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脑出血模型大鼠PirB和nogoa表达与神经功能缺损

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中国组织工程研究 2022年第20期26卷 3202-3206页

作者：杨洋刘梦兰孟仁亮陶涛西南医科大学附属医院神经内科四川省泸州市646000

背景:nogoa和PirB是髓鞘相关抑制因子及受体,在多种中枢神经系统损伤模型中表达明显增高,且起着抑制轴突再生和阻碍神经功能恢复的作用,脑出血遗留严重持久的神经功能障碍可能与二者有关。目的:通过构建大鼠脑出血模型,探讨PirB和nogoa... 详细信息

背景:nogoa和PirB是髓鞘相关抑制因子及受体,在多种中枢神经系统损伤模型中表达明显增高,且起着抑制轴突再生和阻碍神经功能恢复的作用,脑出血遗留严重持久的神经功能障碍可能与二者有关。目的:通过构建大鼠脑出血模型,探讨PirB和nogoa蛋白表达与神经功能缺损的关系。方法:健康雄性SD大鼠75只,随机分为假手术组(n=25)和脑出血组(n=50),按取材时间点不同分为12 h及1,3,7,14 d组,假手术组大鼠不做任何处理,脑出血组大鼠以自体鼠尾不凝血经改良二次注入法建立脑出血模型。各时间点大鼠进行神经功能缺损评分后深度麻醉断头取脑,采用Western blot检测PirB和nogoa蛋白的定量表达,免疫荧光观察PirB定位表达。结果与结论:①PirB可表达于成年健康大鼠的神经元及星形胶质细胞的胞体和突起;②脑出血组各时间点PirB和nogoa表达较假手术组明显增加,差异有显著性意义(Pnogoa的表达与神经功能评分呈负相关关系;④结果表明,PirB和nogoa均可表达于健康成年大鼠脑组织中,脑出血后PirB和nogoa表达明显上调并抑制轴突再生,从而阻碍神经功能的恢复。

关键词：脑出血 PirB nogoa 轴突再生神经功能缺损大鼠

Olfactory ensheathing cell transplantation and inhibition of nogoa,NgR and RhoA expression in the damaged zone to ameliorate spinal cord injury

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Neural Regeneration Research 2010年第13期5卷 999-1003页

作者： Puwei Yuan Xijing He Guoyu Wang Yangquan Hao Deyu Liu Department of Orthopaedics Affiliated Hospital Shaanxi College of Traditional Chinese Medicine Xianyang 712046 Shaanxi Province China Second Department of Orthopaedics Second Hospital of Xi'an Jiaotong University Xi'an 710042 Shaanxi Province China

BACKGROUND： Olfactory ensheathing cell （OEC） transplantation promotes repair of spinal cord injury. Neural regeneration inhibits binding of the myelin protein Nogo to its receptor （NgR）, activates downstream inhibitory signal RhoA, and leads to axonal degeneration. OBJECTIVE： To determine the relationship between OECs transplantation for spinal cord injury and nogoa, NgR, and RhoA protein expression in the damaged zone. DESIGN, TIME AND SETTING： A randomized, controlled, animal experiment was performed from September 2006 to May 2007 at the Key Laboratory of Environment and Genes in Xi＇an Jiaotong University School of Medicine, China. MATERIALS： OECs were harvested from healthy, adult, male, Sprague Dawley rats aged 6 months. Mouse anti-rat nogoa, NgR, and RheA monoclonal antibodies were utilized for detection. METHODS： A total of 40 adult Sprague Dawley rats were randomly assigned to four groups： normal, model, OECs, and DF12, with 10 animals in each group. Transverse section spinal cord injury was established in the OECs and DF12 groups, followed by injection of 1μL OECs suspension （1×10^8/mL） or equivalent DF12 medium at 1 mm above and below the injury site. MAIN OUTCOME MEASURES： Immunohistochemistry and Western blot were utilized to detect nogoa, NgR, and RhoA expression in the spinal cord injury lesions. Morphological changes were observed by argyrophilia staining, and lower extremity function of the animals was assessed using Basso, Beattie, and Bresnahan scores. RESULTS： Eight weeks following OECs transplantation, a significant increase in new axons was observed in the OECs group, and nerve fibers crossed the injury site to repair spinal cord injury. Qualitative and quantitative results from the OECs group were superior to the model and DF12 groups. At 8 weeks after transplantation, Basso, Beattie, and Bresnahan scores were significantly greater in the OECs group compared with the model and DF12 groups （P 〈 0.01）, but expression of nogoa, NgR, and RhoA prote

