检索结果-南通市图书馆

中华传染病杂志 2003年第2期21卷 101-104页

作者：阮冰王淑颖陈勇庄辉马亦林干梦九浙江大学医学院附属第一医院杭州310003 杭州市第一人民医院浙江省医学科学院北京大学医学部微生物学系

目的　研制戊型肝炎病毒重组抗原诊断试剂。方法　用融合蛋白表达载体 pGEX 4T 3 ,表达戊型肝炎病毒第二开放读码框架 (orf2 )近 3′端 492bp片段。结果　经酶切、聚合酶链反应(PCR)及序列分析鉴定 ,证实重组表达质粒 ( pGEX 4T 3 HEV)... 详细信息

目的　研制戊型肝炎病毒重组抗原诊断试剂。方法　用融合蛋白表达载体 pGEX 4T 3 ,表达戊型肝炎病毒第二开放读码框架 (orf2 )近 3′端 492bp片段。结果　经酶切、聚合酶链反应(PCR)及序列分析鉴定 ,证实重组表达质粒 ( pGEX 4T 3 HEV)构建成功。重组体菌株经异丙基 β D硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达 ,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE) ,在 46× 10 3处见一蛋白条带。该蛋白经Westernblot分析 ,能与 1∶10 0抗 HEV阳性血清起特异性反应 ;应用于ELISA诊断 ,与Genelabs公司重组抗原抗 HEVELISA试剂盒比较 ,一致率为 96 .9%。结论　该克隆表达产物可用于制备戊型肝炎重组抗原诊断试剂。

关键词：戊型肝炎病毒 orf2重组蛋白克隆表达应用序列分析酶切聚合酶链反应

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

引用

西北农业学报 2008年第1期17卷 15-19页

作者：元永平丛丽媛陈德坤蒋智勇张春红宋长绪西北农林科技大学陕西杨凌712100 广东省农科院兽医研究所广东广州510640

以纯化复性的猪圆环病毒Ⅱ型（PCV2）Cap重组蛋白作为免疫原，按常规方法免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与SP2／0细胞融合，经间接ELISA筛选，获得了3株分泌PCV2-Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，分别命名为1C7A4、4F3F5和4G8F7，其染色... 详细信息

以纯化复性的猪圆环病毒Ⅱ型（PCV2）Cap重组蛋白作为免疫原，按常规方法免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与SP2／0细胞融合，经间接ELISA筛选，获得了3株分泌PCV2-Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，分别命名为1C7A4、4F3F5和4G8F7，其染色体平均数为98～103，间接ELISA检测3株细胞培养上清效价分别为1：3125、1：3125、1：15625，小鼠腹水效价分别为1：390000、1：390000、1：1950000。ELISA结果显示，1C7A4、4F3F5和4G87F仅与融合表达的PCV2-Cap蛋白反应，而与PET-32a载体表达的蛋白不反应。相加ELISA结果显示3株单克隆抗体对应两个不同的病毒抗原位点。间接免疫荧光结果显示，1C7A4、4F3F5和4G8F7能与PCV2发生反应，而不与PCV1发生交叉反应。结果表明所获得的3株单抗是PCV2型特异性的，为PCV1和PCV2鉴别诊断方法的建立奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒Ⅱ型 orf2重组蛋白单克隆抗体

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

禽戊型肝炎血清学调查以及与肝脾肿大综合征关系的研究

引用

中国家禽 2008年第20期30卷 22-24页

作者：张璐周恩民崔治中董施伟荆胜涛彭军孙陪明孙淑红秦卓明山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 山东省农业科学院家禽研究所山东济南250023

禽戊型肝炎病毒(hepatitis Evirus,HEV)是肝脾肿大(hepatitis-splenomegaly,HS)综合征的主要病原。禽HEV与人和猪HEV均属于肝病毒属。我们的前期研究结果表明基因重组禽HEV的orf2蛋白含有其独有的抗原表位,同时含有与人、猪HEV共有的抗... 详细信息

禽戊型肝炎病毒(hepatitis Evirus,HEV)是肝脾肿大(hepatitis-splenomegaly,HS)综合征的主要病原。禽HEV与人和猪HEV均属于肝病毒属。我们的前期研究结果表明基因重组禽HEV的orf2蛋白含有其独有的抗原表位,同时含有与人、猪HEV共有的抗原表位。本研究用禽HEVorf(Open Reading Frame)2-1蛋白作为包被抗原所建立的检测血清抗体的间接ELISA对从山东、广东、黑龙江采集的914份鸡血清进行了血清学检测,用疑似肝脾肿大综合征鸡肝组织感染SPF鸡群,检测攻毒后血清中可能存在的抗禽HEVorf2抗体。检测结果显示健康鸡群的抗体阳性率平均为28.5%,而患有肝脾肿大综合征的鸡群中的阳性率则为43.3%。用疑似肝脾肿大综合征鸡肝组织感染的SPF鸡群血清抗禽HEVorf2抗体的阳性率则高达62.5%。本研究进一步阐明了禽HEV在我国部分地区的流行状况以及与HS的直接关系。

