DC靶向适配体修饰的载铜绿假单胞菌DNA疫苗递送系统的构建及体外评价

作     者：黄仕琴 

作者单位：重庆医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：余娴

授予年度：2020年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

主      题：铜绿假单胞菌 DNA疫苗 DC靶向 适配体 OprF 

摘      要：目的构建及体外评价DC靶向适配体修饰的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)DNA疫苗递送系统。方法采用乙醇注入法制备阳离子脂质体,静电吸附法制备载pVAX1-OprF-VP22的阳离子脂质体(Lip-pOprF-VP22),探讨不同DOTAP/pDNA质量比的Lip-pOprF-VP22的包封效果、DC2.4的细胞毒性及转染率,筛选最佳质量比的Lip-pOprF-VP22测定其粒径及Zeta电位;后插法制备DC靶向适配体修饰的载pVAX1-OprF-VP22的阳离子脂质体(Apt-Lip-pOprF-VP22),检测其转染DC2.4后OprF蛋白的表达量及对小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)成熟的影响。结果Lip-pOprF-VP22随着DOTAP/pDNA质量比增加包封率逐渐增加,当质量比为5:1时即能很好的包封pVAX1-OprF-VP22;当Lip-pOprF-VP22作用于DC2.4 24 h或48 h后,不同质量比的Lip-pOprF-VP22对DC2.4的存活率均在80%以上;当DOTAP/pDNA质量比由2:1增加到10:1,转染率表现为先增加、后降低的趋势,其中DOTAP/pDNA质量比为4:1、5:1时转染率相对较高;当DOTAP/pDNA质量比为5:1时,Lip-pOprF-VP22粒径为(171.67±1.27)nm,Zeta电位为(11.30±0.57)mV;Apt-Lip-pOprF-VP22转染DC2.4后可表达更多OprF蛋白且可明显促进BMDCs的成熟。结论成功构建DC靶向适配体修饰的PA DNA疫苗递送系统Apt-Lip-pOprF-VP22,该系统可靶向进入DC并促进DC的成熟。