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ox40和ox40l在原发性干燥综合征患者外周血中的表达及临床意义

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第8期29卷 862-865页

作者：朱然然蒋觉安王婷徐婷吴敏刘翠平张学光苏州大学医学生物技术研究所江苏苏州215007 苏州大学附属第三医院风湿免疫科江苏常州213000 苏州大学附属第一医院江苏省临床免疫学研究所江苏苏州215006

目的检测原发性干燥综合征(pSS)患者外周血单个核细胞表面共刺激分子ox40和ox40l的表达,并探讨其临床意义。方法采用免疫荧光标记流式细胞技术检测51例pSS患者及36例健康志愿者外周血T细胞表面ox40的表达及CD14+单核细胞和CD19+B细胞表... 详细信息

目的检测原发性干燥综合征(pSS)患者外周血单个核细胞表面共刺激分子ox40和ox40l的表达,并探讨其临床意义。方法采用免疫荧光标记流式细胞技术检测51例pSS患者及36例健康志愿者外周血T细胞表面ox40的表达及CD14+单核细胞和CD19+B细胞表面ox40l分子表达,比较11例初诊pSS患者治疗前后ox40和ox40l表达水平变化,分析其临床意义。结果与健康志愿者相比,pSS患者外周血CD4+T细胞表面ox40表达显著增高(8.65%±3.51%vs 5.68%±1.68%,Pox40的表达无统计学差异。pSS患者表面ox40l的表达,在外周血中CD14+单核细胞(6.76%±3.60%vs 3.15%±1.89%,P40%vs 2.76%±1.33%,Pox40和ox40l的表达高于非活动期患者,伴发多系统损伤pSS患者外周血ox40和ox40l分子的表达显著高于单纯外分泌腺损伤患者。治疗后CD4+T细胞表面ox40的表达及CD14+单核细胞和CD19+B细胞表面ox40l的表达显著下降。结论 pSS患者外周血单个核细胞表面ox40和ox40l异常高表达,且与疾病活动度、组织损伤及治疗密切相关。

关键词：原发性干燥综合征共刺激分子 ox40 ox40l

ox40l基因修饰肿瘤细胞疫苗的构建及其生物学活性初步研究

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OX40L基因修饰肿瘤细胞疫苗的构建及其生物学活性初步研究

ox40l基因修饰小鼠腹腔巨噬细胞抗肿瘤的实验研究

第九届全国肿瘤生物治疗学术会议

作者：冯永堂王菲原江水邸大琳梁淑娟牟东珍苗乃法吴国庆魏兵潍坊医学院分子免疫学实验室潍坊医学院分子免疫学实验室潍坊医学院分子免疫学实验室潍坊医学院分子免疫学实验室潍坊医学院分子免疫学实验室潍坊医学院分子免疫学实验室潍坊医学院分子免疫学实验室潍坊医学院分子免疫学实验室潍坊医学院分子免疫学实验室

＜正＞目的用RT-PCR法获取小鼠ox40l基因,构建ox40l真核表达载体,转染H22肝癌细胞获得表达ox40l的肿瘤细胞疫苗,并初步研究其生物学活性。方法（1）用TRIzol抽提活化脾细胞的总RNA,用RT-PCR法扩增出小鼠ox40l基因,测序验证无误后,经BamH... 详细信息

＜正＞目的用RT-PCR法获取小鼠ox40l基因,构建ox40l真核表达载体,转染H22肝癌细胞获得表达ox40l的肿瘤细胞疫苗,并初步研究其生物学活性。方法（1）用TRIzol抽提活化脾细胞的总RNA,用RT-PCR法扩增出小鼠ox40l基因,测序验证无误后,经BamHI和PstI双酶切装入含有编码绿荧光蛋白报告基因的质粒载体

