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ntg诱变农抗702产生菌链霉菌702的研究

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生物技术 2010年第1期20卷 36-39页

作者：涂璇刘霞涂晓嵘涂国全江西农业大学生物科学与工程学院江西南昌330045

目的:筛选出产抗真菌活性物质的高产链霉菌702突变株。方法:分别以链霉菌702菌株为试验材料,以庆大霉素为敏感抗生素,ntg诱变链霉菌702菌株,获得抗庆大霉素突变株。结果:ntg处理90min对菌株的致死率可达73.46%,突变率高达23.64%,经过摇... 详细信息

目的:筛选出产抗真菌活性物质的高产链霉菌702突变株。方法:分别以链霉菌702菌株为试验材料,以庆大霉素为敏感抗生素,ntg诱变链霉菌702菌株,获得抗庆大霉素突变株。结果:ntg处理90min对菌株的致死率可达73.46%,突变率高达23.64%,经过摇瓶筛选获得高产突变株20-29-12,产素单位达到1 443μg/mL,比出发菌株提高了38.08%。结论:采用抗药性致死突变标志的ntg诱变筛选模型可以获得产抗真菌活性物质的链霉菌702高产菌株。

关键词： ntg诱变农抗702 链霉菌702

优化亚硝基胍(ntg)诱变条件选育低产蛋白酶A菌株的研究

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酿酒 2008年第1期35卷 88-90页

作者：张卓王德良傅力王辉新疆农业大学食品科学学院乌鲁木齐830052 中国食品发酵工业研究院北京100027

通过优化亚硝基胍(ntg)对啤酒酵母的化学诱变条件,得出ntg的最佳实验条件,选育低产蛋白酶A的菌株,比较了两种初筛方法--羧肽酶Y平板实验和酸变性血红蛋白实验的筛选效果,筛选出6株蛋白酶A活力较低的菌株,并进行多次重复性实验检验其稳... 详细信息

通过优化亚硝基胍(ntg)对啤酒酵母的化学诱变条件,得出ntg的最佳实验条件,选育低产蛋白酶A的菌株,比较了两种初筛方法--羧肽酶Y平板实验和酸变性血红蛋白实验的筛选效果,筛选出6株蛋白酶A活力较低的菌株,并进行多次重复性实验检验其稳定性。

关键词： ntg诱变蛋白酶A 菌种选育

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ntg对南昌霉素产生菌的诱变选育

安徽农业科学 2007年第29期35卷 9303-9304页

作者：付学琴魏赛金黄文新涂国全江西师范大学生命科学学院江西南昌330027 江西农业大学生物工程系江西南昌330045 江西省经济作物局江西南昌330027

采用不同浓度的ntg诱变剂,对南昌霉素产生菌南昌链霉菌80-5.3-116菌株的孢子进行处理。结果表明,500μg/ml的诱变浓度对孢子致死率达79.92%,具有较好的诱变效果;初筛摇瓶产量比出发菌株提高20%以上的菌株有54株,占菌株的54%;连续3批进... 详细信息

采用不同浓度的ntg诱变剂,对南昌霉素产生菌南昌链霉菌80-5.3-116菌株的孢子进行处理。结果表明,500μg/ml的诱变浓度对孢子致死率达79.92%,具有较好的诱变效果;初筛摇瓶产量比出发菌株提高20%以上的菌株有54株,占菌株的54%;连续3批进一步摇瓶复筛,并对复筛结果进行分析,发现116-5.8-64菌株所产南昌霉素活性单位高达9571.4mg/ml,比出发菌株提高了116.7%,差异达到极显著水平。

关键词：南昌霉素南昌链霉素 ntg诱变

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高产丙酮丁醇梭菌的诱变筛选及特性研究

太阳能学报 2014年第1期35卷 36-40页

作者：高凯李云田沈杨秀山首都师范大学生命科学学院北京100048

使用亚硝基胍对实验室保藏的丙酮丁醇梭菌Clostridium acetobutylicum进行诱变,并结合外源添加丁醇的平板培养基对诱变菌株进行筛选,得到一株高产丁醇菌株。以60g/L葡萄糖为底物,37℃,发酵60h,该菌株丁醇及总溶剂产量分别比对照菌株提高... 详细信息