关键词： olfactory ensheathing cells nogoa NgR RhoA cell transplantation spinal cord peripheral nerve injury neural regeneration

成对关联刺激对缺血性脑卒中大鼠缺血半暗带区nogoa/NgR/RhoA信号通路蛋白表达的影响

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中国康复医学杂志 2020年第12期35卷 1409-1415页

作者：胡艳郭铁成张香玉鲁银山张秀娟田峻华中科技大学同济医学院附属同济医院康复医学科武汉430030 武汉大学中南医院郑州大学第五附属医院

目的:观察成对关联刺激对缺血性脑卒中大鼠缺血半暗带区nogoa、NgR、RhoA蛋白表达的影响。方法:90只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和PAS组,每组又分为7d、14d、28d三个亚组(n=10)。模型组和PAS组大鼠采用Longa线栓法制作MCAO... 详细信息

目的:观察成对关联刺激对缺血性脑卒中大鼠缺血半暗带区nogoa、NgR、RhoA蛋白表达的影响。方法:90只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和PAS组,每组又分为7d、14d、28d三个亚组(n=10)。模型组和PAS组大鼠采用Longa线栓法制作MCAO模型,假手术组除不插入线栓外,其余操作与模型组和PAS组相同。PAS组于术后第1d开始给予0.05Hz、共90对脉冲的PAS治疗,每日1次,每次持续30min;模型组和假手术组不予任何干预措施,各时间点治疗结束后取缺血半暗带区脑组织,Western Blot和免疫荧光检测缺血半暗带nogoa、NgR、RhoA蛋白的表达和分布情况。结果:术后第7、14、28d,假手术组nogoa、NgR、RhoA蛋白的表达水平均最低,模型组在各时间点nogoa、NgR、RhoA含量均较假手术组明显升高(Pnogoa、NgR、RhoA的含量高于假手术组(Pnogoa、NgR、RhoA蛋白在术后28d的含量低于同组第7d、14d(Pnogoa/NgR/RhoA信号通路蛋白的表达,可能是PAS促进脑缺血大鼠神经再生,改善脑缺血大鼠的感觉运动功能障碍的内在分子机制之一。

关键词：脑缺血成对关联刺激 nogoa NgR RhoA

nogoa在视觉发育期正常猫和斜视性弱视猫视皮层21a区的表达

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中华实验眼科杂志 2012年第3期30卷 228-232页

作者：郭珍刘冰林锦镛赵堪兴天津市眼科医院天津市眼科学与视觉科学重点实验室天津市眼科研究所天津医科大学眼科临床学院 300074

背景视觉发育可塑性的分子机制仍是目前研究的热点，有助于对视觉发育期视功能的异常进行解释和防治，目前轴索生长抑制因子nogoa在视觉发育可塑性中的作用日益受到关注。目的观察正常发育猫和斜视性弱视猫视皮层21a区神经元nogoa的表... 详细信息

背景视觉发育可塑性的分子机制仍是目前研究的热点，有助于对视觉发育期视功能的异常进行解释和防治，目前轴索生长抑制因子nogoa在视觉发育可塑性中的作用日益受到关注。目的观察正常发育猫和斜视性弱视猫视皮层21a区神经元nogoa的表达变化，从分子水平探讨斜视性弱视的发病机制。方法4周龄幼猫16只按随机数字表法分为正常组和斜视性弱视组，每组8只。斜视性弱视组手术离断右眼外直肌制备成人工内斜视模型，与正常组在同等视觉环境下饲养1周后进行视觉诱发电位（VEP）检测，VEPP100波幅下降及隐含时延长确定为弱视模型制作成功。确定弱视形成后用断颈法处死实验猫，制备猫视皮质区21a区组织切片，采用苏木精-伊红染色检测2个组猫视皮层区的发育情况，应用免疫组织化学法观察正常组和斜视性弱视组视皮层21a区nogoa的表达并进行定量比较。结果斜视性弱视组猫P—VEPP。隐含时为（108．50±6．95）ms，右眼／左眼P100振幅比值为0．35±0．09，正常组为（98．10±7．07）ms，右眼／左眼P100振幅比值为0．83±0．14，差异均有统计学意义（t=4．450，P=0．005；t=5．970，P=0．005）。2个组视皮质21a区苏木精-伊红染色表明斜视性弱视组视皮质神经元的数目无明显减少，但神经元细胞质突起变短或消失。免疫组织化学染色表明，nogoa阳性细胞均存在于Ⅱ～Ⅵ层，呈棕黄色表达，位于神经元一侧。正常组视皮质21a区Ⅱ～Ⅵ层可见nogoa阳性染色细胞，斜视性弱视组Ⅱ／Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ／-Ⅵ区nogoa表达的免疫阳性细胞密度分别为（387．37±2．01）、（354．58±1．85）、（289．68±1．81）个／mm2，明显高于正常组的（161．39±1．98）、（128．93±1．26）、（96．25±1．49）个／mm2，差异均有统计学意义（t=-160．400、-201．890、-164．740，P=0．000）。结论nogoa在调控视觉发育敏感期及其可塑性中可发挥关键性作用。