关键词： ox40l 协同刺激信号肿瘤免疫细胞瘤苗

来源： cnki会议评论

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OX40L基因修饰小鼠腹腔巨噬细胞抗肿瘤的实验研究

丁苯酞软胶囊联合瑞舒伐他汀治疗急性脑梗死患者的临床观察及对血清lp-PlA2、Il-18、ox40l的影响

第九届全国肿瘤生物治疗学术会议

作者：史琳冯永堂许传武牟东珍苗乃法刘艳菲林志鹃邸大琳吴国庆魏兵潍坊医学院分子免疫学实验室潍坊医学院分子免疫学实验室潍坊医学院分子免疫学实验室潍坊医学院分子免疫学实验室潍坊医学院分子免疫学实验室潍坊医学院分子免疫学实验室潍坊医学院分子免疫学实验室潍坊医学院分子免疫学实验室潍坊医学院分子免疫学实验室潍坊医学院分子免疫学实验室

目的:通过脂质体法将构建的ox40l真核表达载体转染小鼠腹腔巨噬细胞,观察ox40l基因修饰的巨噬细胞对小鼠体内外抗肿瘤效应的影响。研究方法:（1）无菌获取小鼠腹腔巨噬细胞,将含有绿荧光蛋白报告基因的ox40l重组质粒pIRES2–EGFP–ox40... 详细信息

目的:通过脂质体法将构建的ox40l真核表达载体转染小鼠腹腔巨噬细胞,观察ox40l基因修饰的巨噬细胞对小鼠体内外抗肿瘤效应的影响。研究方法:（1）无菌获取小鼠腹腔巨噬细胞,将含有绿荧光蛋白报告基因的ox40l重组质粒pIRES2–EGFP–ox40l采用脂质体法转染巨噬细胞,培养12h,然后经相差显微镜观察转染后巨噬细胞形态变化,荧光显微镜法观察转染后巨噬细胞绿荧光蛋白的表达效果,RT–PCR法鉴定转染细胞ox40l基因的表达。（2）用H22肿瘤细胞可溶性抗原体外处理转染ox40l基因的巨噬细胞,经尾静脉输注正常小鼠,7d后取脾脏制备淋巴细胞悬液,采用MTT法检测转染巨噬细胞诱导的H22特异性CTl对H22的杀伤。（3）取小鼠脾淋巴细胞与肿瘤抗原处理的转染有ox40l基因的巨噬细胞体外混合培养,利用3H-TdR掺入法检测转染巨噬细胞对抗原特异性淋巴细胞增殖的影响。（4）荷瘤小鼠腹腔注射转染ox40l巨噬细胞,观察其对荷瘤鼠腹水产生及生存时间的影响。结果:（1）荧光显微镜观察可见ox40l基因表达载体转染的巨噬细胞发出绿色荧光,RT–PCR技术从转染细胞扩增出了800bp左右包含ox40l基因的目的片断。（2）MTT检测结果显示肿瘤抗原触发ox40l基因转染细胞诱导后CTl对H22杀伤率在靶效比为1:5,1:10,1:20时杀伤率分别为22%,43%,91%,转染ox40l巨噬细胞明显高于空载体转染及PBS对照组在各靶效比的杀伤率,差异有显著性（P＜0.05）。（3）3H-TdR检测结果显示肿瘤抗原冲击ox40l基因转染巨噬细胞处理抗原与淋巴细胞作用后的cpm值为12859.67±389.04,显著高于空载体转染巨噬细胞组7877.72±320.64和肿瘤抗原冲击未经处理的巨噬细胞组8270.78±255.36（P＜0.05）。（4）荷瘤小鼠腹腔注射转ox40l巨噬细胞治疗后,比对照组腹水形成时间推迟5d以上、存活时间延长9d以上。结论:（1）构建的ox40l真核表达载体成功转染巨噬细胞并获得较强的表达。（2）外源性ox40l基因修饰的巨噬细胞能促进其对肿瘤抗原提呈,增强淋巴细胞对肿瘤抗原的特异性应答,提高CTl的杀伤活性。（3）ox40l转染的巨噬细胞体内注射治疗可延长荷瘤鼠的生存时间。