使用亚硝基胍对实验室保藏的丙酮丁醇梭菌Clostridium acetobutylicum进行诱变,并结合外源添加丁醇的平板培养基对诱变菌株进行筛选,得到一株高产丁醇菌株。以60g/L葡萄糖为底物,37℃,发酵60h,该菌株丁醇及总溶剂产量分别比对照菌株提高了39.3%和48.4%。为了使溶剂产量最大化,针对不同底物浓度对溶剂产量的影响进行研究。结果表明,诱变菌株在利用80g/L葡萄糖为底物,发酵70h,得到最大总溶剂产量23.47g/L。

关键词：丙酮丁醇梭菌 ntg诱变丁醇耐受高底物浓度

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产耐高温谷氨酰胺转胺酶菌株的快速筛选方法

中国生物工程杂志 2015年第8期35卷 83-89页

作者：郭玮婷张慧查东风黄汉峰黄静高红亮常忠义金明飞鲁伟华东师范大学生命科学学院上海200241 河南省商丘市农业局经作中心商丘476000 泰兴市东圣食品科技有限公司泰兴225411

目的：采用亚硝基胍（ntg）诱变结合96孔板高通量筛选方法筛选产耐高温谷氨酰胺转胺酶（MTG）的茂原链霉菌（Streptomyces mobaraensis）。方法：通过优化96孔板高通量测定MTG活性的方法、确定筛选温度和时间,建立了产耐高温MTG菌株的... 详细信息

目的：采用亚硝基胍（ntg）诱变结合96孔板高通量筛选方法筛选产耐高温谷氨酰胺转胺酶（MTG）的茂原链霉菌（Streptomyces mobaraensis）。方法：通过优化96孔板高通量测定MTG活性的方法、确定筛选温度和时间,建立了产耐高温MTG菌株的快速筛选方法;通过优化ntg诱变条件建立了筛选突变库;通过96孔板高通量初筛、摇瓶复筛获得了产耐高温MTG的突变株12-82,并通过摇瓶发酵对12-82所产MTG进行热稳定性分析。结果：采用2mg/ml ntg、p H8.0、60min的诱变条件获得突变株,将突变株的发酵上清液于70℃水浴7.5min,再在37℃空气浴、反应10min的条件下测定MTG活性,从5 200株突变株中筛选出5株产耐高温MTG的突变株,其中突变株12-82在50℃水浴60min以及70℃水浴1.5min的酶活残留率均比出发株高出近20%,且80℃保温2min仍有11.9%的酶活残留率。结论：利用ntg诱变结合96孔板高通量筛选的方法筛选到5株所产MTG热稳定性相对较高的突变株,其中突变株12-82在50℃、70℃和80℃的酶活残留率均有10%~20%的提高。这为高温食品加工领域所需耐高温MTG生产菌株的高效筛选提供了可行性方案。

关键词：茂原链霉菌谷氨酰胺转胺酶热稳定性 ntg诱变 96孔板高通量筛选

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L-苯丙氨酸抗噬菌体生产菌的选育和应用

食品与发酵工业 2013年第7期39卷 88-93页

作者：周海岩刘龙堵国成陈坚浙江工业大学生物工程研究所浙江杭州310014 江南大学生物工程学院江苏无锡214122 江南大学食品科学与技术国家重点实验室江苏无锡214122

为了解决噬菌体污染问题,提高L-苯丙氨酸(L-Phe)的生产稳定性,首先从L-Phe生产菌大肠杆菌WSH-Z06(pAP-B03)的异常发酵液中分离到1种噬菌体,将其命名为BP-1;再经WSH-Z06的亚硝基胍(ntg)诱变、抗性初筛、质粒pAP-B03的转化和摇瓶发酵复筛... 详细信息

为了解决噬菌体污染问题,提高L-苯丙氨酸(L-Phe)的生产稳定性,首先从L-Phe生产菌大肠杆菌WSH-Z06(pAP-B03)的异常发酵液中分离到1种噬菌体,将其命名为BP-1;再经WSH-Z06的亚硝基胍(ntg)诱变、抗性初筛、质粒pAP-B03的转化和摇瓶发酵复筛等过程,获得了1株对噬菌体BP-1不敏感的L-Phe高产菌株BR-42(pAP-B03)。在添加噬菌体的条件下的发酵中,该菌株的生长和L-Phe合成均不受影响,说明BR-42(pAP-B03)是1株可以抗噬菌体BP-1并能高产L-Phe的优良菌株,具有较大的工业生产应用价值。

