猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

作     者：元永平 丛丽媛 陈德坤 蒋智勇 张春红 宋长绪 YUAN Yong-ping;CONG Li-yuan;CHEN De-kun;JIANG Zhi-yong;ZHANG Chun-hong;SONG Chang-xu

作者机构：西北农林科技大学陕西杨凌712100 广东省农科院兽医研究所广东广州510640 

出 版 物：《西北农业学报》 (Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica)

年 卷 期：2008年第17卷第1期

页      面：15-19页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家食品安全重大专项(2001BA804A31) 广东省农业科技攻关(2003B21404、20052490100和2006B20301013) 广东省自然科学基金(04002083) 广东省自然基金重点项目(06105311)资助 

主　　题：猪圆环病毒Ⅱ型 ORF2重组蛋白 单克隆抗体 

摘      要：以纯化复性的猪圆环病毒Ⅱ型（PCV2）Cap重组蛋白作为免疫原，按常规方法免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与SP2／0细胞融合，经间接ELISA筛选，获得了3株分泌PCV2-Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，分别命名为1C7A4、4F3F5和4G8F7，其染色体平均数为98～103，间接ELISA检测3株细胞培养上清效价分别为1：3125、1：3125、1：15625，小鼠腹水效价分别为1：390000、1：390000、1：1950000。ELISA结果显示，1C7A4、4F3F5和4G87F仅与融合表达的PCV2-Cap蛋白反应，而与PET-32a载体表达的蛋白不反应。相加ELISA结果显示3株单克隆抗体对应两个不同的病毒抗原位点。间接免疫荧光结果显示，1C7A4、4F3F5和4G8F7能与PCV2发生反应，而不与PCV1发生交叉反应。结果表明所获得的3株单抗是PCV2型特异性的，为PCV1和PCV2鉴别诊断方法的建立奠定了基础。