产耐高温谷氨酰胺转胺酶菌株的快速筛选方法

作     者：郭玮婷 张慧 查东风 黄汉峰 黄静 高红亮 常忠义 金明飞 鲁伟 

作者机构：华东师范大学生命科学学院上海200241 河南省商丘市农业局经作中心商丘476000 泰兴市东圣食品科技有限公司泰兴225411 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2015年第35卷第8期

页      面：83-89页

核心收录：

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(78210203) 

主　　题：茂原链霉菌 谷氨酰胺转胺酶 热稳定性 NTG诱变 96孔板高通量筛选 

摘      要：目的：采用亚硝基胍（NTG）诱变结合96孔板高通量筛选方法筛选产耐高温谷氨酰胺转胺酶（MTG）的茂原链霉菌（Streptomyces mobaraensis）。方法：通过优化96孔板高通量测定MTG活性的方法、确定筛选温度和时间,建立了产耐高温MTG菌株的快速筛选方法;通过优化NTG诱变条件建立了筛选突变库;通过96孔板高通量初筛、摇瓶复筛获得了产耐高温MTG的突变株12-82,并通过摇瓶发酵对12-82所产MTG进行热稳定性分析。结果：采用2mg/ml NTG、p H8.0、60min的诱变条件获得突变株,将突变株的发酵上清液于70℃水浴7.5min,再在37℃空气浴、反应10min的条件下测定MTG活性,从5 200株突变株中筛选出5株产耐高温MTG的突变株,其中突变株12-82在50℃水浴60min以及70℃水浴1.5min的酶活残留率均比出发株高出近20%,且80℃保温2min仍有11.9%的酶活残留率。结论：利用NTG诱变结合96孔板高通量筛选的方法筛选到5株所产MTG热稳定性相对较高的突变株,其中突变株12-82在50℃、70℃和80℃的酶活残留率均有10%~20%的提高。这为高温食品加工领域所需耐高温MTG生产菌株的高效筛选提供了可行性方案。