关键词： L-苯丙氨酸大肠杆菌噬菌体 ntg诱变筛选

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变铅青链霉菌66的多效性突变子

农业生物技术学报 1995年第2期 25-31页

作者：周秀芬邓子新华中农业大学

变铅青链霉菌ＤＮＡ存在一种异常的位点特异性修饰，使其在含有Ｆｅ２＋的电泳缓冲液中电泳时遭到双链切割。用ＮＴＧ诱变变铅青链霉菌ＪＴ４６，获得了一株修饰缺陷突变株，命名为ＺＸＩ。该突变菌株除了丧失修饰其ＤＮＡ的能力以外（... 详细信息

变铅青链霉菌ＤＮＡ存在一种异常的位点特异性修饰，使其在含有Ｆｅ２＋的电泳缓冲液中电泳时遭到双链切割。用ＮＴＧ诱变变铅青链霉菌ＪＴ４６，获得了一株修饰缺陷突变株，命名为ＺＸＩ。该突变菌株除了丧失修饰其ＤＮＡ的能力以外（亦即其ＤＮＡ在含有Ｆｅ２＋的电泳缓冲液中电泳时不被降解），在某些基因［如黑色素基因（ｍｅｌ）和某些抗生素抗性基因］的表达方面也发生了变化，同时还丧失了产孢能力和对唾噬体φＨＡＵ３的抗性。ＺＸ１作为受体时，转化频率比ＪＴ４６也有所提高。通过ＺＸ１的自发突变获得了改良了产孢性能的衍生菌株ＺＸ７。

关键词：变铅青链霉菌 ntg诱变 DNA修饰基因表达

利用玉米浆发酵生产类胡萝卜素红酵母的诱变选育

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食品研究与开发 2010年第9期31卷 159-162页

作者：丁东红徐文静牛春华李倬林李玉秋王景会吉林大学第四医院一汽总医院吉林长春130011 吉林省农业科学院吉林长春130124 吉林农业大学食品科学与工程学院吉林长春130118

以试验室保存的红酵母为出发菌株,利用ntg(N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍)诱变的方法,以获取可高效利用玉米浆发酵生产类胡萝卜素的突变株。通过筛选及连续传代试验,确定一株突变性状能稳定遗传的突变株,其类胡萝卜素产量达到13.01mg/L,比... 详细信息

以试验室保存的红酵母为出发菌株,利用ntg(N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍)诱变的方法,以获取可高效利用玉米浆发酵生产类胡萝卜素的突变株。通过筛选及连续传代试验,确定一株突变性状能稳定遗传的突变株,其类胡萝卜素产量达到13.01mg/L,比出发菌株提高了41.72%。

关键词： ntg诱变红酵母类胡萝卜素

蛋白质谷氨酰胺酶产生菌的诱变育种发酵优化及酶对谷朊粉的改性

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蛋白质谷氨酰胺酶产生菌的诱变育种发酵优化及酶对谷朊粉的改性

作者：黄大亭华东师范大学

学位级别：硕士

蛋白质谷氨酰胺酶（Protein-glutaminase,PG酶）作为一种新型的蛋白质脱酰胺酶,由解朊金黄杆菌（Chryseobacterium proteolyticum）产生。它可以把蛋白质或多肽侧链上的谷氨酰胺转化成谷氨酸,在蛋白质的改性研究中得到广泛应用。目前野... 详细信息