关键词：弱视视皮质免疫组织化学 nogoa

脊髓损伤大鼠nogoa、NgR mRNA和蛋白的时相表达及电针治疗时间窗

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中国康复理论与实践 2018年第6期24卷 621-628页

作者：闵友江孙洁贾永忠曾学波余弯姚海华周璇周建华上海市第八人民医院上海市200235 江西中医药大学附属医院江西南昌市330006

目的探讨影响脊髓损伤轴突生长的nogoa、NgR时相表达及电针治疗脊髓损伤的时间窗效应。方法 144只Sprague-Dawley雌性大鼠随机分成假手术组(A组,n=48)和造模组(n=96)。造模组大鼠采用改良Allen法制作脊髓损伤大鼠模型,随机分为模型组(B... 详细信息

目的探讨影响脊髓损伤轴突生长的nogoa、NgR时相表达及电针治疗脊髓损伤的时间窗效应。方法 144只Sprague-Dawley雌性大鼠随机分成假手术组(A组,n=48)和造模组(n=96)。造模组大鼠采用改良Allen法制作脊髓损伤大鼠模型,随机分为模型组(B组,n=48)和电针组(C组,n=48)。C组电针大椎、腰阳关及双侧次髎、足三里,选择疏密波,持续20 min,每天1次。分别在造模后1 d、7 d、14 d介入电针治疗,每个介入治疗点大鼠随机再分成2个亚组,分别持续治疗7 d和14 d。A组于术后1 d、3 d、7 d、14d、21 d、28 d,B组和C组于造模后在相应时间点处死大鼠提取脊髓组织,所有大鼠处死前进行BBB评分。各组每个时间点随机选取4份样本,应用逆转录实时定量聚合酶链反应(RT-q PCR)和Western blotting检测损伤脊髓不同时间段nogoa、NgR mRNA和蛋白的表达。结果 B组术后14 d BBB评分开始有所提高,直至28 d,评分较术后1 d、3 d、7 d提高(P0.05)。B组nogoa、NgR mRNA和蛋白在造模后呈逐渐升高趋势,21 d达到高峰;不同时间点,B组nogoa、NgR mRNA和蛋白表达均明显高于A组(Pnogoa mRNA(P>0.05)表达外,其他时间点nogoa mRNA和蛋白的表达较相应时间点的模型组均下降(Pnogoa、NgR mRNA和蛋白的表达大多要低于术后1 d介入治疗(Pnogoa、NgR mRNA和蛋白的表达都无显著性差异(P>0.05);术后不同时间点介入电针治疗7 d与14 d nogoa、NgR mRNA和蛋白表达之间无显著性差异(P>0.05)。结论电针能改善脊髓损伤大鼠后肢运动功能,可能与电针抑制脊髓损伤后nogoa、NgR mRNA和蛋白的表达有关;且电针早期介入治疗有效,恢复期介入治疗效果更佳。

关键词：脊髓损伤电针时间窗效应 nogoa NgR 大鼠

“三法三穴”推拿手法对坐骨神经损伤大鼠运动功能和脊髓nogoa及其受体表达的影响

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中国康复理论与实践 2018年第12期24卷 1403-1407页

作者：李易真杨超于天源鲁梦倩苗润培吕桃桃北京中医药大学北京市100029

目的探讨"三法三穴"推拿手法对坐骨神经损伤大鼠后肢运动功能和脊髓中nogoa及其受体NgR表达的影响。方法 64只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组(n=16)、假手术组(n=16)、模型组(n=16)和推拿组(n=16)。模型组和推拿组采用夹持法制... 详细信息

目的探讨"三法三穴"推拿手法对坐骨神经损伤大鼠后肢运动功能和脊髓中nogoa及其受体NgR表达的影响。方法 64只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组(n=16)、假手术组(n=16)、模型组(n=16)和推拿组(n=16)。模型组和推拿组采用夹持法制备坐骨神经损伤模型,推拿组以按摩推拿手法模拟仪模拟点、拨、揉三种手法按摩殷门、承山、阳陵泉三穴。分别于术后7 d和干预20 d行斜板测试;取大鼠脊髓组织,Westen blotting检测nogoa和NgR蛋白表达。结果术后7 d,与正常组比较,模型组和推拿组斜板测试评分降低(P 0.05)。结论 "三法三穴"推拿手法能改善坐骨神经损伤大鼠后肢运动功能,可能与抑制脊髓中NgR蛋白表达有关。