关键词：巨噬细胞 ox40l H22 转染肿瘤

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中风与神经疾病杂志 2023年第3期40卷 266-269页

作者：南楚黄爱玲陈维萍刘怡伽董超前苏丹颖哈尔滨医科大学附属第四医院黑龙江哈尔滨150000

目的探讨丁苯酞软胶囊联合瑞舒伐他汀治疗急性脑梗死患者的临床观察及对血清lp-PlA2、Il-18、ox40l的影响。方法收集2021年9月-2022年1月期间,哈尔滨医科大学附属第四医院神经内科病区及门诊收治的急性脑梗死患者100例,随机将其分为对... 详细信息

目的探讨丁苯酞软胶囊联合瑞舒伐他汀治疗急性脑梗死患者的临床观察及对血清lp-PlA2、Il-18、ox40l的影响。方法收集2021年9月-2022年1月期间,哈尔滨医科大学附属第四医院神经内科病区及门诊收治的急性脑梗死患者100例,随机将其分为对照组和治疗组,各组50例。对照组予以基础治疗及瑞舒伐他汀(10 mg/次,1次/d),治疗组在其基础上再予以丁苯酞软胶囊(0.2 g/次,3次/d)。根据卒中量表(NIHSS)评分和Barthel指数(Barthel Index)评估两组患者治疗前与治疗90 d后神经功能缺损程度和基础日常生活能力,比较两组治疗前后的血清lp-PlA2、Il-18、ox40l水平。结果治疗组临床总有效率为94.00%高于对照组的80.00%(Plp-PlA2水平均降低,Barthel指数评分均升高,并且治疗组改善显著优于对照组(Plp-PlA2水平高于低分组(Pl指数以及治疗前后Il-18、ox40l水平无统计学差异(P>0.05)。两组不良反应发生率分别为12.00%和16.00%,无显著差异(P>0.05)。结论丁苯酞软胶囊联合瑞舒伐他汀治疗具有良好的疗效和安全性,可明显促进患者神经功能恢复,提高日常生活能力,并且降低血清lp-PlA2水平。

关键词：急性脑梗死丁苯酞软胶囊瑞舒伐他汀 lp-PlA2 Il-18 ox40l

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观察依那普利叶酸片治疗H型高血压的降压效果及ox40l,hs-CRP水平的影响

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中国科技期刊数据库医药 2022年第11期 16-19页

作者：平广豫周四光广州新海医院广东广州510230

研究H型高血压使用依那普利叶酸片进行药物治疗的效果。方法选择80例H型高血压,在治疗观察组、对照组患者过程中使用依那普利叶酸片、依那普利,对比组间数据。结果对比治疗后的微炎症指标、心肾功能指标、ox40l、hs-CRP、血压、Hcy、... 详细信息

研究H型高血压使用依那普利叶酸片进行药物治疗的效果。方法选择80例H型高血压,在治疗观察组、对照组患者过程中使用依那普利叶酸片、依那普利,对比组间数据。结果对比治疗后的微炎症指标、心肾功能指标、ox40l、hs-CRP、血压、Hcy、生活质量、治疗效果,观察组明显优于对照组,Pox40l、hs-CRP、血压、Hcy,P>0.05。结论 H型高血压使用依那普利叶酸片进行药物治疗,效果较为理想。

关键词：依那普利叶酸片 H型高血压降压效果 ox40l hs-CRP

鼠抗人ox40l功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第10期24卷 790-793页

作者：王勤陈永井孙建军施勤居颂文於葛华陈洁张学光苏州大学医学生物技术研究所江苏省临床免疫学重点实验室215007

目的　鼠抗人ox4 0l分子功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定。方法以高表达人ox4 0l分子的转基因细胞l92 9/ox4 0l为免疫原 ,常规免疫BAlB/c小鼠 ,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合 ,并以l92 9/ox4 0l为阳性抗体筛选细胞 ,... 详细信息