蛋白质谷氨酰胺酶（Protein-glutaminase,PG酶）作为一种新型的蛋白质脱酰胺酶,由解朊金黄杆菌（Chryseobacterium proteolyticum）产生。它可以把蛋白质或多肽侧链上的谷氨酰胺转化成谷氨酸,在蛋白质的改性研究中得到广泛应用。目前野生菌株PG酶的酶活较低,距工业化生产的目标较远。本研究旨在通过ntg诱变筛选得到一株PG酶高产菌株,并对菌株进行发酵工艺优化和发酵罐放大培养,为PG酶工业化生产奠定基础。谷朊粉是一种物美价廉的天然植物蛋白,由于含有较多的谷氨酰胺导致溶解性较差,从而限制了其在食品中的应用。本研究优化了PG酶改性谷朊粉条件,探究改性后谷朊粉功能特性和结构的变化,并初步应用于鸡肉丸和谷朊粉蛋白饮料中。主要研究结论如下:（1）PG酶高产菌株的诱变育种以解朊金黄杆菌TM1040为出发菌株,以致死率为指标确定了ntg诱变的最佳条件,经过5轮递推式诱变,初筛6347株菌,复筛167株菌,最终得到一株高产菌株T37,酶活为5.07±0.03 U/m L,与出发菌株相比提高了45.46%。高产菌株T37突变基因KEGG通路主要涉及嘌呤代谢、嘧啶代谢、氨基酸的生物合成等。（2）出发菌株TM1040和高产菌株T37三角瓶发酵优化菌株TM1040的最优发酵条件为:培养温度30℃,装液量25 m L/250 m L,转速200 r/min,接种量7%;利用单因素实验和CCD响应面实验设计优化得到最优发酵培养基成分为:α-乳糖5 g/L、多聚蛋白胨20 g/L、七水硫酸镁2.5 g/L,磷酸二氢钾4.89 g/L,十二水磷酸氢二钠0.43 g/L。优化后酶活为4.59 U/m L,较优化之前提高了43.43%。利用单因素实验和CCD响应面实验设计优化得到菌株T37最优发酵培养基成分为:酵母蛋白胨FP103 19.11 g/L,磷酸二氢钾4.89 g/L,十二水磷酸氢二钠0.43 g/L,七水硫酸镁2.07 g/L,七水硫酸亚铁0.07 g/L,PEG2000 4.53 g/L。优化后酶活为5.24 U/m L,相较于优化之前提高了5.65%。（3）高产菌株发酵罐放大培养在10 L发酵罐中以Ka和混合时间为指标优化了搅拌桨组合,发现搅拌桨组合为六平叶+BT6+BT6时,具有较高的Ka和较短的混合时间。利用该搅拌桨组合对菌株TM1040在10 L发酵罐中进行放大培养,酶活在12 h达到最高值,为2.88±0.47 U/m L,较六平叶组合的酶活2.47±0.19 U/m L提高16.60%。将此条件运用于高产菌株T37的发酵,酶活在16h达到最高值为3.97±0.14 U/m L。（4）PG酶对谷朊粉的改性作用通过单因素实验和CCD响应面实验设计优化PG酶对谷朊粉的最优改性条件为:酶与底物比30 U/g,反应p H 7,反应温度为55℃,以此条件反应2 h,脱酰胺度为73.49%。不同脱酰胺度的谷朊粉在p H5～9范围内溶解性都显著提高,蛋白浓度为4 mg/m L条件下改性谷朊粉的乳化活性（EA）显著提高;改性后谷朊粉的起泡性和持水持油能力均优于对照。FTIR和CD对谷朊粉二级结构分析均表明改性后β-折叠比例增加、α-螺旋比例减少;改性后谷朊粉粒径显著降低,Zeta电位随着脱酰胺程度的增加逐渐增加。（5）改性谷朊粉在食品中的应用将脱酰胺度60%的谷朊粉以5%的添加量加入到鸡肉丸中,鸡肉丸硬度、凝聚性、胶着性、咀嚼性、回复性均增加。改性谷朊粉制备的蛋白饮料,卡拉胶浓度为0.015%即能较好地起到稳定的作用。改性谷朊粉浓度为9%,121℃灭菌15min后,常温下储存30天沉淀率仅为1.32%。综上所述,本文通过ntg诱变筛选到一株高产菌株T37,并初步探究了菌株的高产机理。接着对出发菌株TM1040的种子培养条件、发酵培养条件进行了优化,在此基础上对菌株T37的发酵培养条件进行了优化,并放大到10 L发酵罐中。最后对PG酶改性谷朊粉的条件进行了探究,系统研究了改性后谷朊粉理化特性和结构的改变并制备了高蛋白饮料。

关键词：蛋白质谷氨酰胺酶解朊金黄杆菌 ntg诱变发酵优化谷朊粉改性