机构的热烈欢迎。虽然教育直播平台的蓬勃发展给我们带来很多便利,同时也给用户的隐私带来了很多威胁,这些直播平台对用户隐私信息的保护严重缺失,平台中用户的隐私信息被窃取后可能会造成严重后果。在此背景下,设计并实现考虑用户隐私的视频直播平台,无论在理论研究还是在实际应用中都具有重要意义。本文首先阐述了考虑用户隐私的视频直播平台的研究背景与意义,并对隐私保护领域的主要研究方向及其国内外研究现状做了详细介绍。其次本文结合视频直播平台的设计,研究了一些密码学中的关键技术。文章阐述了密码学中的一些加密算法,并对他们的优缺点进行分析。文章还研究了 JavaFX浏览器框架,它能够将本文中由Java编写的密码学算法逻辑组件的生成结果嵌入到Web页面进行提交,并将信息处理组件以注入的形式与其交互,适合用于实现本文中的视频直播平台。接着针对目前教育类直播平台普遍存在的隐私泄露问题,本文详细阐述了考虑用户隐私的视频直播平台的设计,针对教育类用户,将班级设置为标签并对传递在用户和权限管理服务器之间的数据进行加密保护。本文提出对多标签支持和主动匹配的方案;本文还考虑到用户之间的关注关系会发生变化的需求,我们提出的权限撤回方案进一步满足对用户隐私保护的需求。本文实现了考虑用户隐私的视频直播平台。平台设计的核心是基于RSA盲签名的oprf算法。整个平台中对信息所有的加密和解密操作都是在用户的本地客户端进行的,而平台权限管理服务器对用户加密后的标签信息会进行盲匹配。学生用户和教师用户在发布和验证关注请求时,双方不需要同步在线,并且所有的加解密操作都是在平台用户的客户端上自动完成的,用户在平台上的操作像在其它平台上的操作一样简单方便。最后我们对平台进行分析和实验测试,并对实验结果进行仔细分析。经过实验和分析对比,平台的安全性和性能完全符合我们的预期,在满足安全性的同时,平台完全符合实际应用的需要。

关键词：隐私保护教育直播平台 RSA盲签名 oprf

铜绿假单胞菌院内感染的防控策略 ——耐药性及免疫原性研究

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铜绿假单胞菌院内感染的防控策略 ——耐药性及免疫原性研究

作者：陈建国江苏大学

学位级别：硕士

铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa,PA)是一种非发酵革兰阴性杆菌,在医院获得性感染中较为常见。PA耐药机制较为复杂,其中整合子特别是Ⅰ类整合子介导的多重耐药机制正日益引起人们的重视。由于PA对多种抗菌药物表现为天然或获得性... 详细信息

铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa,PA)是一种非发酵革兰阴性杆菌,在医院获得性感染中较为常见。PA耐药机制较为复杂,其中整合子特别是Ⅰ类整合子介导的多重耐药机制正日益引起人们的重视。由于PA对多种抗菌药物表现为天然或获得性多重耐药,其所致感染可供选择的有效抗菌药物甚少,使得临床治疗的难度大为增加。这种状况已使抗生素治疗PA感染面临困境,这一方面促使人们不断更新和研制新型抗生素,寻求有效的治疗方案;另一方面激发人们寻找新型广谱疫苗,提高易感人群的特异性抗感染免疫能力,避免PA感染带来的困窘。本研究基于镇江地区PA的耐药状况,利用信号接头分子MyD88对病原刺激信号的细胞内传递作用,研制广谱、高效的PA核酸疫苗。目的(1)了解分离于镇江地区的PA对十三种常用抗生素的耐药状况,明确I类整合子基因盒结构及其在耐药基因播散中的作用。(2)原核表达PA外膜蛋白oprf,建立检测抗PA抗体的ELISA方法,以用于判断本研究所制备的疫苗效果。(3)研制PA oprf表位核酸疫苗,利用MyD88的佐剂作用增强免疫应答。方法(1)采用K-B纸片法检测71株PA的耐药率;煮沸法提取71株PA基因组DNA;PCR扩增Ⅰ类整合子基因;测序分析其所携带的耐药基因盒;脉冲场电泳分析优势携带Ⅰ类整合子的PA菌株间的关系。(2)SDS-蛋白酶K提取PA基因组DNA,并以此为模板扩增oprf基因,T-A克隆后将此基因插入PET-32(a)载体,构建重组载体PET-32(a)-oprf,在E.coli BL21中表达,用Ni-NTA层析柱纯化目的蛋白。将纯化蛋白包被ELISA板,建立检测PA抗体的ELISA检测方法,为疫苗免疫机体产生抗体效果的检测奠定基础。(3)优选PA oprf的三个中和性B细胞表位,并将此三表位及一个外源通用T细胞表位串联,表位之间用赖氨酸间隔,再采用大肠埃希菌的优势密码子,将上述构建的疫苗的氨基酸序列转换为DNA序列。采用重叠PCR方法合成全基因,并在此序列前插入组织型纤溶酶原(tPA)的信号肽基因,将此获得的片段与MyD88基因同时连接到双表达载体pIRES中,构建pIRES-tPA-oprf:MyD88重组质粒。通过PCR、酶切及序列测定进行鉴定。将pIRES-tPA-oprf:MyD88重组质粒免疫Balb/c小鼠,ELISA法检测血清特异性抗体水平。建立小鼠肺部感染PA动物模型,通过检测各组小鼠血清中特异性抗体水平、鼠肺细菌计数等,判断研制的PA核酸疫苗的免疫效果和对受染小鼠的保护作用。结果(1)71株PA对临床常用的13种抗生素的耐药率在18.3%～77.5%不等;Ⅰ类整合子检出率为38%,包括aadB、aac(6')-Ⅱ、PSE-Ⅰ,dfrA17和aadA5五种基因盒,其中最常见者为dfrA17和aadAS。Ⅰ类整合子阳性菌株对哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢曲松、头孢吡肟、头孢他啶、庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素、左氧氟沙星、环丙沙星等10种抗生素的耐药率明显高于整合子阴性菌株。PFGE分析22株携带1.6kbⅠ类整合子的PA流行规律。(2)扩增得到oprf基因,编码区cDNA的全长459bp,编码153个氨基酸残基,与GenBank中发表的序列完全一致。将oprf基因克隆到pET32a原核表达载体,获得重组载体PET-32(a)-oprf。将重组质粒转化至E.coli M15,IPTG诱导蛋白表达,Ni-NTA层析柱纯化获得目的蛋白。将纯化蛋白包被ELISA板,建立了PA抗体检测方法。(3)构建了PA表位核酸疫苗,体内试验证实,小鼠血清中特异性抗体水平较高,对PA的感染具有免疫保护。结论(1)不同PA临床株对十三种常用抗生素的耐药率各不相同,整合子阳性菌株耐药率明显高于整合子阴性菌株,提示Ⅰ类整合子是PA多重耐药的重要因素。(2)成功克隆了oprf基因并获得原核表达蛋白,重组蛋白具有较强的免疫原性,用其免疫动物获得较高效价的特异性抗体,并以此建立了PA抗体ELISA检测方法和成功用于PA核酸疫苗效果评价。(3)成功构建了重组有MyD88基因的PA表位核酸疫苗,动物实验证实该核酸疫苗免疫效果明显高于无MyD88基因的核酸疫苗,表明作为抗原信号接头分子MyD88的正向免疫调节作用,以及应用MyD88基因与优势抗原基因重组构建新型高效核酸疫苗的可行性,为临床应用提供了实验依据。

关键词：铜绿假单胞菌整合子原核表达 oprf 表位疫苗免疫应答

基于微生物燃料电池检测Cu2+的生物传感器

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基于微生物燃料电池检测Cu2+的生物传感器

作者：周拓宇兰州大学

学位级别：硕士

我国经济在近三十年来快速发展,逐步实现农业现代化和工业现代化。然而,农业和工业生产过程中产生的大量的废水,这些废水造成了土壤,湖泊乃至近海地区的重金属污染,并进一步影响环境安全和平衡。其中铜离子污染是较为常见的重金属污染之... 详细信息