目的　鼠抗人ox4 0l分子功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定。方法以高表达人ox4 0l分子的转基因细胞l92 9/ox4 0l为免疫原 ,常规免疫BAlB/c小鼠 ,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合 ,并以l92 9/ox4 0l为阳性抗体筛选细胞 ,l92 9/mock为阴性抗体筛选细胞 ,经免疫荧光标记和流式细胞术分析、反复筛选和多次克隆化培养 ,筛选出特异分泌鼠抗人ox4 0l分子单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ;采用Westernblot、Ig亚型快速定性试纸法、间接免疫荧光法、竞争结合抑制试验和3 H TdR增殖试验等对单抗进行生物学特性的鉴定。结果　成功获得 3株持续、稳定分泌鼠抗人ox4 0l单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,命名为 9H10、4C12和 1G1。对单抗的生物学功能的研究结果表明 ,3株单抗均能识别活化B细胞和成熟DC表达的ox4 0l分子 ,且能抑制成熟DC对T细胞的促增殖作用 ,并与阻断型抗人B7 1单抗具有协同作用。结论　获得的 3株分泌鼠抗人ox4 0l功能性单克隆抗体的杂交瘤 ,所分泌的抗体具有特异性地识别人ox4 0l分子并能阻断ox4 0 /ox4 0l共刺激信号及抑制DC对T细胞的激发作用。

关键词： ox40l 单克隆抗体单抗分泌杂交瘤细胞株抗体筛选 T细胞竞争结合分子细胞融合

两株新的鼠抗人ox40l单克隆抗体的研制及其生物学功能的初步研究

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第8期23卷 757-760页

作者：吴鸿雅王勤陈永井谢芳毛一香刘高勤张学光苏州大学生命科学学院生物技术研究所江苏省临床医学免疫学重点实验室江苏苏州215007

目的:鼠抗人ox40l分子功能性单克隆抗体(mAb)的研制及其生物学特性的鉴定。方法:以高表达人ox40l分子的基因转染细胞l929/ox40l为免疫原,常规免疫BAlB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,经流式细胞术(FCM)分析和多次克隆化培... 详细信息

目的:鼠抗人ox40l分子功能性单克隆抗体(mAb)的研制及其生物学特性的鉴定。方法:以高表达人ox40l分子的基因转染细胞l929/ox40l为免疫原,常规免疫BAlB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,经流式细胞术(FCM)分析和多次克隆化培养,筛选出特异分泌鼠抗人ox40l分子mAb的杂交瘤细胞株;采用Westernblot、Ig亚型快速定性试纸法、染色体核型分析、竞争结合抑制试验、间接免疫荧光法和MTT增殖试验等对单抗的生物学特性进行鉴定。结果:获得2株持续、稳定分泌鼠抗人ox40lmAb的杂交瘤细胞株,分别命名为4D6和5C2。对mAb生物学功能的研究结果表明,2株mAb均能识别成熟DC细胞以及Jurkat、SHI-1、U937等白血病细胞株表面的ox40l分子。对其中SHI-1白血病细胞株增殖影响的实验显示,这2株抗体对SHI-1的增殖都具有一定的抑制作用。结论:成功地获得了2株鼠抗人ox40l功能性mAb杂交瘤,其所分泌的抗体能特异地识别人ox40l分子,并影响表达ox40白血病细胞株的体外增殖,为进一步研究ox40/ox40l的生物学功能奠定了基础。

关键词： ox40l 共刺激信号杂交瘤单克隆抗体白血病

ox40l对儿童哮喘和哮喘小鼠模型辅助性T细胞分化的影响

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中国免疫学杂志 2020年第7期36卷 852-858页