关键词：坐骨神经损伤推拿 nogoa 受体神经再生大鼠

nogoa-PirB通路对脑出血大鼠轴突再生和神经功能的影响

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NogoA-PirB通路对脑出血大鼠轴突再生和神经功能的影响

作者：杨洋西南医科大学

学位级别：硕士

目的:通过构建大鼠脑出血模型,观察nogoa和Pir B两种蛋白在脑出血大鼠脑组织中不同时间点的定量表达、PirB表达的时空特点、轴突再生情况、大鼠神经功能缺损情况,探讨PirB的表达对脑出血损伤大鼠轴突再生和神经功能的影响、nogoa和PirB... 详细信息

目的:通过构建大鼠脑出血模型,观察nogoa和Pir B两种蛋白在脑出血大鼠脑组织中不同时间点的定量表达、PirB表达的时空特点、轴突再生情况、大鼠神经功能缺损情况,探讨PirB的表达对脑出血损伤大鼠轴突再生和神经功能的影响、nogoa和PirB蛋白表达的相关性,推测Nogo A-PirB通路与神经功能缺损的相关性,探讨脑出血损伤后脑组织的修复机制,进一步探索脑出血后治疗靶点,为临床治疗研究提供理论依据。方法:雄性SD大鼠75只,随机分为假手术(Sham)组(n=25)和脑出血(ICH)组(n=50),两组分别按断头取脑时间点不同分为1d、3d、7d、14d、28d共5个亚组,各时间点脑出血大鼠随机分为Western Blot组和组织免疫荧光组。Sham组大鼠颅骨钻孔后不注射血液,脑出血组以大鼠自体鼠尾动脉不凝血50ul,经改良二次注入法建立大鼠脑出血模型,术后3小时通过神经功能评分判定造模成功与否。造模成功后,各时间点大鼠采用Garcia神经功能障碍评分方法进行评分后断头取脑。Western Blot组脑组织取出后立即液氮冷冻,随后转入-80℃冰箱冻存备用,研磨组织提取蛋白后,采用蛋白免疫印迹法(Western-blot)测定PirB和nogoa蛋白的表达;组织免疫荧光组大鼠深度麻醉后予以PBS和4%多聚甲醛灌注后取脑,取出脑组织经后续处理后行石蜡切片和冰冻切片,分别行HE染色和免疫荧光。结果:(1)、脑出血组神经功能缺失评分明显低于对应时间点Sham组,以3d组神经功能缺失评分最低,以上结果统计学差异具有显著性(Pnogoa和PirB定量分析:脑出血组各时间点nogoa、PirB表达均高于对应时间点的Sham组;二者在脑出血后表达明显增加,并在脑出血后7天达到表达高峰,持续高水平表达至28d,差异具有统计学意义(P0.05)。(5)、脑出血组各时间点nogoa、PirB表达与神经功能评分和轴突长度呈负相关。结论:(1)正常成年大鼠脑组织中可见少量nogoa、PirB表达,主要表达于神经元及星形胶质细胞,维持神经功能的稳定。(2)脑出血可诱导nogoa、PirB表达增加,nogoa-PirB通路可抑制轴突再生,阻碍脑出血后的神经功能恢复。

关键词：脑出血 PirB nogoa 轴突再生神经元细胞星形胶质细胞

nogoa疫苗联合嗅鞘细胞移植治疗急性脊髓损伤的实验研究

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NogoA疫苗联合嗅鞘细胞移植治疗急性脊髓损伤的实验研究

作者：张志成中国人民解放军军医进修学院

学位级别：硕士

目的:脊髓损伤是常见疾患,造成许多病人肢体功能的障碍。嗅鞘细胞(OEG)兼有雪旺氏细胞与星形胶质细胞的双重功能特点,它能伴从周围神经(PNS)进入中枢神经(CNS)而不同于雪旺氏细胞仅局限于PNS中,克服雪旺氏细胞与成纤维细胞在脊髓移植中... 详细信息