我国经济在近三十年来快速发展,逐步实现农业现代化和工业现代化。然而,农业和工业生产过程中产生的大量的废水,这些废水造成了土壤,湖泊乃至近海地区的重金属污染,并进一步影响环境安全和平衡。其中铜离子污染是较为常见的重金属污染之一,其污染程度大,污染范围广,容易通过生态网络中食物链的积蓄富集于鱼的肠道,植物根系和人体组织中,从而对自然环境的平衡和稳态造成不可估量的影响。传统的铜离子检测方法基于DDTC-Na法,原子吸收光谱法和生物荧光法等,具有操作繁琐,价格昂贵,需要特定仪器检测且无法实时监测水体铜离子污染程度等一系列缺点。微生物燃料电池(Microbial fuel cell,MFC)近年来受到许多研究者的密切关注。其通过在阳极室中添加电化学微生物作为有机物的催化剂,将阳极室中的化学能通过生物作用转化为电能,同时在阴极室引入电子受体,通过外电路将生成的负电荷传输到阴极室中,丙酮酸循环和TCA循环等生物化学过程中产生的质子则在质子交换膜(或阳离子交换膜)的作用进入到阴极室中,从而介导正电荷和负电荷的分离。基于MFC中的电化学微生物的生化作用,可以方便地将水体中的化学信号转化为电信号,这不仅可以在废水处理的同时提供电力输出,而且为构建基于环境因素,实时监控水体污染物水平的生物传感器提供了崭新的思路。环境中的化学信号在MFC的作用下反映为电信号,可以进一步通过电力网连通到水体监测系统中,为水体污染的预警,监控和处理系统的构建提供实时的信号传输装置。此外,化学信号,电信号和数字信号之间的转化可以使得MFC传感器进一步整合到信息网络中。许多研究已经表明,阳极电化学微生物合成核黄素的含量与MFC输出的电信号水平存在正相关关系。同时在大肠杆菌(Escherich coli,E.coli)中已经证实ribB基因是细菌合成核黄素的限速基因,过表达ribB基因可以解除E.coli的负反馈调节作用并提高核黄素合成水平。然而,大肠杆菌的细胞外膜(Outer menbrane,OM)是低渗透性的转运屏障,限制了核黄素作为电子穿梭体在细胞膜间的穿梭,从而降低了MFC的细胞外电子传输效率(Excellular electron transfer,EET)。通过在E.coli中引入铜绿假单胞菌PAO1(P.aeruginosa PAO1)的孔蛋白合成基因oprf,可以通过提供水通道蛋白而增强E.coli的细胞膜通透性水平。最后,设计并应用了基于MFC特异性检测Cu的分子生物传感器。在E.coli的环境因素响应系统中,双组分响应系统(Two componet system,TCS)常被用来感知周围环境的变化,并控制相关基因的表达以应对信号分子的变化。从E.coli双组分系统CusSR的遗传电路中,选择了特异性响应Cu的cusC启动子(PcusC),将其融合到T7 lysY基因的上游,通过调节T7 RNAP的转录水平使ribB基因和oprf基因的表达水平响应于水体中Cu的诱导,从而通过改变核黄素的合成和转运水平以改变MFC的电信号水平。实验结果表明,MFC生物传感器的最大电压与Cu浓度在0.7 mM之间存在线性关系。此外,对MFC传感器的运行参数进行了测试和优化,检测了水体中其余重金属的干扰程度。最后使用实际废水对基于MFC的Cu生物传感器进行了实际应用研究。同时,开发了便携式的水体Cu污染监测系统,为水污染的预警,远程监测和处理提供实时的数据支持。

关键词： MFC ribB oprf PcusC 核黄素细胞膜通透性 Cu2+ 生物传感器

DC靶向适配体修饰的载铜绿假单胞菌DNA疫苗递送系统的构建及体外评价

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DC靶向适配体修饰的载铜绿假单胞菌DNA疫苗递送系统的构建及体外...

作者：黄仕琴重庆医科大学

学位级别：硕士

目的构建及体外评价DC靶向适配体修饰的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)DNA疫苗递送系统。方法采用乙醇注入法制备阳离子脂质体,静电吸附法制备载pVAX1-oprf-VP22的阳离子脂质体(Lip-poprf-VP22),探讨不同DOTAP/pDNA质量比的Li... 详细信息

目的构建及体外评价DC靶向适配体修饰的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)DNA疫苗递送系统。方法采用乙醇注入法制备阳离子脂质体,静电吸附法制备载pVAX1-oprf-VP22的阳离子脂质体(Lip-poprf-VP22),探讨不同DOTAP/pDNA质量比的Lip-poprf-VP22的包封效果、DC2.4的细胞毒性及转染率,筛选最佳质量比的Lip-poprf-VP22测定其粒径及Zeta电位;后插法制备DC靶向适配体修饰的载pVAX1-oprf-VP22的阳离子脂质体(Apt-Lip-poprf-VP22),检测其转染DC2.4后oprf蛋白的表达量及对小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)成熟的影响。结果Lip-poprf-VP22随着DOTAP/pDNA质量比增加包封率逐渐增加,当质量比为5:1时即能很好的包封pVAX1-oprf-VP22;当Lip-poprf-VP22作用于DC2.4 24 h或48 h后,不同质量比的Lip-poprf-VP22对DC2.4的存活率均在80%以上;当DOTAP/pDNA质量比由2:1增加到10:1,转染率表现为先增加、后降低的趋势,其中DOTAP/pDNA质量比为4:1、5:1时转染率相对较高;当DOTAP/pDNA质量比为5:1时,Lip-poprf-VP22粒径为(171.67±1.27)nm,Zeta电位为(11.30±0.57)mV;Apt-Lip-poprf-VP22转染DC2.4后可表达更多oprf蛋白且可明显促进BMDCs的成熟。结论成功构建DC靶向适配体修饰的PA DNA疫苗递送系统Apt-Lip-poprf-VP22,该系统可靶向进入DC并促进DC的成熟。

关键词：铜绿假单胞菌 DNA疫苗 DC靶向适配体 oprf