关键词：禽戊型肝炎病毒血清学调查 orf2重组蛋白肝脾重大综合征

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

广东省猪圆环病毒2型分子流行病学调查及其ELISA检测方法的建立

广东省猪圆环病毒2型分子流行病学调查及其ELISA检测方法的建立

引用

作者：孟张丽河南农业大学

学位级别：硕士

猪圆环病毒2型是一种严重危害养猪业的传染病，抑制机体免疫系统，增加其他病原入侵的几率，造成机体继发感染，使病情更加复杂，危害更加严重。该病流行于世界各养猪国家，给世界养猪业造成了巨大的经济损失。目前已经发现了不同全基... 详细信息

猪圆环病毒2型是一种严重危害养猪业的传染病，抑制机体免疫系统，增加其他病原入侵的几率，造成机体继发感染，使病情更加复杂，危害更加严重。该病流行于世界各养猪国家，给世界养猪业造成了巨大的经济损失。目前已经发现了不同全基因长度的PCV2毒株，并在不同时间不同地区呈现不同的主导亚型，说明PCV2处于不断变异中，特别是在疫苗免疫压力下，PCV2的变异情况更值得监测与分析。目前检测PCV2抗体的方法有很多，在临床上主要是ELISA方法，研究最多的是以orf2编码的蛋白为包被抗原建立ELISA方法，但无法区分是疫苗抗体还是野毒感染抗体。本研究扩增了PCV2的全基因序列并对在免疫压力下的圆环病毒的变异情况进行了分析;构建了原核表达质粒pET32α-orf3和人工合成了pET32α-orf2，并以纯化的重组蛋白为包被抗原建立了检测PCV2抗体的ELISA方法，为PCV2的分子流行情况及防治诊断提供新的检测方法。为了解PCV2在免疫压力下的流行、变异及进化情况，本研究对2013年广东省PCV2疫苗免疫猪场中发生PCV2感染的病猪血清进行PCV2病毒分离，参考GenBank上已发表的PCV2全基因序列，设计3对引物，用PCR方法扩增其全基因序列，测序并进行序列分析。结果分离到了9株PCV2毒株，全基因序列长度都为1767bp。同源性分析表明，9株PCV2分离株核苷酸同源性为93.6%-99.4%，与2012年广东省分离株同源性为94.5%-99.7%，与2011年广东省分离株同源性为94.2%-99.7%，与GenBank中其他PCV2分离株的同源性为92.5%-99.7%。9株PCV2的orf1、orf2、orf3核苷酸及其推导的氨基酸序列同源性分别为94.9%-99.9%和95.3%-100%、89.0%-99.9%和86.4%-100%、92.4%-100%和86.8%-100%，存在一定的变异。氨基酸序列多态性分析表明orf1氨基酸有27位，orf2氨基酸有35位，orf3有24位发生了变异，与2011年和2012年分离株氨基酸相比较，orf1和orf3发生了较大变异，orf2基本没有变异。基因型分析表明，有5株属于PCV2d，3株属于PCV2b，1株属于PCV2a。对2011年至2013分离的PCV2基因组特征进行分析发现PCV2核苷酸序列比较稳定，与世界其他分离株具有较高的同源性，PCV2b和PCV2d亚型已经成为当前的流行毒株，在免疫压力下，PCV2d有可能会替代PCV2a和PCV2b成为主导毒株。根据分离毒株YD01(YB2013)基因序列，设计1对特异性引物用PCR方法扩增orf3基因，并克隆到原核表达载体pET32α(+)上，构建原核表达质粒pET32α-orf3，同时根据密码子的偏好性优化去掉信号肽的orf2基因，人工合成了原核表达质粒pET32α-orf2。经IPTG诱导表达后纯化，以纯化后的重组蛋白作为包被抗原，初步建立了两种检测PCV2抗体的间接ELISA方法。确定最佳的ELISA的工作条件：orf2重组蛋白最佳包被浓度为1.69μg/mL，血清最佳稀释倍数为1:50，二抗最佳工作浓度为1:15000;orf3重组蛋白最佳包被浓度为0.51μg/mL，血清最佳稀释倍数为1:200，二抗最佳工作浓度为1:10000。批内批间重复性试验变异系数都小于7%，与其他猪疾病阳性血清没有交叉反应。orf2蛋白ELISA结果与商品试剂盒符合率为97.4%，orf3蛋白ELISA阳性率为52.6%。orf2蛋白ELISA可以用于临床疫苗抗体的检测，orf3蛋白ELISA可以用于疫苗免疫血清中的野毒抗体检测。

关键词：猪圆环病毒2型全基因序列基因亚型原核表达 orf2重组蛋白 orf3重组蛋白 ELISA

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：