目的:脊髓损伤是常见疾患,造成许多病人肢体功能的障碍。嗅鞘细胞(OEG)兼有雪旺氏细胞与星形胶质细胞的双重功能特点,它能伴从周围神经(PNS)进入中枢神经(CNS)而不同于雪旺氏细胞仅局限于PNS中,克服雪旺氏细胞与成纤维细胞在脊髓移植中功能的不足;嗅鞘细胞尚可分泌多种神经生长因子等促进损伤脊髓轴突的再生,由于损伤部位众多抑制因子的分泌,实验中在损伤稍远处观察到再生轴突的数量仍较少。nogoa是主要的轴突再生抑制因子,针对其的抗体IN-1可以封闭其抑制作用,而促进轴突的再生。由于外源性抗体存在半衰期短的问题。本研究的目的是以nogoa主要功能区段Nogo66的13肽为抗原,制备疫苗,免疫大鼠,刺激产生抗nogoa-13肽抗体,在拮抗抑制因素的同时植入OEG细胞,以增加其促进因素,观察比较联合nogoa疫苗和OEG移植对脊髓损伤大鼠神经功能恢复及神经再生的作用,进一步探讨脊髓损伤后促进神经再生所需的最佳微环境。方法:使用人工合成的nogoa主要功能区段Nogo66的13肽,结合的大分子蛋白钥孔帽贝血蓝蛋白(KLH),增强其免疫源性。给予纯化后预先给大鼠进行腹腔免疫,在脊髓损伤前刺激出自身抗nogoa的抗体,并检测抗体的滴度和与抗原抗体反应的结合能力,检测疫苗的安全性即大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的发生率。脊髓损伤的同时植入OEG细胞,连续观察12周时间,与单纯疫苗、单纯OEG治疗组及单纯损伤的大鼠进行行为学及组

关键词：脊髓损伤免疫治疗细胞移植嗅鞘细胞 nogoa 疫苗

夹脊电针结合神经松动术对兔坐骨神经损伤后运动功能及nogoa、RhoA表达的影响

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夹脊电针结合神经松动术对兔坐骨神经损伤后运动功能及NogoA、Rho...

作者：董传菲黑龙江中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过观察夹脊电针结合神经松动术对兔坐骨神经损伤后神经功能以及Nogo A、Rho A表达的影响,为夹脊电针结合神经松动术治疗周围神经损伤提供理论依据。方法:随机将180只新西兰家兔分为正常对照组、模型对照组、治疗组三组(神经松动... 详细信息

目的:通过观察夹脊电针结合神经松动术对兔坐骨神经损伤后神经功能以及Nogo A、Rho A表达的影响,为夹脊电针结合神经松动术治疗周围神经损伤提供理论依据。方法:随机将180只新西兰家兔分为正常对照组、模型对照组、治疗组三组(神经松动术组、夹脊电针组、夹脊电针结合神经松动术组简称:电针+神经松动术组),每组36只;再按治疗时间为1周、2周、4周分3个亚组,每个亚组12只。钳夹法制造坐骨神经善德尔兰德(Sunderland)Ⅲ度损伤模型。正常对照组不做任何干预;模型对照组术后放入笼中安静饲养;神经松动术组进行坐骨神经神经松动术治疗,每次操作时间为1s,放松5s,10次/组,1组/天,6天/周;夹脊电针组取坐骨神经发出的相应脊髓节段的夹脊穴进行夹脊电针治疗,1次/d,30min/次,6次/周;电针+神经松动术组先进行夹脊电针治疗后进行神经松动术治疗。采用趾张反射和改良Tarlov评分对损伤侧坐骨神经功能进行评价;取坐骨神经发出的脊髓相应节段及坐骨神经卡压处组织,RT-PCR检测方法观察Rho A基因表达的变化,Western Blot法检测Rho A蛋白的表达;由于Nogo A只在中枢神经系统表达,因此在坐骨神经发出的脊髓相应节段L4-L6中,采用RT-PCR检测方法观察Nogo A基因表达的变化,Western Blot法检测Nogo A蛋白的表达。结果:1.趾张反射和改良Tarlov评分1周、2周、4周三个时间点模型对照组、三个治疗组评分低于正常对照组各亚组(P0.05)。结论:1.夹脊电针、神经松动术以及夹脊电针结合神经松动术均可以改善坐骨神经损伤后的运动功能,降低Nogo A和Rho A的表达,促进坐骨神经损伤的修复,且夹脊电针结合神经松动术优于单纯应用夹脊电针或单纯应用神经松动术。2.夹脊电针结合神经松动术促进坐骨神经损伤后的修复,可能与降低Nogo A和Rho A的表达水平有关。

关键词：夹脊电针神经松动术 nogoa RhoA 周围神经损伤