作者：林香花王思勤张秋兴刘丹河南省人民医院变态反应科郑州大学人民医院郑州450000

目的:探讨ox40l对哮喘细胞免疫过程中辅助性T细胞分化的影响。方法:采用酶联免疫吸附试验(ElISA)检测哮喘患者和健康受试者血清ox40l、Il-4、Il-17、IFN-γ和TGF-β的浓度。3H-TdR渗入法测定T细胞的增殖。流式细胞仪分析Th1、Th2、Th17... 详细信息

目的:探讨ox40l对哮喘细胞免疫过程中辅助性T细胞分化的影响。方法:采用酶联免疫吸附试验(ElISA)检测哮喘患者和健康受试者血清ox40l、Il-4、Il-17、IFN-γ和TGF-β的浓度。3H-TdR渗入法测定T细胞的增殖。流式细胞仪分析Th1、Th2、Th17和Treg细胞数量。Western blot检测蛋白质表达和磷酸化。苏木精和伊红(HE)染色评价肺组织病理改变。结果:与稳定期哮喘患者或健康对照受试者相比,急性期哮喘患者的ox40l、Il-4和Il-17水平明显增加,而IFN-γ和TGF-β水平明显降低。用ox40l-Ig融合蛋白处理时,CD4^+T细胞的增殖进一步增加。OVA诱导的CD4^+T细胞中Akt的磷酸化水平升高,而ox40l-Ig融合蛋白处理的细胞中Akt的磷酸化水平进一步升高。PI3K/Akt抑制剂lY294002处理明显降低了OVA诱导的CD4^+T细胞的增殖。lY294002处理后,OVA诱导的CD4^+T细胞中Il-4、Il-17以及Th2和Th17细胞的数量明显减少。相反,lY294002显著升高了IFN-γ和TGF-β的表达以及Th1和Treg细胞的数量。用抗小鼠ox40l单抗处理时,与ox40l-Ig融合蛋白处理组相比,Il-4和Il-17水平以及Th2和Th17细胞的数量显著减少,而IFN-γ和TGF-β水平以及Th1和Treg的数量明显增加。HE染色显示,用抗小鼠ox40l单抗处理可抑制哮喘小鼠肺组织病变。结论:ox40l通过PI3K/Akt信号通路诱导了Th2和Th17细胞的分化,用抗小鼠ox40l单抗阻断ox40l可以诱导哮喘中的Th1和Treg细胞分化。

关键词： ox40l 哮喘辅助性T细胞细胞分化 PI3K/Akt信号通路

人ox40l在Bl-21大肠杆菌中的表达和生物学功能研究

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中国免疫学杂志 2005年第3期21卷 163-167,171页

作者：施勤陈永井孙建军马泓冰姜智毛一香张学光苏州大学医学生物技术研究所苏州215007

目的克隆和表达人可溶性ox40l重组蛋白(sox40l),探讨ox40l信号在T细胞对乳腺癌细胞反应中的协同刺激效应。方法运用基因工程技术在大肠杆菌中表达人重组融合蛋白GSTsox40l,Westernblot分析表达蛋白的特异性;采用体外T细胞和乳腺癌细胞... 详细信息

目的克隆和表达人可溶性ox40l重组蛋白(sox40l),探讨ox40l信号在T细胞对乳腺癌细胞反应中的协同刺激效应。方法运用基因工程技术在大肠杆菌中表达人重组融合蛋白GSTsox40l,Westernblot分析表达蛋白的特异性;采用体外T细胞和乳腺癌细胞混合培养体系,观察对T细胞生长和增殖的影响。结果构建了GSTsox40l原核表达体系,从而进行重组蛋白的有效表达;纯化的重组蛋白通过免疫印迹分析能被特异性单抗识别,并在体外培养体系中显示出协同刺激T细胞对乳腺肿瘤细胞的反应性促进T细胞生长、增殖以及Il2的分泌。结论成功地研制了具有生物学活性的sox40l,为体外激发肿瘤特异性T细胞提供良好的物质基础。

关键词： ox40l Bl-21大肠杆菌表达生物学功能